人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响

目的: 探究人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响。方法: Dil标记神经干细胞微囊泡,流式细胞仪和共聚焦显微镜观察THP-1巨噬细胞对微囊泡的内化;实时荧光定量PCR筛选微囊泡最适浓度;100 ng/mL 脂多糖刺激THP-1细胞6 h后,微囊泡处理12 h,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞炎性因子IL-1β,肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)以及IL-6的mRNA表达水平;微囊泡处理24 h, 蛋白免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶 (inducible nitric oxide synthase, iNOS)和精氨酸酶1 (Arginase-1, Arg-1)蛋白表达水平;流式细胞术检测THP-1巨噬细胞M1极化表面标志CD86表达。结果： THP-1巨噬细胞在12 h和24 h均能明显内化神经干细胞微囊泡;0.12 μg/mL微囊泡具有最适调控作用;与未处理细胞相比,脂多糖处理后明显增加THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白,Arg-1蛋白表达差异无统计学意义(P<0.05);经神经干细胞微囊泡处理后THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白表达明显降低(P<0.05);与未处理细胞相比,脂多糖和微囊泡处理后THP-1巨噬细胞CD86表达差异无统计学意义。结论： 人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡能够减少THP-1细胞炎性细胞因子和iNOS表达,抑制巨噬细胞M1极化。     

ABT-737对M2型TAM来源外泌体处理的卵巢癌细胞SKOV3自噬性凋亡与干性特征的影响

目的 探讨Bcl-2小分子抑制剂ABT-737对经肿瘤相关巨噬细胞(TAM)来源外泌体(Exo)处理的卵巢癌细胞自噬性凋亡及干性特征的作用。方法 利用佛波酯(PMA)与重组人白细胞介素-4(IL-4)诱导人外周血单核细胞THP-1为M2型TAM,流式细胞术检测细胞表面巨噬细胞相关标志物表达;差速离心法提取外泌体,透射电镜与纳米粒子追踪技术观察外泌体形态及径粒分布,Western blot检测外泌体标志蛋白表达,Dil结合PKH67染色检测TAM来源外泌体被卵巢癌细胞系SKOV3摄取情况;实验分组为对照组、Exo组、Exo+ABT-737组,采用TAM来源外泌体与ABT-737按照分组处理SKOV3细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光mRFP-GFP-LC3实验检测细胞自噬水平,Western blot检测细胞自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、p62)与凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase3)表达,肿瘤细胞成球实验检测细胞干性,Western blot检测肿瘤干细胞相关蛋白(CD133、OCT4、SOX2)表达。结果 经PMA与IL-4...     

人干细胞标志Musashi2在急性髓系白血病细胞分化中的表达变化

目的 探讨人干细胞标志Musashi2 (Msi2)在佛波酯(phorbol myristoyl acetate,PMA)诱导急性单核白血病细胞株THP-1分化过程中的表达变化.方法 PMA作用THP-1细胞0、6、12、24 b后,倒置显微镜下观察THP-1细胞形态学改变,计算分化细胞百分数;流式细胞仪检测THP-1细胞表面分化抗原CD11b的表达;定量PCR和Western blot检测Msi2的基因及蛋白表达水平;定量PCR检测Msi2下游信号分子Numb的mRNA水平;定量PCR和Western blot检测Numb下游分子Notch1的mRNA和蛋白表达水平.结果 PMA处理24h后可诱导THP-1细胞出现巨噬细胞样分化表型,实验组分化细胞的百分比显著高于未处理组(P＜0.05).同时24 h组CD11b表达量(59.30±8.70)较未处理组(0.32 ±0.08)显著增加(P＜0.05).实验组白血病细胞经PMA处理24 h后,Msi2的mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.33 ±0.08)和(0.50±0.01),显著低于未处理组(P ＜0.05);PMA处理12 h后Numb的mRNA相对表达量为(2.92±0.33),较未处理组明显升高(P＜0.05);而PMA处理24 h后Notch1的mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.31±0.03)和(0.23±0.01),较未处理组显著下降(P＜0.05).结论 干细胞标志Msi2表达随THP-1细胞分化而下降,Msi2-Numb-Notch1通路可能参与白血病细胞的分化调控.     

肺炎链球菌溶血素诱导THP-1细胞凋亡涉及MAPK1/3信号途径

目的 探讨肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)对人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制.方法 MTT法检测Ply对THP-1细胞的增殖抑制.瑞氏染色观察Ply对人THP-1细胞形态的影响.AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡.琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DN...     

