抗狂犬病病毒CVS-11株单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗狂犬病毒单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病毒抗原检测方法奠定基础.方法 将狂犬病病毒CVS-11株纯化浓缩后免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经细胞克隆和间接ELISA筛选,获得稳定分泌抗狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株.小鼠腹腔注射法制备大量单克隆抗体并测定腹水效价,用G蛋白亲和层析柱进行纯化,间接ELISA法和间接荧光法鉴定单克隆抗体的类型、特异性及敏感性.结果 细胞融合率达100%,经克隆筛选获4株稳定分泌抗狂犬病病毒抗体的杂交瘤细胞株,其腹水效价分别为1×104,1×105,1×104和1×105;4株单抗均为IgG类型且特异性好.结论 制备的单抗具有良好特异性和敏感性.     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

本文报道,从肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染乳鼠鼠脑中提取高滴度的血凝素(HAN),以该血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。融合率为60％和78％,阳性孔率为15％和44％。IFA筛选后共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中1A_8,2A_(11),1B_3,3D_8,2F_7,1G_4,1G_9,3G_1,3G_(11),2H_1十株细胞系用有限稀释法进行了3～4次克隆化,阳性克隆率达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养     

分泌抗-LSP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立(摘要)

应用成人肝提取的肝脏特异性膜脂蛋白(LSP)免疫BALB/c小鼠,小鼠免疫脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞在PEG1000介导下融合,采用ABC-ELISA筛选抗-LSP阳性孔,细胞融合率为305/384(79.2％),抗体阳性孔数为8/305(2.62％),经过三次克隆化后筛选出5株杂交瘤细胞系(1A3、2E5、2D7、3G8、4F1).培养上清抗体效价在1∶100～1∶     

人大细胞肺癌单克隆抗体的制备及其碘化后的免疫活性

为进一步扩大肿瘤放射免疫显像和放射免疫治疗的研究和应用,制备了抗人大细胞肺癌单克隆抗体。用人大细胞肺癌细胞(PLA-801)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,筛选出四株分泌抗体性能稳定的杂交瘤,在BALB/c小鼠中产生含抗体丰富     

抗兔出血症病毒单克隆抗体的研究

本文利用兔出血症病毒(RHDV)感染发病兔肝组织液,经高速离心提取病毒抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合,接种24孔板融合率为100％,96孔板融合率为42％,经ELISA试验测定分泌抗体阳性率分别为35％和10％,选其一株进行3次克隆并连续传代2月余,经酶联检测分泌McAb性能稳定。杂交瘤细胞培养上清液滴度为1:40～1:80,小鼠腹水单抗为1:1600～1:3200,Sp2/0细胞培养上清液,正常鼠血清对照为阴性。同时利用腹水McAb     

抗口腔支原体单克隆抗体的制备研究

本研究通过BALB/c小鼠免疫脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞(Sp 2/0)融合,融合率为100％(72/72),抗体阳性率为77.79％,并经筛选、克隆、建立37株分泌抗口腔支原体单克隆抗体的 杂交瘤细胞株(2A_(10)、2A_(11)、3C_8、2C_(10)、3G_3、2H_7和2H_(12)),抗体滴度介于4000～64000之间。同时,建立了检测抗体的BA法。该抗体与相应的口腔支原体以及人肺炎支原体、牛     

两株登革2型病毒E基因重组质粒免疫BALB/c小鼠产生特异性抗体水平的比较

目的 用含登革2型病毒(Dengue type 2 virus,DEN2)B株和NGC株E基因部分序列pcDNA3.1重组质粒初次和加强免疫BALB/c小鼠,观察免疫小鼠体液免疫应答的差异.方法 用两株含DEN2 E基因部分序列(1～476 bp)的pcDNA3.1重组质粒与含有佐剂的重组质粒共同免疫BALB/c小鼠,初次免疫后第14天、28天分别加强免疫1次,共免疫3次.收集初次免疫后第14、28、42、70和98天外周血标本,间接ELISA法测定小鼠血浆特异性IgM/IgG类抗体水平,细胞病变抑制法检测特异性抗体水平.结果 不同DEN2毒株E基因部分序列的pcDNA3.1重组质粒初次和加强免疫BALB/c小鼠诱导特异性IgM、IgG类抗体的产生存在差异,B株重组质粒加强免疫小鼠后特异性抗体效价水平较高并持续较长时间.结论 DEN2两毒株E基因部分序列重组质粒免疫小鼠后诱生的特异性抗体类别、水平存在差异.     

SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究

目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并...     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体细胞系的建立及初步应用

用提纯的猪流行性腹泻病毒抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS—1骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附试验间接法筛选出阳性孔经3～4次克隆化,阳性率达100％后扩大培养,液氮及超低温冰箱保存。建立了1D_8、5D_7、4B_1、2B_8、1A_4五株抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体杂交瘤细胞系。接种BALB/c小鼠,10天左右收取腹水,用ELISA检测培养上清液     

抗痢疾志贺氏2型菌单克隆抗体的制备和鉴定

志贺氏菌(Shigella)是细菌性痢疾的病原菌。抗志贺氏菌单克隆抗体(McAb)的制备,对菌痢的临床诊断、流行病学调查和基因工程疫苗的研究有一定意义。 试验所用材料 细菌株和BALB/c小鼠来自流研所;Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞来自病毒所。 免疫和细胞融合 免疫程序参见文献。按常规方法进行细胞融合,融合后细胞接种在3块96孔板中,置二氧化碳孵箱内培养。     

抗尿激酶单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗尿激酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用市售的尿激酶(UK),免癌BALB/c小鼠。取脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得六株分泌抗尿激酶单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1UB_5、1UD_2、3UA_2、3UD_(12)、3UG_2、3UH_7。其中,1UB_5及1UD_2连续传代培养4个月以上,其培养液抗体的ELISA效价仍为10~(-2)～10~(-3)。两株细胞经扩大培养后,注入C_(57)×BALB/c杂交后的F_1代小鼠,诱生的腹水抗体效价为5×10~(-6)～10~(-7)1UB_5、1UD_2所分泌的抗体经ELISA鉴定,分属IgG_1和IgG2a。用高纯度的低分子量UK包被,ELISA检测后表明,两株细胞所分泌的为抗高分子量UK的McAb。 抗UK的McAb用于粗制品UK的纯化及监察某些肿瘤发生与发展的进一步工作正在进行之中。     

北亚立克次体单克隆抗体的产生及用于我国斑点热立克次体的鉴定

本文报道以斑点热立克次体精河株全细胞抗原免疫BALB/c小鼠,取10~8免疫小鼠脾细胞与10~7 Sp 2/0小鼠骨髓瘤细胞用50％PEG 1000融合,以微量间接免疫荧光(Micro-IFA)检测抗体。本试验融合率为79.2％,抗体分泌阳性率为22.7％。选择抗体滴度较高的三孔进行扩大培养及克隆化,选出三株杂交瘤细胞1—2C_(12),1—2F_5和1—2C_5,其腹水单克隆抗体     

异基因嵌合体与移植耐受关系的研究Ⅱ成年小鼠联体共生诱导耐受的机制

将BALB/c(H 2 d)小鼠及C5 7BL/ 6 (H 2 b,B6 )小鼠的脾细胞分别经尾静脉注射给对方 ,2d后再分别腹腔注射环磷酰胺 (CY ) 15 0mg/kg ,CY注射后 1d对BALB/c及B6小鼠进行联体 (parabiosis) ,1周后分开并进行相互间的植皮。发现BALB/c小鼠对B6小鼠的皮肤耐受期明显延长 (MST =2 5 7d ) ,但是B6对BALB/c小鼠的皮肤耐受期无明显延长 (MST =11 9d )。利用流式细胞仪分析技术 (FACS )分别对上述处理的BALB/c及B6小鼠在联体分开后的第 1天和第 30天进行胸腺及脾脏嵌合程度的检查 ,发现皮肤耐受期与嵌合程度不呈正相关。对联体后耐受的BALB/c小鼠进行体内和体外细胞转移实验 ,均未显示耐受小鼠脾细胞中存在抑制细胞活性。在耐受BALB/c→B6小鼠的单向混合淋巴细胞反应 (MLR )体系中加入外源IL 2可以部分反转耐受BALB/c小鼠脾细胞的增殖反应 ,表明本实验诱导耐受的机制可能与克隆不应答 (clonalanergy )有关。     

