基于DJ-1/GPX4通路探讨加味二至丸对动脉粥样硬化巨噬细胞铁死亡的影响

目的：探讨加味二至丸（MEP）对动脉粥样硬化（AS）巨噬细胞铁死亡的作用及机制。方法：（1）50只载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠构建AS模型,随机分为模型组,辛伐他汀组,以及低、中、高剂量MEP组,每组10只,以10只同背景的C57BL/6J为空白对照组。按照分组干预10周后,HE染色观察小鼠主动脉窦病理学改变,RT-qPCR法检测各组小鼠主动脉组织DJ-1和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的mRNA表达。（2）将40只SD大鼠随机分为空白对照组和MEP组,制备MEP含药血清。体外培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,将细胞分为空白对照血清组、氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的模型组、铁死亡抑制剂（ferrostatin-1）组、MEP含药血清组和MEP含药血清+铁死亡诱导剂（erastin）组共5组。MTT实验检测不同浓度MEP含药血清对细胞活力的影响,油红O染色观察各组细胞脂质沉积,ELISA检测各组细胞活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）及铁离子水平,透射电镜观察各组细胞线粒体结构和形态,RT-qPCR法和Weste...     

四君子汤通过铁死亡途径改善动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质沉积

目的 基于"塞因塞用,以补开塞"探讨四君子汤通过铁死亡途径对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质沉积的影响.方法 ApoE-/-小鼠20只饲喂高脂饲料8周,随机分为模型组(Apoe)和四君子汤组(Sjz),Sjz组小鼠每天灌胃130mg/kg/d四君子汤,连续4周;另选10只C57BL/6J小鼠作为空白对照组(Con...     

Nrf2激动剂萝卜硫素通过抑制肝组织铁死亡减轻小鼠脓毒症肝损伤

目的:探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)激动剂萝卜硫素(sulfora?phane,SFN)对脓毒症小鼠肝脏铁死亡的影响及其分子机制.方法:用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and punc?ture,CLP)复制C57BL/6小鼠的...     

铁死亡脂质过氧化机制及其与阿尔茨海默病的联系

<正>阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）是多发于65岁及以上老年人群的中枢神经系统退行性疾病,临床表现以记忆、语言及其他认知能力衰退为主,主要病理特征为以β-淀粉样蛋白（amyloidβ-protein,Aβ）为核心成分的老年斑及tau蛋白过度磷酸化引起的神经原纤维缠结。在日益增强的老龄化趋势下,     

内质网应激参与双酚A导致小鼠的肝脏脂质沉积

目的研究内质网应激在双酚A(BPA)导致的肝脏脂质沉积中的作用。方法将雄性CD1小鼠随机分为对照组(n=10)和BPA组(n=10)。BPA组给予一定浓度BPA的饲料进行喂养[BPA质量按照500μg/(kg·d)的量加入普通饲料]。8周后化学酶促-比色法检测肝脏三酰甘油(TG)含量,油红O染色观察肝脏内脂质聚集情况,RTPCR法检测肝脏组织脂肪酸合成酶(FAS)和脂肪酸转运蛋白1(FATP1)的mRNA表达。Western blot检测内质网应激相关蛋白(Bip、IRE1α、PERK、e IF2α和SREBP-1c)等蛋白及其磷酸化的表达水平。结果与对照组相比,BPA组小鼠肝脏的TG含量明显增加(P0.05);油红O染色结果与TG定量一致。BPA组肝脏组织中FAS和FATP1的mRNA表达水平显著高于对照组(P0.05)。BPA组肝脏组织中Bip、p-IRE1α/IRE1α、p-PERK/PERK、p-e IF2α/e IF2α和SREBP-1c的蛋白表达水平显著高于对照组(P0.05)。结论内质网应激途径可能参与了BPA所导致的肝脏脂质沉积。     

