基于AllGlo探针的双重实时荧光定量PCR法检测高危型人乳头瘤病毒HPV16/18

目的建立基于AllGlo探针的双重实时荧光定量PCR检测高危型人乳头瘤病毒HPV16/18的方法。方法针对HPV16/18病毒基因组保守序列,设计引物和AllGlo探针,建立双重荧光定量PCR检测方法,评价其敏感性、特异性和稳定性,并与传统HC2方法比较。结果成功建立了双重实时荧光定量PCR检测HPV16/18的方法,检测限均为10copies/μL,敏感性和特异性均为100%。应用该方法检测160份宫颈肿瘤患者样本,与传统HC2法结果一致性为100%。结论该研究建立的快速、准确、可同时检测HPV16/18的双重实时荧光定量PCR法,具有较高的敏感性、特异性和稳定性,操作简单,可用于HPV16/18的临床筛查和诊断。     

三种方法检测人乳头瘤病毒的比较

目的比较基因芯片分型法、PCR荧光定量法、免疫组织化学法检测人乳头瘤病毒（humanpa pillomavirus,HPV）的敏感性,为临床人乳头瘤病毒检测提供适用的方法。方法收集2002至2007年在本院就诊的宫颈癌病例200例,采用新鲜宫颈癌组织进行人乳头瘤病毒基因芯片分型检测;在上述200例患者中进取自愿接受荧光定量PCR检测的患者134例,收取宫颈癌灶分泌物,采用荧光定量PCR检测方法检测人乳头瘤病毒;对在上述134例宫颈癌患者中,选取自愿接受免疫组织化学检测的患者利用石蜡包埋宫颈癌组织,采用免疫组织化学法检测人乳头瘤病毒。结果基因芯片分型法检测人乳头瘤病毒呈阳性为188例,阳性率为94．0％（188／200）,其中HPV-16／-18阳性率为95．74％（180／188）。荧光定量PCR法检测HPV-16／18阳性率为36．57％（49／134）;免疫组化法检测HPV-16／18阳性率为46．51％（60／129）。荧光定量PCR检测和免疫组化法检测人乳头瘤病毒呈阳性者,在基因芯片分型法检测中均呈阳性。基因芯片分型法人乳头瘤病毒检出率与荧光定量PCR检测和免疫组化法比较,差异有显著意义（P〈O．05）,而后两种方法比较,差异无显著意义（P〉0．05）。结论基因芯片分型技术检测人乳头瘤病毒具有敏感性好,且同时可以分型的明显优势,适用于临床人乳头瘤病毒感染的诊断和研究。     

浏阳地区女性人乳头瘤病毒(HPV)感染状况分析

目的了解本地区女性人乳头瘤病毒(HPV)感染状况,为预防HPV感染和宫颈疾病防治提供理论依据。方法应用导流杂交基因芯片技术(可以同时检查21种基因型别),对21例宫颈癌、59例CIN、38例宫颈炎症1、006例宫颈正常的共1 124例宫颈细胞标本进行HPV检测及基因分型,分析其感染情况及型别分布。采用卡方检验,对HPV阳性和阴性在不同程度宫颈病变的构成比进行分析。结果本组资料中总感染率为28.4%(319/1 124),存在多重感染。共查出20种基因型,HPV43型未查出。HPV的主要基因型别为HPV16(19.8%)、HPV58(18.3%)、HPV52(16.1%)、HPV18(6.3%)。HPV阳性与阴性组之间在宫颈正常、宫颈炎症、宫颈CIN和宫颈癌的发病总体构成比差异有统计学意义(χ2=150.4,P0.005)。结论 HPV16、HPV58、HPV52、HPV18为该地区HPV感染的主要型别,感染高危型HPV是引起宫颈CIN及宫颈癌的必要和关键因素。HPV检测能及早发现宫颈疾病,在有效防治宫颈癌前病变,降低宫颈癌症的发病率中有重要的意义。     

