微波辐射诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的可能机制

目的:观察微波辐射对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法:采用10、30和50 mW·cm-2辐射强度的微波辐射SH-SY5Y细胞5 min,以假辐射组(0 mW·cm-2)为对照,光镜下观察细胞形态变化;荧光显微镜下观察DAPI染色细胞核的形态;CTAB法提取细胞基因组DNA,电泳观察DNA...     

反义P38cDNA抑制胆红素诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡

目的：观察P38激酶特异性抑制剂SB203580及反义P38激酶cDNA对胆红素诱导人神经母细囊瘤SH—SY5Y细胞凋亡的影响，探讨P38激酶信号转导通路在胆红素诱导SH—SY5Y细胞凋亡中的作用及高胆红素血症损伤中枢神经细胞的分子机制及在听神经病发病中的作用。方法：分别经SB203580和二甲基亚砜预处理的SH—SY5Y细胞在胆红素作用3h和5h后，在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况；流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。采用脂质体法将含人反义P38cDNA的真核表达载体pcDNA3．O—antiP38导入SH—SYSY细胞，建立稳定低表达P38蛋白的细胞株，经Western blotting鉴定后命名为SH—SY5Y—antiP38，而转染空载体pcDNA3．0的SH—SY5Y细胞株则命名为SH—SY5Y细胞株则命名为SH-SY5Y-pcDNA3.0；SH—SY5Y—antiP38细胞和SH-SY5Y-pcDNA3．O细胞分别经胆红素作用3h和5h，在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况；流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果：在0．02g／L胆红素作用下，流式细胞仪显示与对照相比SB203580预处理的SH—SY5Y细胞在胆红素作用3h后，其凋亡细胞由19．4％下降到12．1％，5h后由66．2％降到39．3％；与SH—SY5Y—pcDNA3．O细胞相比，SH—SY5Y—antiP38细胞在胆红素作用3h后，其凋亡细胞由11．1％降到8．02％，5h后67％降到23．4％。结论：P38激酶参与了胆红素诱导SH—SY5Y细胞凋亡的信号转导。P38通路的激活可能在高胆红素血症导致的神经细胞损伤中(包括听神经细胞)发挥重要作用。     

纳米SiO2对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO₂)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡和周期的影响,阐明其作用机制。方法:选取不同浓度粒径为90 nm的SiO₂颗粒作用于SH-SY5Y细胞,分别为0、3.125、6.250、12.500、25.000、50.000 mg·L^-1 SiO₂组,其中0 mg·L^-1组为对照组。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率;采用AO/EB染色和 Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期百分比和细胞中活性氧(ROS)水平。结果:MTT检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于对照组 (P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于3.125 mg·L^-1 SiO₂组 (P<0.05)。AO/EB染色和 Annexin V-FITC/PI法检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于3.125 mg·L^-1 SiO₂组(P<0.05)。FCM检测,3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞中ROS水平高于对照组 (P<0.05)。25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₀/G₁期细胞百分比低于3.125 mg·L^-1SiO₂组和对照组(P<0.05),50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₂/M期细胞百分比高于对照组 (P<0.05)。结论:纳米SiO₂ 可降低SH-SY5Y细胞的活力,诱导细胞凋亡,增加细胞中ROS水平,可干扰细胞周期进程,对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用。     

基于自噬探讨龙蛭汤含药血清对H2O2诱导SH-SY5Y神经细胞氧化损伤的保护作用

目的:基于自噬探讨龙蛭汤(LZD)含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导的神经母细胞瘤(SH-SY5Y)氧化损伤的保护作用.方法:采用H2O2诱导SH-SY5Y构建氧化应激损伤模型,观察LZD含药血清对细胞的保护作用.加入自噬激动剂雷帕霉素(RAP)、抑制剂氯喹(CQ)干预SH-SY5Y细胞,观察自噬在SH-SY5Y损伤中...     

