黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶诱导的肺癌A549细胞自噬及PI3K/AKT信号通路的影响

目的基于PI3K/AKT信号通路观察黄芪多糖(Astragaluspolysaccharide, APS)对人肺癌A549细胞自噬的影响。方法黄嘌呤氧化酶(XOD)建立自噬模型,分别以APS(100、200、400) mg·L~(-1)浓度及3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)进行干预;CCK-8法、透射电镜及Western blot分别检测APS对人肺癌A549细胞自噬模型增殖、自噬体及自噬标记分子的影响。结果与空白组比较,模型组细胞生长加快,自噬小体数量增多,模型组LC3B及PI3K蛋白表达增高,p62及AKT降低(P<0.05);与模型组比较,APS(200、400) mg·L~(-1)浓度组细胞生长减慢,自噬小体数量减少,LC3B及PI3K蛋白表达下降,p62及AKT显著性增高(P<0.05);与3-MA组比较,APS(200 mg·L~(-1))浓度组LC3B蛋白表达下降(P <0. 05),APS(400 mg·L~(-1))浓度组PI3K显著性下降(P <0. 05)。结论 APS可能通过下调PI3K/AKT信号通路的自噬而发挥抗肿瘤作用。     

尿石素A抗糖脂毒性改善MIN6胰岛β细胞活力机制靶点研究

目的 靶点通路预测及细胞实验验证尿石素A（UA）在糖尿病环境下保护胰岛β细胞的作用机制。方法 用Cytoscape软件分析成分药效靶点,以基因本体（GO）、京都基因和基因组百科全书（KEGG）富集分析信号通路。将MIN6胰岛β细胞分为3组：对照组、高糖脂模型组、给药组(UA,11.5μg·mL^-1),干预24 h。CCK-8法测定细胞活力（光密度值）,蛋白质印迹法检测蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素蛋白（mTOR）及其相应磷酸化蛋白（p-Akt、p-mTOR）表达水平。自噬抑制剂氯喹(CQ,50μmol·L^-1)、AMP依赖的蛋白激酶抑制剂(CC,10μmol·L^-1)进行进一步反证。结果 网络预测发现Akt、mTOR为主要靶点,KEGG分析得到34条信号通路（P<0.05）,Akt-mTOR是其中一条重要通路。对照组、高糖脂模型组、给药组的细胞活力分别为99.92±1.84, 47.40±2.78和67.07±2.95;p-Akt表达分别为1.00±0.02, 0.61±0.01和0.79±0.01;p-m...     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨黄芪多糖对结直肠癌自噬的影响

目的 探讨黄芪多糖（APS）对结直肠癌自噬的影响及其机制。方法 采用CCK-8法检测APS各剂量（0.25 g/L、0.5 g/L、0.75 g/L、1 g/L）组对人结直肠癌HCT-116细胞增殖的影响，通过细胞划痕实验检测APS对HCT-116细胞迁移的影响，通过单丹磺酰尸胺染色检测APS对结直肠癌细胞自噬的影响，采用Western blot法检测APS对HCT-116细胞和结直肠癌荷瘤裸鼠肿瘤中自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白LC3B、p62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、PI3K、Akt及m TOR表达的影响；通过免疫组化染色检测APS对结直肠癌肿瘤中自噬相关蛋白p62表达的影响。结果APS可抑制HCT-116细胞增殖，且呈剂量依赖性（P<0.05）;APS可通过诱导细胞自噬抑制HCT-116细胞增殖和迁移，而自噬抑制剂3-MA(2 mmol/L)不仅可减弱APS对HCT-116细胞自噬的诱导作用，也可减弱APS对HCT-116细胞增殖和迁移的抑制作用（P<0.05）;APS可上调HCT-116细胞及结直肠癌小鼠肿瘤中自噬相关蛋白LC3BⅡ...     

