氯喹通过抑制NF-κB和MAPK信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应

目的:探究氯喹(CQ)对脂多糖(LPS)刺激的BV2小胶质细胞活化的抑制作用及可能机制。方法:将小鼠BV2小胶质细胞分为对照组、LPS组和LPS+CQ组。LPS+CQ组预先给予CQ(10μmol/L)处理30 min再给予LPS刺激,在LPS组和LPS+CQ组中给予LPS(500μg/L)刺激后,各组细胞分别培养30 min、6 h和24 h。倒置显微镜下观察BV2细胞的形态学改变;RT-qPCR和ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA和蛋白表达水平来评估BV2细胞的活化情况;用免疫荧光染色检测NF-κB蛋白核转移情况;用Western blot检测核因子κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白的表达情况及c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38蛋白的磷酸化水平。结果:LPS刺激后,BV2细胞形态由圆形或椭圆形向多极或纺锤样转变,而预先给予CQ能抑制BV2细胞的形态转变。LPS刺激后,BV2细胞中TNF-α和IL-6的mRNA水平和培养上清液中的蛋白水平明显增加,但预先给予CQ则明显抑制TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白表达,可见CQ能减轻LPS诱导...     

桔梗总皂苷对胶原性关节炎大鼠的抗炎作用及对TLR/MyD88/NF-κB通路的影响

目的:探讨桔梗总皂苷对胶原性关节炎大鼠的抗炎作用及对Toll样受体4/髓样分子因子88/核因子-κB(TLR/MyD88/NF-κB)通路的影响,阐明桔梗总皂苷对类风湿性关节炎(RA)的治疗机制.方法:将70只大鼠根据随机数字法分为对照组、模型组、桔梗总皂苷(CKS)低剂量组、CKS高剂量组、雷公藤多苷组,每组14只....     

竹节参皂苷IVa通过抗炎和抗氧化减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的：探讨竹节参皂苷IVa(saponin from Panax japonicus IVa, SPJ IVa)对大鼠急性肺损伤的影响,并对其可能的保护机制进行初步的探索。方法：将60只SD大鼠随机均分为4组,每组15只：对照组、模型组、低剂量SPJ IVa组和高剂量SPJ IVa组。以脂多糖（LPS,2 mg/kg）气管内滴注法建立大鼠急性肺损伤模型,低、高剂量SPJ IVa组大鼠在造模后30 min分别腹腔注射15和45 mg/kg SPJ IVa。造模后24 h,收集血清、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid, BALF）和肺组织。HE染色法评估肺组织病理形态学变化;称重法测定肺组织湿重/干重值;ELISA法检测血清和BALF中白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平;试剂盒法检测丙二醛（malondialdehyde, MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）和谷胱甘肽（glutathion...     

三七总皂苷对脂多糖诱导小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞表达的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞活化的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为溶媒对照(NS)组、LPS组、三七总皂苷预处理(PNS+LPS)组,采用新奇环境抑制摄食实验、糖水偏好实验、悬尾实验、强迫游泳实验观察小鼠的抑郁样行为;采用免疫组织化学法检测海马、杏仁核小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白分子1(IBA-1)的表达变化。结果 LPS导致小鼠出现抑郁样行为,包括新奇环境摄食潜伏期延长(P<0.05),糖水偏好百分比下降(P<0.05),悬尾不动时间延长(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),PNS干预可逆转上述抑郁行为表现(P<0.05);LPS导致小鼠海马和杏仁核IBA-1阳性细胞数目显著增多(P<0.0001),PNS预处理能明显减少IBA-1的阳性细胞数(P<0.05)。结论三七总皂苷能有效缓解LPS诱导的小鼠抑郁行为,其机制可能与抑制脑内小胶质细胞活化有关。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨黄芪多糖对肺癌小鼠免疫功能的影响及对Th1/Th2的调节作用

目的:探讨黄芪多糖(APS)对肺癌小鼠免疫功能的影响及对Th 1/Th2的调节作用及机制.方法:选取C57BL/6J野生型(TLR4+/+)和TLR4基因敲除(TLR4-/-)小鼠各50只,各随机分为5组:模型组、顺铂组(3 mg/kg)、APS高、中、低剂量组(400、200、100 mg/kg),每组10只,皮下注...     

