Peroxiredoxin Ⅵ mRNA在小鼠卵泡发育和卵巢衰老过程中表达

目的探讨Peroxiredoxin(PRDX)Ⅵ mRNA在小鼠卵泡发育和卵巢衰老过程中表达。方法分别选用C57BL/6j小鼠不同周龄、不同动情周期以及促性腺激素预处理卵巢,通过实时定量聚合酶链反应检测PRDXⅥmRNA表达。结果 PRDX Ⅵ mRNA在新生(3D)小鼠卵巢中表达为3周龄组的1.47倍、为6周龄组的3.89倍、为8月龄组的4.28倍(P<0.05);在小鼠动情前期卵巢中表达高于动情后期和动情间期(P<0.05);在促性腺激素预处理试验中,在孕马血清注射48 h后卵巢中表达是对照组的1.7倍,而人绒毛膜促性腺激素注射8、10及12 h后分别为对照组的0.44、0.41、0.54倍,而48 h后则为对照组的2.32倍(P<0.05)。结论 PRDX Ⅵ可能通过调节卵巢氧化应激压力而在卵泡发育和卵巢衰老中发挥重要调控作用。     

Peroxiredoxin Ⅱ在小鼠卵巢中卵泡、GV卵、MⅡ卵和植入前胚的表达和定位

目的:观察PeroxiredoxinⅡ在小鼠卵巢中卵泡和植入前胚的表达与定位,为探讨PeroxiredoxinⅡ在小鼠卵母细胞发育成熟和早 期胚发育的作用提供依据.方法:根据小鼠PeroxiredoxinⅡmRNA序列(AccessionNo:BC002034)设计引物,对小鼠生发泡完整 卵细胞(GV卵)中的PeroxiredoxinⅡ可能编码区进行扩增.同时,取生后3d和2mo小鼠的卵巢,免疫细胞化学染色显示Perox iredoxinⅡ蛋白在卵泡中的分布.此外,运用RT PCR和免疫细胞化学染色方法观察PeroxiredoxinⅡ在植入前胚的表达.结果:从 GV卵中扩增所得684bp的cDNA序列,与小鼠PeroxiredoxinⅡ具有99%同源性;其推导的编码氨基酸序列与小鼠Peroxiredoxin Ⅱ氨基酸序列完全相同.免疫细胞化学染色显示:生后3d小鼠卵巢内未见PeroxiredoxinⅡ阳性反应;2mo小鼠卵巢内阳性反应 见于初级卵泡、次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的胞质.卵泡细胞未见PeroxiredoxinⅡ阳性反应.RT PCR结果表明:Peroxire doxinⅡmRNA在GV卵中处高水平,从MⅡ卵开始略有下降,在4 细胞胚和早期囊胚期间未检到.免疫细胞化学染色显示:GV 卵、MⅡ卵、1 细胞胚、2 细胞胚、4 细胞胚、8 细胞胚、桑椹胚和早期囊胚均呈PeroxiedoxinⅡ阳性反应.结论:PeroxiredoxinⅡmR NA和蛋白在小鼠植入前胚的表达存在时程差别,     

Plexin A1蛋白及mRNA在小鼠卵泡发育过程中的表达

目的:探讨Plexin A1在小鼠卵巢不同发育阶段的表达。方法:选择不同发育时期的C57BL/6j小鼠,采用免疫组织化学方法测定小鼠卵巢中Plexin A1蛋白水平的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测Plexin A1mRNA水平的表达。结果:Plexin A1蛋白在小鼠卵巢各级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞中均有表达。随着卵泡的不断发育,其在卵母细胞和颗粒细胞中的表达水平均逐渐增强。始基卵泡卵母细胞中的Plexin A1蛋白表达水平明显低于初级、次级和窦状卵泡的卵母细胞。始基卵泡颗粒细胞中未见明显Plexin A1蛋白表达,至初级卵泡阶段可见颗粒细胞开始有Plexin A1蛋白表达,其水平低于次级及窦状卵泡。闭锁卵泡中的Plexin A1呈强阳性表达,明显高于生长卵泡中的表达水平。Plexin A1mRNA在卵巢组织中的表达水平随周(日)龄呈先升高后降低的趋势,5d,7d,3周小鼠卵巢中Plexin A1 mRNA表达水平分别为3d小鼠的1.56、1.26、0.79倍(P<0.05),而2周小鼠卵巢中的Plexin A1mRNA表达水平与3d小鼠相当(P>0.05)。结论:Plexin A1在不同级别的小鼠卵泡中均有表达,且表达水平随卵泡的不断生长发育而增强,但闭锁卵泡中表达最强,提示Plexin A1在卵泡的生长发育及闭锁过程中可能发挥重要的调控作用。     

