电离辐射对人成纤维细胞中透明质酸酶表达的影响

目的:研究电离辐射对人成纤维细胞中透明质酸酶(HAase)表达的影响,并探讨其在放射性臂丛神经损伤致病机制中的作用.方法:0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 Gy X射线分别照射人成纤维细胞24和48 h,同时设立假照组(0GyX射线),透射电镜观察其超微结构的改变,并采用ELISA法和Real-time PCR法...     

透明质酸酶对眼眶成纤维细胞增殖及分泌透明质酸的影响

目的 探讨透明质酸酶对人眼眶成纤维细胞增殖以及分泌透明质酸的影响,为透明质酸酶用于甲状腺相关眼病患者的治疗提供实验依据.方法 取健康意外死亡者眼眶脂肪组织行眼眶成纤维细胞培养,用不同浓度透明质酸酶(0 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、500 μg/mL)分别处理细胞,在不同时间点(24 h、48 h、72 h)观察细胞形态变化;MTT法检测细胞增殖情况;ELISA法检测透明质酸含量.结果 体外成功培养人眼眶成纤维细胞;各浓度透明质酸酶作用眼眶成纤维细胞后细胞形态密度未见明显差别;MTT测得A值在各时间点上的差异无统计学意义(P值均＞0.05);各浓度实验组分别与在同一时间点的正常对照组相比差异无统计学意义(P0.05);各浓度透明质酸酶组均较空白对照组透明质酸含量减少,随浓度升高透明质酸含量降低,随时间变化实验组与对照组透明质酸含量差值增加.各浓度组在3个时间点分解透明质酸量与空白对照组差异均具有统计学意义(P<0.01).结论 通过获取人眼眶脂肪结缔组织进行组织块法成功培养、传代获得纯化眼眶成纤维细胞;实验设定浓度范围的透明质酸酶对眼眶成纤维细胞的增殖无明显影响;眼眶成纤维细胞能分泌透明质酸,不同浓度透明质酸酶均对其有分解作用,且呈剂量和时间依赖性.     

透明质酸对胚胎成纤维细胞胶原网架收缩的影响

目的 探讨羊水中抑制胚胎伤口收缩的成分是否为透明质酸ＨＡ以ＨＡ对胚胎伤口收缩是否有直接的抑制作用。方法 使用一种体外胚胎伤口收缩模型－－含成纤维细胞的胶原网架ＦＰＣＬ），观察ＨＡ深度为１μｇ／ｍ１￣１０ｍｇ／ｍ１对ＦＰＣＬ收缩的影响。结果低深度组（１、５、２０、５０、１００、１０００μｇ／ｍ１）的ＨＡ对ＦＰＣＬ的收缩指数，差异有显著意义（Ｐ〈０．０５）；高深度级（３、６、１０ｍｇ／ｍ１）ｒ ＨＡ     

透明质酸刺激因子对成纤维细胞胶原合成的影响

０引言在瘢痕机理的研究中，有学者发现一种相对分子质量（Ｍｒ）为１５０ｘ１０３的糖蛋白能刺激体外培养的成纤维细胞（ＦＢ）产生高浓度透明质酸（ＨＡ），称为透明质酸刺激因子（ＨＡＳＦ）．ＨＡＳＦ参与创伤愈合过程，是导致胚胎早期伤口无瘢痕修复的重要因素之一［１］，而瘢痕的主要基质成分为胶原蛋白，ＨＡＳＦ对于ＦＢ胶原合成的作用尚未见文献报道，我们利用体外培养的正常人皮肤及瘢痕ＦＢ，观察了ＨＡＳＦ对细胞胶原合成的影响．１方法１．１实验仪器与试剂ＬＳ－６５００液问计数仪（Ｂｅｃｋｍａｎ），ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２…     

透明质酸刺激因子对增生性瘢痕成纤维细胞透明质酸合成的影响

目的　了解兔源性透明质酸刺激因子 (HASF)对体外单层及三维培养条件下增生性瘢痕成纤维细胞 (FB)透明质酸 (HA)合成的影响 .方法　从胎兔羊水及血清中提纯HASF分别作用于单层及三维培养的 FB细胞 ,用放免法测定上清液中 HA浓度 .结果　在单层培养条件下 ,随着 HASF剂量由 0 .1m g· L- 1增至 0 .1g· L- 1 ,HA浓度也由 (495±37) mg· L- 1 增至 (914± 75 ) mg· L- 1 ,在一定范围内呈剂量依赖性 (P<0 .0 1) .继续增加 HASF剂量 ,HA浓度并不成比例增加 ,呈显出饱和性 .随 HASF作用时间由 3d延长至 7d,HA浓度也呈时间依赖性的增加 (P<0 .0 1) .在三维培养条件下 ,随 HASF剂量的增加 ,HA浓度也由 (90± 2 5 ) mg· L- 1增至 (2 93± 6 3) mg· L- 1 ,也呈剂量依赖性 (P<0 .0 1) ,且明显低于单层培养条件下 HA的浓度 (P<0 .0 1) .结论　 HASF对单层及三维培养的 FB有明显的促 HA合成作用 ,并呈剂量和时间依赖性 .     

