恩替卡韦通过微小RNA-199a-5p抑制乙型肝炎病毒复制的机制研究

目的 研究恩替卡韦(ETV)通过微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)抑制乙型肝炎病毒复制的机制。方法 将HepG2.2.15细胞标记为空白对照组;根据恩替卡韦浓度的不同将细胞分为低剂量实验组(10μmol·L^-1 ETV)、中剂量实验组(20μmol·L^-1 ETV)、高剂量实验组(30μmol·L^-1 ETV);miR-199a-5p, anti-miR-199a-5p、anti-miR-con、miR-con转染至HepG2.2.15细胞,分别标记为miR-199a-5p组、anti-miR-199a-5p组、anti-miR-con组、miR-con组,转染后anti-miR-199a-5p组、anti-miR-con组继续用30μmol·L^-1的ETV进行培养,分别标记为ETV+anti-miR-199a-5p组、ETV+anti-miR-con组。蛋白质印迹法检测各组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应法检测H...     

山奈酚通过调控miR-21/SOX9对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨山奈酚(KAE)对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:将C28/I2细胞分为对照组(正常培养的C28/I2细胞)、模型组(100 ng·ml^-1 LPS)、山奈酚低(KAE-L组,25μmol·L^-1 KAE+100 ng·ml^-1 LPS)、中(KAE-M组,50μmol·L^-1 KAE+100 ng·ml^-1 LPS)、高(KAE-H组,100μmol·L^-1 KAE+100 ng·ml^-1 LPS)剂量组。利用Lipofectamine^TM2000转染试剂盒对C28/I2细胞进行转染,并分为：mimics NC组(转染mimics NC+100 ng·ml^-1 LPS)、miR-21 mimics组(转染miR-21 mimics+100 ng·ml^-1 LPS)、inhibitor NC组(转染inhibitor NC+100 ng·m...     

黄芪对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究黄芪在高糖诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移中的作用及其机制。方法 取VSMCs随机分为对照组（普通培养）、高糖组(25mmol·L^-1葡萄糖)、实验组(25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·m L^-1黄芪)、第1转染组(转染阴性对照寡核苷酸+25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·ml^-1黄芪)、第2转染组(转染miR-18a-5p模拟物+25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·m L^-1黄芪)。以细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞的存活率;以划痕实验检测细胞迁移情况;以实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测miR-18a-5p的表达;以蛋白质印迹法检测线粒体融合蛋白2 （MFN2）蛋白的表达。结果 对照组、高糖组和实验组VSMCs存活率分别为（100.00±10.00）%,（188.24±18.17）%和（123.52±12.66）%;VSMCs迁移率分别为（15.16±1.64）%,（53...     

槲皮素通过调控GAS5/miR-18b-5p轴抑制神经内分泌肿瘤细胞活性的研究

目的 探讨槲皮素抑制胃肠胰神经内分泌肿瘤(GEP-NEN)的作用机制。方法 将人胰腺神经内分泌瘤细胞BON-1细胞随机分为对照组、槲皮素组(80μmol·L^-1槲皮素)、槲皮素+si-NC组(转染si-NC+80μmol·L^-1槲皮素)、槲皮素+si-生长抑制特异性基因5(GAS5)组(转染si-GAS5+80μmol·L^-1槲皮素)。用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA相对表达水平,用荧光原位杂交(FISH)实验检测细胞中GAS5和miR-18b-5p的阳性表达情况。结果 双荧光素酶报告基因结果发现,GAS5与miR-18b-5p靶向结合。对照组、槲皮素组、槲皮素+si-NC组、槲皮素+si-GAS5组细胞的GAS5表达水平分别为1.00±0.13、1.72±0.19、1.78±0.14和1.16±0.11,miR-18b-5p表达水平分别为1.00±0.15、0.67±0.08、0.72±0.06和0.95±0.11,Bax m...     