钙蛋白酶在TOCP诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬中的调节作用

目的探究钙蛋白酶对三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬的调节作用。 方法不同浓度TOCP处理未分化和分化的SH-SY5Y细胞,用荧光分光光度法检测钙蛋白酶活性。抑制钙蛋白酶活性后,通过Western blotting检测TOCP对自噬相关蛋白的影响;抑制钙通道后,用荧光分光光度法检测胞质钙离子浓度对钙蛋白酶活性的影响。 结果TOCP诱导未分化和分化的SH-SY5Y细胞钙蛋白酶活性上升;钙蛋白酶抑制剂可降低TOCP诱导的自噬相关蛋白LC3-II和Beclin1表达。维拉帕米和2-APB阻断钙通道后钙蛋白酶活性降低,维拉帕米而非2-APB可以抑制TOCP诱导的自噬相关蛋白LC3-II表达。 结论TOCP在未分化和分化的SH-SY5Y细胞中诱导的自噬受钙蛋白酶活性的调节。     

不同能量的培养条件对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响

目的 建立热量限制的体外模型,观察不同能量培养条件下对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞生长代谢的影响.方法 将人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞分别采用含有低浓度(2 g/L)、正常浓度(3.15g/L)或高浓度(4.5 g/L)葡萄糖的培养基进行常规传代培养,利用MTT代谢率、细胞生长曲线及LDH漏出率等指标观察各组细胞生长情况.结果 与正常葡萄糖浓度培养条件下培养的对照组相比,高糖组细胞突起缩短,细胞胞体皱缩,MTT代谢率稍低(0.573±0.001),LDH漏出率高,细胞生长状态差;与对照组相比,低糖组细胞突起伸展,MTT代谢率较低(0.428±0.003),LDH漏出率低,细胞生长速度缓慢,但是形态良好.结论 高糖培养对细胞有损伤作用,细胞代谢加速,更容易衰老死亡;而低糖培养起到保护作用,在热量限制允许范围内降低培养液的含糖量,不但不会对细胞造成损伤,反而对细胞的代谢及生长起到保护作用,延长细胞的总体寿命.     

叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用

目的通过观察叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响,探讨叶酸和维生素B12对神经细胞的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、叶酸组(1.875 mg/L)、维生素B12组(800μg/L)、叶酸(1.875 mg/L)+维生素B12(800μg/L)组,进行细胞形态观察、细胞计数分析以及测定各组细胞的噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率。结果与对照组相比,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组的细胞计数和MTT代谢率升高(P<0.05),LDH漏出率降低(P<0.05),在细胞形态上,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组明显好于对照组,表现为细胞胞体饱满、存活细胞数目增多、贴壁良好、突起延长。结论叶酸、维生素B12能促进神经细胞生长,降低神经细胞死亡率,从而达到保护神经元的作用。     

2,3-吲哚醌诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡作用及机制

目的 观察2,3-吲哚醌(ISA)经Caspase-3途径诱导人神经母细胞瘤凋亡的作用及机制.方法 以不同浓度ISA(0、100、200、400 ìmol/L)作用于SH-SY5Y细胞48 h,采用Hocehst33258/PI荧光染色技术观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot方法检测Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂(ICAD)蛋白表达的变化.结果 Hochest33258/PI荧光染色可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡形态学特征.100、200、400 ìmol/L ISA处理组SH-SY5Y细胞的凋亡率均明显高于对照组(F=111.30,P<0.05).随着ISA浓度的升高,表达活化Caspase-3的细胞数逐渐增加(F=5.622,P<0.05).Western blot检测到其下游作用底物ICAD被降解.结论 ISA能诱导SH-SY5Y细胞凋亡,该作用可能通过激活Caspase-3来实现.     

miR-221对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y裸鼠移植瘤生长的影响

目的 研究高表达miR-221对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的分子机制.方法 将18只裸鼠按照随机区组法分成3组:SH-SY5Y组(空白对照组)、miR-221-up组(实验组)和miRNA-NC组(阴性对照组),分别接种SH-SY5Y细胞、稳定转染miR-221的SH-SYSY-miR-221细胞及稳定转染对照质粒的SH-SY5 Y-miRNA-NC细胞,观察裸鼠体内成瘤及生长情况,30 d后处死取瘤体测量肿瘤体积、质量;qRT-PCR检测各组肿瘤组织中miR-221和MYCN mRNA水平的表达;Western blot和免疫组织化学法检测肿瘤组织中MYCN蛋白的表达水平.结果 与SH-SY5Y组相比,miR-221-up组裸鼠的瘤体体积和质量明显增加(P＜0.01),miRNA-NC组无统计学差异(P＞0.05);与SH-SY5Y组相比,miR-221-up组中miR-221、MYCN mRNA以及MYCN蛋白的表达明显升高(P＜0.01),而miRNA-NC组与SH-SY5Y组相比无统计学差异(P＞0.05).结论 miR-221可能通过上调MYCN的表达,促进SH-SY5Y细胞在裸鼠体内的生长.     