小鼠腔前卵泡在淋巴结脱细胞支架中发育的研究

目的 探讨小鼠腔前卵泡在淋巴结脱细胞支架中的发育情况。方法 10周龄C57BL/6J小鼠的腋下淋巴结,使用0.5%的十二烷基硫酸钠(SDS)进行脱细胞处理,HE染色和扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察支架形态,DAPI染色和琼脂糖凝胶电泳和DNA含量检测观察细胞和DNA残留情况。中国仓鼠卯巢细胞(CHO)与支架共培养后,CCK-8验证脱细胞支架对细胞活力的影响。将小鼠腔前卵泡注射到支架内进行体外培养,HE染色观察卵泡的生长情况。免疫组化染色观察CYP-17/A1和FSHR的表达情况,ELISA检测细胞支架培养液中雌激素分泌水平。结果 与新鲜淋巴结相比,脱细胞后淋巴结外观变得透明,形态保持完整。HE和SEM发现支架内密集分布大量的三维纤维网架结构。DAPI染色未发现细胞的残留,琼脂糖凝胶电泳未发现明显DNA残留。DNA定量分析表明DNA的去除率为88%[(1 390.0±248.6)ng·mg^-1 vs.(342.6±116)ng·mg^-1](P<0.05)。CCK-8检测结果表明,在2...     

丹酚酸B促进卵巢早衰小鼠卵泡发育的研究

目的：探究丹酚酸B对卵巢早衰模型小鼠卵泡发育的影响。方法：选取27只6周龄雌性昆明小鼠,按照随机数字表法分为对照组、模型组和实验组,每组9只,对每只小鼠均给药,定期测量体重,给药结束后收集小鼠血清和卵巢组织。ELISA检测血清E2、AMH和FSH水平;HE染色观察卵巢窦状卵泡;免疫组化检测颗粒细胞PCNA的表达;TUNEL检测卵巢颗粒细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR和Western blot测定卵巢组织中Bcl-2和Bax mRNA表达和其蛋白表达情况。结果：模型组小鼠体重明显低于对照组和实验组(P<0.05);与模型组比较,实验组血清E2和AMH水平升高且FSH水平降低,窦状卵泡数量增多,颗粒细胞中PCNA与Bcl-2表达增加,同时Bax表达减少,凋亡细胞数量减少(P<0.05)。结论：丹酚酸B能抑制卵巢早衰小鼠颗粒细胞凋亡,促进卵泡发育。     

TLR4在抵抗生殖道感染过程中对小鼠卵泡发育的影响

目的 探讨固有免疫调节受体TLR4在抵抗生殖道感染过程中对卵泡发育的影响.方法 雌性BALB/c小鼠随机分为LPS组、PBS组和未处理组,每组12只.组织学方法计数各组卵泡发育的变化,real time qPCR技术检测TLR成员在LPS组卵巢中的表达模式.体外培养BALB/c小鼠的卵巢,随机分为LPS刺激组和对照组....     

LMO3 mRNA在小鼠中枢神经系统的表达定位

目的观察神经特异性转录因子LMO3 mRNA在小鼠中枢神经系统中的定位.方法原位杂交组织化学染色.结果 LMO3 mRNA阳性神经元可见于大脑、小脑、丘脑、脑干、脊髓,在小鼠中枢神经系统中,LMO3 mRNA阳性反应产物主要位于细胞质和突起内.强阳性信号主要出现于大脑皮质的Ⅱ～Ⅵ层、梨状皮质、内嗅皮质、海马的CA1区、齿状回、中脑的黑质致密部、红核、室旁核、巨细胞网状核、外侧网状核、三叉神经脑桥核、面神经核、三叉神经运动核、舌下神经核等部位;中等强度着色主要分布于扣带前皮质、嗅球、海马的CA2区、梨状内核、杏仁核等部位;海马的CA3区、尾壳核、苍白球、杏仁复合体、丘脑、三叉神经脊束核、疑核、中缝核团、小脑间置核及外侧核、浦肯野细胞可见弱的阳性细胞.结论 LMO3基因在CNS的广泛分布提示它除了在多巴胺神经递质的活动中起作用外,还参与了机体的学习记忆、嗅觉的调节.     

