miR-760靶向调节黑色素瘤抗原家族D1抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的研究北大核心CSCD

目的 探讨microRNA-760(miR-760)靶向负调节黑色素瘤抗原家族D1(NRAGE)表达对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用。方法 将胃癌NCI-N87细胞分为空白组、miR-760 NC组、miR-760 mimics组、miR-760 mimics+NRAGE NC组和miR-760 mimics+NRAGE OE组。空白组用RPMI 1640培养基培养;miR-760 NC组、miR-760 mimics组分别转染miR-760 NC、miR-760 mimics;miR-760 mimics+NRAGE NC组同时转染miR-760 mimics和空载pcDNA3.1质粒;miR-760 mimics+NRAGE OE组同时转染miR-760 mimics和NRAGE过表达pcDNA3.1质粒。用蛋白质印迹法检测NRAGE的表达水平,用Transwell实验法检测NCI-N87细胞的迁移、侵袭能力。结果 空白组、miR-760 NC组和miR-760 mimics组的NRAGE蛋白相对表达水平分别为0.95±0.06,0.93±0.09和0.27±0.04;迁移细胞数分别为(268.65±14.08),(261.43±13.25)和(163.25±11.37)个;侵袭细胞数量分别为(183.58±10.65),(176.29±9.93)和(95.73±8.29)个;miR-760 mimics组的上述指标均较空白组、miR-760 NC组显著降低(均P<0.05)。NRAGE OE可显著减弱miR-760 mimics对上述指标的影响(均P<0.05)。结论 miR-760可能通过靶向下调NRAGE表达,抑制胃癌NCI-N87细胞的增殖、迁移及侵袭。     

α-细辛醚对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨α-细辛醚调控内质网应激对食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响。方法 实验分为空白组和低、中、高剂量实验组。空白组给予不含药物的RPMI-1640培养基进行培养;低、中、高剂量实验组分别给予含25,50和100 mg·L^-1α-细辛醚溶液的RPMI-1640培养基进行培养。用噻唑蓝法检测细胞增殖率,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中免疫球蛋白重链结合蛋白（BIP）、C/BEP环腺苷酸反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）及葡萄糖调节蛋白78（GRP78）mRNA的表达水平。结果 低、高剂量实验组和空白组的细胞增殖能力（OD值）分别为0.78±0.14,0.50±0.09和0.92±0.12,BIP mRNA相对表达量分别为7.68±2.08,3.27±0.94和13.07±2.35,CHOP mRNA相对表达量分别为1.22±0.33,2.39±0.63和0.91±0.30,GRP78 mRNA相对表达量分别为2.11±0.59,5.86±1.47和0.84±0.31。低、高剂量实验组的上述指标与空白组相比,差异均有统计学意义（均P<0....     

β-链蛋白基因沉默对高糖诱导血管内皮细胞钙化的抑制作用

目的 探究β-链蛋白(β-catenin)基因沉默对糖尿病血管钙化的抑制作用。方法 体外培养大鼠下肢股动脉内皮细胞。调整稳转细胞状态,分为空白组、阴性对照组、实验组和模型组。空白组给予常规培养;实验组用β-catenin慢病毒转染48 h后,给予钙化培养基培养12 d;阴性对照组用空载慢病毒细胞转染48 h后,给予钙化培养基培养12 d;模型组细胞在钙化培养基培养12 d,诱导细胞钙化。用实时荧光定量聚合酶链反应检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、β-catenin、碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达水平,用激光共聚焦检测细胞β-catenin蛋白定位。结果 病毒感染48 h后,空白组、阴性对照组和实验组的β-catenin mRNA分别为1.00±0.08,1.03±0.07和0.22±0.01。培养12 d后,空白组、模型组和实验组的α-SMA mRNA分别为1.00±0.03,3.68±0.23和1.99±0.10,β-catenin mRNA分别为1.00±0.07,4.51±0.16和2.15±0.15,ALP mRNA分别为1.00±0.09,4.02±...     