叶酸对铝诱导的人神经母细胞瘤细胞活性氧和线粒体膜电位水平的影响

目的 探讨叶酸对铝诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)水平的影响.方法 叶酸与不同金属共同处理SH-SY5Y细胞24 h,不同浓度Al分别染毒SH-SY5Y细胞6 h,不同浓度叶酸干预Al诱导SH-SY5Y细胞6 h,检测上述各组细胞ROS水平.测定叶酸对Al诱导SH-SY5Y细胞的毒性、MMP水平.结果 与control组比较,300μmol/L Al诱导SH-SY5Y细胞的ROS水平最高(P<0.05).50μmol/L叶酸+300μmol/L Al组细胞DCF相对荧光值、MMP降低的细胞比例、细胞存活率分别为15926±8200、38.04％、82.7％,与300μmol/L Al组20118±12503、45.88％、71.9％比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 叶酸可能通过拮抗铝诱导的SH-SY5Y细胞ROS水平升高来阻止MMP的降低,从而提高铝诱导下SH-SY5Y细胞的存活率.     

氨甲酰基促红素的制备及其对过氧化氢损伤的SH-SY5Y细胞保护作用的观察

目的 制备氨甲酰基促红细胞生成素并研究其对H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用。方法 将促红细胞生成素与氰酸钾共同作用使其转化为氨甲酰基促红细胞生成素,并通过电泳鉴定。分别选用300、400μmol/L H2O2作用于SH-SY5Y细胞12h后分别加入相同浓度的氨甲酰基促红细胞生成素及促红细胞生成素,作用24h终止培养,分别测定各组的噻唑兰(MTT)、乳酸脱氢酶值,通过Annexin V /PI双染色后经流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测Bcl-2及Caspase-8的表达,比较氨甲酰基促红素及促红素对H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用,并探讨其作用机制。结果 成功将促红素已氨甲酰化为氨甲酰基促红素。经氨甲酰基促红细胞生成素与促红细胞生成素作用后,H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的MTT值增高,乳酸脱氢酶降低,细胞凋亡率减少。结论 氨甲酰化促红素对氧自由基损害的SH-SY5Y细胞具有与促红素同样的保护作用,且在一定浓度范围内保护程度随着浓度的升高而增加。     

枳壳活性成分对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y生长的影响

目的：探讨枳壳醇提有效部位及其所含部分单体成分对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y生长的影响。方法：将细胞分为不同给药组,给以枳壳醇提有效部位及其所含的川陈皮素、红橘素、伞形酮和葡萄内酯不同浓度的试药,以四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞的活力,分析药物对SH-SY5Y细胞生长的作用。结果：红橘素和伞形酮在实验浓度下对SH-SY5Y细胞生长无显著性影响;枳壳醇提有效部位、川陈皮素和葡萄内酯在实验浓度下对SH-SY5Y细胞生长有显著性影响,且呈浓度效应关系。结论：枳壳醇提有效部位、葡萄内酯和川陈皮素对神经细胞生长有保护作用。     

黄杞苷对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨黄杞苷对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用与分子机制。方法黄杞苷(5、10、20、40、80和160μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h, MTT法检测黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后细胞活力的影响;通过氮蓝四唑(NBT)法总超氧化物歧化酶(SOD)活力检测试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶(NADPH)检测试剂盒测定黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响;通过流式细胞术对SH-SY5Y细胞进行活性氧(ROS)水平的测定。黄杞苷(20μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h, H₂O₂孵育6、12和24 h或用黄杞苷(5、10和20μmol·L^-1)预处理细胞12 h, H₂O₂孵育12 h,采用Western blot法分别检测Nrf...     