淫羊藿苷调控mTOR/Akt/CREB通路对高糖诱导的足细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨淫羊藿苷对高糖诱导的足细胞自噬、凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路的影响。方法 将小鼠足细胞MPC5分为5组：正常对照组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^-1葡萄糖)、淫羊藿苷组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷)、GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+50μmol·L^-1 GDC-0349)、淫羊藿苷+GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷+50μmol·L^-1 GDC-0349)。培养48 h后，噻唑蓝法检测MPC5细胞活力；吖啶橙染色观察MPC5细胞自噬情况；流式细胞术检测MPC5细胞凋亡；蛋白印迹法检测MPC5细胞自噬[微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin-1...     

川芎嗪通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导自噬改善糖尿病肾病大鼠肾损害

目的 探讨川芎嗪对糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏 PI3K/Akt/mTOR信号通路和自噬标志蛋白 LC3B表达以及 尿微量白蛋白与尿肌酐比值（UACR）、肾脏病理的影响。方法 采用链脲佐菌素建立 DN大鼠模型,将模型大鼠随机 分为模型组,川芎嗪低、中、高剂量组,厄贝沙坦组;另设正常组,每组 12只。分别干预 8周后,采用酶法测定尿肌酐, 免疫比浊法测定尿微量白蛋白,计算 UACR;取肾组织,经甲醛固定后,进行苏木精-伊红（HE）和过碘酸-雪夫（PAS） 染色;通过蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫组化检测大鼠肾组织 PI3K/Akt/mTOR信号通路以及自噬标志蛋白 LC3B 表达的变化。结果 川芎嗪能减缓 DN 大鼠 UACR 的升高,改善其肾脏病理变化,其中川芎嗪中、高剂量组 UACR显著低于模型组（P＜0.05）,且川芎嗪中、高剂量组与厄贝沙坦组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。此外, 川芎嗪能抑制 DN大鼠肾组织 p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达,进而提高自噬标志蛋白 LC3B的表达水平和 LC3B-Ⅱ/ LC3B-Ⅰ比值。结论 川芎嗪能降低 DN大鼠 UACR的升高、改善其肾脏病理变化,发挥以上肾保护作用的机制可能 与其抑制 PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而促进肾脏自噬有关。     

黄芪注射液对肺结核大鼠免疫功能、自噬和凋亡的影响

目的 研究黄芪注射液对肺结核大鼠免疫功能、自噬和凋亡的影响及机制。方法 将SD大鼠分成对照组、模型组（注射结核杆菌）、实验组(注射结核杆菌,8 mL·kg^-1黄芪注射液处理)、实验+LY294002组[注射结核杆菌,8 mL·kg^-1黄芪注射液和磷脂酰肌醇-3激酶蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号抑制药LY294002处理]。以蛋白质印迹（Western blot）法检测肺组织中磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、Beclin1蛋白表达,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）水平,以流式细胞术检测T细胞亚群,以脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果 对照组、模型组、实验组、实验+LY294002组PI3K蛋白表达水平为0.59±0.05,0.23±0.03,0.46±0.05和0.33±0.02,p-Akt/Akt表达水平为0.40±0.04,0.22±0.02...     

黄芪注射液对肺结核大鼠免疫功能、自噬和凋亡的影响

目的 研究黄芪注射液对肺结核大鼠免疫功能、自噬和凋亡的影响及机制。方法 将SD大鼠分成对照组、模型组（注射结核杆菌）、实验组(注射结核杆菌,8 mL·kg^-1黄芪注射液处理)、实验+LY294002组[注射结核杆菌,8 mL·kg^-1黄芪注射液和磷脂酰肌醇-3激酶蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号抑制药LY294002处理]。以蛋白质印迹（Western blot）法检测肺组织中磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、Beclin1蛋白表达,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）水平,以流式细胞术检测T细胞亚群,以脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果 对照组、模型组、实验组、实验+LY294002组PI3K蛋白表达水平为0.59±0.05,0.23±0.03,0.46±0.05和0.33±0.02,p-Akt/Akt表达水平为0.40±0.04,0.22±0.02...     

抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对MPP+处理的SH-SY5Y细胞自噬、凋亡及PD特征蛋白表达的影响

目的 探讨抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP⁺)处理的SH-SY5Y细胞自噬、凋亡及帕金森病(PD)特征蛋白α-突触核蛋白(α-syn)、酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。方法 以MPP⁺、PI3K/Akt激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、PI3K/Akt抑制剂LY294002作用于人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(AO)染色检测自噬空泡;Western blot检测α-syn、TH、p62、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、p-mTOR、mTOR、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白水平。结果 MPP⁺干预显著降低SH-SY5Y细胞存活率,且呈现剂量依赖性(P<0.05)。MPP⁺和IGF-1处理后SH-SY5Y细胞存活率降低,凋亡率增高(P<0.05);细胞中自噬空泡减少,LC3BⅡ/Ⅰ降低,p62蛋白水平...     

乌司他丁对缺血性急性肾损伤大鼠肾功能及肾损伤因子-1水平的影响

目的 探讨乌司他丁对缺血性急性肾损伤（IAKI）大鼠肾功能及肾损伤因子-1（KIM-1）水平的影响。方法 用结扎输尿管法建立IAKI模型。将模型大鼠随机分为模型组和实验组,每组10只;另取10只正常大鼠作为假手术组。术后,假手术组和模型组均给予尾静脉推注3 mL·kg^-1·d^-1 0.9%NaCl;实验组给予尾静脉推注3.0×10⁴ U·kg^-1·d^-1乌司他丁。3组大鼠均每天给药1次,连续给药7 d。用酶联免疫吸附实验法检测大鼠肾功能,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和蛋白激酶B（AKT）mRNA的表达水平。结果 实验组、模型组和假手术组的血清肌酸酐分别为（71.36±10.31）,（108.23±16.36）和（48.15±5.65）μmol·L^-1,尿素分别为（13.54±3.42）,（21.80±5.65）和（8.37±3.03）mmol·L^-1,KIM-1分别为（1.74±0.18）,（2.48...     

土槿乙酸诱导的卵巢癌细胞HO-8910自噬及其机制

目的探讨土槿乙酸诱导的人卵巢癌细胞系HO-8910细胞自噬蛋白的表达及PI3K/Akt信号转导通路的变化,以及自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)对自噬相关蛋白的影响。方法不同浓度的土槿乙酸作用HO-8910细胞,采用台盼蓝染色检测细胞的存活率,Western blot分析检测自噬相关蛋白及PI3K/Akt通路相关蛋白的变化,分别用3-MA和RAPA处理HO-8910细胞后检测自噬相关蛋白的变化。结果土槿乙酸能够诱导卵巢癌细胞HO-8910自噬,增加LC3-Ⅱ和自噬调节因子Beclin-1的表达;3-MA可以抑制土槿乙酸诱导的HO-8910细胞自噬相关蛋白的表达,而RAPA促进了土槿乙酸诱导的HO-8910细胞自噬相关蛋白的表达,且土槿乙酸能抑制PI3K/Akt通路蛋白的表达。结论土槿乙酸可通过抑制PI3K/Akt通路诱导HO-8910细胞自噬。     

桃红四物汤改善紫杉醇导致的大鼠外周神经损伤的机制研究

目的 探索桃红四物汤（THD）改善紫杉醇（PTX）导致的大鼠外周神经损伤的作用机制。方法 考察THD(1 g/mL含药血清)、PTX(0.1μmol/L)单用和联用下对施万细胞系RSC96细胞增殖率以及自噬溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)、自噬标记蛋白酵母Atg6同源物（Beclin1）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达的影响,并与自噬促进剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）进行比较。考察THD高、低剂量对PTX导致的外周神经损伤模型大鼠坐骨神经中髓鞘碱性蛋白质（MBP）、鞘磷脂蛋白（MPZ）、S100钙结合蛋白（S100）、LAMP2、Beclin1、PI3K、Akt、mTOR表达的影响。结果THD+PTX作用下RSC96细胞增殖率显著高于PTX单用;THD+PTX、THD+3-MA作用下RSC96细胞中LAMP2、Beclin1蛋白的表达显著高于PTX、3-MA单用,PI3K、Akt、m TOR蛋白的表达显著低于PTX、3-MA单用（P<0.05）。与模型组相比,THD高、低剂量组大鼠坐骨神经中MBP、M...     