人正常肝细胞LO2感染HBV后表达CCL22

目的探讨感染HBV的人正常肝细胞LO2表达趋化因子CCL22的机制。方法首先用HBV病毒感染LO2细胞,通过ELISA检测细胞IL-32表达情况;之后用外源人类重组IL-32蛋白刺激人急性单核细胞白血病细胞THP-1或用HBV感染共培养的LO2和THP-1细胞,通过ELISA检测TNF-α表达情况;其次用外源人类重组TNF-α蛋白刺激LO2细胞或用HBV感染共培养的LO2和THP-1细胞,使用特异性抗体通过Western blot检测CREB蛋白磷酸化情况,并通过ELISA检测趋化因子CCL22的表达情况。结果 HBV诱导LO2细胞表达IL-32;病毒诱导的IL-32诱导THP-1细胞分泌TNF-α(P0.05);TNF-α诱导LO2细胞活化CREB通路(P0.05);CREB通路活化后促使LO2表达趋化因子CCL22(P0.05)。结论 HBV感染与THP-1共培养的LO2细胞可表达CCL22,其机制可能是HBV诱导LO2细胞表达IL-32,之后IL-32诱导THP-1细胞分泌TNF-α,进而TNF-α促进HBV感染的LO2细胞表达趋化因子CCL22。     

白念珠菌磷脂甘露聚糖对单核细胞产生白介素-6、白介素-8的影响

目的 研究白念珠菌磷脂甘露聚糖( PLM)诱导人急性单核细胞白血病细胞系细胞(THP-1)产生的炎症反应是否依赖Toll样受体(TLR)2.方法 实时荧光定量逆转录PCR分析PLM体外刺激THP-1细胞TLR2、TLR4、前炎症因子[白介素(IL)-6]和趋化因子(IL-8)的mRNA表达水平.酶联免疫吸附法检测IL-6、IL-8分泌含量.免疫印迹法分析TLR2的蛋白表达.结果 PLM可升高THP-1细胞的IL-6和IL-8 mRNA表达和分泌水平(均P＝0.0000).PLM上调THP-1细胞的TLR2 mRNA和蛋白表达水平(P＝0.0000),但对TLR4 mRNA表达无影响.PLM经β-D-甘露糖苷水解酶处理后,不能诱导上述受体及因子的表达.TLR2中和抗体能抑制PLM诱导的IL-6和IL-8产生(P ＝0.0003,P＝0.0010).结论 白念珠菌胞壁PLM依赖TLP2介导激活人THP-1细胞产生炎症反应.     

大麻素Ⅱ型受体通过AMPK-mTOR-p70S6K通路抑制泡沫细胞形成

目的 探究大麻素Ⅱ型受体(cannabinoid receptor 2,CB2R)在抗动脉粥样硬化中的作用和机制。方法 利用佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)诱导THP-1细胞分化为THP-1巨噬细胞。通过氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, oxLDL)诱导THP-1巨噬细胞形成泡沫细胞。采用油红O染色检测THP-1巨噬细胞形成泡沫细胞的情况。通过Western blot法检测THP-1巨噬细胞中NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR、p-P70S6K和P70S6K的表达。利用酶联免疫吸附(ELISA)检测THP-1巨噬细胞IL-1β和IL-18表达变化。结果 油红O染色检测显示,oxLDL成功诱导THP-1巨噬细胞形成泡沫细胞。通过Western blot法检测发现,CB2R对oxLDL诱导THP-1巨噬细胞中NLPR3炎性小体具有抑制作用;同时,ELISA检测显示CB2R通过下调THP-1巨噬细胞IL-1β和I...     

脂多糖对THP-1细胞CD14诱导表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)对THP-1细胞CD14诱导表达的影响。方法应用不同质量浓度(0.1~50 mg/L)的LPS刺激培养48 h的THP-1细胞,并测定其CD14mRNA、肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素6(IL-6)表达的变化。结果正常培养条件下,THP-1细胞CD14表达量极低,而LPS对单核巨噬细胞THP-1具有显著的诱导激活作用,在较低质量浓度剂量刺激下即可被活化,表现为CD14mRNA表达量迅速增加,同时,LPS可诱导THP-1细胞产生TNF-α和IL-6,并在一定范围内呈剂量依赖关系。结论LPS可导致THP-1细胞活化,显著上调CD14mRNA的表达,并诱导产生炎症介质TNF-α和IL-6。     