氟伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨氟伐他汀对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞（CFs）增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法将CFs随机分为A、B、C、D、E、F、G、H、I、J和K组。A组未给予氟伐他汀和AngⅡ处理;B组用0.1μmol·L^-1 AngⅡ刺激细胞6 h; C、D、E组在0.1μmol·L^-1 AngⅡ刺激细胞6 h后,再分别用0.1,1.0和10.0μmol·L^-1氟伐他汀处理12 h; F组将miR-NC转染至0.1μmol·L^-1 AngⅡ处理6 h后的CFs细胞中;G组将miR-590-5p转染至0.1μmol·L^-1 AngⅡ处理6 h后的CFs细胞中;H、I、J、K组分别将anti-miR-NC、anti-miR-590-5p、pcDNA3.1和pcDNA3.1-STAT3转染至1.0μmol·L^-1氟伐他汀和0.1μmol·L^-1AngⅡ处理12 h后的CFs细胞中。用噻唑蓝法检测细胞增殖,用Transwell法检...     

姜黄素通过上调miR-34a抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的恶性生物学行为

目的 探讨姜黄素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞恶性生物行为的影响及其可能作用机制。方法 CCK8法检测姜黄素(0、6.25、12.5、25、50和100μmol·L^-1)作用下细胞活力并筛选出后续姜黄素处理浓度(0、6.25、12.5、25μmol·L^-1),流式细胞法、划痕实验、Transwell实验和Western blot分别检测细胞凋亡、迁移、侵袭及相关蛋白水平。使用qRT-PCR法检测SH-SY5Y细胞miR-34a表达水平,构架miR-34a低表达SH-SY5Y细胞系(miR-34a inhibitor组)及其阴性对照(NC组)、对照组(Control组),三组细胞系均给予姜黄素(25μmol·L^-1)处理分别记为黄素+miR-34a inhibitor组、姜黄素+NC组、姜黄素组,另设置空白对照组,采用上述相同方法检测各组细胞凋亡、迁移、侵袭及相关蛋白水平和p-p65、p-IκBα蛋白水平。结果 当姜黄素干预浓度达到12.5μmol·L^-1时,SH-SY5Y细胞存活率显著低于无姜黄...     

黄芪甲苷对食管鳞癌细胞凋亡的影响

目的 研究黄芪甲苷对食管鳞癌细胞凋亡的影响及其调控机制。方法 体外培养Eca109细胞,用不同浓度(0、20、60和120μmol·L^-1)的黄芪甲苷处理细胞,并把细胞随机分为4组：Control组、AST组(120μmol·L^-1黄芪甲苷处理)、AST+pcDNA-NC组(120μmol·L^-1黄芪甲苷处理+转染pcDNA-NC)、AST+pcDNA-SATB1组(120μmol·L^-1黄芪甲苷处理+转染pcDNA-SATB1)。用细胞计数法-8（CCK-8）检测各组细胞增殖情况,用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;用蛋白质印迹法检测各组细胞SATB1、Bcl-2、Bax和Cl-caspase-3蛋白表达量。结果 Control组、AST组、AST+pcDNA-NC组、AST+pcDNA-SATB1组的SATB1的蛋白表达量分别为0.89±0.11,0.34±0.06,0.38±0.06,0.76±0.09,72 h OD值分别为1.16±0.14,0.57±0.08,0.64±0.08,0.89±...     

淫羊藿苷调控mTOR/Akt/CREB通路对高糖诱导的足细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨淫羊藿苷对高糖诱导的足细胞自噬、凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路的影响。方法 将小鼠足细胞MPC5分为5组：正常对照组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^-1葡萄糖)、淫羊藿苷组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷)、GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+50μmol·L^-1 GDC-0349)、淫羊藿苷+GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷+50μmol·L^-1 GDC-0349)。培养48 h后，噻唑蓝法检测MPC5细胞活力；吖啶橙染色观察MPC5细胞自噬情况；流式细胞术检测MPC5细胞凋亡；蛋白印迹法检测MPC5细胞自噬[微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin-1...     