抗乙肝病毒前S(2)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

本文用聚合人血清白蛋白亲和层析柱纯化的含前S(2)-HBsAg,脾内接种BALB/c/小鼠,取其脾细胞与Sp2/0-Ag骨髓瘤细胞进行常规方法融合,以4种酶联法进行筛选,并经多次有限稀释亚克隆培养,最终选出3株为分泌抗前S(2)单克隆抗体的细胞株。再经亚克隆培养和多次传代与冻存,并用抑制酶联法检测其抗体,均为抗前S(2)抗体阳牲。接种BALB/c小鼠     

分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

<正> 本文用斯氏肺吸虫代谢抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,首次成功地获得了2株分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞D_1—3B_4和G_2—3C_4。 在培养皿中收集斯氏肺吸虫代谢产物,经透析、浓缩,测蛋白含量为2.4mg/ml。用此抗原(0.1ml)与等量福氏完全佐剂经腹腔及皮下免疫BALB/c小鼠,每隔3周一次,共三次。末次免疫后10天用单纯代谢抗原0.1ml注入尾静脉一次,融合前3天再从尾静脉加强免疫一次。取对数生长期的SP2/0小鼠骨髓瘤细胞和免疫小鼠脾细胞以1:5比例混合,用     

天津地区抗霍乱弧菌单克隆抗体(McAb)细胞系的建立及其应用的研究

应用天津市防病中心保存的EL-Tor霍乱弧菌小川型和稻叶型菌体抗原,混合免疫BALB/c小鼠,小鼠免疫脾细胞与骨髓瘤细胞Sp 2/0-Ag 14融合,采用ELISA法筛选抗霍乱弧菌McAb阳性孔,细胞融合率为328/384(85.2％);经过三次克隆化后筛选出9株分泌抗霍乱弧菌菌体抗原的McAb杂交瘤细胞系。取其中两株细胞进行分析研究;培养上清抗体效价在     

口蹄疫病毒非结构蛋白3D单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备并鉴定口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3D的单克隆抗体(mAb).方法:以纯化的原核表达3D蛋白免疫BALB/c小鼠, 取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合, 杂交瘤细胞经间接ELISA法筛选, 有限稀释法克隆, 直至所克隆的细胞能够100%的分泌抗体, 用Western blot以及间接免疫荧光法对mAbs的特异性等进行鉴定.结果:免疫的BALB/c小鼠经过多次融合筛选, 共获得5株抗pET28a-3D的mAb, 其亚类鉴定3株为IgG1 , 2株为IgG2b, 初步判定所得5株mAb识别2个不同表位.Western blot显示这些mAbs与重组3D蛋白和FMDV O/China99感染的BHK-21细胞中的3D抗原均特异性结合, 免疫荧光结果显示这5株mAb能够特异结合FMDV感染细胞中的3D蛋白.结论:成功获得了能识别自然3D蛋白的特异性mAb , 为进一步研究3D蛋白的结构和功能以及诊断方法奠定基础.     

家鼠型肾综合征出血热病毒单克隆抗体的制备与鉴定

以家鼠型HFRS病毒R22株免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0-Ag14融合,获得了23株能稳定分泌HFRS病毒特异性McAb的杂交瘤细胞系。以18株不同型别的HFRS病毒株进行分析,结果表明上述McAb中有些为HFRS病毒组特异性的,有些为家鼠型特异性的。有2株McAb对家鼠型HFRS病毒株具有较高的中和活性,对HFRS病毒R22株感染乳鼠也有明显的保护作用。     

用基因工程HBcAg制备抗-HBc单克隆抗体的研究

本文探索了用基因工程HBcAg研制抗-HBc单克隆抗体,获得成功。本文用基因工程HBcAg经单克隆抗-HBc制备的亲和层析柱进一步纯化后,免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0瘤细胞在50％PEG(MW 4,000)作用下进行杂交融合,经三次有限稀释克隆化后,选出一株分泌抗-HBc单克隆抗体杂交瘤细胞株,培养上清用兔抗鼠血清作双扩检测免疫球     

抗人T细胞单克隆抗体的研制及初步鉴定

应用B细胞杂交瘤技术,将胎儿胸腺细胞免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,以扁桃体冰冻组织切片免疫酶染色技术作为筛选方法。从两次融合筛选建立了四株分泌抗人T细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系(分别命名为SM,SM_2,SM_3和SM_4)四次克隆化后,阳性孔率均达100％。经七个月传代培养仍能稳定分泌特异性抗体。液氮冷冻复苏