分泌型丛生蛋白通过抑制线粒体自噬缓解H2O2诱导的心肌细胞损伤 #br#

目的 探讨分泌型丛生蛋白（sCLU）对心肌细胞氧化损伤的影响及其机制。方法 采用大鼠心肌细胞 H9C2。实验1分为Control组（仅更换培养基）和H2O2组（100 µmol/L H2O2处理）。实验2分为Control组、pcDNA3.1组 （转染 pcDNA3.1 对照空质粒）、pcDNA3.1-sCLU 组（转染 pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒）、H2O2组（100 µmol/L H2O2处 理）、H2O2+pcDNA3.1 组（pcDNA3.1 对照空质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）、H2O2+pcDNA3.1-sCLU 组 （pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）。实验 3 分为 DMSO 组（加入 1% 体积分数 的 DMSO）、Mdivi-1 组（10 µmol/L 的 Mdivi-1 处理）、H2O2+DMSO 组（加入 1% 体积分数的 DMSO 处理 30 min 后加入 100 µmol/L的H2O2处理）、H2O2+Mdivi-1组（10 µmol/L的Mdivi-1处理30 min后加入100 µmol/L的H2O2处理）、H2O2+ pcDNA3.1-sCLU 组（pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）、H2O2+pcDNA3.1-sCLU+ Mdivi-1组（pcDNA3.1-sCLU过表达质粒转染48 h后加入10 µmol/L的Mdivi-1处理30 min,再加入100 µmol/L H2O2 处理）。采用MTT法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二 醛（MDA）水平。DFCH-DA荧光探针测定细胞活性氧（ROS）水平。实时定量聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验 检测细胞中sCLU表达,Western blot法检测CLU、PINK1、Parkin和LC3蛋白表达水平。结果 （1）实验1。与Control 组比较,H2O2组细胞中sCLU mRNA、细胞培养上清中sCLU蛋白及细胞中CLU蛋白相对表达水平均降低（P＜0.01）。 （2）实验2。与Control组比较,H2O2组细胞活力、SOD水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均降低,细胞凋亡率、ROS水平、MDA 水平、PINK1和Parkin蛋白表达水平均升高（P＜0.05）;与H2O2组比较,H2O2+pcDNA3.1-sCLU组细胞活力、SOD水平、 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均升高,细胞凋亡率、ROS水平、MDA水平、PINK1和Parkin蛋白表达水平均降低（P＜0.05）。（3） 实验3。与DMSO组比较,Mdivi-1组细胞活力与细胞凋亡率差异无统计学意义;H2O2+DMSO组细胞活力下降,细胞 凋亡率升高（P＜0.05）。与H2O2+DMSO组比较,H2O2+Mdivi-1组、H2O2+pcDNA3.1-sCLU组和H2O2+pcDNA3.1-sCLU+ Mdivi-1 组细胞活力均升高,细胞凋亡率均下降（P＜0.05）。与 H2O2+Mdivi-1 组比较,H2O2+pcDNA3.1-sCLU 组和 H 2O2+pcDNA3.1-sCLU+Mdivi-1组细胞活力差异无统计学意义,细胞凋亡率降低（P＜0.05）。结论 sCLU对氧化应 激条下的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与线粒体自噬的抑制有关。     

