眼镜蛇伤家兔模型凝血功能动态变化的观察

目的 :探讨眼镜蛇毒中毒模型凝血功能的动态变化。方法 :用中华眼镜蛇毒于家兔制作眼镜蛇伤模型 ,并设蛇伤药酒组和生理盐水组作为对照 ,分别于注蛇毒前 1d ,注蛇毒后 6h、2 4h和 7d从家兔耳缘静脉采抗凝血作凝血指标和血细胞检测。结果 :眼镜蛇毒组PT在注毒后 6h明显缩短 (P <0 .0 1) ,PT、Fbg和PLT在注毒后 2 4h均有显著变化(均为P <0 .0 1)。生理盐水组没有这些变化 ,蛇伤药酒组这些变化亦不明显。结论 :中华眼镜蛇毒在家兔模型中可影响外源凝血系统 ,导致家兔在中毒后数小时至 2 4h产生急性DIC而使血液呈高凝状态。蛇伤药酒可防止急性DIC的发生。     

热敷法对家兔化疗性静脉炎模型耳缘静脉组织中TNF-α表达的影响

目的：探讨热敷法对家兔化疗性静脉炎模型耳缘静脉组织中TNF表达的影响。方法：将40只新西兰大耳白兔随机分为5组,分别为空白对照组、注射四类化疗药组,采用耳缘静脉注射药物法,造家兔化疗性静脉炎模型,每只兔子一侧耳缘静脉注射化疗药时用热敷处理,对侧耳缘静脉注射同样化疗药时则不做任何处理。4d后处死家兔模型,取耳缘静脉及局部组织,免疫组化法,测组织中TNF-α的表达情况,以IPP6.0软件分析其表达强度。结果：对照组与另外4组家兔实验耳比较无统计学意义（P〉0.05）;对照组与另外4组家兔对照耳比较有统计学意义（P〈0.05）;实验组兔耳自身比较发现热敷组织TNF-α表达明显弱于对侧,且两组之间表达有统计学意义（P〈0.05）。结论：给予局部热敷可有效预防家兔化疗性静脉炎的发生。     

银杏叶提取物抗氧化作用的实验研究

1材料和方法1.1动物健康日本大耳白家兔32只,体重2.5~3.0kg,雌雄各半(雌者无孕),随机分为4组,每组8只,1组为假手术组,2组为缺血再灌注模型组,3组为中剂量银杏叶提取物治疗组,4组为大剂量银杏叶提取物治疗组。由河北职工医学院动物室提供。1.2方法所有家兔切除右肾,暴露左肾及左肾蒂,假手术组家兔不夹闭左肾及左肾蒂,直接关腹。缺血再灌注模型组、中剂量组、大剂量组均夹闭肾蒂,阻断左肾血流60m in,然后松夹,关腹。所有家兔于再灌注2h后处死,取肾保存待用。其中中剂量组于术前给予银杏叶提取物15mg /kg,耳缘静脉注射(相当于人推荐剂量20倍),1…     

血府逐瘀汤对动脉粥样硬化家兔主动脉组织单核细胞趋化因子-1表达的影响

目的观察血府逐瘀汤对动脉粥样硬化家兔主动脉组织单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)表达的影响,并探讨血府逐瘀汤抗动脉粥样硬化的机制。方法将24只清洁级日本雄性大耳家兔,随机分为3组,每组8只:空白组给予普通饲料;模型组先给予高胆固醇高脂饲料100 g/d后给予普通饲料;血府逐瘀汤组在模型组喂养的基础上,灌胃给予血府逐瘀汤,每天1次。喂养8周后,采血测定家兔血脂全套(TG、TC、LDL);应用光学显微镜观察兔主动脉切片的病理改变,测定其主动脉粥样硬化斑块灰度及斑块面积;利用免疫组织化学方法测定主动脉MCP-1蛋白的表达。结果主动脉图像分析血府逐瘀汤组家兔胸主动脉斑块灰度及斑块面积分别低于模型组(P0.01);与空白组及血府逐瘀汤组相比,模型组家兔血清TC,TG,LDL均明显升高(P0.05)。血府逐瘀汤组家兔血清TC,LDL的水平却明显高于空白组(P0.01)。模型组家兔动脉粥样硬化家兔主动脉MCP-1蛋白表达平均灰度值明显高于血府逐瘀汤组和空白组(P0.01)。结论血府逐瘀汤可以降低动脉粥样硬化家兔主动脉的MCP-1蛋白表达水平;血府逐瘀汤抗动脉粥样硬化的机制可能与其降低MCP-1蛋白表达水平有关。     