塞利尼索通过调控miR-205-5p/OTUB1通路对白血病KOCL44细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨塞利尼索(Selinexor)对急性淋巴细胞白血病细胞KOCL44增殖、凋亡的影响，分析其对微小RNA-205-5p(miR-205-5p)/去泛素化酶卵巢肿瘤蛋白域所含泛素乙酰结合蛋白1(OTUB1)通路的调控作用。方法 体外培养KOCL44细胞，随机分为空白组和低、中、高剂量实验组(125、250、500 nmol·L^-1塞利尼索)及高剂量+anti-miR-205-5p组(转染anti-miR-205-5p 48 h后再用500 nmol·L^-1塞利尼索处理)、高剂量+pcDNA-OTUB1组(转染pcDNA-OTUB1 48 h后再用500 nmol·L^-1塞利尼索处理)。用细胞计数-8(CCK-8)实验检测细胞增殖情况；用流式细胞术检测细胞凋亡情况；用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-205-5p表达水平；用蛋白质印迹法检测OTUB1蛋白表达水平；用双荧光素酶报告实验检测miR-205-5p、OTUB1靶向关系。结果 空白组和低、中、高剂量实验组72 h细胞活力分别为1.21±0....     

miR-195-3p在同型半胱氨酸诱导的肝氧化应激损伤中的调控作用研究

目的 探讨miR-195-3p在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的肝氧化应激损伤中的作用。方法 小鼠分为CBS^+/+组、CBS^+/-组、Lv-miR-195-3p组(CBS^+/-小鼠经尾静脉注射病毒滴度为2×10⁷ TU·mL^-1的miR-195-3p重组慢病毒)、Lv-GFP组(CBS^+/-小鼠经尾静脉注射等体积病毒滴度为1×10⁸ TU·mL^-1的绿色荧光蛋白慢病毒)和PBS组(CBS^+/-小鼠经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液),每组10只。体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0μmol·L^-1 Hcy)、Hcy组(100μmol·L^-1 Hcy)、mimic-NC组(转染模拟物对照组)、mimic-NC+Hcy组(转染模拟物对照组+100μmol·L^-1 Hcy)、miR-195-3p-mimic组(转染miR-1...     

硫利达嗪调控长链非编码RNA癌症易感候选基因7对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

目的 研究硫利达嗪调控长链非编码RNA癌症易感候选基因7（CASC7）对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法 膀胱癌T24细胞分成对照组、Vector组、CASC7组、实验组、实验组+sh-NC组、实验组+sh-CASC7组。Vector组转染阴性对照载体、CASC7组转染CASC7过表达载体。对照组正常培养,实验组给予48μmol·L^-1的硫利达嗪处理,实验组+sh-NC组先转染shRNA control再给予48μmol·L^-1的硫利达嗪处理,实验组+sh-CASC7组先转染CASC7 shRNA再给予48μmol·L^-1的硫利达嗪处理。转染前将对数期的T24细胞调整浓度为每毫升5×10⁴个,接种于无菌细胞培养板,细胞融合度至75%～85%时,使用0.5%胰蛋白酶消化,用Lipofectamine^? 2000转染试剂将阴性对照载体、CASC7过表达载体、shRNA control、CASC7 shRNA转染进细胞。以实时定量反转录聚合酶链反应检测CASC7表达水平;以细胞...     

microRNA-124靶向髓样分化因子88增强肝癌细胞对索拉非尼敏感性的研究

目的 探讨microRNA-124（miR-124）靶向髓样分化因子88（MyD88）对肝癌细胞对索拉非尼敏感性的影响。方法 实验分实验组、miR-124 inhibitor组、MyD88组和MyD88+miR-124组。实验组给予含1,5,10和20μg·mL^-1索拉非尼的DMEM培养基进行培养;miR-124 inhibitor组转染miR-124 inhibitor后,再给予含10μg·mL^-1索拉非尼的DMEM培养基进行培养;MyD88组转染pcDNA-MyD88后,再给予含10μg·mL^-1索拉非尼的DMEM培养基进行培养;MyD88+miR-124组转染miR-124 mimic和pcDNA-MyD88后,再给予含10μg·mL^-1索拉非尼的DMEM培养基进行培养。用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-124相对表达量,用CCK-8和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡,用蛋白质印记法检测MyD88蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平。结果 不同浓度索拉非尼均会上调miR-124的表达水平。敲降miR...     