透明质酸刺激因子对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响

目的：了解兔源性透明质酸刺激因子（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ,ＨＡＳＦ）对人增生性产痕成纤维细胞生长增殖的影响。方法：将ＨＡＳＦ作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,测定＾３Ｈ－ＴｄＲ参入量、ＭＴＴ反应Ａ值及上清液中有质酸（ＨＡ）的含量。结果：１×１０＾－３～１×１０＾－２ｇ／Ｌ值降低,ＨＡ含量明显增加（Ｐ〈０．０１）。结论：兔源性ＨＡＳＦ在体外能促进人增     

AT2受体对成年大鼠心肌成纤维细胞ET-1蛋白及其mRNA水平的影响

1 材料和方法 1．1材料雄性sD大鼠,体质量230-250g（西安交通大学医学院实验动物中心提供）;血管紧张素Ⅱ（angiotensin II,AngⅡ）,受体特异性阻断剂（PD l23319）（美国Sigma公司）;氯沙坦（losartan,Los）（美闰DuPont＆Merk Pharmaceuticals公司）;RT-PCR试剂（美旧Promega公司）;内皮素1（endothelinl,     

透明质酸,肝素,酸性成纤维细胞生长因子对内皮细胞生长的影响

０引言血管内皮细胞（ＥＣｓ）的培养是研究内皮细胞生物学、生理生化特性的重要手段,同时也是应用组织工程技术体外复制血管的关键步骤［１］．我们对ＥＣｓ生长的控制因素进行了初步探索［２］．１材料和方法１．１内皮细胞的获取应用酶消化法,以１ｇ／Ｌ的胶原酶（Ｓ...     

丹参对人粘连组织成纤维细胞MMP-1与TIMP-1mRNA表达的影响

目的 考察丹参及其化学成分对人粘连组织成纤维细胞（ATF）MMP-1与TIMP-1 mRNA表达的影响。方法 使用组织块培养的方法获取ATF，分别加入丹参提取物、丹参素钠、丹参酮IIA磺酸钠与地塞米松培养48 h，提取总RNA并逆转录为cDNA，采用Real-time PCR法检测各组MMP-1与TIMP-1 mRNA的表达水平。结果 与空白对照组比较，丹参提取物与丹参素钠10、40 μg？mL-1剂量组MMP-1 mRNA水平差异有统计学意义（p〈0.01），丹参素钠40 μg？mL-1剂量组TIMP-1 mRNA水平差异有统计学意义（p〈0.01），其余各组差异均无统计学意义（p〉0.05）。结论 上调MMP-1 mRNA水平是丹参抑制ATF胶原过度合成，防止粘连产生的作用机制之一，丹参素在其中起主要作用。     

透明质酸合酶-2在癌相关成纤维细胞促进舌癌细胞侵袭中的作用

目的:检测透明质酸合酶2 (hyaluronan synthase 2,HAS2) 在正常成纤维细胞(normal zone fibroblasts,NFs)及癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)中的表达,并探讨其在CAFs介导的舌鳞癌细胞系Cal27侵袭行为中的作用?方法:分别从同一舌癌患者手术切除标本的癌组织及癌旁组织获取CAFs和NFs?免疫细胞化学?Western blot法鉴定细胞表型?实时定量RT-PCR及Western blot检测透明质酸合酶在两种细胞中的表达?利用Transwell小室共培养模型,观察CAFs及NFs对舌癌细胞系Cal27侵袭能力的影响?利用siRNA抑制CAFs 中的HAS2,并分析其对Cal27侵袭能力的影响?结果:α-SMA表达于CAFs,NFs中几乎无表达?Cal27在CAFs组中的侵袭力显著高于NFs组及空白对照组(P < 0.01)?实时定量RT-PCR结果显示HAS2在CAFs中的表达是NFs的7倍(P < 0.01),蛋白水平则为NFs的3倍(P < 0.01);Cal27在HAS2干扰组的侵袭力显著低于CAFs组及无关序列组(P < 0.01)?结论:CAFs具有促进舌癌细胞侵袭能力的作用,高表达HAS2可能是其作用机制之一,抑制肿瘤微环境中CAFs的HAS2功能可能是一条新的抗肿瘤侵袭转移的途径?     

