血清肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶ELISA检验方法的建立及临床应用

目的 应用抗人肝癌组织中蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰转移酶(GGT)单克隆抗体(MeAb),建立其血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 ,并探讨其在原发性肝癌(PHC)诊断的应用价值.方法 通过McAb技术制备的抗DSA-GGT的McAb,采用蛋白G亲和层析柱色谱纯化;纯化的McAb经生物素标记后,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 .用建立的方法 对39例PHC患者和122例非PHC患者进行初步临床应用研究,用P-P概率图检验119例健康对照血清DSA-GGT分布状态,依据受试者工作曲线(ROC)确定DSA-GGT诊断PHC的cut-off值.结果 获取5株分泌McAb杂交瘤细胞制备的腹腔积液,经纯化后McAb蛋白总量在2.12～6.70 mg之间;McAb的生物素标记率为48.6%～72.2%.所构建的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 的最低检出限为2μg/L;平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%.119份健康对照血清DSA-GGT水平呈正态分布,x±s为(1.50±0.51)μg/L;经ROC分析确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L.39例PHC患者26例DSA-GGT阳性,其诊断PHC敏感度为66.7%;122例非PHC患者10例DSA-GGT阳性,其诊断特异度为91.8%.结论 所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 具有良好的重复性和可靠性.临床初步应用表明其诊断PHC的敏感度、特异度良好,且方法 操作简便,便于临床推广应用,为PHC实验室诊断提供了新方法 .     

血清γ-谷氨酰转移酶测定参考方法的建立及在酶校准品定值中的临床应用

目的通过建立γ-谷氨酰转移酶（GGT）测定参考方法，及其对酶校准品进行定值，并将此酶校准品在常规试剂配套使用，探讨血清GGT测定结果的准确性与一致性。方法按照国际临床化学与检验医学联合会（IFCC）有关GGT活性测定的要求，建立参考方法；通过测定有证参考物质（CRM），验证参考方法的准确可靠性；并用参考方法对制备的酶校准品进行准确定值；在不同分析仪上，分别用理论K值和使用校准品校准的方法测定40份人血清，记录测定结果；计算测定结果与参考方法的相对偏倚及变异系数。结果采用参考方法测定CRM，结果在CRM允许范围内；在HITACHI 7600、7060、7170、7180及BECKMAN LX20、OLYMPUS AU400生化分析仪上，测定40份人血清，采用校准品校准较理论K值，相对偏倚≤10％的样品比例明显上升，相对偏倚≥20％的样品比例下降；测定5个浓度水平的人血清，采用理论K值测定结果的变异系数为11．0％～14．0％，采用校准品校准变异系数下降到5．0％以下。结论中生GGT试剂盒与酶校准品配套使用后，测定结果的准确性和一致性有明显提高。     

糖尿病患者血清γ-谷氨酰基转肽酶水平变化及其检测价值

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)水平变化及其临床检测价值。方法选择临床确诊的住院和门诊T2DM患者126例,同期健康对照组50例,两组分别进行血清GGT和血糖(Glu)水平检测,进行对比分析。结果 (1)T2DM患者血清GGT和Glu水平均显著高于健康对照组(P0.01)。(2)126例T2DM患者中有41例阳性,阳性率为32.5%。结论T2DM患者体内存在血清GGT的异常表达,T2DM患者伴血清GGT升高者较多见,血清GGT水平检测可作为T2DM病情判定以及治疗效果观察的指标,对预测T2DM发生、发展具有辅助诊断价值。     

钙网蛋白的ELISA检测方法的建立及其在膀胱癌诊断中的应用研究

目的建立钙网蛋白的ELISA检测方法,同时探讨其在膀胱癌诊断中的应用。方法应用制备的钙网蛋白的多克隆抗体包被酶标板,同时制备其与HRP交联物,应用双抗体夹心法构建钙网蛋白的ELISA检测方法。应用构建的方法检测膀胱癌患者尿液钙网蛋白的浓度,同时采用发光法检测尿液中CA199和CYFRA21-1的浓度。结果 ELISA法检测膀胱癌尿液钙网蛋白阳性率为100.00%,良性病变组阳性率为31.25%,对照组其阳性率为0.00%。尿液钙网蛋白,其测定特异性为83.87%,敏感性为100.00%;尿液CYFRA21-1,当临界值为4.15ng/mL时,其诊断膀胱癌的特异度为77.55%,灵敏度为43.48%。结论应用建立的ELISA方法检测尿液钙网蛋白,可用于膀胱癌的诊断、监测及预后评估。     