C57BL/6小鼠系膜增生型肾小球肾炎的复制

目的：探索一种复制小鼠系膜增生型。肾小球。肾炎动物模型的方法。方法：80只C57BL／6小鼠随机分为4组（每组20只）：A-正常对照组；B-竹叶青蛇毒2mg／kg注射组；C-竹叶青蛇毒4mg／kg注射组；D-竹叶青蛇毒6mg／ks注射组。按照分组要求计算B、C、D3组小鼠中每只小鼠需注射的竹叶青蛇毒的总量，配制3种不同浓度的竹叶青蛇毒液，B、C、D3组小鼠分别尾静脉注射不同浓度的竹叶青蛇毒液0．2mL，A组小鼠尾静脉注射生理盐水0．2mL以进行对照。结果：竹叶青蛇毒注射后的小鼠均出现中毒性症状。C、D组小鼠因蛇毒注射剂量较大，死亡率高达50％，且集中于前3d内死亡，3d后中毒小鼠的活动基本如常。B组与正常对照组小鼠无死亡。中毒小鼠的肾功能与正常对照组相较无明显差别，但均出现了肾小球系膜细胞增生，系膜基质增多，肾小球及间质内炎性细胞浸润等病理学改变。结论：竹叶青蛇毒尾静脉注射是一种复制小鼠系膜增生型肾小球肾炎动物模型的较好的方法。     

大剂量糖皮质激素联合抗蛇毒血清在竹叶青蛇伤致DIC临床观察

目的观察大剂量糖皮质激素联合抗蛇毒血清在治疗竹叶青蛇伤致 DIC 中的疗效。方法 57例竹叶青蛇伤致DIC 患者按单盲随机法分为两组,对照组28例,治疗组29例。对照组:常规综合治疗 抗蝮蛇血清;治疗组:在对照组基础上加用甲基泼尼松龙1000mg/d,观察两组疗效及凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fg)和血小板(PLT)的恢复时间。结果治疗组总有效率96.6%,对照组75.0%,两者差异有显著性(P<0.05);治疗组 PT、Fg、PLT 与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论大剂量糖皮质激素联合抗蛇毒血清治疗竹叶青蛇伤致 DIC 可明显缩短凝血指标恢复时间及提高疗效。可以对竹叶青蛇毒起较好的中和作用,取得满意的临床治疗效果。     

复方紫金霜对寻常痤疮兔模型的治疗作用研究

目的:采用煤焦油制造实验痤疮兔模型,观察复方紫金霜对实验性痤疮的治疗作用.方法:30只雄性日本大耳白兔随机分为实验组和对照组,在实验组家兔双耳内侧外用2%煤焦油溶液2周以制作实验痤疮兔模型.2周后将实验组再分为3组,分别于白兔右耳内侧外涂复方紫金霜、5%硫磺粉刺洗剂和生理盐水治疗3周.结果:外涂煤焦油2周后,外用煤焦油组均不同程度肉眼可见兔耳出现粉刺,在普通光镜下呈现与人类痤疮类似的病理改变;而对照组在肉眼和病理无明显改变.外用药3周后紫金霜组兔耳粉刺大部分消退,基本接近正常对照兔;外用硫磺粉刺组粉刺部分减少;生理盐水组无明显变化.结论:复方紫金霜对实验性痤疮有较好治疗效果,可明显减少痤疮模型的毛囊角栓和减轻炎症,其疗效优于硫磺粉刺洗剂.     

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤血管内皮功能影响

目的:研究蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的机制。方法:根据前期实验复制竹叶青蛇伤的动物及细胞模型。均设置空白组(KB)、模型组(MX)和低、中、高剂量蛇伤胶囊药液组(DY、ZY、GY)5组,每组10个样本。在动物实验中,KB经兔右后腿皮下注射0.75 m L/kg生理盐水,6 h后灌胃10 m L/kg生理盐水。MX、DY、ZY和GY经兔右后腿皮下注射0.75 m L/kg竹叶青蛇毒液,6 h后分别灌胃10 m L/kg生理盐水和10 m L/kg低、中、高剂量蛇伤胶囊药液。各组均每日灌胃1次,连续灌胃1周。于末次灌胃后24 h经耳缘静脉采血,分离出血清。在细胞实验中,KB加入10%正常兔血清培养,MX在KB的基础上加入5μg/m L竹叶青蛇毒液培养,DY、ZY和GY在MX基础上培养6 h后分别加入5%、10%和15%的含中药兔血清继续培养。各组分别培养72 h后,收集细胞培养液及细胞。以酶联免疫吸附法检测兔血清及细胞培养液中的内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、一氧化氮(Nitric Oxide,NO)和血管性血友病因子(von Willebrand Factor,v WF)水平。流式细胞术检测细胞中NO含量。结果:MX的ET-1和v WF水平相对KB均出现了显著的升高(P0.01,P0.05),NO水平显著降低(P0.01);DY、ZY和GY的ET-1及v WF水平相对MX均出现不同程度降低,NO水平出现不同程度的升高,其中ZY组变化有统计学意义(P0.01或P0.05)。结论:蛇伤胶囊可通过抗血管内皮细胞损伤途径治疗竹叶青蛇伤凝血障碍。     

