LY294002对胃癌细胞株生长增殖及侵袭能力的影响

目的探讨LY294002（PI3K/Akt信号通路特异性阻断剂）对胃癌细胞生长增殖、凋亡和侵袭转移的影响。方法采用不同浓度LY294002处理胃癌AGS细胞,MTT法检测胃癌AGS细胞经LY294002作用后生存率的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化;Transwell实验和划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变。结果 MTT检测结果显示,一定浓度的LY294002可抑制AGS细胞的生长,且随着浓度的增加和作用时间的延长,其抑制作用明显增强（P〈0.05）。流式细胞术显示,AGS细胞经LY294002作用48h后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,细胞有明显凋亡,并呈现浓度依赖性（P〈0.05）。Transwell实验和划痕实验显示,AGS细胞经LY29400作用后,其侵袭和转移能力受到抑制。结论 LY294002可抑制胃癌AGS细胞的生长增殖,且呈时间和剂量的依赖性。其机制可能是阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡。LY294002也可抑制胃癌AGS细胞的侵袭和转移。     

LY294002对胃癌细胞的抑制作用

目的探讨PI3K／Akt途径特异抑制剂LY294002对胃癌细胞化疗药物敏感性的作用。方法噻唑蓝（MTT）比色法测定单独或联用LY294002时化疗药物在体外对胃癌细胞的抑制作用,流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡率及细胞内多柔比星的蓄积和潴留,Western印迹检测胃癌细胞中Bcl-2蛋白的表达。结果长春新碱、多柔比星、丝裂霉素联用LY294002实验组与单独药物组相比,其IC50值均明显降低（P〈0．05）,细胞凋亡率明显增高,而细胞内Bcl-2蛋白表达则明显降低。结论LY294002能有效提高化疗药物对胃癌细胞的抑制作用。     

LY294002增强5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞侵袭和转移的抑制作用

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002及5-氟尿嘧啶(5-Fu)对大肠癌细胞转移和侵袭的影响.方法:LY294002及5-Fu体外作用于大肠癌细胞株SW480,Western blot检测总Akt和Akt-ser473蛋白表达,细胞黏附实验观察细胞与基质的黏附力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法观察细胞侵袭能力,免疫细胞化学法测定β-catenin及MMP-7蛋白表达.结果:经LY294002及5-Fu处理的SW480细胞总Akt表达无改变,Akt-ser473蛋白表达下降.LY294002及5-Fu分别、并协同使细胞与基质的黏附力、细胞迁移能力及侵袭能力减弱,β-catenin及MMP-7蛋白表达水平降低.结论:LY294002可增强5-Fu对大肠癌细胞侵袭和转移的抑制作用.     

LY294002对胃癌MGC803细胞生长的影响

目的 观察磷脂酰肌醇-3-激酶的特异性抑制剂(LY294002)对胃癌MGC803细胞生长的影响.方法 选用LY294002处理胃癌MGC803细胞后,利用细胞生长曲线、平皿克隆与流式细胞术观察细胞的生长情况,采用免疫细胞化学染色和Western blot检测AKT蛋白与p27Kip1蛋白磷酸化及Cyclin E蛋白的表达.结果 LY294002处理后,MGC803细胞生长速度明显减慢,细胞克隆体积变小,数量减少;G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例降低.LY294002处理后,MGC803细胞中磷酸化的AKT蛋白与Cyclin E蛋白表达降低,而磷酸化的p27Kip1蛋白表达升高.结论 LY294002抑制胃癌MGC803细胞生长速度,呈现出G1/S期细胞周期阻滞.     

LY294002联合顺铂对卵巢癌细胞A2780和SKOV3增殖、侵袭的影响及机制

目的 探讨LY294002联合顺铂对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的影响及机制研究.方法 将A2780和SKOV3细胞分为正常对照组、LY294002组、顺铂组和LY294002+顺铂组,采用CCK-8法检测不同浓度的LY294002(10、20、40、60)μmol/L和顺铂(5、15、25、40)μmol/L处理...     