芦荟多糖对体外培养人成纤维细胞增殖和分泌透明质酸与羟脯氨酸的影响

目的：观察芦荟多糖对体外培养人成纤维细胞增殖及其分泌透明质酸与羟脯氨酸水平的影响,并探讨其在创面愈合过程中的可能作用机制。方法：将体外培养人成纤维细胞随机分为芦荟多糖组（25、50、100、200和400rag／I。）和对照组。通过甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖状况,流式细胞技术检测细胞周期,吖啶橙-溴乙锭（acridine orange-ethidium bromide,AO-EB）染色法检测细胞生存状况,乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）漏出率检测细胞损伤程度,^3H脯氨酸掺入法观察细胞胶原合成情况,酶联免疫吸附测定法检测细胞分泌透明质酸和羟脯氨酸的水平。结果：各个浓度芦荟多糖均能促进细胞增殖,并于细胞培养的第5天达到高峰。与对照组相比,各个浓度芦荟多糖组G0／G1期细胞所占百分率显著下降,而G2／M期和S期细胞所占百分率显著上升（P〈0．01）;AO—EB染色显示各浓度芦荟多糖组细胞核着绿色荧光并呈正常结构,未发生死亡或凋亡;各个浓度芦荟多糖组LDH漏出率均呈不同程度的下降（P〈0．05）;芦荟多糖能明显促进细胞内胶原合成及透明质酸和羟脯氨酸的分泌（P〈0．05）。结论：芦荟多糖可通过促进人成纤维细胞增殖和透明质酸与羟脯氨酸等细胞外基质的分泌,加速创面愈合。     

电离辐射对小鼠胸腺细胞蛋白质表达的影响

目的 :观察低剂量 X射线全身照射诱导小鼠胸腺细胞蛋白质表达变化及对细胞内外蛋白质交换的影响。方法 :采用双向电泳方法。结果 :75m Gy X射线全身照射小鼠后 4h,细胞浆出现 5个新蛋白点、4个增强蛋白点及 3个减弱蛋白点。正常细胞浆中的 5个蛋白点在照射后消失。照射后细胞外液出现 1个新蛋白点、1个增强蛋白点及 1个减弱蛋白点。正常细胞外液中的 3个蛋白点在照射后消失。正常细胞浆中的 2个蛋白点在照射后分别减弱和消失 ,而在细胞外液中出现和增强。正常细胞外液中的 2个蛋白点在照射后消失 ,而出现在细胞浆中。结论 :低剂量辐射诱导小鼠胸腺细胞蛋白质表达变化 ,并促进细胞内外大分子物质的交换     

离辐射对小鼠EL-4淋巴瘤细胞caspase-3蛋白表达的影响

目的：观察电离辐射对caspase-3蛋白表达的影响。方法：采用体外传代培养的小鼠EL-4淋巴瘤细胞为实验材料；采用单克隆抗体免疫荧光标记，FACScan流式细胞仪(FCM)检测蛋白表达的变化；采用PI荧光标记及FCM测定细胞凋亡的变化；量效实验, 观察0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后24 h EL-4细胞caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的变化；时效实验, 观察4.0 Gy照射后2、4、8、12、24、48及72 h EL-4细胞caspase-3蛋白表达的变化。结果：量效实验表明，0.5、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后24 h EL-4细胞中caspase-3蛋白表达均明显增高，与假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.05或P<0.01)。0.5、1.0及4.0 Gy 照射后24 h EL-4细胞凋亡明显增高，与假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.05或P<0.01)。 时效实验表明，4.0 Gy照射后8、12及24 h EL-4细胞中caspase-3蛋白表达均明显增高, 与同时间点假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.01或P<0.001)。结论：电离辐射可诱导EL-4细胞caspase-3蛋白表达增高。同时诱导EL-4细胞凋亡。     

电离辐射对小鼠骨髓 c-kit 阳性细胞损伤效应体外研究

目的：观察电离辐射引起小鼠骨髓 c-kit+细胞损伤变化。方法磁珠法分选小鼠 c-kit+细胞,生物发光法检测细胞活力,活性氧探针(DCFH-DA)检测细胞内活性氧水平,集落形成数目检测克隆形成能力,流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,基因芯片分析细胞内信号通路变化。结果与0 Gy 组(对照组)比较,c-kit+细胞受到1 Gy 和4 Gy 照射后,细胞活力下降,克隆形成能力下降,早期凋亡和晚期凋亡细胞比例增加,细胞内活性氧水平升高;与对照组比较,c-kit+细胞受到1 Gy 照射后,处于增殖期(S/G2/M 期)细胞比例增加;4 Gy 照射后处于增殖期(S/G2/M 期)细胞比例下降;c-kit+细胞受到4Gy 照射后 Srxn1、Psmb5、Cdkn1a、Smc1b、Bcl2l1、Lrdd 等基因表达上调;Mpo、Mtf1、Chek1、Rcc1 Ebag9、Ciapin1等基因表达下调。结论电离辐射能够引起骨髓 c-kit+细胞损伤,导致一系列信号通路表达变化。     