骨髓间充质干细胞来源外泌体诱导自噬对MPP+抑制SH-SY5Y细胞存活的影响及其机制

探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）来源外泌体（Exo）诱导自噬对１-甲基-４-苯基吡啶离子（MPP⁺）抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞存活的影响,阐明其作用机制。     

食源性原花青素对SH-SY5Y细胞生长的抑制作用及其机制

目的：探讨食源性原花青素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长的抑制作用,并阐明其作用机制。方法：培养SH-SY5Y细胞,将细胞分为对照组及10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组,各组细胞中加入含不同浓度（0、10、20和40mg·L^-1）食源性原花青素的培养基,采用噻唑蓝（MTT）法检测药物作用24、48和72h时SH-SY5Y细胞增殖率,流式细胞术检测药物作用72 h时不同细胞周期SH-SY5Y细胞百分率,Annexin Ⅴ凋亡试剂盒检测药物作用72 h时SH-SY5Y细胞的凋亡率。结果：与对照组比较,各时间点10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组SH-SY5Y细胞增殖率均降低,作用48和72h时20mg·L^-1食源性原花青素组细胞增殖率差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,作用24、48和72h时40mg·L^-1食源性原花青素组细胞增殖率差异有统计学意义（P<0.01）。与对照组比较,40mg·L^-1组食源性原花青素组细胞中G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.01）,G₂/M期细胞百分率降低（P<0.01）。与对照组比较,10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）。结论：食源性原花青素可抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长,其机制主要是阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。     

黄连素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其相关的氧化应激机制

目的已有较多研究表明黄连素对许多肿瘤有治疗作用。文中探讨黄连素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其相关的氧化应激机制。方法 MTT法检测不同浓度黄连素(10、25、50、75、100μmol/L)对细胞活力的影响,Hochest33342检测不同浓度黄连素(10、25、50、75、100μmol/L)对细胞凋亡的影响;2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(2’,7’-dichlorofluorescein diace-tate,DCFH-DA)荧光探针检测黄连素(50μmol/L)处理后MCF-7细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的变化;5,5’,6,6’-四氯-1,1’,3,3’-四乙基苯丙咪唑羰花青碘化物(JC-1)荧光探针检测黄连素处理后MCF-7细胞线粒体膜电位(mitochon-drial membrane potential,△Ψm)的变化。结果黄连素作用MCF-7细胞48 h,呈浓度依赖性致MCF-7细胞活力降低,诱导其凋亡。黄连素作用诱导MCF-7细胞内ROS大量生成并伴随△Ψm降低。结论黄连素具有抑制乳腺癌细胞活力,诱导其凋亡的作用,黄连素可能通过对乳腺癌细胞内氧化还原状态的调节,诱导ROS大量生成,从而损伤线粒体功能,诱导△Ψm降低,参与抗肿瘤作用。     

五味子乙素对谷氨酸诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制

目的: 探讨五味子乙素(Sch B)对谷氨酸(Glu)致人神经母瘤细胞SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,阐明其对ATR信号通路的影响。 方法: 将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分为对照组、DMSO组、模型组、Sch B1组、Sch B2组和Sch B3组。对照组SH-SY5Y细胞不做任何处理;DMSO组SH-SY5Y细胞用17 mmol·L^-1 DMSO作用24h;模型组SH-SY5Y细胞用20 mmol·L^-1 Glu孵育24h造成细胞损伤模型;Sch B1、Sch B2和Sch B3组采用0.05、 0.10和1.00 μmol·L^-1浓度Sch B预处理SH-SY5Y细胞24 h后再用Glu(20 mmol·L^-1 )继续孵育24 h。MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting法检测ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达情况。 结果: MTT法检测,与模型组比较,Sch B1、Sch B2和Sch B3组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01),且Sch B2组细胞存活率最高,故选取Sch B2组作为Sch B组进行后续实验。细胞周期检测,与对照组比较,模型组G₀/G₁期细胞所占百分比降低(P<0.05),S期和G₂/M 期细胞所占百分比升高(P<0.05);与模型组比较,Sch B组G₀/G₁期细胞所占百分比升高(P<0.05),S期和G₂/M 期细胞所占百分比降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,模型组细胞中ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,Sch B组细胞中ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达水平均降低(P<0.05)。 结论: Sch B对Glu致SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与下调ATR信号通路、减少细胞周期阻滞有关。