LY294002对胃癌细胞SGC7901增殖及相关调控因子的影响

目的:研究PI3K抑制剂LY294002对SGC7901胃癌细胞增殖凋亡及相关调控因子的影响.方法:MTT法测定细胞增殖,流式细胞术Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NAG-1、Skp2 mRNA的表达情况.结果:LY294002可抑制SGC7901的生长,呈时间-剂量依赖性,细胞表现出形态学改变;经10、30、50 μmol·L-1的LY294002作用12 h的凋亡率依次为(12.7±0.42)%、(36.5±0.45)%、(64.1±0.79)%,明显高于空白对照组的(2.3±0.36)%(均P<0.01);LY294002可上调NAG-1 mRNA表达,下调Skp2 mRNA表达.结论:LY294002可改变胃癌细胞株SGC7901 Skp2和NAG-1基因的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与其调控NAG-1、Skp2 mRNA表达水平有关.     

CHD1L对胃癌细胞增殖、侵袭及转移的影响

目的 研究胃癌细胞生物学行为是否受沉默CHD1L的调控.方法(1)筛选沉默效率最高的干扰组进行后续试验;(2)蛋白p53、p21、Nur77、ARHGEF9在沉默CHD1L后表达水平利用Western Blot免疫印迹进行测定;(3)CHD1L沉默对胃癌细胞凋亡和增殖的影响分别采用流式细胞术和MTT比色法测定;(4)沉...     

苦参碱联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探究苦参碱（Mat）联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法 采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响;将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组,分别采用0.4 g/L Mat及10μmol/L LY294002单独或联合干预48 h后,应用光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术annexinⅤ-FITC/PI双标记检测细胞凋亡,PI单标记检测细胞周期变化,Western blot法检测Mat联合LY294002对K562细胞p-mTOR、p-PI3K、Akt、p-Akt、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,不同浓度Mat单药和联合LY294002均可抑制K562细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,且联合组增殖抑制率比单药组明显升高（P<0.01）。形态学检查显示,联合用药组比单药组凋亡表现更明显。流式细胞结果显示,与对照组及单药组相比,联合组显著促进细胞凋亡[（42.50±2.63）%,P...     

LY294002对SGC7901/VCR细胞VCR耐药逆转作用研究

目的观察LY294002对SGC7901/VCR胃癌细胞长春新碱(VCR)耐药的逆转作用,并探讨其可能机制。方法通过MTT法明确LY294002可以逆转SGC7901/VCR对VCR的耐药作用后,采用TUNEL检测细胞的凋亡,高效液相法检测细胞内药物浓度,RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中MDR1、caspase-3和XIAP的基因和蛋白表达水平。结果 LY294002能明显提高VCR的诱导细胞凋亡作用,明显增加细胞内VCR的浓度,并可降低耐药细胞中MDR1、XIAP的基因和升高caspase-3表达水平。结论抑制PI3K/PKB通路可逆转胃癌耐药,其机制可能与降低耐药基因MDR1的表达以及调控凋亡相关基因caspase-3和XIAP的表达有关。     

ACTN4对胃癌细胞侵袭转移的影响

目的 研究α-辅肌动蛋白（alpha-actinin-4,ACTN4）在胃癌SGC7901细胞及正常胃黏膜上皮RGM-1细胞中的表达及对胃癌SGC7901细胞侵袭和转移的影响。方法 通过qRT-PCR技术及蛋白印迹技术检测ACTN4在胃癌SGC7901细胞及RGM-1正常胃黏膜上皮细胞中的表达;利用RNAi技术敲低SGC7901细胞中的ACTN4表达,并应用qRT-PCR及蛋白印迹技术检测SGC7901细胞中ACTN4的沉默效果;通过Transwell实验检测细胞侵袭及转移能力的变化。结果 ACTN4在胃癌SGC7901细胞中明显高表达;ACTN4-siRNA可有效敲低SGC7901细胞中ACTN4的表达,敲低ACTN4的表达可以明显降低胃癌SGC7901细胞的侵袭转移能力。结论 ACTN4在胃癌细胞发生侵袭转移中发挥着重要作用。     