DcR3双抗体夹心ELISA法的建立及其在原发性肝癌中的应用前景

目的:建立一种新的双抗体夹心ELISA法,以检测血清中DcR3抗原的浓度.辅助诊断原发性肝癌.方法:探索建立DcR3双抗体夹心ELISA法最适反应务件.结果:所建立方法线性范围广、灵敏度较高、精密度较好、回收率较高,批间和批内变异系数均＜10%.对50例正常对照组的检测结果进行统计学分析,确定参考值范围为1.59～60.71 ng/mL((x)±2s).原发性肝癌组同正常对照组血清DcR3抗原水平差异有显著性(P＜0.01).结论:该法是一种较好的定量测定血清DcR3抗原的ELISA法,它可以为原发性肝癌患者的诊断提供一种新的辅助指标.     

表皮生长因子ELISA检测方法的建立及其在肿瘤临床的初步应用

目的建立表皮生长因子(EGF)酶联免疫检测方法,探讨其在临床常见肿瘤患者血清中含量的变化规律。方法采用EGF单克隆抗体包被酶标板、兔抗EGF多抗为二抗,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG作为酶标抗体,建立夹心法ELISA,检测临床常见肿瘤患者及健康体检人群的血清EGF含量。结果建立的EGF酶联免疫吸附法最小检测限为15.6ng/L,批内精密度8.7%,批间精密度11.6%,平均回收率94.7%,符合临床检测要求。血清EGF含量在31名正常人为(1.305±0.382)ng/ml;24例乳腺癌患者术前为(0.729±0.347)ng/ml,术后为(0.711±0.332)ng/ml;17例结直肠癌患者术前为(0.678±0.311)ng/ml,术后为(0.658±0.298)ng/ml;19例胃癌患者术前为(0.598±0.224)ng/ml,术后为(0.614±0.257)ng/ml。各肿瘤组患者血清EGF水平较健康对照组明显降低(P<0.01)。结论建立了适用于临床检测EGF的ELISA法,肿瘤患者血清中EGF含量较健康对照组明显下降,为进一步探讨肿瘤的发病机制提供了有效手段。     

4种血清标志物联合检测在肝癌诊断中的价值

目的探讨4种血清标志物对肝癌的诊断价值。根据应用的目的,选择相关的血清标志物进行联合检测,以提高肝癌诊断的准确性。方法采用化学发光法测定甲胎蛋白(AFP)、循环酶法测定总胆汁酸(TBA)、连续监测法测定γ-谷氨酰转移酶(GGT)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量。共检测肝脏占位病变者207例,其中169例为原发与继发性肝癌(病例组),对照组包括肝硬化结节和其他肝病等38例。结果病例组与对照组的AFP均数经t检验,差异有统计学意义(P0.01)。4种标志物单项检测对肝癌诊断的敏感性依次为GGTAFPTBAALT,特异性依次为AFPTBAALTGGT。AFP与其他3种血清标志物进行平行试验的敏感度均有所提高,AFP与其他3种血清标志物进行系列试验的特异度均显著提高。结论AFP、TBA、GGT、ALT联合检测对肝癌的诊断有意义,平行试验可提高敏感度,适用于高危人群的肝癌筛查;系列试验可显著提高特异度,有利于临床诊断工作。     