电离辐射对小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的作用机制

目的:研究不同剂量X射线照射对小鼠胸腺bcl-2 蛋白表达及细胞凋亡的作用机制.方法:用免疫组织化学、图像分析技术及透射电镜技术分别检测小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡.结果:假照组胸腺实质内bcl-2蛋白表达主要分布于髓质,胸腺皮质内可有少量凋亡的胸腺细胞.2 Gy照射后4、8和12 h胸腺髓质内bcl-2表达减少,皮质内出现许多典型的凋亡细胞;0.075 Gy照射后bcl-2蛋白表达增多,皮质内凋亡细胞减少,且可见较多的细胞分裂像.结论:不同剂量电离辐射对胸腺细胞凋亡的影响与胸腺髓质内bcl-2蛋白表达水平有关.     

X射线对小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4表达的影响

目的:探讨X射线对小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4表达的影响.方法:采用细胞间接荧光标记法、FACScan流式细胞仪检测不同剂量X射线全身照射后小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4三种蛋白表达的时程变化和量效关系.结果:2.0 Gy X射线照后24 h小鼠脾细胞P16表达明显高于假照组;CDK4表达水平在照后8 h明显降低,持续至照后72 h仍低于正常水平.周期蛋白cyclin D1表达轻度下调.不同剂量照射后P16蛋白表达呈剂量依赖性增加,1.0～4.0 Gy组与假照射组相比显著增多(P＜0.05,P＜0.01);cyclin D1蛋白表达随剂量升高有降低趋势;CDK4亦呈剂量依赖性降低,0.5～6.0 Gy组与假照组比较差异具有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论:P16/cyclin D1/CDK4/pRb通路在电离辐射诱导脾细胞G1期阻滞中可能起十分重要作用.     

牛磺酸对成纤维细胞增殖及功能的影响

目的观察牛磺酸对３Ｔ３细胞的增殖及产生胶原和透明质酸的影响。方法；采用「＾３Ｈ」－胸腺嘧啶（「＾３Ｈ」－ＴｄＲ）、「＾３Ｈ」－脯氨酸（「＾３Ｈ」－Ｐｒｏ）掺入和放射名单分析法分析别测定细胞增殖、胶原和透明质酸合成。结果；牛磺酸能显著抑３Ｔ３细胞的「＾３Ｈ」－ＴｄＲ和「＾３Ｈ」Ｐｒｏ掺入，并呈时间、剂量依赖关系；对透明质酸的合成亦具有剂量依赖的抑制作用。此外，牛磺酸还明显提高细胞内ｃＡＭＰ水平。结论     

电离辐射对Jurkat T细胞周期进程的影响

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat T细胞损伤过程中细胞周期进程的变化规律。方法：采用流式细胞术 (FCM) 检测低剂量（0.075 Gy）和较大剂量（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞周期进程变化的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系研究发现,2.0 Gy X射线照射后Jurkat T细胞相继发生S期延迟和G₂期阻滞,S期细胞百分率于照射后立即增加(P<0.001),而G₂+M期细胞百分率照射后8 h开始显著增加（P<0.001）。剂量-效应关系研究发现,75 mGy低剂量X射线照射即可诱导Jurkat T细胞发生S期延迟（P<0.001）和G₂期阻滞（P<0.05）;0.5~6.0 Gy较大剂量X射线照射后,Jurkat T细胞发生S期延迟和G₂期阻滞。与假照组相比较,G₀/G₁期细胞百分率显著降低（P<0.001）,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性,而S期和G₂+M期细胞百分率显著升高（P<0.05或P<0.001）。结论：X射线照射可以改变Jurkat T细胞周期进程,诱导其相继发生S期延迟和G₂期阻滞,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性。     

电离辐射对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z体外表达血管内皮生长因子的影响

目的 探讨电离辐射对人鼻咽癌细胞体外表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 人鼻咽癌细胞株CNE-2Z置RPMI 1640培养液培养,实验分为两组,剂量梯度组分别给予2、4、6、8、12、16 Gy电离辐射;时间梯度组给予6 Gy照射;收集细胞上清液,双抗体夹心ELISA法测定VEGF表达水平.结果 与阴性处理细胞比较,人鼻咽癌细胞株CNE-2Z体外接受不同剂量辐照后,VEGF表达明显增高,且具有剂量依赖性和时程依赖性.结论 电离辐射能诱导人鼻咽癌细胞VEGF高表达,这可能是临床肿瘤抗辐射的机制之一.