BMP2,4 mRNA在BALB/c系小鼠颅面部发育中的定位表达

0　引言　骨形成蛋白 (Bone morphogenetic Proteins,BMPs)属于 TGF- β超家族 ,最初从牛的脱矿骨骨基质提取出来 ,在活体内可诱导异位成骨 .但近年来的研究表明 ,BMPs还是生长和发育中的调控分子 .为了探讨 BMPs在颅面部发育过程中的表达、区域及变化 ,为进一步研究颅面部畸形 (如腭裂、唇裂、牙齿发育畸形等 )的发生机制打下基础 ,作者检测了BMP2 ,4在颅面部各组织正常发育中的表达模式 .1　材料和方法1.1　材料　 BAL B/ c近交系孕鼠在妊娠期第 14,15 ,16日分别被脱椎处死 ,取胎鼠头部固定于 40 g· L- 1多聚甲醛 ,常规脱水包埋…     

超声监测卵泡发育在人工授精中应用

人工授精解决了不育症夫妇的生育问题，以往用基础体温、宫颈粘液以及测定生殖激素水平等方法预测排卵，但这些方法均不能测到卵泡破裂的具体时间。本文应用Ｂ超对４５例不孕妇女卵泡及子宫内膜动态监测，认为超声不但能准确地判断卵泡的生长发育、子宫内膜的厚度及形状，还可测得排卵时间，减少了人工授精的盲目性，从而提高了人人授精的成功率。     

大鼠支持细胞生后发育过程中卵泡刺激素受体mRNA水平的…

本研究发现大鼠出生后２－６０ｄ，睾丸支持细胞卵泡刺激受体ｍＲＮＡ水平处于波动状态。生后早期，睾丸ＦＳＨＲｍＲＮＡ水平轻度增加而后下降，在青春期前维持较低水平。进入青春期后，睾丸ＦＳＨＲｍＲＮＡ水平再次升高，万以生后２０－２５ｄ上升迅速，于生后２５ｄ达高峰。４０ｄ之后睾丸ＦＳＨＲｍＲＮＡ水平重又出现增加趋势。     

不同浓度气态甲醛慢性染毒对小鼠卵泡发育影响的研究

目的:研究不同浓度气态甲醛慢性染毒对小鼠卵泡发育的影响,探讨环境污染导致卵巢性不孕的相关因素。方法:将40只性成熟SPF级雌性昆明小鼠随机分为空白对照组和3个不同浓度(0.1mg/m3、1.0mg/m3、10mg/m3)气态甲醛染毒组(模型组),每组10只。模型组采用不同浓度气态甲醛动态吸入式染毒,6h/d,连续14d,对照组给予吸入过滤的新鲜空气,时间同前。造模成功后处死小鼠,取出卵巢,计算卵巢脏器系数,光学显微镜下观察卵巢组织形态学改变,计数始基卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡、排卵前卵泡和闭锁卵泡数。结果:不同浓度气态甲醛慢性染毒均可使小鼠一般状况差,动情周期延长且不规则,卵巢脏器系数降低。各染毒组闭锁卵泡数量增多,中、高浓度染毒组窦前卵泡、窦状卵泡和排卵前卵泡数明显减少,各组间始基卵泡和总卵泡数无明显差异。结论:不同浓度气态甲醛慢性染毒均可影响小鼠发育期卵泡,中、高浓度染毒可导致卵泡不可逆的损害,发育期卵泡数量明显减少。环境污染会诱发不孕症的发生。     

小鼠生殖细胞特异性转录因子NOBOX调控初级卵泡发育机制的研究

目的 NOBOX是在原始卵泡激活过程中起关键作用的转录因子,可直接调控Gdf9转录,并参与GDF9/SMAD通路影响颗粒细胞增殖分化,但其在初级卵泡及之后的具体调控机制并不清楚.Kit作为影响卵泡发育的重要基因,其启动子存在多个NOBOX结合位点.本研究拟探索在初级卵泡发育阶段,转录因子NOBOX对Kit的转录调控作用...     

