FGF23-Klotho轴及其生理学作用的研究进展

成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor-23,FGF23)-Klotho轴功能异常在慢性肾病及血液透析所致钙磷代谢失调中具有重要作用。然而,新近大量研究指出FGF23-Klotho轴的紊乱所致的FGF23抵抗参与到其他疾病的病理生理进程中,本文拟对FGF23-Klotho轴及其生理功能最新研究进展作一综述。     

FGF23、orexin A、BMP-7在肾衰竭患者中的表达水平及与临床预后的关系

目的 探讨成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)、食欲素A(orexin A)、骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)在肾衰竭患者中的表达水平及与临床预后的关系。方法 选取收治的肾衰竭患者65例为研究组,另选同期健康体检人群65例为对照组。研究对象均检测血液中FGF23、orexin A、BMP-7水平并进行比较分析;进行1年随访后,比较不同临床预后患者的临床资料,并分析FGF23、orexin A、BMP-7与肾衰竭患者临床不良预后的相关性;COX回归分析影响肾衰竭患者预后因素,分析FGF23、orexin A、BMP-7预测肾衰竭患者预后不良的接受者操作特性曲线(receiver operating characteristic curve, ROC)图。结果 与对照组比较,研究组FGF23、orexin A表达水平及血肌酐、尿酸、血尿素氮、C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)水平较高,BMP-7表达水平较低(P<0.05);预后良好组48例,预后不...     

重庆地区汉族人群FGF23基因多态性与冠心病的相关性分析

目的 探索重庆地区汉族人群中成纤维细胞生长因子23(FGF23)基因多态性同冠心病发病的相关性.方法 筛选2014年5月至2015年3月在我科接受冠脉造影检查的重庆汉族人群431例,其中冠心病(CHD)组231例与对照组200例.提取血液DNA样本后采用Sequenom Massarray 系统对于rs7955866、rs13312756、rs3812822这3个FGF23基因TagSNP位点进行基因分型,对其等位基因、基因型及单体型的组间分布进行统计学分析.结果 CHD组rs7955866 A等位基因和rs3812822 C等位基因频率明显高于对照组(P ＜0.001),两位点组间基因型分布也存在明显差异(P＜0.01).单因素Logistic回归分析示rs7955866 GA基因型携带者患病风险为GG基因型的2.146倍,具有统计学意义(P=0.01,OR=2.146,95％ CI[1.393 ～3.306]),rs3812822 CT基因型与TT基因型携带者患病风险亦具有统计学差异(P=0.01,OR=2.010,95％CI[1.327 ～3.046]).多因素非条件Logistic回归分析调整性别、年龄、BMI、吸烟饮酒史、高血压病史、高胆固醇血症等混杂因素后,结果显示rs7955866及rs3812822位点均与CHD发病独立相关(P＜0.001,OR=2.478,95％ CI[1.613 ～3.806];P ＜0.001,OR=2.123,95％CI[1.439 ～3.132]).单体型rs7955866-rs1 3312756-rs3812822统计学分析结果显示,单体型ACC具有增加冠心病患病风险的作用(P＜0.001; OR=2.074,95％ CI[1.391～3.091]).结论 重庆汉族人群FGF23基因多态性及与冠心病患病风险相关.     

特发性中枢性性早熟女童FGF23、Klotho、IGF-1和性激素水平分析

目的 检测特发性中枢性性早熟女童的血清成纤维细胞生长因子23（FGF23）、Klotho、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和促性腺激素的水平,探讨其与特发性中枢性性早熟的关系。方法 选取2021年6月—2022年6月河北省人民医院儿科收治,年龄< 8岁,诊断为特发性中枢性性早熟的女童34例作为观察组。选取同期于本院行健康体检,年龄< 8岁,未启动青春期发育的26例健康女童作为对照组。检测所有入选者的血清FGF23、Klotho、IGF-1、性激素水平、骨龄及卵巢容积,并进行比较分析。结果 观察组和对照组的身高、身高标准差积分、体质量指数、体质量指数标准差积分、骨龄、骨龄指数和卵巢容积比较,差异均有统计学意义（P <0.05）。观察组和对照组的促黄体生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）、FGF23比较,差异均有统计学意义（P <0.05）。观察组患儿的Klotho和FGF23呈正相关（r =0.781,P <0.05）,Klotho与IGF-1、LH、体质量指数、骨龄和卵巢容积呈正相关（r =0.646、0.520、0.317、0.413和0.697,均P <0.05）;FGF23与IGF-1、LH、体质量指数、骨龄和卵巢容积呈正相关（r =0.781、0.591、0.392、0.353、0.410和0.669,均P <0.05）。结论 血清IGF-1、FGF23和 Klotho在女童青春期发育中发挥了一定的生理作用。     