脂多糖通过NF-κB途径调节大鼠星形胶质细胞Toll样受体表达

目的 研究脂多糖（LPS）对大鼠星形胶质细胞Toll样受体表达的影响及其机制。方法 在原代培养的第3代星形胶质细胞中加入不同浓度的LPS作用24h,通过免疫荧光、western blot观察星形胶质细胞 Toll样受体的表达和NF-κB p65的表达,同时研究NF-κB通路抑制剂对其的影响。结果 在正常状况下,星形胶质细胞胞浆和胞膜表达大量的TLR3受体,很少的TLR4受体。在LPS的刺激下,星形胶质细胞的TLR3表达保持不变,TLR4受体的表达随予以LPS的量增加而增高。LPS可刺激星形胶质细胞NF-κB的表达升高,抑制NF-κB通路活化抑制TLR4受体的上调。 结论 星形胶质细胞Toll样受体的表达是不同源的,TLR4受体随环境的变化而改变,其分子机制可能与NF-κB信号途径有关。     

人参皂苷Rg1通过TLR4/MyD88/NF-κB p65通路调控小鼠急性肾损伤诱导的急性肝损伤的机制研究

目的：探讨人参皂苷Rg1(GRg1)对小鼠急性肾损伤所诱导的急性肝损伤的保护作用及其调控机制。方法：昆明小鼠随机分为假手术（sham）组、模型（model）组、GRg1组和necrostatin-1 (Nec-1)组,每组10只。制备急性肾损伤模型,24 h后收集血液。采用生化试剂盒检测小鼠血清肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、天冬氨酸转氨酶（AST）、谷氨酸转氨酶（ALT）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。采用ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。HE染色观察组织病理学改变,采用免疫组织化学和Western blot法检测TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白的表达水平。结果：与假手术组比较,model组小鼠出现明显的肝细胞坏死、肝肾功能减退,血清中SCr、BUN、AST和ALT均显著升高（P<0.01）,MDA含量显著上升,SOD活性显著降低（P<0.01）,且血清中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α含量显著升高（P<0.01）,TLR4、MyD88和N...     

蝎毒耐热多肽对脂多糖诱导的BV2细胞炎性反应的抑制作用

目的:观察蝎毒耐热多肽(SVHRP)对细菌脂多糖(LPS)诱导的BV2细胞炎性反应的影响,探讨其是否具有抑制神经炎症的作用。方法:LPS诱导BV2细胞活化,进行免疫细胞化学染色(OX-42抗体)检测细胞的形态,MTT法检测SVHRP对细胞的毒性;分别用Griess试剂法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞外液炎性介质一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;Western Blot检测诱导型NO合成酶(iNOS)蛋白表达水平。结果:不同浓度的SVHRP(2~50μg/ml)对BV2细胞均无毒性。SVHRP(20μg/ml)预处理能明显抑制LPS诱导的BV2细胞的形态活化改变,减少细胞激活后产生的炎性因子NO和TNF-α,抑制iNOS的蛋白表达。结论:SVHRP明显抑制BV2小胶质细胞的炎性反应,提示SVHRP具有抗神经炎症作用。     

右美托咪定调节星形胶质细胞表型改善创伤性脑损伤大鼠神经功能的机制研究

目的 探讨右美托咪定对创伤性脑损伤大鼠神经功能的保护作用及其可能的作用机制。方法30只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及右美托咪定组,每组10只,采用Feeney自由落体的方法建立脑创伤模型。NSS评分评价大鼠神经功能;免疫荧光染色检测小胶质细胞标志物Iba-1表达;ELISA检测脑组织中TNF-α、IL-1α及C1q表达情况;免疫荧光染色检测A1型星形胶质细胞标志物C3/GFAP、A2型星形胶质细胞标志物S100A10/GFAP表达情况;Western blot检测TLR4/NF-κB信号通路TLR4、NF-κB及IκB蛋白表达情况。结果 与模型组相比,右美托咪定组大鼠NSS评分明显降低,神经功能明显改善;脑内Iba-1阳性细胞表达明显减少;脑组织中TNF-α、IL-1α及C1q水平明显降低;A1型星形胶质细胞标志物C3/GFAP表达明显减少,而A2型星形胶质细胞标志物S100A10/GFAP表达明显增加;并且TLR4/NF-κB信号通路TLR4、NF-κB蛋白表达明显减少,而IκB蛋白表达明显增加。结论 右美托咪定能够改善创伤性脑损伤大鼠神经功能,其作用机制可能与抑制T...     

葛根素通过抑制小胶质细胞TLR4/NF-κB介导的炎症反应治疗神经根性疼痛

目的:探究传统中药葛根素对腰椎间盘突出症引起的神经根性疼痛的作用及机制.方法:用自体髓核(NP)移植的方法复制大鼠腰椎间盘突出症模型,连续7天腹腔注射葛根素(100 mg·kg-1·d-1)观察镇痛效果;采用机械性撤足阈值(PWT)和热撤足潜伏期(PWL)作为痛觉阈值检测指标;Western blot方法检测脊髓组织T...     