消瘀接骨散对兔膝骨关节炎模型关节液中MMP-1、MMP-3表达的影响

目的 观察消瘀接骨散对兔膝骨关节炎模型中关节软骨病理改变及关节液中基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-1、MMP-3表达的影响。 方法 将24只新西兰大耳白兔分为正常组、模型组、用药组,每组8只。采用膝关节石膏制动方法复制膝骨关节炎模型,模型复制成功后,正常饲养并驱赶1周,给予用药组家兔消瘀接骨散外敷,给予模型组和正常组家兔相同大小药棉、绷带、胶布固定。光镜下观察膝关节软骨退变情况,采用酶联免疫吸附法测定关节液中MMP-1、MMP-3表达水平。 结果 用药组家兔膝关节软骨损伤较模型组明显减轻,关节软骨表面较正常组粗糙,滑膜增厚、稍有肿胀,镜下可见细胞排列规律尚可,偶见少量细胞簇集现象,关节软骨细胞有轻度变性,潮线尚完整。用药组家兔膝关节软骨的Mankin评分及关节液中MMP-1、MMP-3表达水平明显低于模型组（P<0.05）。 结论 消瘀接骨散外敷治疗兔膝骨关节炎的机制与其降低关节液中MMP-1、MMP-3的表达水平有关。     

实验兔酪氨酸酶基因家族表达水平与毛色和虹膜颜色性状的关系研究

目的探讨家兔酪氨酸酶家族基因表达量与动物不同毛色和虹膜颜色性状与之间的关系。方法选取白毛黑眼兔、日本大耳白兔、獭兔和青紫兰兔4个品系家兔各12只,分别取皮肤和虹膜组织提取RNA,采用荧光定量PCR和AAC,方法检测其中珂Tyr,Tyrpl,Dct基因的相对表达量,并在品系间和组织间进行比较。结果Tyr基因在白毛黑眼兔和青紫兰兔虹膜组织中的表达水平极显著高于该基因在日本大耳白兔和獭兔虹膜组织中的表达水平。Tyrpl基因在青紫兰兔皮肤组织中的表达水平极显著高于该基因在日本大耳白兔、獭兔和白毛黑眼兔皮肤组织中的表达水平。而研r基因在各品系实验兔的皮肤组织中,Tyrpl基因在各品系实验兔的虹膜组织中,以及Dct基因在各品系实验兔的皮肤和虹膜组织中虽然有一定的高低变化,但差异均未出现显著性。结论黑毛家兔皮肤组织中Tyrpl基因平均表达水平显著高于白毛家兔。黑眼家兔虹膜组织中ryr基因的表达水平显著高于红眼家兔。本研究揭示了家兔酪氨酸酶基因家族成员Tyrpl和Tyr的表达量分别与家兔的毛色和虹膜颜色表型具有相关性。     

高内涵分析及Western blotting法在蛋白质核质分布研究中的应用及比较研究

目的 使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法 细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析（high content analysis,HCA）对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组分中的蛋白质含量进行鉴定。结果 两种方法均可检测到蛋白质的出核转运;经定量分析,HCA法检测到的HuR蛋白质/核比升高倍数小于Western blotting法。结论 使用HCA法检测蛋白质核质定位具有准确、客观、成本低、快捷、多参数等特点,不失为Western blotting的有效补充及替代方法。     