高危型人乳头瘤病毒核酸(分型)检测试剂的临床应用初步评价

目的 通过对正常人群样本、宫颈癌样本的检测,评估市售实时荧光定量PCR方法学高危型HPV分型检测试剂临床应用性能。 方法 分别采用两种荧光PCR检测试剂(A试剂与B试剂)对1 000例的体检样本、48例宫颈鳞癌样本和18例宫颈腺癌样本进行HPV DNA检测并对比其结果,评价其临床应用性能。 结果 A试剂与B试剂检测体检样本阳性率分别为18.5%和16.5%。14种HPV型别阳性一致性百分比为97.57%,阴性一致性百分比为98.78%,总一致性百分比为98.58%。 A试剂与B试剂检测48例宫颈鳞癌样本阳性率分别为100%和95.83%,其中HPV16型(66.7%)、58型(14.6%)、18型(10.4%)所占比例较高。18例宫颈腺癌样本阳性率分别为83.33%和77.78%,HPV16型(50%)、18型(27.7%)和51型(11.1%)所占比例较高。通过比较发现A试剂在宫颈鳞癌和腺癌样本中的阳性检出率较B试剂高。 结论 通过检测对比,两种试剂一致性较好,而A试剂检测下限更低,检测性能更好,更适用于人群宫颈病变的早期检测与筛查,具有较高的临床应用价值。     

宫颈癌患者感染人乳头状瘤病毒16、18的检测结果分析

为了解本地区宫颈癌患者感染HPV16、18情况，我们用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法对在四川多所医院就诊的宫颈癌患者进行检测，现报道如下。1资料与方法 1．1标本来源112例确诊的宫颈癌患者和88例妇科疾病患者（对照组）的宫颈分泌物标本。宫颈癌组患者的年龄30～56岁，平均49．5岁；对照组患者年龄21～56岁，平均41．2岁。     

荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒6/11型女性生殖道感染

[目的]了解女性阴道炎患者人乳头瘤病毒6/11型(HPV6/11)的感染情况。[方法]应用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测108例门诊患者阴道分泌物中HPV6/11的病毒拷贝数。[结果]共检出HPV6/11阳性44例,阳性率为40.74%;21～40岁年龄组感染阳性率较高。[结论]女性生殖道HPV6/11感染以中青年为主。FQ-PCR检测HPV敏感、快速、准确,对临床具有较大的指导意义。     

人乳头状瘤病毒16、18型感染的检测分析

目的 了解健康体检妇女、宫颈炎和阴道炎患者人乳头状瘤病毒(HPV)16、18型的感染状况.方法 采用荧光定量聚合酶链反应技术,对382例健康体检妇女、118例宫颈炎和阴道炎患者进行了人乳头状瘤病毒16、18型检测.结果 在382例健康体检妇女中,检测出人乳头状瘤病毒16型阳性标本2例、人乳头状瘤病毒18型阳性标本1例,阳性率分别为0.52%、0.26%;在118例宫颈炎和阴道炎患者中检测出人乳头状瘤病毒16型阳性标本8例、人乳头状瘤病毒18型阳性标本3例,阳性率分别为6.78%、2.54%;健康体检妇女组与宫颈炎和阴道炎患者组比较,人乳头状瘤病毒16、18型感染率,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 在宫颈炎和阴道炎患者中人乳头状瘤病毒16、18型均有较高的感染率.     