缺血预处理通过抑制铁死亡减轻大鼠肺缺血-再灌注损伤

目的：探讨铁死亡是否参与大鼠肺缺血-再灌注损伤（LIRI）,以及缺血预处理（I-pre-C）是否通过抑制铁死亡而减轻LIRI。方法：将SPF级雄性SD大鼠随机分成4组：对照组（control组）,缺血-再灌注（IR）30 min组（IR组）、铁死亡抑制剂去铁胺（DFO）组（IR+DFO组）和I-pre-C组,进行指标检测及肺脏病理观察。使用光镜、电镜和二氢乙啶（DHE）染色等评估大鼠肺组织的损伤程度;Western blot等方法检测缺血-再灌注肺组织铁死亡的相关指标。结果：与control组相比,IR组肺组织的活性氧（ROS）水平升高,丙二醛（MDA）和Fe水平升高,谷胱甘肽（GSH）水平下降,铁死亡相关蛋白酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)和转铁蛋白受体1(TFR1)水平升高,铁蛋白重链1(FTH1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)下降（P<0.01）;与IR组相比,IR+DFO组肺组织的ROS水平显著下降,铁死亡的线粒体形态有所改善,MDA水平下降,GSH水平上升（P<0.01）;与IR组相比,I-pre-C明显改...     

齐墩果酸通过Nrf2抑制铁死亡并减轻重症急性胰腺炎大鼠肝损伤

目的：基于核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗铁死亡轴探讨齐墩果酸（OLA）对重症急性胰腺炎（SAP大鼠肝损伤的作用机制。方法：经逆行注射牛磺胆酸钠法构建SAP大鼠模型,大鼠被随机分为SAP组、OLA+SAP组、铁死亡抑制剂ferrostatin-1(FER1)+SAP组、OLA+Nrf2抑制剂brusatol(BRU)+SAP组和假手术（sham）组,每组8只。注射牛磺胆酸钠后0.5、3和6 h,依次给予相应药物或生理盐水灌胃及腹腔注射。HE和TUNEL染色分别观察胰腺和肝脏形态变化及肝细胞死亡情况;试剂盒检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆汁酸（TBA）、白蛋白（ALB）和淀粉酶（AMY）水平,肝组织丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、4-羟基壬烯醛（4-HNE）和总谷胱甘肽（t-GSH）水平,以及肝组织中铁含量;Western blot检测肝组织中cleaved caspase-3及Nrf2-抗铁死亡轴相关蛋白水平。结果：造模后12 h,相较于sham组,SAP组胰腺和肝细胞肿胀变形,有较多炎性细胞,血清ALT、AST、TBA和AMY水平,肝组织clea...     

二苯乙烯苷通过抑制ROS减轻MPTP对帕金森病小鼠的神经毒性作用

目的:探讨2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside,TSG)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-pheyl-1,2,3,6-tetrahydrophridine,MPTP)诱导的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的机制。方法:实验分成三组,即健康C57BL小鼠随机分为对照组(腹腔注射生理盐水);模型组,连续7 d给C57BL小鼠腹腔注射MPTP(30 mg/kg)制备亚急性PD模型;治疗组,在给予MPTP后1 h腹腔注射TSG(60 mg/kg)。爬杆实验检测小鼠的行为学变化;活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测ROS水平;免疫荧光组织化学染色法测定黑质酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)的表达变化。结果:行为学:与对照组比较,模型组爬杆时间与转头时间明显延长(P<0.01),而治疗组较模型组时间缩短(P<0.05)。模型组ROS水平较对照组大幅度升高(P<0.01),治疗组较模型组明显下降(P<0.05)。免疫荧光染色:与对照组相比,模型组TH及DAT阳性神经元的数目明显减少(P<0.01),而治疗组TH及DAT阳性神经元数目减少的幅度明显有所下降(P<0.05)。结论:TSG对MPTP诱导的神经毒性具有保护作用,其机制可能与TSG抑制ROS有关。     

非对称性二甲基精氨酸通过激活铁死亡促进小鼠早期肾损伤

目的：探讨内源性一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)抑制物非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine, ADMA)是否通过诱导细胞铁死亡促进小鼠早期肾损伤。方法：将16只8周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=8)和实验组(n=8),实验组小鼠正常饮食,每天灌胃给予小鼠ADMA(60 mg·kg^-1·d^-1),对照组小鼠正常饮食,每天灌胃给予等体积的生理盐水,实验周期为16周。采用口服葡萄糖耐量和胰岛素耐受实验检测血糖代谢;总胆固醇(total cholesterol, TC)和甘油三酯(triglyceride, TG)测定试剂盒(COD-PAP法和GPO-PAP法)以及高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)检测试剂盒(微板法)检测血清TC、TG和HDL-C水平;HE染色法观察肾组织的形态变化;ELISA法检测血清中ADMA及肾组织炎症因子白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)和...     