葡萄糖抑制THP-1巨噬细胞载脂蛋白E的表达

目的:观察葡萄糖对人单核细胞性白血病细胞株(human monocytic leukemia cell line,THP-1)巨噬细胞的载脂蛋白E(Apo E)表达的影响。方法:用佛波脂诱导THP-1细胞使其分化成巨噬细胞。再用含不同浓度葡萄糖的RPMI 1640培养基培养巨噬细胞72 h后,RT-PCR和Western Blot分别检测巨噬细胞Apo E的mRNA和蛋白的表达,同时用MTT法检测各组细胞活力。结果:葡萄糖呈剂量依赖性(20~30 mmol/L),明显抑制THP-1巨噬细胞Apo E的表达。结论:葡萄糖抑制THP-1巨噬细胞Apo E的表达,其可能是导致动脉粥样硬化的机制之一。     

黄芩苷对脂多糖诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用

目的 探讨黄芩苷(baicalin)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用。 方法 利用LPS建立人单核细胞THP-1的炎症模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitatFive polymerase chain reaction, RT-qPCR)方法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的相对表达,确定最优的LPS刺激浓度。乳酸脱氢酶检测试剂盒检测黄芩苷的细胞毒性,优选其最佳使用浓度范围。对LPS诱导的人单核细胞THP-1炎症模型予以不同浓度的黄芩苷预处理,利用RT-qPCR法检测黄芩苷对LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高的影响。 结果 与对照组相比,1 μg/mL的LPS处理人单核细胞THP-1 24 h后均可显著引起IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高(P<0.05),黄芩苷在浓度为10、30、100 μmol/L时处理人单核细胞THP-1 24 h和48 h,无明显细胞毒性。30 μmol/L和100 μmol/L的黄芩苷可降低LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高。 结论 黄芩苷可显著抑制LPS诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应。     

乳块消胶囊治疗乳腺增生症临床对照研究

目的观察孔块消胶囊和三苯氧胺（TAM）治疗乳腺增生症的疗效。方法前瞻性随机对照研究260例乳腺增生症患者。结果乳块消胶囊与TAM治疗有效率分别为95．5％和96．2％，差异无统计学意义，但副作用较TAM少且轻微。服药后两者均存在较高的复发率。结论乳块消胶囊治疗乳腺增生症的效果与TAM相当，但副作用微少，应进一步开展治疗前后的病理组织学对照研究。     

直肠癌中肿瘤相关巨噬细胞、基质金属蛋白酶-9与微淋巴管生成关系

目的：研究直肠癌的微淋巴管生成情况、肿瘤相关巨噬细胞（TAM）计数与基质金属蛋白酶（MMW）-9表达的关系,探讨TAM与MMP-9在直肠癌微淋巴管生成中的作用。方法：通过免疫组化法测定41例直肠癌标本微淋巴管密度（LMVD）、TAM密度及MMP-9的表达,并分析LMVD、MMP-9与直肠癌其它临床病理学因素间的关系。结果：①直肠癌组织LMVD、TAM密度、MMP-9的表达明显高于正常组织（P〈0．05）。②TAM浸润与MMP-9表达和肿瘤微淋巴管生成相关（P〈0．05）。③三者与肿瘤分化程度、Dukes分期、淋巴浸润和淋巴结转移等有不同程度的相关性。结论：TAM与MMP-9、直肠癌微淋巴管生成在直肠癌转移中起着重要的作用,MMP-9很可能是肿瘤微淋巴管生成的始动因子之一。     

腹腔镜与开腹子宫肌瘤切除术的对比研究

目的:评价腹腔镜子宫肌瘤切除术的临床应用价值。方法:选取行腹腔镜子宫肌瘤切除术(LM)40例,与同期经腹子宫肌瘤切除术(TAM)43例进行对照分析,对手术时间、术中出血量、术后肛门排气时间及术后住院日等进行对比。结果:LM组手术时间(96.24±36.35min),与TAM组(60.12±15.32min)比较,LM手术时间较TAM长,差异有显著性(P<0.01);术后肛门排气时间(18.62±5.61h)及术后住院日(5.54±1.80d)均较TAM组肛门排气时间(22.45±8.32h)及术后住院日(7.62±2.07d)缩短,差异有极显著性(P<0.01);LM组术中出血量(124.88±54.46ml)与TAM组(112.67±66.48ml)无显著统计学差异(P>0.05)。结论:腹腔镜子宫肌瘤切除术具有创伤小、术后恢复快等优点,是一种安全、可行的理想术式。     