LY294002对套细胞淋巴瘤增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响

目的观察磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)特异性抑制剂LY294002对人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡变化;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9及信号通路相关蛋白pAkt、Notch1、HES1的变化。结果 LY294002能明显抑制Jeko-1细胞的增殖;经0、5、10和20μmol/L的LY294002作用24h后,Jeko-1细胞的凋亡率分别为(3.25±1.27)%、(11.34±2.35)%、(22.81±2.74)%、(43.61±3.48)%,差异有统计学意义(P<0.01);Western blot检测发现凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达上升,PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt磷酸化水平下降,Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下降。结论LY294002可以特异性抑制PI3K/Akt信号通路,也可下调Notch1信号通路的活性,抑制Jeko-1细胞增殖,促进细胞凋亡。     

LY294002联合顺铂对脑胶质瘤U87细胞株增殖的影响

目的体外观察磷酸肌醇-3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002与顺铂(CDDP)联合对人脑胶质瘤U87细胞株增殖的抑制作用。方法采用细胞毒实验(MTT)法、流式细胞术(FCM)检测LY294002单独或联合CDDP对人脑胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用,并观察细胞形态学变化。结果 LY294002与CDDP均能抑制U87细胞生长,呈剂量依赖性,两者联合有协同效应。当CDDP为0.625μg/mL和LY294002为5μmol/L时达到最大协同作用(Q=1.21),FCM检测细胞被阻滞在G1期,S期细胞比例减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LY294002能有效提高神经胶质瘤U87细胞对CDDP的敏感性,本研究为两种化疗药物在临床上的联合应用提供了理论依据。     

LY294002增强5-氟尿嘧啶抑制裸鼠大肠癌移植瘤生长及转移的实验研究

目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002在裸鼠体内对5氟尿嘧啶(5-Fu)抑制大肠癌移植瘤生长及肝转移的影响。方法:采用细胞接种法建立裸鼠异位及原位移植瘤模型,观察LY294002、5-Fu及LY294002联合5-Fu对异位裸鼠移植瘤生长的抑制作用,用流式细胞仪检测异位裸鼠移植瘤细胞凋亡,用免疫共沉淀法检测Akt和Akt-ser473蛋白表达;观察LY294002、5-Fu及LY294002联合5-Fu对原位裸鼠移植瘤肝脏转移的影响情况,用免疫共沉淀法检测原位裸鼠移植瘤Akt、Akt-ser473的表达,用免疫组化法检测β-catenin及MMP-7蛋白表达。结果:与对照组比较,5-Fu、LY294002抑制异位移植瘤的生长,促进肿瘤细胞凋亡,LY294002显著促进5-Fu诱导的肿瘤生长抑制、细胞凋亡;与对照组比较肿瘤细胞的Akt表达无改变,Akt-ser473蛋白表达下降。与对照组比较,5-Fu、LY294002抑制原位移植瘤的肝脏转移,LY294002显著增强5-Fu抑制原位移植瘤的肝脏转移;与对照组比较原位移植肿瘤细胞的Akt表达无改变,Akt-ser473、β-catenin及MMP-7蛋白表达下降。结论:LY294002可增强5-Fu抑制裸鼠移植大肠癌生长及肝脏转移的作用。     

骨桥蛋白对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨骨桥蛋白（OPN）对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法 体外培养胃癌SGC-7901细胞后分为control组、NC-shRNA组、OPN-shRNA组。MTT法检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力;Western blot实验检测细胞周期蛋白（cyclin D1）、血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果 control组与NC-shRNA组细胞增殖、侵袭、迁移能力和相关蛋白表达水平比较,差异无统计学意义（P> 0.05）;在沉默OPN表达后,OPN-shRNA组细胞增殖、侵袭和迁移能力低于control组,差异有高度统计学意义（P <0.01）;OPN-shRNA组cyclin D1、VEGF和MMP-2蛋白表达水平低于control组,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 OPN能增强胃癌SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与调节cyclin D1、VEGF和MMP-2的表达有关。     