脂联素对脂肪细胞条件培养基促系膜细胞合成转化生长因子β1的作用

目的 探讨脂联素对脂肪细胞条件培养基促系膜细胞(MsMC)合成转化生长因子β1(TGFβ1)的作用.方法 将MsMC分为7组:A组加入无血清DMEM培养基;B组加入脂肪细胞条件培养基;C组加入pSuper质粒转染后条件培养基;D组加入pcDNA3.1(-)质粒转染后条件培养基;E组加入脂联素siRNA-pSuper表达质粒转染后条件培养基;F组加入脂联素pcDNA3.1(-)表达质粒转染后条件培养基;C组加入添加3 mg/L脂联素的脂肪细胞条件培养基.用脂联素pcDNA3.1(-)表达质粒、脂联素siRNA-pSuper表达质粒、pcDNA3.1(-)质粒及pSuper质粒分别转染3T3-L1细胞(脂质体2000转染法),诱导细胞分化为成熟脂肪细胞后收集细胞,以蛋白质印迹法检测细胞裂解液中脂联素蛋白含量.孵育MsMC 9 h后,收取细胞,用实时定量聚合酶链反应检测细胞裂解液中TGFβ1 mRNA水平;孵育24 h后收取上清液,用酶联免疫吸附试验检测上清液中TGFβ1蛋白质水平.结果 与未转染的成熟脂肪细胞比较,用脂联素pcDNA3.1(-)表达质粒转染3T3-L1细胞得到的成熟脂肪细胞的细胞裂解液中脂联素含量增加[(0.59±0.06)比(0.21±0.02)],差异有统计学意义(P＜0.05);用脂联素siRNA-pSuper表达质粒转染3T3-L1细胞得到的成熟脂肪细胞的细胞裂解液中脂联素含量减少[(0.12±0.01)比(0.39±0.02)],差异有统计学意义(P＜0.05).B组TGFβ1 mRNA水平及蛋白质表达含量高于A、F、G组[TGFβ1 mRNA:(3.09 ±0.15)比(1.50±0.35)、(2.1±0.53)、(1.8±0.42),TGFβ1蛋白质水平:(708±10)比(224±16)、(382±11)、(300 ±25)],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脂肪细胞条件培养基可刺激系膜细胞合成TGFβ1,而脂联素对这一效应具有明显抑制作用.     

茶多酚通过miR-33a-5p/RUNX2介导人牙槽骨成骨细胞增殖和凋亡

摘要：目的:探讨茶多酚对人牙槽骨成骨细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法:分离培养人牙槽骨成骨细胞,用含0.000 1～100μg·ml-1茶多酚的DMEM培养基培养人牙槽骨成骨细胞,记为不同浓度茶多酚处理组,用不含茶多酚的正常培养基培养的细胞作为对照组;将pcDNA3.1-NC、pcDNA3.1-RUNX2、anti-NC、anti-miR-33a-5p、mimics-NC、miR-33a-5p分别转染至人牙槽骨成骨细胞中,记为pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-RUNX2组、anti-NC组、anti-miR-33a-5p组、mimics-NC组、miR-33a-5p组。细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞增殖核抗原Ki67（Ki-67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、runt相关转录因子2（RUNX2）蛋白表达;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-33a-5p和RUNX2 m RNA表达;荧光素酶报告实验检测miR-33a-5p对RUNX2的靶向调控。结果:各浓度茶多酚处理的人牙槽骨成骨细胞的细胞活力显著升高,凋亡率显著降低（P<0.05）,其中茶多酚浓度为1μg·ml-1处细胞活力和凋亡率达到极值;1μg·ml-1茶多酚处理的成骨细胞中Ki-67、PCNA、Bcl-2水平及RUNX2 m RNA和蛋白表达水平显著升高,Bax和miR-33a-5p水平显著降低（P<0.05）。过表达RUNX2或抑制miR-33a-5p表达,细胞活力及Ki-67、PCNA、Bcl-2水平显著升高,细胞凋亡率和Bax水平显著降低（P<0.05）。miR-33a-5p靶向负调控RUNX2。结论:茶多酚可能通过miR-33a-5p/RUNX2轴促进人牙槽骨成骨细胞增殖,抑制细胞凋亡。     