2型心肾综合征患者血清FGF23、renalase表达及其预后相关性研究

目的探讨2型心肾综合征（CRS）患者血清成纤维细胞生长因子23（FGF23）、肾胺酶（renalase）表达及其与预后相关性。方法选取2017年2月至2019年6月石家庄市第三医院收治的254例慢性心力衰竭（CHF）患者进行研究,其中单纯CHF患者151例（CHF组）,2型CRS患者103例（2型CRS组）,另外选取110例同期健康体检者作为对照组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清FGF23、renalase表达并进行组间比较,记录2型CRS患者24个月随访期内预后情况;绘制受试者工作特征（ROC）曲线评估血清FGF23、renalase表达对2型CRS的诊断价值;采用乘积极限法（K-M法）进行生存分析,Log-rank检验比较显著性;采用COX回归模型分析2型CRS患者预后影响因素。结果对照组、CHF组、2型CRS组血清FGF23表达水平依次升高（P<0.05）,renalase表达水平依次降低（P<0.05）。血清FGF23、renalase单独及两者联合诊断2型CRS的曲线下面积（AUC）分别为0.804、0.824、0.889,FGF23单独诊断2型CRS的截断值为47.77 pg/ml,敏感度、特异度分别为76.70%、76.60%; renalase单独诊断2型CRS的截断值为23.92μg/ml,敏感度、特异度分别为66.00%、92.70%;两者联合诊断的敏感度为79.60%,特异度为86.20%。24个月随访期内,2型CRS患者预后不良的发生率为41.75%（43/103）,与FGF23低表达者相比,FGF23高表达者预后不良发生率较高（χ 2=8.490,P<0.05）,无进展生存期较短（Log-rank值为8.690,P<0.05）;与renalase高表达者相比,renalase低表达者预后不良发生率较高（χ 2=13.787,P<0.05）,无进展生存期较短（Log-rank值为14.311,P<0.05）。COX多因素分析结果显示,年龄>60岁、合并糖尿病、FGF23高表达、renalase低表达均是影响2型CRS患者预后不良的独立危险因素（P<0.05）。结论 2型CRS患者血清FGF23、renalase表达异常,可能为2型CRS的早期诊断及预后评估提供临床参考依据。     

FGF23/Klotho轴与慢性肾脏病的研究进展

【摘要】 成纤维细胞生长因子 23(Fibroblast growth factor 23,FGF 23)是一种调节磷和活性维生素D(1,25(OH)2D)代谢的一种骨源性激素。FGF 23在其共受体Klotho的协同下与成纤维细胞生长因子受体 1(Fibroblast growth factor receptor 1,FGFR 1)结合,通过提高肾脏对磷的排泄,维持血清磷水平在正常范围内。此外,FGF 23还能减少1,25(OH)2D的合成和促进其降解,从而减少肠道对磷的吸收。而且,FGF 23还可作用于甲状旁腺,减少甲状旁腺激素(PTH)的合成及其分泌。在慢性肾脏病(CKD)的发展进程中,在血清磷浓度升高发生的很早之前,随着肾功能降低,血清FGF 23水平就明显升高,而血清Klotho却显著降低。目前研究表明FGF 23/Klotho轴与CKD病程中的钙磷代谢紊乱、继发性甲状旁腺功能亢进症(Secondary hyperparathyroidism,SHPT)和心血管疾病(Cardiovascular diseases,CVD)等并发症密切相关,在慢性肾脏病 矿物质及骨代谢异常(CKD MBD)的发生发展中起重要作用。近年来,对FGF 23/Klotho轴与CKD关系不断的深入研究,为CKD MBD的诊断和治疗带来了新的视角。本文旨在就FGF 23/Klotho轴与CKD的研究进展作一综述。     

老年腔隙性脑梗死与血浆FGF23蛋白水平的相关性研究

目的 研究血浆FGF23蛋白水平与老年腔隙性脑梗死的相关性.方法 选择年龄大于65岁腔隙性脑梗死患者75例作为腔梗组;无腔隙性脑梗死老年人75例作为对照组.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较两组血浆FGF23蛋白水平,分析血浆FGF23水平与老年腔隙性脑梗死的相关性.结果 腔梗组血浆FGF23蛋白水平明显高于对照组(P＜0.01),高血压患者比例明显高于对照组(P＜0.05).多因素Logistic回归分析提示高血浆FGF23蛋白水平和高血压是老年腔隙性脑梗死的独立危险因素(OR=1.847、2.478,P=0.040、0.019).结论 高血浆FGF23蛋白水平与腔隙性脑梗死发病有关.     