香菇多糖对甲状腺癌细胞生物学行为的影响

目的 研究香菇多糖(LNT)通过调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对甲状腺癌细胞生物学行为的影响。方法 将甲状腺癌TPC-1细胞分为空白组(常规培养)和低、中、高剂量实验组(20、40、60μmol·L^-1 LNT);另用不同剂量PI3K抑制剂LY294002(0、5 mg·L^-1)处理甲状腺癌TPC-1细胞，根据浓度分为对照组和LY294002组。以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力，以Transwell实验检测细胞迁移及侵袭情况，以流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期，以蛋白质印迹法检测PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果 香菇多糖可呈时间及浓度依赖性抑制甲状腺癌TPC-1细胞增殖率(P<0.05)。空白组和低、中、高剂量实验组细胞迁移数分别为(127.67±8.09)、(98.00±5.76)、(77.67±6.25)、(38.33±5.13)个；细胞侵袭数分别为(144.50±12.50)、(109.67±6.02)、(83.00±8.07)、(50....     

鱼腥草总黄酮调控PI3K/Akt信号通路诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的实验研究

目的：探讨鱼腥草总黄酮调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的诱导作用。方法：取对数期MCF-7细胞,随机分为4组（5个复孔）,低、中、高剂量组分别用3,6,9 g·L^-1鱼腥草总黄酮处理,对照组用磷酸盐缓冲液（PBS）处理。干预48 h后进行细胞形态学观察;对比干预12,24,48 h时的细胞凋亡率;对比干预48 h时PI3K、Akt、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA和PI3K、Akt、磷酸化Akt（pAkt）、Bcl-2、Bax蛋白相对表达量。结果：Hoechst 33258染色结果显示,干预后3剂量组部分细胞体积缩小、染色质浓缩,出现凋亡小体,且中剂量组凋亡现象最为明显;细胞凋亡率、Bax mRNA和蛋白相对表达量组间比较,中剂量组最高、高剂量组其次、低剂量组其稍低、对照组最低,且每2组间比较差异均有显著性（P<0.05）;细胞凋亡率组内比较,对照组随时间的延长变化不显著（P>0.05）,3剂量组均随时间的延长显著增加（P<0.05）;PI3K、Bcl-2 mRNA和PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白相对表达量组间比较,中剂量组最低、高剂量组其次、低剂量组稍高、对照组最高,且每2组间比较差异均有显著性（P<0.05）;Akt mRNA和蛋白相对表达量组间比较差异均不显著（P>0.05）。结论：鱼腥草总黄酮可促进人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡,其中浓度为6 g·L^-1时促凋亡作用最强,推测是通过下调PI3K、Bcl-2 mRNA和PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白表达,上调Bax mRNA和蛋白的表达,与PI3K/Akt信号通路有关。     

二苯乙烯苷对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的作用机制研究

目的 探讨中药单体二苯乙烯苷（TSG）对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的影响及其分子机制。方法 将SCC-9细胞分为3组:空白对照组(0μmol·L^-1TSG)和低、高2个浓度实验组(14,28μmol·L^-1TSG)。用划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞迁移水平,用流式细胞仪测定凋亡率,用实时荧光定量-PCR法检测抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）基因表达水平,用蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B （Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达水平。结果 空白对照组和低、高2个浓度实验组于24 h的平均水平迁移率分别为（48.00±5.87）%,（19.30±1.34）%和（17.16±1.50）%;这3组的垂直迁移细胞数分别为73.00±9.17,32.67±3.21和24.33±4.04;这3组的细胞凋亡率分别为（11.10±0.70）%,（23.17±1.03）%和（36.10±1.32）%;这3组的bcl-2基因的相对表达水平分别为1.03±0.02,0.39±0.09和0.1...     