miR-502增强肺癌对替莫唑胺化疗敏感性的机制研究

摘要：目的:探讨miR-502对替莫唑胺化疗敏感性的影响及其作用机制。方法:用200μmol·L-1的替莫唑胺处理细胞A549作为替莫唑胺组,不作任何处理的细胞作为对照（Con）组;将miR-NC、miR-502、anti-miR-NC、anti-miR-502质粒分别转染至A549细胞中,分别记为miR-NC组、miR-502组、anti-miR-NC组、anti-miR-502组; miR-502转染至A549细胞后再用200μmol·L-1的替莫唑胺处理作为替莫唑胺+miR-502组;将miR-502质粒分别与pcDNA 3.1、pcDNA 3.1-ERCC1共转染至A549细胞中再用200μmol·L-1的替莫唑胺处理,分别记为替莫唑胺+miR-502+pcDNA 3.1组、替莫唑胺+miR-502+pcDNA3.1-ERCC1组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-502表达水平;蛋白质印迹（Western Blot）法检测p21、细胞周期素D1（Cyclin D1）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、切除修复交叉互补基因1（ERCC1）表达;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-502和ERCC1的靶向关系。结果:与人胚肺成纤维细胞MRC5相比,肺癌细胞A549中miR-502表达水平显著降低。过表达miR-502、替莫唑胺处理以及替莫唑胺处理同时过表达miR-502,肺癌细胞A549中p21、Bax表达水平均显著升高,Cyclin D1、Bcl-2表达水平均显著降低,细胞活性均显著降低,细胞凋亡率均显著升高（P<0.05）。结论:过表达miR-502和替莫唑胺均可抑制细胞A549增殖,促进细胞凋亡,过表达miR-502可增强替莫唑胺对细胞A549增殖抑制和凋亡促进作用,其机制可能与ERCC1有关,将可为提高肺癌化疗效果提供新途径。     

STC 1 过表达抑制人宫颈癌CaSki 细胞增殖

目的研究STC1基因对人宫颈癌CaSki细胞增殖及周期的影响。方法 CaSki细胞分为3组：实验组转染pcDNA3.1（＋）-STC1质粒;空载体转染pcDNA3.1（＋）空载体;空白对照组不加任何干扰。挑选稳定表达克隆,用RT-PCR及Western blot检测细胞中STC1基因表达水平;MTT法检测转染STC1基因对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染STC1基因后细胞周期的变化。结果稳定转染后,与空载体组相比,实验组STC1基因的表达水平显著提高（P﹤0.01）,CaSki细胞存活率下降（P﹤0.05）,G1期细胞比例显著上升（P﹤0.05）,细胞出现G1期阻滞。结论 STC1基因与CaSki细胞增殖相关,其高表达引起的宫颈癌细胞增殖速度降低可能与其所致的细胞G1期延长有关。     

右美托咪定对痛觉过敏大鼠脊髓 PKCγ、 CaMKⅡα及pCaMKⅡα表达的影响

摘要： 目的 探讨右美托咪定对切口痛-瑞芬太尼痛觉过敏大鼠脊髓蛋白激酶 C （PKC） γ、 钙/钙调素依赖性蛋白激酶 （CaMK） Ⅱα及 pCaMKⅡα表达的影响。方法 雄性 SD 大鼠 40 只, 体质量 240~260 g, 2~3 月龄, 随机数字表法分为 5 组 （n=8）： 空白对照组 （C 组）、 瑞芬太尼+切口痛组 （R+I 组）、 右美托咪定+瑞芬太尼+切口痛组 （D+R+I 组）、 右美托咪定+瑞芬太尼+切口痛+佛波醇酯+二甲基亚砜组 （D+R+I+P+DMSO 组）、 右美托咪定+瑞芬太尼+切口痛+二甲基亚砜组（D+R+I+DMSO 组）。采用足底切口的方法制备切口痛模型。瑞芬太尼以 1.2 μg·kg-1·min-1的速度经尾静脉输注 90 min; 右美托咪定以 50 μg/kg 的剂量于术前 30 min 皮下注射; 佛波醇酯及二甲基亚砜均为鞘内注射 10μL。分别于输注前 24 h（T0）、 输注后 2、 6、 24 和 48 h（T1~4）时测定热刺激缩足潜伏期（PWL）和机械刺激缩足阈值（PWT）。最后 1 次行为学测试后处死大鼠, 取脊髓 L4~6节段。采用 Western blot 法测定脊髓背角 PKCγ、 CaMKⅡα及pCaMKⅡα的表达。结果 除 T0外, 与 C 组比较, 其余各组 PWL 缩短、 PWT 降低, PKCγ、 CaMKⅡα及 pCaMKⅡα表达上调。与 R+I 组比较, D+R+I 组、 D+R+I+DMSO 组 PWL 延长、 PWT 升高, PKCγ、 CaMKⅡα及 pCaMKⅡα表达下调。与 D+R+I 组比较, D+R+I+P+DMSO 组 PWL 缩短、 PWT 降低, PKCγ、 CaMKⅡα及 pCaMKⅡα表达上调。与 D+R+I+P+DMSO 组比较, D+R+I+DMSO 组 PWL 延长、 PWT 升高, PKCγ、 CaMKⅡα及 pCaMKⅡα表达下调。结论 右美托咪定可以减少切口痛-瑞芬太尼痛觉过敏大鼠脊髓 PKCγ、 CaMKⅡα及 pCaMKⅡα的表达。     

