EGCG联合维拉帕米逆转白血病细胞系K562/A02多药耐药的研究

克服多药耐药(MDR)是提高白血病疗效的重要途径。我们选择非细胞毒性剂量维拉帕米(VRP)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)联合对人白血病多药耐药细胞系K562/A02进行体外逆转研究。一、材料和方法1.细胞系和培养条件:K562/A02和K562/S细胞均在37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中,以     

细胞周期检测点激酶1shRNA联合环胞素A逆转K562/A02细胞多药耐药的实验研究

目的:研究联合阻断细胞周期检测点激酶1(Chk1)信号通路与P-糖蛋白(P-gp)泵功能2条途径对逆转K562/A02细胞多药耐药性的作用,探索有效的逆转白血病细胞耐药的策略.方法:通过电穿孔转染法将特异性靶向Chk1的短发卡状RNA(short hairpin RNA,shRNA)导入K562/A02细胞;MTT法测定CsA的非细胞毒性剂量;Chk1 shRNA与非细胞毒性剂量的CsA联用后,MTT法检测细胞的药物敏感性;流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期及细胞内阿霉素浓度的变化.结果:CsA浓度低于(2.95±0.39) mg/L时对K562/A02细胞的生长抑制率小于10%.Chk1 shRNA联合CsA(1 mg/L)使阿霉素对K562/A02细胞的IC50值由原来的(109.65±0.26) mg/L降至(2.44±0.51) mg/L,逆转倍数为45倍,明显增加了细胞敏感性;细胞凋亡率升至(66.74±1.62)%,与Chk1 shRNA或CsA单独处理组相比差异有统计学意义(P<0.05).Chk1 shRNA与CsA单独或联用均导致G2/M期细胞百分率显著下降,分别为(17.10±0.63)%、(14.60±0.97)%、(18.21±1.13)%,三者间差异无统计学意义(P>0.05).Chk1 shRNA联合CsA组细胞内阿霉素浓度为(22.06±0.56),与CsA处理组(20.44±0.79)比较,其差异无统计学意义(P>0.05).结论:Chk1基因的表达下调与P-gp泵功能的抑制两个靶点的联合能够更有效逆转白血病细胞的多药耐药.     

K562/A02细胞核糖体蛋白L6的表达与多药耐药性的实验研究

目的观察核糖体蛋白L6(RPL6)基因表达的改变对白血病多药耐药性的作用。方法通过RT-PCR方法获得RPL6cDNA序列,用真核表达载体pcDNA3.1( )分别构建正向插入和反向插入的RPL6cDNA重组质粒,以脂质体将正义RPL6cDNA真核表达质粒转染K562细胞,将反义RPL6cDNA真核表达质粒转染K562/A02细胞,以MTT法检测细胞对阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)、米托蒽醌(MIT)和依托泊苷(VP16)耐药性的作用。结果RPL6在K562/A02细胞中的表达较K562增高(P<0.001),转染正义RPL6cDNA真核表达质粒后,K562细胞对ADM、VCR、MIT、VP16的耐药性比未转染的K562细胞分别增强3.25、1.95、2.00和3.48倍(P<0.05或0.01),转染反义RPL6cDNA真核表达质粒后,K562/A02细胞对ADM、VCR、MIT、VP16的耐药性比未转染的K562/A02细胞分别降低62%、50%、56%和47%(P<0.05或0.01)。结论RPL6基因过表达在K562/A02细胞耐药性的形成中起重要作用。     

小檗碱对HeLa细胞黏附和移动作用的体外实验研究

目的研究小檗碱体外对HeLa细胞黏附和移动的作用及机制。方法5、20、40mg／L小檗碱作用于HeLa细胞，黏附实验检测细胞黏附率，划痕损伤实验检测迁移率，流式细胞术测定MMP2、TIMP2的表达。结果HeLa细胞黏附率、迁移率明显降低，随药物浓度增大作用增强，小檗碱处理组MMP2阳性表达细胞减少，TIMP2阳性表达细胞增多，MMP2／TIMP2比值下降。结论小檗碱体外能抑制HeLa细胞黏附与转移，其机制可能与直接抑制细胞迁移运动及抑制细胞MMP2蛋白表达，促进TIMP2蛋白表达有关。