阿帕替尼上调miR-324-5p表达抑制结肠癌细胞的研究

目的 探讨阿帕替尼对结肠癌细胞生物学行为的影响和机制。方法 将结肠癌细胞HCT116分为对照(NC)组,低、中、高剂量组(0.5,1.0和2.0μmol·L^-1阿帕替尼),转染1组(2.0μmol·L^-1阿帕替尼+anti-miR-NC),转染2组(2.0μmol·L^-1阿帕替尼+anti-miR-324-5p)。细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖率;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;荧光定量聚合酶链反应法检测miR-324-5p表达。结果 NC组,低、中、高剂量组、转染1组、转染2组HCT116细胞增殖率分别为(100.00±2.79)%,(94.29±1.74)%,(76.48±1.65)%,(51.48±1.75)%,(51.58±0.88)%和(93.64±3.90)%;迁移细胞数分别为(206.27±9.30),(163.23±3.84),(133.83±4.26),(104.32±5.72),(107.93±3.14)和(194.51±3.96)个;侵袭细胞数分别为(153.47±4.37),(121.4...     

芸香苷改善椎间盘退变大鼠髓核细胞焦亡的研究

目的 从细胞水平探究芸香苷对椎间盘退变大鼠髓核细胞焦亡的影响及作用机制。方法 将大鼠椎间盘髓核细胞随机分为对照组、模型组[白细胞介素-1β(IL-1β)诱导]、低剂量实验组(25μmol·L^-1芸香苷+10 ng·mL^-1 IL-1β)、中剂量实验组(50μmol·L^-1芸香苷+10ng·mL^-1 IL-1β)、高剂量实验组(100μmol·L^-1芸香苷+10 ng·mL^-1 IL-1β)、高剂量+SIRT1激动药组[100μmol·L^-1芸香苷+10 ng·mL^-1 IL-1β+1μmol·L^-1沉默信息调节因子1(SIRT1)激动药SRT1720]。用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验、蛋白质印迹法检测相关基因和蛋白的表达水平,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞活力,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎性因子的表达水平。结果 对照组、模型组、高剂量实验组、高剂量+...     

连翘苷通过调控miR-483-3p对oxLDL诱导的血管平滑肌细胞损伤的影响

目的:探讨连翘苷(PHN)对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管平滑肌细胞炎症损伤的影响及分子机制。方法:人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)随机分为对照组、oxLDL组(50 mg·ml^-1)、oxLDL(50 mg·ml^-1)+PHN低(1μmol·L^-1)、中(10μmol·L^-1)、高(100μmol·L^-1)剂量组、oxLDL(50 mg·ml^-1)+anti-miR-483-3p组、oxLDL(50 mg·ml^-1)+anti-miR-NC组、oxLDL(50 mg·ml^-1)+PHN(100μmol·L^-1)+miR-483-3p组、oxLDL(50 mg·ml^-1)+PHN(100μmol·L^-1)+miR-NC组。采用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot法检测活化的半胱胺酸蛋白酶(Cleaved-Caspa...     

木犀草素上调miR-384对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 研究木犀草素(luteolin)对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的作用及机制。方法 以质量浓度2.5、25和50μmol·L^-1Luteolin1处理U251和U87细胞。分别以克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测细胞克隆形成、凋亡和侵袭。采用Lipofectamine 2000将antagomir-NC、miR-384 antagomir转染胶质瘤细胞U251。以RT-qPCR检测胶质瘤细胞中miR-384的表达水平。转染miR-384 antagomir后用质量浓度50μmol·L^-1的luteolin处理,以蛋白免疫印迹法(western blot)检测各组细胞中Ki67、p21、VEGF、Bax、Bcl-2和N-cadherin蛋白相对表达水平。结果 结果表明CCK-8浓度>25μmol·L^-1时luteolin可显著降低U251和U87细胞活力;与对照组相比,以质量浓度25和50μmol·L^-1 luteolin处理可明显降低细胞克隆形成率和侵袭率、提升细胞凋亡率。...     