Fueling autoimmunity: type I interferon in autoimmune diseases

In recent years, active research using genomic, cellular and animal modeling approaches has revealed the fundamental forces driving the development of autoimmune diseases. Type I interferon imprints unique molecular signatures in a list of autoimmune diseases. Interferon is induced by diverse nucleic acid-containing complexes, which trigger innate immune activation of plasmacytoid dendritic cells. Interferon primes, activates or differentiates various leukocyte populations to promote autoimmunity. Accordingly, interferon signaling is essential for the initiation and/or progression of lupus in several experimental models. However, the heterogeneous nature of systemic lupus erythematosus requires better characterization on how interferon pathways are activated and subsequently promote the advancement of autoimmune diseases. Given the central role of type I interferon, various strategies are devised to target these cytokines or related pathways to curtail the progression of autoimmune diseases.     

TLR4、MyD88、NF-κBmRNA在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达及意义

目的:研究TLR4、MyD88、NF-κB mRNA在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达情况,探讨TLR4在肌炎发病中的作用。方法:将30只雌性BALB/c小鼠随机分为5组(每组6只):第1组为正常对照组,其它4组分别为肌炎模型1周处理组、2周处理组、3周处理组和4周处理组,后4组均应用肌球蛋白诱导实验性自身免疫性肌炎模型(EAM)。采用实时荧光定量PCR方法检测各组小鼠淋巴结TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平。结果:(1)与正常小鼠相比,肌炎各组小鼠淋巴结中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达均有统计学差异,表现为不同程度升高(P<0.01),第3组升高最为显著(P<0.01),第4组较第5组升高(P<0.01);(2)各组淋巴结中TLR4 mRNA表达水平与MyD88 mRNA、NF-κBmRNA表达水平均呈正相关(r=0.906,r=0.967,P<0.01),MyD88 mRNA表达水平与NF-κB mRNA表达水平呈正相关(r=0.919,P<0.01)。结论:TLR4在自身免疫性肌炎发生发展过程中发挥重要作用,且以MyD88依赖型信号途径为主,并通过激活NF-κB促进炎性因子释放。     

PYNOD对LPS活化的BV2小胶质细胞炎症因子释放的影响

 目的:观察PYNOD对LPS活化的BV2小胶质细胞炎症因子释放的影响。方法: 将表达PYNOD的重组质粒pEGFP-C2-PYNOD瞬时转染BV2细胞后,加入LPS作用24 h,Griess 法检测一氧化氮（nitric oxide, NO）的释放,实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测诱导型一氧化氮合酶（inducible NO synthase, iNOS）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）mRNA的表达,此外Western blotting和ELISA法检测iNOS和IL-1β的蛋白表达。结果: 转染PYNOD重组质粒能显著抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症因子NO的释放（P＜0.05）。Real-time PCR证实PYNOD可抑制iNOS和 IL-1β 的mRNA表达,差异有统计学意义（P＜0.05）。ELISA和Western blotting证实PYNOD可下调iNOS和 IL-1β 蛋白的表达（P＜0.05）。结论: PYNOD蛋白可以在转录水平和翻译水平显著抑制LPS刺激的BV2小胶质细胞活化产生的炎症反应。     

小檗碱对流感病毒感染肺泡巨噬细胞炎性细胞因子的影响及其分子机制研究

目的:探讨小檗碱对流感病毒感染大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)后TNF-α、MCP-1转录、表达的影响及与TLR7介导的MyD88依赖性信号通路的关系。方法:流感病毒感染NR8383细胞1小时后,加入含小檗碱的培养基(终浓度5μg/ml),药物作用后6、12、24小时,ELISA检测细胞上清中TNF-α、MCP-1的含量;24小时,Real time PCR检测细胞内TNF-α、MCP-1的mRNA水平,RT-PCR检测TLR7、MyD88、NF-κB P65 mRNA水平;4、6、24小时,免疫组化法检测NF-κB P65核转位情况,并做半定量分析;24小时,Western blot检测NF-κB P65表达水平。结果:小檗碱抑制了流感病毒感染NR8383细胞后TNF-α、MCP-1的转录和表达(P<0.05),降低了TLR7、MyD88、NF-κB P65 mRNA水平(P<0.05、P<0.05、P<0.01),抑制了流感病毒感染后NF-κB P65的核转位及表达(P<0.01)。结论:小檗碱通过抑制TLR7介导的MyD88依赖性信号通路,抑制了NF-κB P65的核转位及表达,从而减少流感病毒感染巨噬细胞后炎性细胞因子TNF-α、MCP-1的产生,在流感治疗中发挥抗炎作用。     