黄秋葵多糖调控p73反义RNA 1T对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄秋葵多糖调控p73反义RNA 1T(TP73-AS1)对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,及其作用机制。方法实验分为对照组(正常DMEM培养基),低、中、高剂量实验组(分别用含0.6,1.2,1.8 mg·mL^-1黄秋葵多糖的DMEM培养基)、si-NC组(转染TP73-AS1阴性对照质粒)、si-TP73-AS1组(转染TP73-AS1抑制表达质粒)、pcDNA3.1组(1.2 mg·mL^-1黄秋葵多糖+TP73-AS1阳性对照质粒)、pcDNA3.1-TP73-AS1组(1.2 mg·mL^-1黄秋葵多糖+TP73-AS1过表达质粒)。用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞存活率,用流式细胞术检测细胞凋亡,用实时荧光定量聚合酶链反应检测TP73-AS1的表达水平。结果低、高剂量实验组和对照组、si-NC组、si-TP73-AS1组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-TP73-AS1组的细胞存活率分别为(71.67±3.08)%,(37.36±2.27)%,(100.55±3.68)%,(100.91±6.81)%,(57.12±4.98)%,(49.26±2.81)%和(81.19±7.09)%,细胞凋亡率分别为(14.67±1.40)%,(25.17±2.59)%,(8.38±1.22)%,(8.98±1.04)%,(19.42±1.90)%,(21.13±2.16)%和(10.23±1.06)%,TP73-AS1表达水平分别为0.67±0.07,0.28±0.03,1.00±0.10,1.01±0.10,0.52±0.05,0.42±0.04和0.76±0.06。低、高剂量实验组的上述指标与对照组相比,si-TP73-AS1组的上述指标与si-NC组相比,pcDNA3.1-TP73-AS1组的上述指标与pcDNA3.1组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论黄秋葵多糖可抑制宫颈癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调TP73-AS1有关。     

黄芩醇提液对甲型流感病毒核蛋白基因表达的影响

目的：探讨黄芩醇提液对甲型流感病毒核蛋白（NP）的作用。方法本实验设HeLa细胞组、pcDNA3.1（＋）/empty组、pcDNA3.1（＋）/NP 组、TFSB 组,其中pcDNA3.1（＋）/empty 组、pcDNA3.1（＋）/NP 组分别通过瞬时转染将重组质粒 pcDNA3.1（＋）/empty、pcDNA3.1（＋）/NP转染到HeLa细胞中;黄芩醇提液组在将重组质粒pcDNA3.1（＋）/NP转染到HeLa细胞的同时使用黄芩醇提液进行药物干预。结果与真核重组质粒pcDNA3.1（＋）/NP组比较,黄芩醇提液组NP基因起始拷贝数具有统计学意义,P＜0.05。结论黄芩醇提液能够下调甲型流感病毒NP基因的表达。     