云南省3000例妇女宫颈人乳头瘤病毒的检测与基因分型

目的探讨云南省妇女宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染状况、亚型及年龄分布,为该地区预防HPV感染和防治宫颈癌提供科学依据。方法收集2010年7月至2011年12月云南省各地市州县送检至昆明医学院第一附属医院及于该院妇产科门诊就诊并自愿接受宫颈HPV检查者宫颈标本3000例为研究对象,年龄为18～75岁。通过提取HPV DNA后,通过巢式PCR,美国国立生物技术信息中心(NCBI)BLAST序列比对等方法分析HPV-DNA亚型、感染率和年龄分布(本研究遵循的程序符合中国医学科学院北京和医学院医学生物学研究所人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准)。结果自3000例受试对象中,共计检出646例HPV呈阳性者,感染率为21.53%。其中高危型HPV(HR-HPV)为476例(73.68%,476/646),以HPV-16(33.59%,217/646),-58(22.45%,145/646),-33(8.51%,55/646)为主;低危型HPV(LR-HPV)为170例(26.32%,170/646),以HPV-6(12.54%,81/646),-81(7.74%,50/646),-11(4.43%,28/646)为主。HPV感染的高峰年龄为29～39岁(44.27%,286/646)。结论 HPV基因亚型分布具有一定地域性,云南省妇女宫颈HPV感染最常见类型为HPV-16,-58,-6。HPV-DNA分型检测在宫颈癌的临床诊断和预后方面具有重要意义。     

对人乳头瘤病毒认知度较高人群人乳头瘤病毒感染状况及基因型分析

目的:了解对人乳头瘤病毒(HPV)认知度较高人群的宫颈HPV感染状况及基因亚型分布情况。方法:对妇儿医院1 184例参加医院2012年度体检的已婚女职工,采用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术进行21种HPV亚型感染检测。结果:1 184例中检测出HPV阳性106例,阳性率为8.95%。在阳性感染者中,高危亚型感染者为89例,占阳性感染者83.96%。单1种、合并2种、3种、4种HPV感染分别为88例(83.02%),15例(14.15%),2例(1.89%),1例(0.94%)。亚型感染率相对较高的5个亚型依次为HPV 52(31.13%)、HPV 58(17.92%)、CP 8304(14.15%)、HPV 53(12.26%)、HPV 16(8.49%)。23岁~、30岁~、40岁~、50岁~、≥60岁各年龄段HPV感染率分别为9.15%、9.45%、10.64%、5.56%、9.09%。结论:对HPV认知度较高人群宫颈HPV感染率相对较低,主要为单一亚型感染,HPV 52、HPV 58、CP 8304是最主要感染亚型。进行HPV-DNA检测和分型对宫颈癌的防治具有重要意义。     

人乳头瘤病毒的核酸检测

高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌发生密切相关,低危型感染可引起外生殖器湿疣和宫颈上皮内低度病变。对HPV感染的诊断主要依赖于病毒核酸的检测,方法有探针直接检测、信号放大系统和核酸扩增技术等。其中核酸扩增结合杂交技术对人乳头瘤病毒进行分型,具有较好敏感性和特异性。基因芯片技术具有高通量,自动化等优点,适合人群筛查和流行病学研究。理想的HPV检测方法是具有可调整的临界阳性判定标准以适应不同的需要,同时能进行基因分型。     

1517例乙肝标志物和HBV-DNA定量相关性分析

目的探讨血清HBV-DNA水平与HBV血清标志物的相关性。方法采用实时荧光定量PCR对1517例HBV感染者血清标本中HBV-DNA含量进行检测,同时用ELISA法检测其HBV免疫标志物。结果HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组患者血清HBV-DNA检出率98.24%;HBsAg、HBeAg阳性组为100.00%;HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性组为60.98%;HBsAg、HBcAb阳性组为37.71%;HBcAb阳性组为12.90%。结论患者血清HBV-DNA的阳性率与HBV血清标志物的存在状态相关,采用FQ PCR法检测HBV-DNA能更准确、直接地反映体内病毒复制情况。     

Benefits of vaccinating young adult women with a prophylactic quadrivalent human papillomavirus (types 6, 11, 16 and 18) vaccine

Cervical cancer is a leading cause of cancer-related deaths worldwide. The causal role of human papillomavirus (HPV) infection in the pathogenesis of cervical cancer has prompted the development of vaccines against HPV. The highest risk of HPV infection is in women aged 16-25 years. Almost all young adult women can benefit from HPV vaccination. There is strong epidemiological and clinical support for vaccination programmes that target sexually active women in this age group to prevent HPV infection, and thus avert the development of HPV-related disease. Furthermore, the implementation of HPV vaccination programmes may benefit the development or awareness of cervical cancer prevention strategies and ultimately reduce the burden of cervical cancer and improve cervical cancer control.     