人耐药肺腺癌A549/DDP细胞株的差异蛋白质组学

目的：建立A549与A549/DDP两组细胞株的双向凝胶电泳图谱,识别并鉴定其差异表达的蛋白质,筛选肺腺癌耐药相关蛋白质。方法：收集A549与A549/DDP两组细胞株的总蛋白质,应用二维凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）进行分离应用,图像分析识别差异表达的蛋白质点,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质点。使用Western免疫印迹对其中4个蛋白质进行验证。结果：建立了A549与A549/DDP细胞蛋白质的2-DE图谱,识别了40个差异表达的蛋白质点,鉴定了23个差异表达蛋白质。Western免疫印迹证实了差异蛋白质热休克蛋白β1,膜联蛋白A4,丝切蛋白l和波形蛋白在A549与A549/DDP细胞中的差异表达水平。结论：23个差异表达蛋白质为研究肺腺癌耐药机制提供了实验依据。     

Interaction among Rb/p16, Rb/E2F1 and HDAC1 proteins in gallbladder carcinoma

The mechanism and interaction among Rb/p16, Rb/E2F1 and HDAC1 proteins in gallbladder carcinoma were investigated. By using the immunoprecipitation method, the interactions among Rb, p16, E2F1, HDAC1 proteins in gallbladder carcinoma cell line （Mz-ChA-1） were studied. It was found that there were Rb and E2F1 proteins in the precipitates with anti-HDAC1, and there were HDAC1 and E2F1 proteins in the precipitate with anti-Rb. It was concluded that there are specific interactions among Rb, HDAC1 and E2F1 proteins in gallbladder carcinoma, indicating the existence of the direct Rb/E2F1/HDAC1 signal transduction pathway. There is no direct relationship between p16 proteins with Rb, HDAC1, and E2F1 proteins.     

Interaction among Rb/pl6,Rb/E2F1 and HDAC1 Proteins in Gallbladder Carcinoma

The mechanism and interaction among Rb/p16,Rb/E2F1 and HDAC1 proteins in gallbladder carcinoma were investigated. By using the immunoprecipitation method,the interactions among Rb,pl6,E2F1,HDAC1 proteins in gallbladder carcinoma cell line (Mz-ChA-1) were studied.It was found that there were Rb and E2F1 proteins in the precipitates with anti-HDAC1,and there were HDAC1 and E2F1 proteins in the precipitate with anti-Rb. It was concluded that there are specific interactions among Rb,HDAC1 and E2F1 proteins in gallbladder carcinoma,indicating the existence of the direct Rb/E2F1/HDAC1 signal transduction pathway. There is no direct relationship between p16 proteins with Rb,HDAC1,and E2F1 proteins.     

柯萨奇病毒A16型VP1~VP4基因克隆及其表达产物的抗原相关性分析

目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1~VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法
分别扩增出VP1~VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,
用柯萨奇病毒A16型病毒免疫兔血清及肠道病毒71型病毒免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA分析其抗原
相关性及交叉反应性。结果成功构建的重组质粒pQE30a/VP1~VP4并经IPTG诱导,重组蛋白VP1~VP4高效表达并纯化成
功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1~VP4可以被CVA16免疫兔血清特异识别,部分与肠道病毒71型免疫血清存
在交叉反应。结论在大肠杆菌M15中高效表达出柯萨奇病毒A16型VP1~VP4蛋白,经纯化产物具有较强的抗原反应性。
     

家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用

目的研究家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用。方法在体外培养的JEC和A375肿瘤细胞中分别加入0.02%、0.1%、0.5%、2.5%和12.5%浓度的抗菌蛋白,用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡,计算细胞凋亡指数;HE及AO染色法观察凋亡细胞形态。对照组采用不含抗菌蛋白的等量培养基。结果JEC细胞的凋亡指数/增殖指数(AI/PI)随浓度的增加而递增,2.5%抗菌蛋白组和12.5%抗菌蛋白组PI及凋亡率明显升高,G0/G1期下降。对A375细胞,12.5%抗菌蛋白组的G2/M期、S期、G0/G1期、G2/M期、AI/PI及PI与对照组的差异均有统计学意义(P<0.01)。结论家蝇幼虫抗菌蛋白可能通过诱导细胞凋亡来抑制JEC细胞生长;其对A375细胞的抑制可能是通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而发挥作用。     

Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质组学研究

目的通过比较Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠和正常大鼠关节滑膜组织蛋白质谱的差异,探讨类风湿性关节炎可能的发
病机制,寻找类风湿性关节炎致病相关蛋白。方法建立Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠模型。采用双向凝胶电泳的蛋白质组学
技术比较Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠和正常大鼠关节滑膜组织蛋白质谱的差异;采用Western blot技术和荧光定量PCR技术
验证其中2种差异蛋白表达情况。结果建立了佐剂性关节炎模型组及正常组滑膜组织双向凝胶电泳图谱,获得变化趋势2倍
以上的蛋白质点8个,其中模型组相对于空白对照组下调蛋白4个,模型组相对于空白对照组上调蛋白4个。Western blot方法
和荧光定量方法对其中2种蛋白进行验证,结果与蛋白质组学结果一致。结论类风湿关节炎滑膜病变是一个多种蛋白质参与
的复杂过程,这些表达差异蛋白质可能参与了类风湿性关节炎的进展。
     