CysLT2受体拮抗剂HAMI3379抑制LPS诱导小鼠小胶质瘤细胞系的炎性反应

目的探究半胱氨酰白三烯2(CysLT2)受体拮抗剂HAMI3379对LPS诱导小鼠小胶质细胞(BV-2)炎性反应的调控作用及其可能的作用机制。方法体外培养BV-2,将BV-2分为对照组、LPS(100 ng/mL)组、HAMI3379(0.01、0.1和1μmol/mL)组和LPS+HAMI3379组。CCK-8法检测BV-2细胞的增殖;ELISA检测细胞上清液中炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-10的含量;Western-blot检测PKCα、IKBα、NF-κB p50和p65蛋白的表达。结果LPS能够激活BV-2细胞,促进其细胞的增殖(P<0.05);显著增加细胞上清液中炎性因子IL-1β、TNF-α的分泌,减少IL-10的分泌(P<0.05);且显著上调PKCα、IKBα、p65蛋白的表达水平(P<0.05)。CysLT2受体拮抗剂HAMI3379能够显著减轻上述变化(P<0.05)。结论CysLT2受体拮抗剂HAMI3379能够抑制LPS激活BV-2细胞,抑制炎性反应,其作用机制可能与抑制PKCα/NF-κB信号通路有关。     

GEFH1在LPS诱导树突细胞IL-6和IL-12a表达中的作用

为探讨GEFH1与树突细胞(dendritic cell,DC)TLR4两条下游信号途径的关系,从野生型和TRIF基因、IFNα/β受体基因敲除小鼠中分离和培养DC,LPS或IL-6刺激后收集细胞制备总cDNA,通过实时定量PCR检测GEFH1的mRNA表达。再用GEFH1的siRNA转染DC,LPS刺激后检测IL-6和IL-12a的mRNA表达。结果,在LPS刺激后,GEFH1的mRNA表达在野生型小鼠的DC中显著增加,在TRIF基因、IFN-α/β受体基因敲除小鼠的DC中则未被上调。此外,GEFH1siRNA处理后,IL-6和IL-12a的mRNA表达均上升显著(P0.05),而在IL-6刺激的野生型小鼠的DC中,GEFH1的mRNA没有明显改变。以上结果提示在转录水平,TRIF-IFNβ信号通路、而非IL-6可诱导GEFH1基因表达。GEFH1可能对MyD88途径中细胞因子IL-6和IL-12a的表达有负调节作用。     

黄连解毒汤对变应性鼻炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路及黏膜杯状细胞的影响

目的:探究黄连解毒汤对变应性鼻炎大鼠黏膜杯状细胞及Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响.方法:卵白蛋白制备变应性鼻炎大鼠模型,模型制作成功后分为:模型组,黄连解毒汤低、中、高剂量组,以及阳性对照组.黄连解毒汤低、中、高剂量组分别按5、10和20 g/kg生药量灌胃,阳性对照组给予丙酸氟替...     

氯沙坦调节 TLR4/NF-κB 信号通路对肾血管性高血压大鼠左心室重构的保护作用

目的:探讨氯沙坦对肾血管性高血压大鼠左心室重构的干预机制。方法:将45只SD大鼠随机分为3组,空白对照组(Sham)、模型对照组(RVH)和氯沙坦(LOS)干预组(RVH+LOS),每组各15只。模型对照组和干预组用双肾双夹方法构建大鼠肾血管性高血压(RVH)模型,干预组每天给予氯沙坦(5、10、20 mg∕kg)灌胃治疗,空白对照组和模型对照组给予等量生理盐水灌胃,连续治疗4周。结束后用彩色多普勒超声波诊断仪评价心功能;记录大鼠体质量后处死大鼠,取出心脏,分别称量各组大鼠的心脏(HW)、心室(VW)和左心室重量(LVW),并计算左心室/体质量指数(LVW/BW);Masson染色评估各组大鼠心肌胶原容积分数(CVF);ELISA平行测定各组大鼠血浆中CRP、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10含量水平;免疫组化检测心肌组织TLR4及NF-κB的表达情况。结果:与Sham组相比,RVH组左室舒张末期内径(LVEDD)及收缩末期内径(LVESD)显著增加(P<0.05),左室短轴缩短率(LVFS)和射血分数(EF)显著降低(P<0.05);与RVH组相比,RVH+L...