FGF 23和Klotho蛋白水平在终末期肾病患者中与钙磷代谢及其伴发病的相关性

【摘要】 目的 探讨血清成纤维细胞生长因子23（FGF 23）和Klotho蛋白水平在终末期肾病（ESRD）患者中与钙磷代谢、动脉硬化、左室肥厚的相关性。方法 选取2015年1月～2016年4月在大连大学附属中山医院血液净化科进行血液透析（HD）的患者50例为血透组、腹膜透析（PD）患者50例为腹透组,并选取同期在本院体检的健康人群30例为健康对照组。通过整理资料、实验室检测、超声科检查比较不同透析方式对FGF 23和Kloth蛋白水平的影响、同时分析FGF 23和Kloth蛋白水平与钙磷代谢、动脉硬化及左室肥厚的相关性。结果 血透、腹透组FGF 23水平明显高于健康对照组,且血透组FGF 23水平也明显高于腹透组,差异有统计学意义（P＜005）;血透组、腹透组Klotho蛋白水平明显低于健康对照组,差异均有统计学意义（P＜005）,血透组与腹透组Klotho蛋白水平相近,差异无统计学意义（P＞005）;FGF 23水平与钙磷代谢呈正相关（r =05323、05178、05178,P＜005）、与继发性甲状旁腺功能亢进呈正相关（r =03038,P＜005）、与颈动脉硬化呈正相关（r =02987,P＜005）;Kloth蛋白与钙磷代谢呈负相关（r = 05103、 01105、 05264,P＜005）、与继发性甲状旁腺功能亢进呈正相关（r =03254,P＜005）。结论 ESRD透析患者中FGF 23存在高表达,而Klotho蛋白存在低表达,它们与HD、PD患者发生高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、动脉硬化关系密切。     

慢性肾脏病患者FGF23与PTH及血钙、血磷的关系

目的探讨血清成纤维细胞生长因子(FGF-23)在慢性肾脏病(CKD)患者中与甲状旁腺激素(PTH)及血钙、血磷的关系。方法选取2018年12月—2019年12月本院收治的慢性肾脏病患者86例作为研究对象,依据肾小球滤过率(eGFR)分为三组,分别为A组(CKD1-2期)28例,B组(CKD3-4期)30例,C组(CKD5期)28例。另选同期健康体检人员30名作为对照组。分别测定各组患者的FGF23,全段血甲状旁腺激素(iPTH)、血肌酐(Scr)、血钙(Ca)、血磷(P),采用SPSS 22.0软件处理,F检验用于计量资料,并采用■表示,χ²检验用于计数资料,Pearson相关分析用于两变量之间的关系,以P<0.05为检验标准,检验有无统计学意义。结果与D组比较,A组eGFR下降,FGF23升高(P<0.05),B、C组iPTH、P、FGF23升高,eGFR、Ca下降(P<0.05);与A组比较,B、C组eGFR、Ca下降(P<0.05),iPTH、FGF23、P升高(P<0.05);与B组比较,C组eGFR、Ca下降(P<0....     

血清IMD、CysC及FGF23与高血压左心室肥厚的相关性研究

目的：探讨联合检测血清中叶素( IMD)、胱抑素 C (CysC)、成纤维细胞生长因子23(FGF23)与高血压左心室肥厚( HLVH)发生的关系。方法选择单纯原发性高血压( EH)患者30例( EH组)、HLVH患者30例( HLVH组)及健康体检者30例(对照组),行心脏彩超计算左室质量指数( LVMI),采用酶联免疫吸附法( ELISA)测受试者血清IMD、CysC及FGF23水平,同时检测相关生化指标。结果①EH组LVMI及血清 IMD、CysC、FGF23水平高于对照组( P <0．05),HLVH组 LVMI及血清 IMD、CysC、FGF23水平高于EH组及对照组,差异均有统计学意义( P<0．05)。②不同级别高血压患者LVMI及血清IMD、CysC、FGF23水平随高血压分级上升而增高,差异均有统计学意义( P<0．05)。③LVMI与 IMD、CysC、FGF23呈显著正相关性( r =0．769、0．517、0．700,P<0．01),以LVMI为应变量行多元线性逐步回归分析显示：收缩压( SBP )、IMD、CysC、同型半胱氨酸( Hcy)、FGF23进入回归方程,是影响 LVMI的独立危险因素。结论血清IMD、CysC及FGF23水平与EH、HLVH密切相关,可能参与了EH的发生发展,并影响HLVH的进程。联合检测血清IMD、CysC及FGF23可作为评估HLVH病情及预后的参考指标。     

