抗鳗弧菌单克隆抗体的研制及鉴定

鳗弧菌感染是养殖及野生海水鱼的重要疾病之一 ,在淡水鱼中也有发病的记载 ,并可通过食物链感染人类 ,使人发生较严重的疾病［１］。目前 ,对此种菌的检测主要通过对鱼的临诊病理观察及细菌学检查 ,但检测速度和准确性受到一定的限制。我们制备了抗鳗弧菌的ｍＡｂ ,并对其进行了鉴定。１材料和方法１．１材料实验所用鳗弧菌标准菌株由青岛海洋大学海洋生命学院提供。Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞由第四军医大学８６３课题组惠赠。１．２方法鳗弧菌菌体用１００ｍＬ／Ｌ福尔马林固定２４ｈ灭活 ,生理盐水洗涤两次后 ,比浊记数。经腹腔免疫 (８周龄、…     

抗rhG—CSF单克隆抗体的研制及初步鉴定

利用淋巴细胞杂交瘤技术，以ｒｈＧ－ＣＳＦ为免疫原，建立了６株稳定分泌抗Ｇ－ＣＳＦ单抗的杂交瘤细胞株，并研究了其分泌抗体的某些生物学特性。１材料与方法１．１抗原ｒｈＧ－ＣＳＦ，人用制剂，由北京医科大学免疫学系马大龙教授赠送。１．２细胞及动物Ｂａｌｂ／ｃ...     

抗HCVNS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴定

丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)是一种单链正链ＲＮＡ病毒 ,可通过输血等方式传播 ,引起急、慢性肝炎。目前 ,ＨＣＶ的常规诊断方法主要有抗ＨＣＶ ＩｇＧ ,抗ＨＣＶ ＩｇＭ及ＨＣＶ ＲＮＡ的ＲＴ ＰＣＲ检测。对ＨＣＶ抗原的检测文献报道较少。我们利用基因工程表达的ＨＣＶＮＳ3蛋白作为免疫原 ,研制其单克隆抗体(ｍＡｂ) ,试图用于ＨＣＶ抗原诊断的研究。1材料和方法1 1　材料　Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 ,由南京军区实验动物中心提供。Ｓｐ2 / 0小鼠骨髓瘤细胞 ,从解放军 30 2医院引进 ,液氮保存。ＨＣＶＮＳ3蛋白及ＣＰ9,ＣＰ10抗原 ,由南京军区军事医学…     

抗醛糖还原酶单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的:制备抗醛糖还原酶(AR)的单克隆抗体(mAb),并与本室制备的抗醛糖还原酶相似蛋白(ARL-1)mAb进行比较。方法:经RT-PCR获得AR基因,将基因插入pGEX-4T-1(His)6C中,构建重组质粒pGEX-4T-1(His)6C-AR,以重组质粒转化E.coliRosetta诱导表达GST-AR蛋白。以纯化的GST-AR蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb。应用间接ELISA和Western blot方法对mAb进行筛选和鉴定。使用Clustalx和Antheprot软件,比较AR与ARL-1的同源性,表达GST-dAR[80~142氨基酸(aa)],与ARL-1差异较大;并分析AR的抗原性,表达GST-dA1(1~79aa)、GST-dA2(80~99aa)、GST-dA3(111~142aa)、GST-dA4(143~316aa)。利用AR全长及截短蛋白,采用Western blot分析制备的抗AR mAb识别AR抗原的部位。结果:获得3株稳定分泌抗AR mAb的杂交瘤细胞系ARB3、AR7B3G4和ARF10。3株抗GST-AR的mAb均为IgG1(κ型),腹水mAb效价为1∶4×105,细胞培养上清mAb效价为1∶1×104,3株mAb均可与胎盘组织中的AR蛋白起反应,而与GST-ARL-1和GST蛋白无交叉反应。它们分别为抗GST-dA1、GST-dA3和GST-dA4蛋白的mAb。结论:成功地制备了3株特异性抗AR mAb,可分别识别AR的1~79、111~142、143~316位氨基酸。将它们与抗ARL-1mAb联合应用,将有助于进一步研究AR与ARL-1蛋白的功能,并为深入探讨AR、ARL-1与相关疾病的关系及进行大规模的流行病学调查提供了有力的工具。     

抗HIV核心蛋白p24单克隆抗体的研制及鉴定

抗ＨＩＶ核心蛋白ｐ２４单克隆抗体的研制及鉴定王宏伟金宁一刘仔郭军庆郭志儒毛春生李萍殷震（解放军农牧大学研究所病毒室，长春１３００６２）人Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ１）是导致人获得性免疫缺陷综合征（ＡＩＤＳ）的主要病原［１］。对ＨＩＶ１感染的诊断，常...     

抗人T细胞单克隆抗体的研制及初步鉴定

应用B细胞杂交瘤技术，将胎儿胸腺细胞免疫的BALB／c小鼠脾细胞与Sp2／0骨髓瘤细胞融合，以扁桃体冰冻组织切片免疫酶染色技术作为筛选方法，从两次融合筛选建立了四株分泌抗人T细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系(分别命名为SM，SM2，SM3和SM4)四次克隆化后，阳性孔率均达100％。经七个月传代培养仍能稳定分泌特异性抗体：液氯冷冻复苏后不影响其产生抗体的能力。     

抗GST单克隆抗体的制备和鉴定

ＰＧＥＸ4Ｔ是原核表达系统中常用的表达载体,其表达产物为目的蛋白(肽段)与谷胱甘肽转硫酶(ＧＳＴ)所形成的融合蛋白。本文制备了抗ＧＳＴ的单克隆抗体(ｍＡｂ),为上述融合蛋白的辅助检测、鉴定和纯化奠定了基础。1　材料和方法11　ＧＳＴ抗原　利用基因重组技术制备的Ｇ...     