Cyclin G1在小鼠卵巢的表达及其与卵泡发育的关系

目的观察细胞周期素G1（Cyclin G1）在小鼠卵巢中各级卵泡的表达及其与卵泡发育的关系。方法性成熟前小鼠用孕马血清促性腺激素（PMSG）刺激卵泡生长,用绒毛膜促性腺激素（hCG）刺激卵泡排卵及向黄体转化。于给药后不同时间取出卵巢,用免疫组化方法检测不同发育阶段卵泡Cyclin G1蛋白的表达和分布;用细胞免疫荧光方法检测不同成熟阶段的卵细胞中Cyclin G1蛋白表达。结果免疫组化染色结果显示,颗粒细胞中Cyclin G1的表达水平随卵泡发育成熟而逐渐增强,且一直定位在胞核;Cyclin G1在各个时期卵泡的卵母细胞中均有表达。该表达的定位与卵泡生长发育的不同阶段有关。随着卵泡的发育,Cyclin G1在卵母细胞的表达由胞核转至胞浆。至排卵前卵泡颗粒细胞,Cyclin G1表达水平减弱,当颗粒细胞分化为黄体细胞后表达水平进一步减弱。闭锁卵泡中Cyclin G1的表达水平很弱。细胞免疫荧光染色结果显示,处于生发泡时期（GV）卵母细胞仅有较弱的Cyclin G1表达,当卵母细胞生发泡破裂（GVBD）后,该表达增强;与处于第二次减数分裂中期（MⅡ）的卵母细胞相比,受精卵的Cyclin G1表达明显增强。结论Cyclin G1在小鼠卵泡发育及卵母细胞成熟过程中的表达具有时空特异性,可能作为细胞周期的正调节因子参与了卵泡生长发育和卵母细胞成熟过程的调控。     

大鼠支持细胞生后发育过程中卵泡刺激素受体mRNA水平的动态观察

本研究发现大鼠出生后２～６０ｄ，睾丸支持细胞卵泡刺激素受体（ＦＳＨＲ）ｍＲＮＡ水平处于波动状态。生后早期（２～５ｄ），睾丸ＦＳＨＲｍＲＮＡ水平轻度增加而后下降，在青春期前（１０～１５ｄ）维持较低水平。进入青春期后，睾丸ＦＳＨＲｍＲＮＡ水平再次升高，尤以生后２０～２５ｄ上升迅速，于生后２５ｄ达高峰。４０ｄ之后睾丸ＦＳＨＲｍＲＮＡ水平重又出现增加趋势。     

小鼠组织中Cxcl15 mRNA表达及其在肺组织中的的定位特征

目的观察Cxcl15(chemokine,C-X-C motif,ligand 15)基因在小鼠体内的表达分布规律.方法采用Northern,将小鼠Cxcl15基因与小鼠8种主要组织来源的Poly A RNA印迹膜进行杂交,观察该基因在小鼠各种组织中的分布规律;采用原位杂交,观察该基因在小鼠肺组织中的分布规律.结果Cxcl15基因主要在小鼠肺组织支气管上皮细胞胞浆中表达,并可能存在不同亚型.结论Cxcl15基因的表达存在组织特异性.     

c-fos原癌基因在小鼠内耳发育中作用的研究

目的探讨原癌基因c-fos在昆明种小白鼠内耳发育中的作用.方法运用免疫组化(LSAB法)对原癌基因c-fos蛋白产物在昆明种小白鼠内耳发育中的表达进行研究.结果本研究发现在胚胎发育的第15天至第17天,c-fos蛋白产物在耳蜗的感觉上皮、支持细胞、血管纹、前庭膜、螺旋神经节神经元及前庭感觉器官椭圆囊斑及球囊斑的上皮有阳性表达,而于此期间内耳上皮正处于分化发 育阶段,螺旋神经节也处于分化发育阶段.结论c-fos参与了小鼠内耳的发育过程,在此期间其对内耳上皮的发育主要起促进分化作用.c-fos在内耳毛细胞再生中的作用有待于进一步深入研究.     

促卵泡刺激素受体mRNA的稳定性研究

采用核酸酶保护测定 (NPA)和定量反转录竞争性多聚酶链反应方法 (RT- PCR) ,测定了表达重组促卵泡刺激素受体 (FSHR)的转染细胞 (Y1)的 FSHR m RNA的稳定性和半衰期。对照组 FSHR m RNA量在 8h内保持恒定水平 [NPA,(2 .9± 0 .3) pg/ μg RNA;RT- PCR,(2 .7± 0 .3) pg/ μg RNA]。用 [3H]尿苷结合到 RNA的方法 ,观察到 Actinomycin D(Act D,5 μg/ ml)在 1h内可抑制 m RNA合成达 90 %。在 Act D存在的条件下 ,FSHR m RNA量在 1h后出现一个时间依赖性的显著下降 ,用 NPA测得的半衰期为 (3.6± 0 .2 ) h,RT- PCR为 (3.1± 0 .1) h。提示m RNA的降解速率在 FSHR基因稳定表达维持上起着非常重要的作用。     

米非司酮抑制卵泡发育的实验研究

目的：用组织学方法观察米非司酮抑制卵泡发育和排卵,探讨其避孕机制。方法：取灌服米非司酮3天、7天大鼠的卵巢,光镜下观察卵泡的变化。结果：生长卵泡、成熟卵泡及黄体随用药时间延长减少,闭锁卵泡和间质腺明显增多。结论：米非司酮可抑制卵泡发育,有可能成为微量口服避孕药。