铁抑素-1抑制血红素诱导的小鼠海马神经元铁死亡

目的:研究铁抑素-1(Fer-1)对血红素诱导的小鼠海马神经元铁死亡的影响。方法:小鼠海马神经元细胞系HT22细胞分为对照组(control)、血红素处理组(hemin)以及血红素和铁抑素-1联合处理组(hemin+Fer-1)。利用CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性,利用活性氧荧光探针(DCFH-DA)法检测各组细胞中反应性活性氧(ROS)的含量,利用商品化试剂盒检测谷胱甘肽(GSH)的含量,利用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位(MMP)变化,利用Western Blot和real time RT-PCR检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达。结果:血红素处理可降低HT22细胞活性,诱发氧化应激,破坏线粒体膜电位(MMP),并下调GPX4表达而诱导铁死亡。相反,Fer-1可以使细胞活性恢复,降低氧化应激反应,从而抑制HT22细胞铁死亡。结论:血红素中诱发了HT22细胞内脂质过氧化反应,引起线粒体损伤及铁死亡;铁死亡抑制剂Fer-1可以阻断血红素这种细胞毒性。     

三七总皂苷抑制铁死亡和炎症反应减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的:基于三七总皂苷(PNS)对铁死亡和炎症反应的调控作用,探讨PNS抗脑缺血再灌注损伤(CIRI)机制。方法:采用大脑中动脉阻塞/复灌注(MCAO/R)方法建立大鼠CIRI模型,PNS干预后,各组大鼠进行Longa评分比较;观察脑梗死体积;试剂盒检测缺血侧大脑皮质组织中Fe2+、GSH、MDA、IL-1β、TNF-α和IL-6含量;Western blot检测脑组织中铁死亡关键调控蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达水平。结果:MCAO/R后,大鼠神经评分显著增加,有明显脑梗死区,皮层组织中Fe2+和MDA及IL-1β、TNF-α、IL-6含量显著增加,而GSH含量和GPX4水平显著降低。与MCAO/R组相比,PNS干预组大鼠神经功能评分显著降低、脑梗死体积减小、脑组织中Fe2+和MDA及IL-1β、TNF-α、IL-6含量显著降低,而GSH含量和GPX4水平显著增加。结论:PNS可有效减轻CIRI,其机制与抑制铁死亡和炎症反应有关。     

三七总甙对实验性高脂血症大鼠脾脂质沉积的干预

目的观察三七总甙(PNS)对实验性高脂血症大鼠脾的脂质沉积干预。方法30只SD大鼠随机分为空白对照组、高脂组、PNS组。空白对照组不予任何处理;高脂组与PNS组则每天以脂肪乳剂灌胃,PNS组另加以每日PNS溶液200mg·kg-1·d-1灌胃。20周后处死动物取脾脏对比观察。结果正常组大鼠脾表面色泽暗红,镜下组织未见脂肪细胞;模型组大鼠脾表面色淡黄,镜下见被膜下大量脂肪细胞聚集成团;PNS组脾被膜下脂肪细胞则明显减少。结论三七总甙可减少脂肪细胞在高脂血症模型大鼠脾的沉积,从而减轻对机体最大免疫器官的损害。     

小鼠肠缺血再灌注时肝组织一氧化氮的变化

目的：观察小鼠肠缺血再灌注时肝组织一氧化氮含量的变化,探讨一氧化氮在肠缺血再灌注时的作用。方法：动物分对照组,缺血60 min、再灌注30 min、再灌注60 min组。检测肝组织匀浆一氧化氮代谢产物NO₂^-的变化。结果：肝组织匀浆一氧化氮水平在缺血60 min时明显高于对照组,再灌注30min、再灌注60 min组与对照组相比无显著差异。结论：小鼠肠缺血时肝组织一氧化氮水平升高,提示一氧化氮可能参与小鼠肠缺血再灌注时肝组织损伤过程,对肠缺血再灌注损伤时的肝脏可能有保护作用。     