SA/hI-TAC双功能融合蛋白的制备及其生物学功能鉴定

目的制备链亲和素连接的人干扰素诱导T细胞α趋化因子融合蛋白（SA/hI-TAC）,并对其生物学功能进行鉴定。方法构
建pET24a-SA-hI-TAC/pET21a-hI-TAC- SA表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达两种融合蛋白,用镍金属螯合层析纯化、透
析复性及蛋白质印迹法（Western blot）鉴定,融合蛋白中I-TAC部分的生物学活性由淋巴细胞趋化实验检测;融合蛋白中SA的
生物学活性由流式细胞仪测定。结果两种融合蛋白可在大肠杆菌BL21 中被诱导表达,分别占细菌表达总蛋白量的12%和
25%,经镍柱纯化后融合蛋白纯度达85%、90%,经丙烯葡聚糖凝胶S-100过滤层析后,纯度均可达到98%,融合蛋白在生物素化
的MB49细胞（小鼠膀胱癌细胞）表面的修饰效率分别为91.3%、98.8%,并对淋巴细胞的趋化作用呈剂量依赖性,且hI-TAC-SA
的趋化作用明显强于SA-hI-TAC。结论SA/hI-TAC 双功能融合蛋白可能应用于肿瘤局部治疗以及肿瘤疫苗。
     

鲜广地龙纯化蛋白的制备及其体外抗肺纤维化活性评价

目的 寻找一种方便快捷的鲜广地龙蛋白纯化方法,并探究其是否具有抗肺纤维化作用。方法 采用冷冻干燥法对鲜广地龙进行粗提取,再用分子排阻色谱分离纯化得到纯化蛋白（P2）,并质谱分析P2蛋白组成。细胞实验分组：C57BL/6小鼠24只,随机分3组（8只/组）。对照组、模型组（5 ng/mL TGF-β1处理）、SB431542组（2 μmol/L）和鲜广地龙纯化蛋白P2组（13.125 μg/mL）。动物实验分组：对照组（不处理）、模型组（博来霉素处理）、博来霉素+鲜广地龙纯化蛋白P2（5 mg/mL）。造模后给药21 d,在第22天进行取材。采用CCK8-法检测P2对MRC-5细胞的细胞毒性和肌成纤维细胞异常增殖的抑制;流式细胞术检验其对肌成纤维细胞的凋亡;HE 和 Massson 染色观察其对肺组织的病理学变化;RT-PCR、Western blot 检测其对α-SMA、Vimentin、E-cadherin和Collagen I的调节;机制方面通过检验P2对Smad2/3及P-Smad2/3的调节作用,进而证明其可通过TGF-β/Smad通路起到抗肺纤维化作用。结果 通过分子排阻色谱法可方便、稳定得到鲜广地龙纯化蛋白P2。体外实验显示P2具有抑制肌成纤维细胞的作用（P<0.01）,降低纤维化模型中α-SMA、Vimentin和Collagen I的表达（P<0.001或P<0.01）,升高E-cadherin的表达（P<0.01）,可抑制Smad2/3和P-Smad2/3的表达（P<0.001或P<0.01）。体内实验显示,P2可降低HE染色中炎症细胞的数量以及Masson染色中蓝色的胶原纤维区域。结论 运用分子排阻色谱可较为理想的获得鲜广地龙纯化蛋白P2,且其可通过调节TGF-β/Smad通路抑制肺纤维化进程。     

慢性肾功能衰竭患者透析前后蛋白质和氨基酸含量变化的观察

目的:观察慢性肾功能衰竭CRF患者透析前后蛋白质及氨基酸含量变化及营养状态。方法:对45例血透患者进行蛋白质、氨基酸浓度测定。结果:发现CRF患者总氨基酸含量由透析前的12.24mmol/L降低到透析后的8.67mmol/L,总蛋白质含量则由61.78g/L升至透析后的75.59g/L,白蛋白也由34.3g/L升至40.9g/L(P<0.05)。结论:透析对蛋白质和氨基酸含量有明显影响。