CYP2D6基因多态性与他莫昔芬及4-羟基他莫昔芬血清浓度的相关性研究

目的 探讨CYP2D6基因多态性与乳腺癌患者他莫昔芬（TAM）及其活性代谢产物4-羟基他莫昔芬（4-OH-TAM）血清浓度的相关性.方法 收集2008年1月~2010年10月期间200例服用TAM的乳腺癌患者的口腔粘膜及血清,采用Real-time RT-PC法检测CYP2D6＊10基因多态性,采用液相色谱-质谱方法 （LC-MS）测定患者体内TAM及其活性代谢物4-OH-TAM的的血清浓度.结果 200例乳腺癌中检测到CYP2D6＊10/＊10纯合子94例（47%）,CYP2D6 wt/wt野生型48例（24%）,CYP2D6 wt/＊10杂合型58例（29%）.CYP2D6 wt/wt野生型和wt/＊10杂合型两组4-OH-TAM的血清浓度都明显高于＊10/＊10纯合型（P〈0.05）,各基因型之间TAM血清浓度值差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 乳腺癌患者CYP2D6＊10/＊10基因型影响他莫昔芬的体内代谢过程,与疗效相关,服用TAM前均应推荐检测CYP2D6＊10/＊10基因型.     

他莫昔芬与托瑞米芬治疗复发或转移性乳腺癌的临床对比研究

目的比较分析他莫昔芬（TAM）与托瑞米芬（TOE）治疗复发或转移性乳腺癌的临床疗效及安全性。方法选取2007年12月～2010年12月收治的58例复发或转移性女性乳腺癌患者,随机分为TAM组和TOR组。在内分泌治疗前与治疗后12个月,分别抽取空腹静脉血进行肝功能及血脂检测,并比较TAM组和TOR组的疗效。结果治疗12个月后,TAM组和TOE组的有效率分别为621％、69．0％,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组肝功能损害发生率差异无统计学意义（P〉0．05）;TOR组的TG显著降低,HDL显著升高,较TAM组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论复发或转移性乳腺癌的治疗中,T6R与TAM的疗效及肝功能损害无明显差异,但TOE具有一定改善血脂作用。     

腹腔镜与开腹子宫肌瘤剔除术的临床效果分析

目的:分析腹腔镜子宫肌瘤剔除术(Iaparoscopic myomectomy,LM)和开腹子宫肌瘤剔除术(transabdominalmyomectomy,TAM)的临床效果,探索肌瘤剔除术术式的合理选择.方法:回顾分析我院腹控镜子宫肌翘剔除术140例及开腹86例临床资料,比较两组患者年龄、生育情况、盆控手术史、肌瘤...     

三苯氧胺对人脑胶质瘤细胞SHG-44增殖的影响

目的研究三苯氧胺（TAM）对人脑胶质瘤细胞SHG-44增殖的影响并探究其可能机制。方法将不同浓度TAM和脑胶质瘤细胞作用,分别用细胞划痕法、3H-TdR掺入法、流式细胞仪和免疫组化法检测细胞转移能力、细胞DNA合成情况、细胞周期改变和细胞凋亡率及雌激素受体的表达情况。结果TAM在体外能明显抑制SHG-44细胞转移,抑制细胞DNA合成,且抑制作用呈浓度依赖性。流式细胞仪显示细胞经TAM处理后,表现为G0/G1期和G2/M期细胞所占比例增加,而S期细胞所占比例减少。用0、2、10μmol/LTAM处理时细胞凋亡率分别为（2.05±0.28）%、（7.66±0.52）%和（19.00±0.77）%,SHG-44细胞不表达雌激素受体。结论TAM可能通过改变细胞周期和诱导细胞凋亡来抑制脑胶质瘤细胞SHG-44的生长。     