人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化

目的：构建和表达人成纤维细胞生长因子-21（FGF21）的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法：通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接后转化至BL21（Rosetta）宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经Ni-NTA、分子筛等进行纯化,获得的蛋白纯度在95%以上。结果：经酶切和基因测序证实获得的FGF21基因序列与GenBank（登录号NM019113）报道的完全一致,构建的pET20b-SUMO-FGF21表达载体在BL21大肠杆菌中成功表达FGF21蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量为19 401,与理论预期值相符。Western blotting 分析该表达产物与人FGF21多克隆抗体具有特异性结合能力,经SUMO酶酶切后获得纯度大于95%以上的纯蛋白。结论：成功构建表达人FGF21融合蛋白的基因工程菌,经IPTG诱导、Ni-NTA、分子筛等进行纯化后获得了FGF21纯蛋白。     

慢性肾病患者血清FGF23和Klotho蛋白与心脏并发症的关系

目的：分析维持性血液透析患者血清钙、磷及成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor,FGF23)、 Klotho蛋白水平,探讨慢性肾病矿物质及骨代谢异常(chronic kidney disease-mineral and bone disorder,CKD-MBD)患 者血清FGF23、Klotho蛋白水平变化与心血管系统并发症的关系。方法：回顾性分析中南大学湘雅医院CKD-MBD 未透析患者(NHD组)、CKD-MBD规律血液透析患者(HD组)及CKD-MBD伴继发性甲状旁腺功能亢进(secondary hyperparathyroidism,SHPT)伴腺瘤样增生患者(SHPT组)各60例的MBD及心脏损伤发病情况,比较血液透析对患者 病情的影响。同期收集体检中心体检健康的30例对象为对照组,记录其基本情况、收集钙、磷、全段甲状旁腺素 (iPTH)等钙磷代谢指标及心脏彩超检查结果。通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测 各组血清FGF23和Klotho蛋白情况,比较各组之间钙磷代谢相关生化指标、左室肥厚、左室扩大及心脏瓣膜异位钙化 之间差异,分析上述指标间相关性,明确CKD-MBD患者心血管损伤的相关因素及其与FGF23蛋白和Klotho蛋白水平 的关系。结果：维持性血液透析患者尤其是伴有SHPT的血液透析患者血清FGF23水平明显升高,而血清Klotho蛋白 水平明显降低(P<0.01)。FGF23蛋白水平降低者发生异位钙化风险升高(OR=4.667);Klotho蛋白水平降低者发生心肌肥 厚风险升高(OR=3.496)。在慢性肾病患者异位钙化诊断中的血清FGF23蛋白水平ROC曲线下面积为0.778(P<0.01);血 清Klotho蛋白水平ROC曲线下面积为0.715(P<0.01)。结论：血清FGF23增多、Klotho蛋白减少是CKD心脏损伤的危险因 素。FGF23和Klotho蛋白可作为诊断和预测CKD-MBD患者心脏异位钙化的临床指标。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子-穿膜肽融合蛋白的克隆表达、纯化及活性检测

目的：高效表达并纯化具有生物学活性的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)-穿膜肽(tat)融合蛋白,为进一步开发基因工程药物提供实验依据。方法:通过双酶切方法,从质粒pMD18-T-aFGF-tat中获得aFGF-tat基因片段,并将aFGF-tat融合基因与原核表达载体pET3c连接后转化到大肠杆菌BL21（DE3）宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达,将融合蛋白经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化,MTT法检测aFGF-tat融合蛋白对NIH 3T3细的促增殖作用。结果:经酶切和基因测序证实获得的重组人aFGF-tat基因序列与GenBank报道的完全一致,构建的pET3c-aFGF-tat表达载体在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达aFGF-tat融合蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量与理论预期值相符,经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化后蛋白纯度高于95%,Western blotting分析表达产物与人aFGF多克隆抗体具有特异结合能力,并能够促进NIH 3T3细胞增殖。结论:成功表达重组人aFGF-tat融合蛋白工程菌,获得aFGF-tat纯蛋白,并证实aFGF-tat融合蛋白具有促细胞增殖活性。     