环介导等温扩增技术对HPV16、58亚型进行分型检测

目的 采用煮沸法处理人宫颈黏液上皮细胞,获得人乳头瘤病毒（HPV）DNA,然后再通过应用可视化环介导等温扩增（LAMP）检测技术对 HPV常见基因型16、58的2个亚型进行快速诊断,探讨 HPV感染和分型的快速检测技术,以指导 HPV感染患者的临床诊断和治疗。方法 收集承德医学院妇科宫颈脱落细胞标本104例,采用直接煮沸法提取HPV DNA。应用LAMP及聚合酶链式反应（PCR）2种诊断技术进行检测,并在LAMP扩增体系中加入钙黄绿素使产物可视化。对检测结果进行特异性和敏感度比较,并计算 kappa系数对校测结果的一致性进行分析。结果 成功建立了 HPV16、58的可视化 LAMP体系,其特异性较好,且钙黄绿素产物与电泳结果一致, HPV16、58 LAMP检测限分别为100拷贝/管和103拷贝/管,与 PCR一致性较好（kappa值＞0.7）且无统计学差异（P＞0.05）。结论 LAMP对未经纯化的 HPV核酸具有较好特异性和敏感度,且操作简单,适合应用于基层。     

反向寡核苷酸探针杂交技术检测人乳头状瘤病毒基因型的临床应用

目的探讨反向寡核苷酸探针杂交技术(PCR-RDB)在人乳头状瘤病毒(HPV)分型检测中的临床应用。方法采用PCR-RDB对524例HPV感染的女性生殖道标本进行HPV分型检测,分析各型的感染率以及感染病毒与年龄段关系。结果 524例HPV感染者共检出5种低危型和18种高危型,其中单一型感染者304例,占58.02%,2种混合感染79例,占15.07%,3种混合感染51例,占9.73%,4种混合感染45例,占8.59%,5种混合感染35例,占6.68%,>5种混合感染10例,占1.91%,低危型感染以HPV-6、11为主,高危型感染以HPV-16、18、58、52、33型为主,不同年龄段感染各型也存在差异,15~25岁感染者以低危感染为主,多重感染主要发生在该年龄段;46~55岁年龄段感染高危型较多,随着宫颈糜烂程度的增加多重感染数量也增加。结论 PCR-RDB法可检测HPV多种亚型,对HPV感染早期诊断及预防宫颈病变和治疗具有较好的临床应用价值。     

温州地区女性人乳头瘤病毒的感染情况及亚型分布特征分析

目的:了解本地区女性HPV的感染情况及型别分布,以助于HPV疫苗的研制和应用。方法:采用快速分子导流杂交分型技术对4314例女性HPV的感染情况及型别分布进行分析。结果:HPV感染阳性率为41.68%(1798/4314)。10组年龄组中筛查人群以31岁～50岁的妇女为主,占72.02%(3107/4314);HPV阳性率以21岁～25岁(56.86%)及≥60岁(64.39%)的年龄组较高。各年龄组均以单重感染为主,其次为双重感染。在单重感染下,高危亚型均以HPV16、52、58为主,其次为HPV18、33;低危亚型以HPV6、11为主;常见亚型以HPV53、cp8304(81)为主。结论:温州地区女性HPV感染以单重感染为主,高危亚型优势型别为HPV16、52、58,低危亚型优势型别为HPV6、11,常见亚型优势型别为HPV53、cp8304(81)。     

人乳头瘤病毒16、18感染对乳癌的诱导作用

目的探讨人乳头瘤病毒16、18(HPV16、18)感染与乳腺癌发生发展的关系。方法选取乳腺癌和乳腺增生患者各50例,其中乳腺癌患者中浸润性导管癌25例、单纯癌18例、其他类型7例,采用原位杂交法检测所有患者人乳头瘤病毒16、18的表达,对两组患者及不同组织学分型乳腺癌患者中人乳头瘤病毒16、18表达情况进行统计分析。结果乳腺癌组HPV16感染率、HPV18感染率及HPV16、HPV18感染率分别为36.00%、20.00%和18.00%,乳腺增生组三者感染率分别为8.00%、4.00%和4.00%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。浸润性导管癌、单纯癌及其他类型乳腺癌三组患者中HPV16感染率、HPV18感染率及HPV16、HPV18感染率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 HPV16、18感染与乳腺癌的发生发展密切相关,但乳腺癌的组织分型与HPV16、18感染无明显关系。     