绝经后服用他莫昔芬的乳腺癌妇女子宫内膜ras基因p21^ras蛋白的表达

目的研究他莫昔芬对乳腺癌患者的子宫内膜腺细胞p21ras蛋白表达的影响,探讨ras基因突变与他莫昔芬相关性子宫内膜病变的发生、发展的关系。方法对2005年1月-2008年10月于温州医学院附属第二医院乳腺外科手术绝经后乳腺癌患者进行随访,用免疫组化（sp法）检测服用他莫昔芬前和服用3年以上的正常子宫内膜和他莫昔芬相关性子宫内膜息肉中的p21ras蛋白表达。以同时期于我院治疗的绝经后子宫脱垂患者的子宫内膜、绝经后子宫内膜息肉,及子宫内膜癌患者为对照组。所有对照组患者,均无化疗和放疗及雌、孕激素服用史。结果乳癌组中,服药3年以上和他莫昔芬相关子宫内膜息肉组中,p21ras的表达率分别为25.5%（5/20）、27.27%（6/22）,与正常未服药的内膜及子宫内膜癌组比较,差别有统计学意义。在对照组中,p21ras在正常内膜组、内膜息肉组、子宫内膜癌组阳性表达率分别为3.33%（1/30）、13.33%（4/30）、70%（14/20）,表达率逐渐增加,有统计学意义。结论 p21ras蛋白在子宫内膜腺细胞上的过度表达与子宫内膜病变关系密切。使用他莫昔芬后,引起的p21ras蛋白的表达增加,可能是这一人群子宫内膜癌发病率增高的主要原因。     

子宫肌瘤切除三种术式临床效果比较

目的比较腹腔镜下子宫肌瘤切除术（laparoscopic hysteromyomectomia,LM）、经阴道子宫肌瘤切除术（transvaginal hysteromyomectomia,TVM）和开腹子宫肌瘤切除术（abdominal hysteromyomectomia,TAM）三种术式的临床效果。方法选择2006年7月至2007年7月入住天津市中心妇产科医院需手术治疗切除子宫肌瘤的150例患者,分为3组：LM组54例,TVM组46例,TAM组50例,对3组围手术期的手术时间、术中出血量、术后病率、术后住院天数等情况进行比较。结果3组手术时间、术中出血量、术后病率和术后住院天数差异均有统计学意义（P〈0.05）,TVM组手术时间、术中出血量和术后住院天数皆最短,TAM组术后病发生率高于TVM和LM组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论三种术式各有优劣,LM和TVM具有创伤小、术中出血少、术后恢复快、术后住院天数短等优点,但不能完全替代TAM,对于较困难的子宫肌瘤切除术,TAM仍为最佳选择。     

血清TAM、NSE、SCC—Ag,Cyfra21—1联合检测在肺癌诊断中的临床价值

目的探讨血清肿瘤相关物质（TAM）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、鳞状细胞癌抗原（SCC-Ag）、细胞角蛋白19片断（Cyfra21-1）联合检测用于肺癌诊断的临床价值。方法检测77例肺癌（肺癌组）、30例肺良性疾病（肺良性疾病组）、42名正常体检者（正常对照组）的血清肿瘤标志物TAM、NSE、SCC-Ag、Cyfra21-1水平,比较3组患者4种血清肿瘤标志物表达的差异及不同病理类型肺癌患者4种血清肿瘤标志物表达的差异。结果①肺癌组血清TAM、NSE、SCC-Ag、Cyfra21-1水平明显高于肺良性疾病组和正常对照组（P〈0．01）;小细胞肺癌组血清NSE水平显著高于鳞癌组和腺癌组（P〈0．05）,鳞癌组血清SCC-Ag、Cyfra21-1水平均高于腺癌组和小细胞肺癌组（P〈0．05）,TAM水平在3种病理类型间的差异无统计学意义（P〉0．05）。②肺癌组单检TAM、NSE、SCC-Ag、Cyfra21-1及联检（TAM＋NSE＋SCC-Ag＋Cyfra21-1）阳性率分别高于肺良性疾病组和正常对照组（P〈0．01）;小细胞肺癌组NSE阳性率显著高于鳞癌组和腺癌组（P〈0．05）;鳞癌组SCC-Ag、Cyfra21-1阳性率均高于腺癌组和小细胞肺癌组（P〈0．05）。③单检TAM、NSE、SCC-Ag、Cyfra21-1与联检（TAM＋NSE＋SCC-Ag＋Cyfra21-1）对肺癌诊断的灵敏度分别为81．87％、42．86％、29．87％、53．25％、93．51％,特异度分别为90．3％、97．2％、98．6％、95．8％、88．9％,准确性分别为85．9％、69．1％、63．1％、73．8％、90．6％,联合检测能获得较高的灵敏度和准确性。结论血清TAM、NSE、SCC-Ag、Cyfra21-1检测对肺部良恶性肿瘤的鉴别及判断肺癌病理类型有重要临床价值,4种肿瘤标志物联合检测能进一步提高肺癌诊断的敏感性和准确性。