LY294002 对扩张型心肌病大鼠模型心肌结构及心功能的影响

目的：探讨PI3K抑制剂LY294002对腹腔注射阿霉素诱导的扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)大 鼠模型心肌结构及心功能的影响。方法：将52只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=16)和模型组(n=36),模型组前6周 通过腹腔注射阿霉素建立DCM大鼠模型,对照组同期腹腔注射等量的生理盐水。观察2周后(8周末)每组随机处死6 只存活大鼠;9~16周将建模成功的24只模型大鼠随机分为DCM组(n=12)和LY294002组(n=12),分别予以生理盐水和 LY294002,16周末处死所有存活大鼠。8周末及16周末,所有存活大鼠行血浆氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)浓度 检测及超声心动图检查,并取8周末及16周末处死大鼠的心肌组织行HE及Van Gieson(VG)染色,计算心肌胶原容积 分数(CVF)。结果：与对照组比较,8周末模型组大鼠左室收缩末期内径(LVEDD),左室舒张末期内径(LVESD),NT- proBNP均明显增大,左室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS)均明显下降(均P<0.01),符合DCM的特征;与 DCM组比较,LY294002组LVEDD,LVESD,NT-proBNP均减低,LVEF及LVFS均增高(P<0.05);组织病理学检查示：与 对照组比较,模型组心肌间质明显纤维化且CVF明显增加(P<0.01),与DCM组比较,LY294002组心肌间质纤维化改善 且CVF下降(P<0.01)。结论：LY294002可减轻DCM大鼠模型心肌纤维化,改善其心功能。     

PI3K抑制剂LY294002联合吡柔比星对膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响

目的:探讨PI3K抑制剂联合吡柔比星对人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响。方法:用不同浓度的PI3K抑制剂LY294002联合吡柔比星对BIU-87细胞作用0、12、24、36 h后,通过MTT方法检测抑瘤率;通过Western blotting检测Caspase-3、Bax、Bcl-2及P-gp蛋白的表达。结果:THP能明显抑制BIU-87细胞的增殖,并且具有明显的时间的依赖性(P<0.05)。THP联合应用不同浓度LY294002组与单独使用同剂量的THP组比较,BIU-87细胞的增殖随着药物浓度的增加和时间的延长进一步受到抑制,而且,联合应用LY294002的低浓度THP组对BIU-87细胞抑制作用明显强于高剂量THP组(P<0.05)。此外,PI3K抑制剂LY294002联合应用THP后,BIU-87细胞Bax与Caspase-3表达都明显上升(P<0.05),Bcl-2与P-gp表达量明显降低(P<0.05)。结论:PI3K抑制剂联合THP比单独应用THP对人膀胱癌BIU-87细胞抑制作用效果明显。     

水杨酸抑制胃癌细胞体外增殖及侵袭转移能力研究

目的探讨水杨酸抑制人胃癌细胞侵袭转移的分子机制。方法不同浓度水杨酸体外处理胃癌细胞株MGC-803后,采用基质胶黏附试验、迁移试验和Transwell侵袭试验检测胃癌细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化;采用荧光定量PCR、Westernblot检测细胞黏附相关分子核纤层蛋白（Lamin）、核纤层蛋白C1（LaminC1）、核纤层蛋白B1（LaminB1）、纤连蛋白（FN1）、CD44、整合素A9（ITGA9）、连环蛋白A1（CTNNA1）和E钙粘素（CDH1）表达水平的变化。结果与空白对照比较,0.5mmol/L和1mmol/L水杨酸体外处理胃癌细胞24h后,胃癌细胞的增殖、黏附、迁移和侵袭能力均受抑制（均P＜0.05）;Lamin、LaminC1、LaminB1、FN1、CD44、ITGA9和CTNNA1mRNA表达水平均下降（均P＜0.05）,CDH1mRNA表达水平均升高（均P＜0.05）;LaminB1、FN1、CD44和CTNNA1蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）。结论一定浓度的水杨酸可体外抑制胃癌细胞增殖、黏附、侵袭能力,从而抑制胃癌转移,其作用机制可能与调节细胞黏附相关分子的表达水平和抑制胃癌细胞上皮间质转化有关。     