microRNA-124靶向髓样分化因子88增强肝癌细胞对索拉非尼敏感性的研究

目的 探讨microRNA-124（miR-124）靶向髓样分化因子88（MyD88）对肝癌细胞对索拉非尼敏感性的影响。方法 实验分实验组、miR-124 inhibitor组、MyD88组和MyD88+miR-124组。实验组给予含1,5,10和20μg·mL^-1索拉非尼的DMEM培养基进行培养;miR-124 inhibitor组转染miR-124 inhibitor后,再给予含10μg·mL^-1索拉非尼的DMEM培养基进行培养;MyD88组转染pcDNA-MyD88后,再给予含10μg·mL^-1索拉非尼的DMEM培养基进行培养;MyD88+miR-124组转染miR-124 mimic和pcDNA-MyD88后,再给予含10μg·mL^-1索拉非尼的DMEM培养基进行培养。用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-124相对表达量,用CCK-8和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡,用蛋白质印记法检测MyD88蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平。结果 不同浓度索拉非尼均会上调miR-124的表达水平。敲降miR...     

沉默1型免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子-1对乳腺癌细胞多西他赛耐药性的逆转作用

目的 探讨沉默1型免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子-1（FBI-1）表达对乳腺癌细胞MCF-7多西他赛耐药性的逆转作用，及其可能的调控机制。方法 用梯度浓度递增法建立MCF-7多西他赛耐药（MCF-7/DR）细胞株，并设置空白组、对照组和实验组。空白组不作任何转染处理；对照组转染空载体；实验组转染FBI-1特异性siRNA干扰序列载体。用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞FBI-1和B细胞特异性moloney鼠白血病病毒插入位点1（Bmi-1） mRNA的表达水平，用噻唑蓝法检测MCF-7/DR细胞对多西他赛的敏感性，用流式细胞术检测10 nmol·L^-1多西他赛作用24 h后MCF-7/DR细胞周期和凋亡率的变化，用Western blot法检测Bmi-1蛋白的表达水平。结果 多西他赛抑制空白组和实验组MCF-7/DR细胞增殖的耐药指数分别为33.08±2.33和5.24±0.35。干预24 h后，实验组、对照组和空白组的细胞凋亡率分别为（28.97±5.96）%,（7.69±1.92）%和（5.25±1.78）%,G1期细胞比例分别为（67.23±5.89）%...     

蟾毒灵通过抑制乏氧状态下的乳酸生成调节M2型巨噬细胞极化逆转结肠癌耐药

目的 探讨蟾毒灵(Bu)抑制乏氧状态下乳酸生成调节M2型巨噬细胞极化逆转结肠癌耐药的作用。方法 (1)将HCT116细胞分为常氧组(HCT116_N)、乏氧组(HCT116_H)和乏氧+BU组(HCT116_H+BU),常氧组给予RPMI1640培养基进行培养,乏氧组给予含200μmol·L^-1 CoCl₂的RPMI1640培养基进行培养,乏氧+BU组给予含25 nmol·L^-1 BU的RPMI1640培养基(含200μmol·L^-1 CoCl₂)进行培养。(2)用佛波酯(200 ng·mL^-1)将THP-1诱导48 h后成为M0巨噬细胞;将M0巨噬细胞分为空白组(M0)、常氧对照组(HCT116_N-Mφ)、乏氧模型组(HCT116_H-Mφ)、乏氧+乳酸抑制剂(Lactate inhibitor)实验组(HCT116_H+Lactat...     