依托咪酯对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞损伤的影响

目的 探讨依托咪酯对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响。方法 将人CHON-001软骨细胞分为空白组(常规培养基培养)、模型组(用10 ng·mL^-1 IL-1β培养)、高剂量实验组(用5μmol·L^-1依托咪酯+10 ng·mL^-1 IL-1β培养)、抑制药组[用5μmol·L^-1无翅型MMTV整合位点家族成员3a(Wnt3a)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制药IWR-1-endo+10 ng·mL^-1 IL-1β培养]、抑制药+高剂量实验组(用10 ng·mL^-1 IL-1β+5μmol·L^-1依托咪酯+5μmol·L^-1 IWR-1-endo培养)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞的增殖情况,用膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙啶(PI)染色法检测细胞凋亡情况;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中促炎因子的含量;用蛋白质印迹法测定基质金属蛋白酶(...     

基于PI3K/Akt信号通路探讨姜黄素诱导A549细胞凋亡的机制

目的 观察并探讨姜黄素对非小细胞肺癌A549细胞的作用及其机制。方法 将A549细胞分为空白组(正常培养)和低、高剂量实验组(分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)及激动药+低、高剂量实验组(先用50μmol·L^-1 Recilisib Sodium干预24 h后，再分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)、抑制药+低、高剂量实验组(先用25μmol·L^-1 PI3K-IN-1干预24 h后，再分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)。用MTT法测定细胞增值率；用流式细胞术测定细胞凋亡情况；用实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)mRNA的相对表达水平；用蛋白质印迹法检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果 空白组、低剂量实验组、高剂量实验组、激动药+低剂量实验组、抑制药+低剂量实验组、激动药+高剂量实验组、抑制药+高剂量实验组的细胞活力分别为(100...     

唑来膦酸对高糖诱导的成骨细胞分化、凋亡和氧化应激的影响

目的 探讨唑来膦酸对高糖诱导的成骨细胞分化、凋亡和氧化应激的影响。方法 将人成骨细胞hFOB 1.19分为对照组、高糖组(5.5 mol·L^-1葡萄糖)、低剂量实验组(5.5 mol·L^-1葡萄糖+1×10^-11 mol·L^-1唑来膦酸)、中剂量实验组(5.5 mol·L^-1葡萄糖+1×10^-10 mol·L^-1唑来膦酸)、高剂量实验组(5.5 mol·L^-1葡萄糖+1×10^-9 mol·L^-1唑来膦酸)。通过细胞计数试剂盒（CCK-8）检测各组细胞增殖活性,用碱性磷酸酶（ALP）染色检测ALP活性,用Alizarin red S染色检测钙结节形成情况;用蛋白质印迹（Western Blot）法检测唑来膦酸对高糖诱导的hFOB 1.19细胞分化以及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路相关蛋白表达的影响;用流式细胞术检测唑来膦酸对高糖诱导的hFOB 1.19...     

敲降miR-454-3p上调细胞周期蛋白G2增强乳腺癌多柔比星耐药细胞的敏感性研究

目的 探讨miR-454-3p通过细胞周期蛋白G2(CCNG2)对乳腺癌MCF-7/多柔比星(ADR)细胞ADR耐药性的调控机制。方法 MCF-7细胞用不同浓度的ADR间歇诱导构建MCF-7/ADR耐药细胞模型,当浓度为6.0μmol·L^-1时,细胞稳定增殖,获得MCF-7/ADR耐药细胞。将MCF-7/ADR细胞分为NC组(MCF-7/ADR细胞)、转染1组(MCF-7/ADR细胞中转染miR-454-3p inhibitor)、转染2组(MCF-7/ADR细胞中转染pcDNA-CCNG2)、转染3组(MCF-7/ADR细胞中转染pcDNA-CCNG2+miR-454-3p mimic)、NC mimics组(MCF-7/ADR细胞中转染miR-454-3p mimic阴性对照)、miR-454-3p mimcs组(MCF-7/ADR细胞中转染miR-454-3p mimic)。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法检测miR-454-3p的表达水平;用蛋白质印迹法检测CCNG2的表达水平;用噻唑蓝法检测细胞的增殖活力。结果 MCF-10A、MCF-7和MCF-7/...