血清γ-谷氨酰基转移酶参考方法在国产试剂量值溯源中的应用

目的 应用血清γ-谷氨酰基转移酶(GGT)参考方法评价国产GGT试剂的溯源性.方法 按照国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)有关GGT活性测定的要求建立参考方法;根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)系列文件对建立的参考方法的主要性能进行评价;应用建立的参考方法评价国内不同厂家的GGT试剂在罗氏Cobas 6000和日立7170A全自动生化分析仪上测定结果的溯源性,并用经参考方法定值的新鲜人血清作为校准品实现不同检测系统检验结果的一致性和可比性.结果 GGT参考方法的批内不精密度和总不精密度均<1%,与国际参考实验室外部质量评价计划样品靶值的相对偏倚在等效限内;校准前常规检测系统与参考方法GGT检测结果在医学决定水平处的最大偏倚分别达到-47.53%、-34.11%、-30.07%,平均偏倚分别为14.53%、12.88%、12.48%;使用新鲜血清作为校准品校准后,最大偏倚分别降至-17.63%、-5.88%、-4.08%,平均偏倚降至7.50%、2.70%、1.87%.结论 GGT参考方法性能符合要求.应用参考方法赋值的新鲜人血清作为校准品进行校准是实现国内不同厂家酶学试剂检验结果一致性和可比性的有效途径.     

纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物检测方法的建立和初步临床应用

目的　建立纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的检测方法。方法　从血浆中纯化PAP作为免疫原制备单克隆抗体 (单抗 ) ,建立双抗体夹心法酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,并对该法进行评价。结果　获取了特异针对PAP新抗原的单抗LW 3C10 ,和针对PAP及纤溶酶原 (Plg)的单抗LW 2B9。对PAP的亲和常数分别为 4 6 9× 10 10 mol/L、5 6 2× 10 9mol/L。以它们建立的夹心ELISA检测PAP在 0～ 15 0 μg/L范围内线性良好 ,批内、批间CV分别为 4 0 %～ 5 2 %、11 2 %～ 13 6 % ,回收率为 85%～ 10 5 % ,加入α2 抗纤溶酶 (α2 AP)及纤溶酶 α2 巨球蛋白复合物 (P α2 M)不干扰测定 ,与美国ADI公司PAP试剂盒相关良好 (r=0 96 2 9)。急性髓细胞白血病组、急性心肌梗死组、肝病组、健康老年人组的血浆PAP水平显著高于正常对照组 (P <0 0 0 1)。结论　该法可用于评估纤溶系统激活。     

探讨血清γ-谷氨酰基转移酶对2型糖尿病早期诊断的临床意义

目的 探讨血清γ-谷氨酰基转移酶(GGT)对糖耐量受损(IGT)和2型糖尿病早期诊断的临床应用价值.方法 检测76例2型糖尿病(T2DM)、89例IGT及79例糖耐量正常(NGT)人员的血糖(Glu)、GGT及胰岛素水平,并进行统计学分析.结果 T2DM组和IGT组GGT水平(中位数)分别为20、27 U/L,明显高于NGT组15 U/L,差异有统计学意义(P<0.05);T2DM组、IGT组、NGT组胰岛素水平分别为(17.1±11.6)、(13.8±6.6)和(13.6±6.9)mIU/L,后两组之间差异无统计学意义(P>0.05).T2DM组和IGT组GGT的阳性率分别为15.8%和20.2%,明显高于NGT组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 GGT对IGT和T2DM的早期诊断有一定意义,且优于Glu和胰岛素水平.     

血清MMP9蛋白ELISA检测方法的建立及在肝癌患者血清检测中的初步应用

目的建立基质金属蛋白酶9（MMP9）的双抗体夹心ELISA检测方法，探讨血清中MMP9在正常人及肝癌患者中的差异。方法从人肝组织中经过反转录扩增出MMP9基因721—1156bp区段，插入到原核表达质粒pQE30中，在大肠埃希菌M15中诱导蛋白表达。以纯化的融合蛋白HIS—MMP9为抗原免疫实验用兔及豚鼠，得到的MMP9抗血清经过纯化后，建立双抗体夹心ELISA法。对227份正常及193份肝癌患者血清中的MMP9进行检测。结果SDS—PAGE显示所表达的HIS—MMP9融合蛋白相对分子质量约为17000；以原核表达蛋白为抗原制备的MMP9抗血清可有效地识别重组MMP9和中性粒细胞和HepG2细胞内源性MMP9蛋白；利用建立的MMP9 ELISA检测技术发现肝细胞癌患者血清中MMP9的含量高于正常人群，差异具有统计学意义，P〈0．001。结论建立的双抗体夹心ELISA方法可用于血清MMP9的检测，为建立以MMP9为检测指标的肝细胞癌患者转移复发筛查方法提供了科学基础。     