茶多酚通过调控XB130对LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达的影响

摘要：目的:研究茶多酚（TP）对肺炎小鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达的影响及潜在作用机制。方法:用脂多糖（LPS）诱导小鼠肺泡巨噬细胞MH-S 12h建立小鼠肺泡巨噬细胞炎症模型。将MH-S细胞分为对照组（LPS处理）和TP组（LPS+TP处理）、pcDNA3.1-NC组（转染pcDNA3.1-NC+LPS处理）、pcDNA3.1-XB130组（转染pcDNA3.1-XB130+LPS处理）、si-NC组（转染si-NC+LPS处理）、si-XB130组（转染si-XB130+LPS处理）、TP+si-NC组（转染si-NC+LPS+TP处理）和TP+si-XB130组（转染si-XB130组+LPS+TP处理）,qRT-PCR检测XB130 mRNA表达,Western blot检测XB130表达以及白细胞介素6（IL-6）、IL-1β和肿瘤坏死因子α（TNF-α）分泌。结果:与对照组相比,TP组MH-S细胞IL-6、IL-1β、TNF-α分泌量显著降低（P<0.05）,XB130 mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.05）。与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-XB130组MH-S细胞IL-6、IL-1β、TNF-α分泌量显著降低,XB130蛋白表达显著升高（P<0.05）。与si-NC组比较,si-XB130组MH-S细胞IL-6、IL-1β、TNF-α分泌量显著升高,XB130蛋白表达显著降低（P<0.05）。与TP+si-NC组比较,TP+si-XB130组MH-S细胞IL-6、IL-1β、TNF-α分泌量显著升高,XB130 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论:茶多酚可降低LPS诱导的小鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达水平,其机制与上调XB130表达有关。     

德都红花-7味散对四氯化碳所致慢性肝损伤大鼠凋亡蛋白表达的影响

目的 观察德都红花-7味散对四氯化碳（CCl₄）所致肝纤维化大鼠B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达的影响。方法 将40只SD雄性大鼠按体质量分层随机分为空白组、模型组、对照组和实验组,每组10只。用腹腔注射CCl₄的方法建立肝纤维化模型。空白组和模型组均灌胃给予等量蒸馏水;对照组灌胃给予21.0 mg·kg^-1水飞蓟宾;实验组灌胃给予0.3 g·kg^-1德都红花-7味散。4组大鼠每天给药1次,连续给药7周。用Masson染色法观察肝纤维化的情况,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测大鼠肝组织中Bcl-2和Bax mRNA的表达水平。结果 实验组、对照组、模型组和空白组的胶原百分比分别为（7.99±1.71）%,（8.82±2.63）%,（14.84±4.45）%和（0.80±0.29）%,Bcl-2 mRNA表达量分别为0.64±0.13,0.78±0.18,1.07±0.43和0.48±0.16,Bax mRNA表达量分别为0.95±0.10,0.98±0.26...     

p 16 基因对人肝癌细胞的生长抑制作用的初步研究

目的探讨抑癌基因p16对肝癌细胞生长的抑制作用。方法将p16 cDNA亚克隆至pcDNA3.1真核表达载体上,并经脂质体介导转染至人肝癌细胞株SMMC-7721。用MTT法和Western blot分析转染细胞的生长情况。结果成功构建重组表达质粒pcDNA3.1-p16,转染pcDNA3.1-p16的SMMC-7721细胞生长速度受到明显抑制;经Western blot证实,转染后有外源p16蛋白的表达,且伴随Bax上调,Bcl-2和cIAP2的下调。结论重组pcDNA3.1-p16质粒能在人肝癌细胞SMMC-7721内表达,且能抑制SMMC-7721的生长,其机理与诱导肿瘤细胞凋亡相关。     