白细胞介素-12对干燥综合征小鼠肝脏的损伤作用及其机制

目的 探讨白细胞介素-12（IL-12）对干燥综合征（SS）小鼠肝脏的损伤作用及其机制。方法 选取12周龄C57BL/6小鼠、非肥胖型糖尿病（NOD）SS模型小鼠、IL-12基因敲除NOD小鼠各5只,分别纳入正常对照组、SS模型组和IL-12 KO NOD组。各组小鼠取外周静脉血分离提取外周血单个核细胞（PBMC）和血清,处死小鼠解剖获取颌下腺组织和肝脏组织。（1）取正常对照组和SS模型组小鼠肝脏组织制备石蜡切片,HE染色观察肝脏肝小叶结构,MASSON染色观察肝脏纤维化情况。（2）取正常对照组和SS模型组小鼠肝脏组织、颌下腺组织的石蜡切片免疫组织化学染色观察比较IL-12阳性细胞光密度（OD）值的改变。（3）采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测正常对照组、SS模型组小鼠PBMC和肝脏组织IL-12 mRNA的相对表达量,以及正常对照组、SS模型组、IL-12 KO NOD模型组小鼠肝脏组织纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子-β（TGF-β）、Ⅰ型胶原（Col1）mRNA的相对表达量。（4）取正常对照组、SS模型组、IL-12 KO NOD模型组小鼠外周血血清和肝脏组织,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、转铁蛋白（TRF）、转铁蛋白受体（TFR）蛋白的表达情况。结果 （1）HE染色可见正常对照组小鼠肝小叶结构基本正常,而SS模型组小鼠肝脏的肝小叶、肝索结构紊乱,肝细胞胞浆内有空泡出现。MASSON染色可见SS模型组小鼠肝脏组织中见弥漫不规则的染为蓝色的胶原纤维,正常对照组小鼠肝组织中染为蓝色的胶原纤维则少见。（2）正常对照组小鼠颌下腺和肝脏IL-12阳性细胞OD值分别为0.08±0.01、0.03±0.01,高于SS模型组的8.74±0.78、2.58±0.07,差异均有统计学意义（t=24.82、80.64,P值均<0.001）。（3）正常对照组小鼠肝脏组织及PBMC中IL-12 mRNA表达分别为1.07±0.15、1.03±0.14,均低于SS模型组的3.00±0.50、3.01±0.57,差异均有统计学意义（t=8.27、7.54,P值均<0.001）。与正常对照组比,SS模型组FN、TGF-β mRNA的相对表达量均增高,差异均有统计学意义（P值均<0.001）;与SS模型组比较,IL-12 KO NOD组FN、TGF-β mRNA的相对表达量均降低,差异均有统计学意义（P值均<0.05）;3组间Col1 mRNA的相对表达量差异无统计学意义（P=0.243）。（4）与正常对照组比较,SS模型组血清和肝脏组织中SLC7A11、GPX4、TRF蛋白相对表达量均明显降低,TFR蛋白相对表达量均增高,差异均有统计学意义（P值均<0.05）。与SS模型组比较,IL-12 KO NOD组血清和肝脏组织中SLC7A11、GPX4、TRF的相对表达量均增加,血清TFR蛋白的相对表达量降低,差异均有统计学意义（P值均<0.05）;而肝脏组织中TFR蛋白的相对表达量差异无统计学意义（P>0.05）。结论 IL-12表达增高对SS小鼠肝脏组织的损伤起到了促进作用,其机制可能与增高的IL-12诱导肝脏细胞铁死亡有关。     