二苯乙烯苷对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的作用机制研究

目的 探讨中药单体二苯乙烯苷（TSG）对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的影响及其分子机制。方法 将SCC-9细胞分为3组:空白对照组(0μmol·L^-1TSG)和低、高2个浓度实验组(14,28μmol·L^-1TSG)。用划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞迁移水平,用流式细胞仪测定凋亡率,用实时荧光定量-PCR法检测抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）基因表达水平,用蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B （Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达水平。结果 空白对照组和低、高2个浓度实验组于24 h的平均水平迁移率分别为（48.00±5.87）%,（19.30±1.34）%和（17.16±1.50）%;这3组的垂直迁移细胞数分别为73.00±9.17,32.67±3.21和24.33±4.04;这3组的细胞凋亡率分别为（11.10±0.70）%,（23.17±1.03）%和（36.10±1.32）%;这3组的bcl-2基因的相对表达水平分别为1.03±0.02,0.39±0.09和0.1...     

灵芝酸D通过调控p53/Bax通路对人结直肠肿瘤细胞的作用机制研究

目的 探究灵芝酸D（GAD）对人结直肠肿瘤细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 将直肠癌细胞系SW620分为6组：空白对照组（完全培养基）、低(5μmol·L^-1 GAD)、中(10μmol·L^-1 GAD)、高(20μmol·L^-1 GAD)3个剂量实验组、Pifithrin-α组(3μg·mL^-1 Pifithrin-α)和联合组(3μg·mL^-1 Pifithrin-α+20μmol·L^-1 GAD)。用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测细胞增殖能力,用Caspase-3/Caspase-8/Caspase-9检测试剂盒检测相应蛋白活性,用蛋白质印迹法检测抑癌蛋白p53（p53）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白质的表达水平。结果 空白对照组和低、中、高3个浓度实验组细胞增殖活性分别为（96.33±2.62）%,（95.00±1.63）%,（70.33±5.91）%和（49.00±3.56）%;4组Caspase-...     

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白自噬通路在支气管肺发育不良中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)自噬通路在支气管肺发育不良中的作用。方法 将A549细胞(腺癌人类肺泡基底上皮细胞)一定条件培养后分成对照组、支气管肺发育不良组、雷帕霉素干预组。支气管肺发育不良组、雷帕霉素干预组高氧环境培养,置于37℃、85%氧气孵化箱中培养48 h,前者不加药剂、后者加10μmol/L的雷帕霉素干预;对照组常规环境培养,置于37℃、5%二氧化碳孵化箱中培养48 h,不加药剂。利用高氧构建支气管肺发育不良的细胞模型,利用蛋白质印迹实验和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证自噬对高氧处理后A549细胞肺泡表面标志物合成蛋白复合物(SPC)、水通道蛋白5(AQP5)的影响,利用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测自噬对高氧处理后A549细胞增殖的影响,利用蛋白质印迹实验验证PI3K/Akt/mTOR自噬通路在支气管肺发育不良中的作用。结果 蛋白质印迹实验和RT-qPCR实验表明自噬激活剂雷帕霉素挽救了高氧处理后A549细胞SPC、AQP5表达的下调。EdU实验表明雷帕霉素显著促进了高氧处...     

黄芪多糖调控AMPK-mTORC1通路对牙周膜成纤维细胞增殖、凋亡、自噬的影响

目的 探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide, APS)对牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts, HPLF)增殖、凋亡、自噬及磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)通路的影响。方法 原代培养HPLF细胞;免疫组织化学法鉴定HPLF细胞;设置对照组、0.1 mg·mL^-1组(0.1 mg·mL^-1 APS)、0.2 mg·mL^-1组(0.2 mg·mL^-1 APS)、0.4 mg·mL^-1组(0.4 mg·mL^-1 APS),细胞增殖及毒性(CCK-8)法检测各组细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;透射电子显微镜观察各组HPLF细胞自噬情况;Western blot检测各组细胞自噬、凋亡、通路相关蛋白表达情况。结果 与对照组相比,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率在0.1 mg·mL^-1组、0.2 mg·mL^-1     