基因芯片技术检测宫颈癌组织的人乳头瘤病毒基因型

目的:了解宫颈癌患者人乳头瘤病毒的感染率及基因型分布情况,探讨人乳头瘤病毒基因型与癌肿类型的相关性。方法:采用可检测23种HPV基因型的基因芯片方法检测200例宫颈癌组织的HPV基因型,计算HPV及各基因型的感染率,比较HPV及其主要基因型分布与癌肿类型的关系。结果:200例宫颈癌组织中HPV的阳性率为94.00%,其中宫颈鳞癌为95.86%,显著高于宫颈腺癌的80.00%,χ2=9.73,P<0.01;而HPV16、HPV18型和HPV双重感染在鳞、腺癌中的阳性率无显著性差异;200例宫颈癌组织中共检测到9种HPV基因型,分别为HPV16、18、45、33、58、59、73、31、56,HPV16检出率最高,达74.00%、其次是HPV18(16.00%);HPV双重感染24例,检出率达12.00%。结论:HPV在宫颈鳞癌的感染率显著高于宫颈腺癌;HPV基因型分布与癌肿类型无关;宫颈癌的HPV基因型别多样,且均为高危型感染,以16、18型最常见,并存在双重感染。     

薄层液基细胞学检查及人乳头瘤病毒检测在宫颈癌筛查中的应用价值

目的探讨薄层液基细胞学(thinprep cytololgy test,TCT)检测及高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)检测在宫颈癌初筛中的不同临床应用价值。方法选择2012年10月—2013年10月自愿参加"两癌"筛查的青岛市崂山区户籍妇女1 568名,所有对象同时进行TCT检测和HPV分型检测,检出阳性病例均在电子阴道镜下行宫颈病理活检。计数资料采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果 1 568例受检者中,TCT阳性236例,病理活检为宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及以上者150例,符合率为63.56%。随着其细胞学分级的增高,组织学符合率逐渐升高。HPV阳性512例,病理活检为CIN及以上者180例,符合率为35.16%。比较差异有统计学意义(P0.05)。126名液基细胞学检测结果为非典型鳞状上皮意义不明确(atypical squamous cell of undermined significance,ASCUS)HPV阳性者病理符合率为61.76%,阴性者病理符合率为27.59%,HPV阳性者病理符合率高于阴性者,比较差异有统计学意(P0.05)。且随着病变程度的加深,HPV感染率逐渐升高。结论与HPV病毒检测相比,TCT检测的组织学诊断符合率更高,特别是对于TCT检测结果为HSIL者;对于TCT检测结果为ASCUS者,HPV病毒检测可以起到有效的分流管理作用。     

宫颈癌前病变筛查中HPV分型检测的应用探讨

目的:评价人乳头瘤病毒(HPV)分型测定在宫颈上皮内瘤变(CIN)等宫颈癌前病变筛查中的应用价值。方法:利用PCR-流式荧光杂交法对319例可疑患者进行26种HPV基因亚型检测(含19种高危亚型和7种低危亚型)。结果:HPV检出率为17.9%(57/319),其中高、低危型检出率分别为16.9%(54/319)与4.4%(14/319),高危型中主要为HPV16、18、523、3感染,低危型主要为HPV61、1感染。尖锐湿疣、宫颈上皮内瘤变(CIN)与正常对照组比较检出率差别有统计学意义(P<0.05)。结论:HPV16、185、23、31、1、6是本地区HPV感染的主要型别,20岁～40岁为女性感染的高峰人群,对阳性患者定期跟踪,是防治宫颈上皮内瘤变(CIN)与宫颈癌的有效途径。