LY294002对舌鳞状细胞癌细胞增殖及PTEN蛋白表达的影响

目的:探讨P13K/Akt通路特异性抑制剂LY294002对体外培养的人舌鳞状细胞癌Tea8113细胞增殖活性和PTEN蛋白表达的影响.方法:取处于对数生期的Tca8113细胞以2.5×104 mL-1的浓度接种于96孔板,加入不同浓度(5、10、20、40μmol/L)的LY294002,以等体积的培养液为空白对照组,分别作用24、48、72、96 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;免疫细胞化学法检测浓度为40 μmol/L实验组的PTEN蛋白表达.结果:随药物浓度的增加及作用时间的延长,实验组Tea8113细胞的细胞增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈依赖关系;浓度为40μmoL/L实验组的PTEN蛋白阳性表达率(82.5%)高于对照组(24.3%),差异有统计学意义(P<0.05).结论:LY294002对体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖有抑制作用,并可能促使PTEN蛋白表达.     

LY294002抑制小细胞肺癌干细胞样细胞自我更新

目的:研究Akt活性抑制剂LY294002抑制源自人小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞即肺癌干细胞样细胞(LCSLCs)自我更新作用。方法:体外培养NCI-H446细胞系细胞。以干细胞条件培养基用超低粘附6孔细胞培养板悬浮培养富集和扩增LCSLCs。裸鼠皮下成瘤实验鉴别LCSLCs高致瘤特性。Western blot分析LCSLCs中Akt蛋白磷酸化水平。肿瘤球形成试验检测LY294002对LCSLCs自我更新的影响。结果:干细胞条件培养基悬浮培养6d,NCI-H446细胞系细胞呈三维非粘附性球体生长。LCSLCs具有高致瘤特性。与NCI-H446细胞系细胞比较,LCSLCs信号分子Akt组成性活化。LY294002有效降低LCSLCs中Akt磷酸化水平,并以剂量依赖方式抑制LCSLCs肺癌球形成(P<0.05)。结论:靶向干预小细胞肺癌LCSLCs信号分子Akt组成性活化可能成为抑制肺癌干细胞特性治疗小细胞肺癌的新策略。     

HES1对胃癌细胞株增殖､凋亡及迁移能力的影响

目的:探讨siRNA靶向HES1对胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901增殖?凋亡及迁移能力的影响?方法:采用荧光实时定量PCR(qPCR)法检测胃癌组织及胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901的HES1水平,采用脂质体法将2条靶向HES1的siRNA片段(siHES1-1和siHES1-2)高效转染至BGC-823和SGC-7901细胞,经qPCR法检测后选取抑制效率最高的siRNA进行后续功能学研究;分别采用MTT?流式细胞术及Transwell法检测转染后BGC-823和SGC-7901细胞的增殖?凋亡及迁移能力的改变?结果:71例胃癌组织的HES1 mRNA水平高于59例癌旁组织,BGC-823和SGC-7901细胞的HES1 mRNA水平明显高于正常胃黏膜细胞株GES-1(P < 0.05);转染HES1 siRNA可降低BGC-823和SGC-7901细胞的HES1水平,此外,较转染对照组细胞,其存活率及穿膜细胞数目明显降低,凋亡率明显升高(P < 0.05)?结论:胃癌组织及细胞株中的HES1高表达,靶向沉默HES1可抑制胃癌细胞增殖及迁移并诱导细胞凋亡?