γ-分泌酶抑制剂在肺纤维化上皮间质转化中的作用

目的 检测体外转化生长因子（TGF）-β1诱导肺纤维化上皮间质转化（EMT）的形成情况并检测Notch信号特异性抑制剂γ-分泌酶抑制剂（DAPT）对其影响及可能机制。方法 将A549细胞分成对照组（RPMI 1640完全培养基培养）、TGF-β1组（在含有10 μg/L TGF-β1的RPMI 1640培养基中培养）、TGF-β1+DAPT组（在含有10 μg/L TGF-β1和2 μmol DAPT的RPMI 1640培养基中培养）、DAPT组（在含有2 μmol DAPT的RPMI 1640培养基中培养）。通过倒置显微镜观察细胞形态,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测肺泡上皮细胞特异性蛋白E-钙黏合素以及间质细胞特异性蛋白α-肌动蛋白（α-SMA）mRNA相对表达水平,Western blot检测E-钙黏合素以及α-SMA蛋白表达水平。结果 倒置显微镜检查示,对照组细胞呈多边形,铺路石样,细胞间连接紧密;TGF-β1组细胞呈梭行,纺锤状,细胞间连接减少;TGF-β1+DAPT组仅有少量细胞呈梭形,多数细胞形态与对照组相似;DAPT组细胞形态大致同对照组。与对照组相比,TGF-β1组α-SMA蛋白及mRNA表达增加,而E-钙黏合素蛋白及mRNA表达减弱（P<0.05）;与TGF-β1组比较,TGF-β1+DAPT组α-SMA蛋白及mRNA表达水平降低,而E-钙黏合素蛋白及mRNA表达水平增加（P<0.05）;DAPT组与对照组2指标的蛋白与mRNA相对表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 TGF-β1可诱导肺上皮间质转化,而Notch信号抑制剂DAPT能够阻断、部分或全部逆转这一过程。     

宾达利对脂多糖诱导的BV-2细胞炎症因子释放和吞噬作用的影响

目的 探讨单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）抑制药宾达利对脂多糖（LPS）诱导的小鼠BV-2小胶质细胞炎症因子表达及吞噬作用的影响。方法 将BV-2细胞分为5组,空白组不给予药物处理,正常培养36 h;模型组正常培养12 h后,加入500 ng·mL^-1 LPS继续作用24 h;低、中、高剂量实验组分别给予20,40,80μg·mL^-1宾达利处理12 h后,加入500 ng·mL^-1 LPS继续作用24 h。用CCK-8法检测各组BV-2细胞存活率,用激光共聚焦显微镜观察BV-2细胞对荧光微球的吞噬能力的改变,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和白细胞介素-6（IL-6）mRNA的表达水平。结果 低、高剂量实验组和模型组、空白组的细胞存活率分别为（104.90±1.90）%,（100.30±4.71）%,（105.30±3.56）%和（100.00±9.44）%,各组间的细胞存活率比较,差异均无统计学意义（均P>0.05）。低、高剂量实验组和模型组、空白组的BV-2细胞所吞噬的荧光微球数...     

PD-L1过表达在DENV-2诱导血管内皮细胞自噬和凋亡中的作用机制

目的　探讨PD-L1过表达在Ⅱ型登革病毒（DENV-2）影响血管内皮细胞自噬和凋亡中的作用及机制。方法　以血管内皮细胞EAhy926为研究对象,以含梯度DENV-2（1×108~2×109 pfu/L）的无血清培养基处理细胞24 h和48 h,同时以无血清培养基处理细胞作为对照组,无血清培养基加入空白孔作为调零孔,MTT法检测细胞增殖活力。以PD-L1过表达慢病毒液和空载慢病毒液处理细胞,分别设空载对照组和转染组。DENV-2（1.2×109 pfu/L）处理细胞12、24、48 h作为DENV-2 12 h组、DENV-2 24 h组及DENV-2 48 h组,同时设置对照组（无血清培养基处理）;另以DENV-2处理空载对照组和转染组48 h,以蛋白印迹法检测LC3B、Beclin-1及Bcl-2蛋白表达变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果　1×108~2×109 pfu/L DENV-2可剂量依赖性抑制EAhy926细胞增殖,DENV-2 24 h和48 h的半数抑制浓度（IC50）分别是1.8×109 pfu/L和1.2×109 pfu/L。与对照组比较,DENV-2 12 h组、DENV-2 24 h组及DENV-2 48 h组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,细胞总凋亡率增加（均P＜0.05）。与空载对照组比较,转染组PD-L1蛋白表达上调（P＜0.01）。DENV-2处理48 h,与空载对照组相比,转染组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,细胞总凋亡率降低（均P＜0.01）。结论　DENV-2通过上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白表达及下调Bcl-2蛋白表达,从而诱导EAhy926细胞自噬和凋亡,而过表达PD-L1可抵抗DENV-2的诱导效应。