不同阶段慢性肾脏病患者血清成纤维细胞 生长因子23 与血管钙化的相关性

目的 探讨不同阶段慢性肾脏病（CKD）患者血清成纤维细胞生长因子23（FGF-23）与血管 钙化的关系。方法 选取2017 年1 月—2018 年6 月天津医科大学总医院肾内科收治的CKD 患者128 例。分 为CKD 1 ～ 2 期组、CKD 3 ～ 4 期组、CKD 5 期组、钙化组及无钙化组,另选取同期健康群众50 例作为对 照组。比较各组的FGF-23、尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）、胱抑素C（Cys C）、肾小球滤过率（GFR）、 钙及磷水平,比较不同阶段的CKD 患者的钙化率。分析CKD 患者血清FGF-23 与临床相关指标的相关性, 分析FGF-23 的独立影响因素。结果 CKD 5 期组的血清FGF-23、BUN、Scr、Cys C 及磷均高于其他3 组 （P <0.05）,GFR、钙均低于其他3 组（P <0.05）;CKD 3 ～ 4 期组的血清FGF-23、BUN、Scr、Cys C 均高 于CKD 1 ～ 2 期组和对照组（P <0.05）,GFR 低于CKD 1 ～ 2 期组和对照组（P <0.05）;CKD 1 ～ 2 期组 的血清Scr、Cys C 高于对照组（P <0.05）,GFR 低于对照组（P <0.05）。钙化组的血清FGF-23、BUN、Scr、 Cys C、磷均高于无钙化组和对照组（P <0.05）,GFR 低于无钙化组和对照组（P <0.05）。CKD 患者血清 FGF-23 与BUN、Scr、Cys C 及磷呈正相关（P <0.05）,与GFR 呈负相关（P <0.05）。经Logistic 回归分析 得知,GFR[Ol ^ R=0.312（95% CI ：0.200,0.487）] 和磷[Ol ^ R=3.714（95% CI ：1.889,7.302）] 是血清FGF-23 的影响因素（P <0.05）。结论 CKD 患者血清FGF-23 水平随临床分期增加而升高,且存在血管钙化的患者 血清中FGF-23 异常升高,其水平可反映患者的血管钙化情况。     

Levels and dynamic changes of serum fibroblast growth factor 23 in hypophosphatemic rickets/osteomalacia

Background Hypophosphatemic rickets/osteomalacia is a group of diseases characterised by defective mineralization of bone due to hypophosphatemia and low 1,25-dihydroxy vitamin D. To explore the role of fibroblast growth factor 23 （FGF-23） in the regulation of phosphate homeostasis, we measured the circulating concentrations of this growth factor in healthy individuals and in patients with hypophosphatemic rickets/osteomalacia. Methods Nineteen patients with hypophosphatemic rickets/osteomalacia were included in hypophosphatemic group （HP, 12 female and 7 male, mean age was 30 years）, and 19 healthy age-matched individuals served as the control group. Full length FGF-23 fragments were measured by two-site enzyme-linked immunosorbent assay.Results Mean FGF-23 concentrations were significantly higher in the HP group （（87.4±43.6） pg/ml） compared with the control group （（19.2±6.16） pg/ml; P 〈0.001）. In 1 patient with tumour-induced osteomalacia, serum FGF-23 concentrations were 84.1 pg/ml; these concentrations were normalized 2 hours after a hemangiopericytoma resection （7.8 pg/ml）. Subsequently, serum 1,25（OH）2 vitamin D3 concentrations significantly increased from 21.3 pg/ml to 89.3 pg/ml, and serum phosphorus levels were normalized. Conclusions Serum FGF-23 concentrations were markedly elevated in patients with hypophosphatemic rickets. FGF-23 plays an important role in the pathogenesis of hypophosphatemic rickets/osteomalacia.     

Dok4和Dok5 PTB结构域融合蛋白的表达和纯化

目的 :制备Dok4和Dok5PTB结构域的GST融合蛋白。方法 :用PCR方法分别扩增编码Dok4、Dok5PTB结构域的cDNA ,并将其克隆入表达载体pGEX 4T 3中 ,转化大肠杆菌BL 2 1,构建成表达GST PTB融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后 ,经Glutathion Sepharose 4B亲和层析柱纯化 ,用SDS PAGE进行分析 ,该融合蛋白的表达量超过菌体总蛋白的 2 5 %。结果 :获得重组的GST 4PTB和GST 5PTB融合蛋白 ,纯度在 95 %以上 ,产物得率约 75 %。结论 :成功制备高纯度Dok4和Dok5PTB结构域的GST融合蛋白 ,为进一步研究磷酸化酪氨酸结合结构域 (PTB)的结构和生物学功能奠定基础