抗桥粒斑蛋白II单克隆抗体的研制及鉴定

本文用改良枸椽酸－枸椽酸钠法，从新鲜牛鼻表皮制备的ＤｅｓｍｏｐｌａｋｉｎⅡ（ＤＰⅡ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾淋巴细胞在ＰＥＧ介导下与Ｓｐ２／０细胞融合，经筛选、克隆化获得４株能稳定分泌ＤＰⅡＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系（分别命名为ＤＰｙ－１，２，３，４）。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧｌ，染色体数目为９３￣１０５。免疫组化分析表明，４株ＤＰⅡＭｃＡｂ具有很高的上皮组织特异性和敏感性，并提示ＤＰⅡ可能不存在于     

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的单克隆抗体的制备及鉴定

对自由基的研究表明，多种疾病的发生和发展，如缺血性心脏病、脑缺血、肿瘤、白内障、各种炎症及生理衰老等，都与自由基代谢紊乱有密切联系［１］。谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）是一种重要的抗氧化药物，它能阻断原发性自由基造成的损伤，或使已受自由基损伤的组织免遭...     

抗二羰基/L-木酮糖还原酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人二羰基/L-木酮糖还原酶(Dicarbon-yl/L-xylulosereductase,DCXR)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Westernblot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAPXR表达文库筛选鉴定抗原。结果获得1株可稳定分泌抗人DCXRmAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Westernblot、免疫组化和免疫沉淀实验。结论成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具。     

抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

Ｆａｓ／Ａｐｏ１／ＣＤ９５抗原的发现,始于对两株单克隆抗体（ｍＡｂ）的功能观察,即抗Ａｐｏ１ｍＡｂ和抗ＦａｓｍＡｂ〔１,２〕。由于二者都能识别细胞膜上ＣＤ９５蛋白抗原,且能诱导敏感细胞凋亡,才导致今天对Ｆａｓ抗原的生物医学研究。制备抗ＦａｓｍＡｂ对于Ｆａｓ抗原的深入研究,尤其是对Ｆａｓ抗原信号传导机制的阐明,以及生物医学应用都有重要的意义。本文利用Ｆａｓ＋的细胞作为免疫原,制备了１株鼠抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１。１材料和方法１．１材料１．１．１细胞系Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞、Ｊｕｒｋａｔ人Ｔ淋巴…     

抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb ,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件     

抗TPO单克隆抗体的制备及初步鉴定

抗ＴＰＯ单克隆抗体的制备及初步鉴定徐荣佳，刘军权，方蕾，姚仁南，陈晓英，徐广奎，陈复兴甲状腺过氧化物酶（ＴＰＯ）现已证明是甲状腺微粒体（ＴＭ）的主要抗原成份［１］。国外就其分子已作了较为深入的研究，并重组了其分子和产生了单克隆抗体。它对研究甲状腺自身...     

鼠抗rhGM-CSF单克隆抗体的研制

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）是人体免疫系统产生白细胞过程中的重要蛋白质,能刺激多种造血细胞的增殖、分化及活化作用［１］。临床上用ｒｈＧＭＣＳＦ治疗放疗、化疗引起的粒细胞减少症,已取得了一定的疗效［２］。本文运用杂交瘤技术成功地建立...     

抗HBeAg单克隆抗体的制备及初步鉴定

为获得能替代抗ＨＢｅＡｇ多克隆酶标记抗体做ＥＬＩＳＡ，我们用纯化的ＨＢｅＡｇ阳性血清，免疫Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术，获得８株能稳定分泌小鼠抗ＨＢｅＡｇｍＡｂ的杂交瘤细胞。对其特性进行了初步鉴定，并就这些单克隆抗体（ｍＡｂ）在ＥＬＩＳＡ反应中的特性进行了分析。１　材料和方法１－１　材料　ｅ抗原阳性的人血清经亲和层析纯化的ＨＢｅＡｇ，由本室收集并纯化。Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠，购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞，由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。１－２　杂交瘤细胞株的…     

抗人NGF单克隆抗体的制备及初步鉴定

神经营养因子（　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｆａｃｔｏｒｓ，　ＮＴＦｓ）是一类对中枢和外周神经系统均有营养活性的蛋白质，其主要功能是促进神经系统的发育，保护并修复受损神经元，以及促进生长和增进认知记忆过程中神经元之间的连结［］。神经生长因子（ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，　ＮＧＦ）是发现最早、研究最多的一种ＮＴＦ。制备抗ＮＧＦ单克隆抗体（ｍＡｂ）可为研究其在体内组织中表达及分布提供一种工具，并可为基因工程制备ＮＧＦ提供检测方法。我们受澳大利亚Ｆｌｉｎｄｅｒ大学周兴福教授委托，研究制备了分…     

抗红细胞生成素单克隆抗体的制备及初步鉴定

红细胞生成素（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＥＰＯ）是一种主要由肾小管内皮细胞产生的酸性糖蛋白，正常人血浆和尿中含量甚微。ＥＰＯ的主要生理功能是通过刺激骨髓多能干细胞进入红细胞系，并促进其增殖、分化而调节外周血液中红细胞的数量。ＥＰＯ用于治疗慢性肾衰...