缬沙坦对颈动脉粥样硬化大鼠AT1R/PI3K/Akt/mTOR通路及血管内皮细胞自噬的影响

目的探讨缬沙坦对颈动脉粥样硬化大鼠血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路及血管内皮细胞自噬的影响。方法采用高脂饲料饲喂结合颈动脉球囊损伤法制备颈动脉粥样硬化大鼠模型,随机分为模型组(生理盐水),缬沙坦低、中、高(10、20、30 mg/kg)剂量组和阳性对照组(阿托伐他汀,2.5 mg/kg),另取假手术大鼠作为对照组(生理盐水),每组15只,均每天ig给药1次,连续4周,给药体积10 mL/kg。末次给药结束24 h后,全自动生化分析仪检测各组大鼠血脂水平,包括总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠颈动脉血清中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠颈动脉内皮组织病理学变化;单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测各组大鼠颈动脉内皮细胞自噬率;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测各组大鼠自噬标记蛋白LC3-Ⅱ、Beclin 1和通路蛋白AT1R表达水平及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平。结果与对照组相比,模型组大鼠颈动脉组织内皮细胞排列紊乱,内皮破损,大量炎性因子浸润,TC、TG、LDL-C、IL-1β、TNF-α、IL-6水平及AT1R蛋白表达和PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平显著升高(P0.05),HDL-C水平、细胞自噬率、LC3-Ⅱ和Beclin 1蛋白表达水平显著降低(P0.05);与模型组相比,缬沙坦低、中、高剂量组大鼠颈动脉组织中内膜逐渐平滑,炎性因子浸润依次减少,TC、TG、LDL-C、IL-1β、TNF-α、IL-6水平及AT1R蛋白表达和PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平依次降低(P0.05),HDL水平、细胞自噬率、LC3-Ⅱ和Beclin 1蛋白表达水平显著升高(P0.05);缬沙坦高剂量组与阳性对照组大鼠各项指标差异无统计学意义。结论缬沙坦可能通过下调AT1R/PI3K/AKT/mTOR信号通路,提高LC3-Ⅱ和Beclin 1自噬相关蛋白表达水平,促进颈动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞自噬,减轻炎症反应。     

二甲双胍调控PI3K/Akt通路对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬的影响研究

摘 要 目的：探讨二甲双胍调控磷脂酰肌醇3 激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬的影响。 方法: 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、二甲双胍低（150 mg·kg-1）、中（300 mg·kg-1）、高（500 mg·kg-1）剂量组、自噬激动剂组（雷帕霉素,5 mg·kg-1）,制备心肌缺血再灌注大鼠模型,药物处理组于建模前3 d以不同剂量二甲双胍及雷帕霉素每天灌胃治疗,模型组及假手术对照组采用等体积生理盐水灌胃,持续3 d。造模成功12 h后,处死大鼠,三苯基氯化四氮唑（TTC）染色观察各组大鼠心肌梗死面积,酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒检测血清中磷酸肌酸同工酶（CK MB）及肌钙蛋白I（cTnI）含量,免疫组织化学检测自噬相关蛋白Beclin 1、LC3、P62阳性细胞比例,蛋白免疫印迹（Western blot）检测自噬相关蛋白Beclin 1、LC3（包括LC3 Ⅰ、LC3 Ⅱ）、P62及PI3K/Akt 通路蛋白p PI3K、PI3K、Akt、p Akt表达情况。 结果: 与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积、血清中CK MB、cTnI含量、心肌组织中P62阳性细胞比例、P62、p PI3K、p Akt蛋白表达明显升高,心肌组织中Beclin 1、LC3阳性细胞比例、Beclin 1、LC3 Ⅱ蛋白表达明显降低（P＜0.05）;心肌组织中LC3 Ⅰ、PI3K、Akt蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）。与模型组比较,各药物处理组大鼠心肌梗死面积、血清中CK MB、cTnI含量、心肌组织中P62阳性细胞比例、P62、p PI3K、p Akt蛋白表达明显降低,心肌组织中Beclin 1、LC3阳性细胞比例、Beclin 1、LC3 Ⅱ蛋白表达明显升高（P＜0.05）,且二甲双胍各组呈剂量依赖性。二甲双胍低、中剂量组与自噬激动剂组比较,以上各指标差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论: 二甲双胍通过促进心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬,发挥心肌保护作用,其机制可能与下调PI3K/Akt通路有关。