血清丙氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰氨基转肽酶、亮氨酸氨基肽酶水平联合检测在甲亢合并肝损害患者早期诊断中的应用价值

目的:研究血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰氨基转肽酶(γ-GT)、亮氨酸氨基肽酶(LAP)水平联合检测甲亢合并肝损害的应用价值。方法:选取我院甲亢患者124例(2019年3月?2020年3月),及同期健康体检者60例。均检测血清ALT、γ-GT、LAP水平,以肝功能损害标准为“金标准”。比较甲亢患者(合并肝损害、无肝损害)、健康体检者血清ALT、γ-GT、LAP水平,并统计血清ALT、γ-GT、LAP单一诊断及联合诊断甲亢合并肝损害的结果及诊断效能(灵敏度、特异度、准确度)。结果:经肝功能损害标准判断,124例甲亢患者中肝损害患者67例,无肝损害患者57例;甲亢患者血清ALT、γ-GT、LAP水平高于健康体检者,且合并肝损害患者高于无肝损害患者(P<0.05);联合诊断甲亢合并肝损害灵敏度95.52%高于ALT诊断64.18%、γ-GT诊断79.10%、LAP诊断80.60%,且联合诊断准确度89.52%高于ALT 诊断74.19%(P<0.05);ALT诊断特异度为85.96%,γ-GT诊断特异度为87.72%,LAP诊断特异度为84.21%,联合诊断特异度为82.46%,四者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:甲亢合并肝损害患者血清ALT、γ-GT、LAP水平会异常升高,且联合检测能提高诊断灵敏度、准确度,有助于肝损害的早期诊断,具有重要临床应用价值。     

颈动脉超声、血浆内脂素及血清γ-谷氨酰转移酶联合检测对冠心病的诊断价值

目的：探讨颈动脉超声、血浆内脂素及血清γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）联合检测对冠心病（CAD）的诊断价值。方法：对107例拟诊CAD患者行冠状动脉造影术（CAG）,按造影结果分成对照组（44例）及CAD组（63例）,其中CAD组根据病变支数进一步分为单支病变组和多支病变组。对所有拟诊患者均行颈动脉超声、血浆内脂素及血清γ-GT检测,并与CAG结果进行对比分析。结果：CAD组颈动脉内中膜厚度（IMT）增加明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.01）,CAD各组间比较多支病变组的IMT明显高于单支病变组,差异有统计学意义（P<0.01）;CAD组血浆内脂素及血清γ-GT均显著高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;多支病变组血浆内脂素高于单支病变组,差异有统计学意义（P<0.05）,但是血清γ-GT水平在两组中并无明显差别,而与心脏射血分数（EF）呈明显负相关（r=-0.24,P<0.01）。结论：颈动脉内中膜增厚、血浆内脂素及血清γ-GT与CAD密切相关,颈动脉内中膜增厚、血浆内脂素对CAD的诊断及判断冠状动脉粥样硬化严重程度具有重要临床意义,而血清γ-GT升高提示心脏功能的下降。     

脑卒中患者血清γ-谷氨酰转移酶水平变化及其与血脂的关系探讨

目的 探讨脑卒中患者血清γ-谷氨酰转移酶 (GGT) 的变化及与血脂的关系,为脑卒中的预防与治疗提供一个实验依据.方法 测定605例(其中男477例,女128例)脑卒中患者血清 GGT、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C).按 GGT值分为 4 个级别,将结果进行统计学处理.结果 605例脑卒中患者中 GGT 升高者为131例,异常率21.65%,其中男、女患者 GGT 异常率分别为21.59%、21.87%,男、女患者间 GGT 异常率的差异无统计学意义(P>0.05);男性患者大多数血脂指标随GGT水平升高而改变,血清TC、TG、LDL-C与GGT水平呈正相关,HDL-C与GGT呈负相关.而女性患者GGT不同分级组间血脂水平的差异均无统计学意义.结论 血清GGT活性升高有可能是男性脑卒中患者的一种危险因素.     

生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF方法的建立及其初步应用

目的 建立生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF的方法(简称“系统ELISA血清CTGF法”),初步评估CTGF在诊断慢性肝炎(CHB)患者肝纤维化的临床价值.方法 用生物素化抗CTGF单克隆抗体和多克隆抗体建立生物素-链霉亲和素ELISA方法,测定CHB患者血清CTGF水平.264例CHB患者根据肝穿刺病理诊断...     

血清抗甲状腺过氧化物酶抗体ELISA定量方法的建立

摘要：目的：建立一种ELISA方法用于定量分析血清抗甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体（TPOAb）。 方法：用生物素化牛血清清蛋白（BSA）和链霉亲合素包被微孔板,同时加入生物素化TPO抗原和待检血清,再加入酶标记抗人IgG,建立间接包被模式酶联免疫法测定抗TPO抗体。经方阵滴定确定生物素化抗原和酶标抗体的最适浓度,优化反应条件,并进行方法学评价。 结果：本法抗原包被量为0.083 μg/mL,检测灵敏度为0.165 IU/mL;高、低浓度混合血清批间变异系数（CV）为9.2%、9.0%,批内CV为4.6%、5.6%;回收率为96.0%~104.0%;包被板37 ℃放置5 d保持稳定;与抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb）交叉反应率为0.22%。经检测120例健康人,将参考值定为<65.7 IU/mL。与Abbott公司试剂盒检测结果的相关系数（r）为0.985（P<0.01）。 结论：间接包被模式适合TPOAb测定,包被抗原用量少,方法灵敏度高,特异性强;操作简单,成本较低,适合基层医院。     

血清γ-谷氨酰转移酶同工酶测定在肝癌鉴别诊断中的意义

目的：建立免疫沉淀法测定血清中低密度脂蛋白(LDL)-极低密度脂蛋白(VLDL)-γ-谷氨酰转移酶(GGT)活性及用垂直板不连续梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分析GGT同工酶，观察其在肝癌鉴别诊断中的价值。方法：以载脂蛋白B(Apo B)抗体沉淀血清中与LDL及VLDL结合的GGT并测定其活性，同时用电泳法分析原发性肝癌、肝硬化、慢性肝炎患及正常人血清GGT同工酶。结果：血清LDL-VLDL-GGT活性对肝癌的诊断敏感度可达86．2％，肝癌与肝硬化和慢性肝炎鉴别诊断的特异度分别为67．9％和81.3％；GGT同工酶Ⅱ在原发性肝癌患血清中的阳性率为78．7%，胆石症、肝硬化、肝炎患的GGTⅡ阳性率分别为15．4%、9．8％和6．4％，正常人为0％。结论：血清LDL-VLDL-GGT活性对鉴别肝癌与其他肝病具有重要意义；血清GGTⅡ是肝癌特异性的同工酶形式。     

联合检测尿微量清蛋白和血清谷氨酰转移酶在糖尿病肾病早期诊断中的价值

目的探讨联合检测尿微量清蛋白和血清γ-谷氨酰转移酶(GGT)在糖尿病肾病中的诊断价值,为临床早期诊断提供依据。方法采用快速金标法和速率法检测168例2型糖尿病患者和124例健康对照组尿微量清蛋白和血清GGT水平。结果 2型糖尿病患者尿微量清蛋白和血清GGT高于对照组(均P0.01)。结论联合检测尿微量清蛋白和血清GGT为临床早期诊断糖尿病肾病提供实验室参考依据,具有重要意义。     

γ-谷氨酰基转肽酶检测对酒精性脂肪肝的辅助诊断意义

目的研究γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)检测对酒精性脂肪肝(AFL)辅助诊断意义。方法检测并比较220例AFL确诊患者及190健康者血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、GGT及碱性磷酸酶(ALP)水平。结果 AFL患者ALT、AST、GGT水平高于健康者(P<0.05),其中GGT升高幅度最大。结论 GGT检测对AFL具有较大的辅助诊断意义,较为敏感、特异,应重视对患者及体检者进行血清GGT检测。