胰岛素及格列齐特治疗2型糖尿病大鼠肝脏脂质沉积的机制探讨*

 目的：探讨胰岛素及格列齐特治疗2型糖尿病对大鼠肝脏脂质沉积的影响及机制。方法：制备高脂及链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组、胰岛素组和格列齐特组,并设正常对照组。通过肝脏油红O染色观察其肝细胞脂质沉积情况;ELISA检测血清脂联素水平;实时荧光定量PCR检测肝脏脂联素受体1（AdipoR1）mRNA表达;Western blotting检测肝脏腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶（Thr172p-AMPK）、固醇调节因子结合蛋白1c（SREBP-1c）、磷酸化的固醇调节因子结合蛋白1c（Ser372p-SREBP1-1c）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、磷酸化的乙酰辅酶A羧化酶（Ser79p-ACC）和免疫球蛋白结合蛋白（BiP）的表达。结果：糖尿病组肝细胞脂质沉积较正常对照组明显增多,胰岛素和格列齐特治疗后肝细胞脂质沉积明显改善。胰岛素治疗后,血清脂联素的水平及肝脏AdipoR1 mRNA水平较糖尿病组和正常对照组显著升高（P＜0.01）,而格列齐特治疗后两者水平恢复至正常对照组水平。Western blotting结果显示,糖尿病大鼠与正常对照组比较,肝脏Thr172p-AMPK/AMPK和Ser372p-SREBP-1c/SREBP-1c和Ser79p-ACC/ACC表达明显降低（P＜0.01）,BiP表达明显升高（P＜0.01）。胰岛素治疗后,Thr172p-AMPK/AMPK和Ser372p-SREBP-1c/SREBP-1c显著升高（P＜0.01）,Ser79p-ACC/ACC和BiP蛋白表达恢复至正常对照组水平。而格列齐特治疗后Thr172p-AMPK/AMPK和Ser372p-SREBP-1c/SREBP-1c恢复至正常对照组水平,BiP蛋白表达显著下降（P＜0.01）,Ser79p-ACC/ACC与糖尿病组比较无明显改善。结论：胰岛素和格列齐特治疗均能通过激活脂联素-AMPK减轻2型糖尿病大鼠肝脏的脂质沉积。但两者作用的分子机制有所不同。胰岛素激活AMPK,通过抑制SREBP-1c表达、直接磷酸化SREBP-1c抑制SREBP-1c入核等短期和长期的作用以及抑制内质网应激影响SREBP-1c,减少脂质合成;而格列齐特仅通过磷酸化的短期作用和抑制内质网应激对SREBP-1c产生影响,且对脂肪酸氧化无作用。     

永生化人肝细胞治疗小鼠急性肝衰竭的实验研究

目的评价微载体培养的永生化人肝细胞(immortalized human hepatocytes,IHH)对裸鼠急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)的治疗作用。方法采用腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立裸鼠ALF模型,将微载体培养的IHH注射于裸鼠腹腔内进行腹膜透析治疗,并设未治疗组和空微载体治疗组,比较各组动物的肝功能损伤指标,肝组织病理和动物生存率。结果腹腔注射CCl4后24h,所有动物的转氨酶升高达正常值10倍以上,未治疗组和空微载体治疗组动物48h内全部死亡,肝组织检查发现肝细胞广泛坏死;而采用IHH微载体治疗组,48h的动物生存率为83.3%,持续14d后转为长期存活。存活的动物转氨酶降至正常水平,肝组织检查显示肝细胞坏死显著减少,免疫组织化学染色显示腹腔微载体上肝细胞仍存活,并表达人肝细胞特异蛋白α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)。结论采用微载体培养的IHH腹腔透析治疗小鼠ALF是有效的,表明IHH适合作为生物人工肝的细胞材料。     

细胞因子信号转导抑制因子3在脓毒症小鼠肝脏和脾脏中的表达

目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在脓毒症小鼠肝脏和脾脏中的表达情况及其可能的作用机制.方法 采用盲肠结扎并穿刺术(CLP)制作小鼠脓毒症模型.检测肝脏和脾脏组织的SOCS3 mRNA及蛋门表达,采用RT-PCR检测组织中SOCS3 mRNA的相对含量,用免疫印迹方法测定组织中SOCS3相对蛋白含量.用SPSS统计软件对上述指标间的变化关系进行分析.结果 脓毒症手术后SOCS3在肝脏内基因和蛋白表达量有升高趋势,但与对照组比较筹异无统计学意义(P>0.05).SOCS3在脾脏内的基因和蛋白表达在术后2 h迅速升高.至12 h达峰值.在肝脏和脾脏中SOCS3的基因表达和蛋白表达均正相关(r=0.353、0.731,P均<0.05).结论 CLP导致的脓毒症可以诱导SOCS3在小鼠肝脏和脾脏中表达增多,提示SOCS3在脓毒症后的免疫变化中有重要作用.     

Hepatic mixed-function oxidase activity in mice infected with Trypanosoma brucei gambiense or treated with trypanocides

Three days after mice were inoculated with Trypanosoma brucei gambiense, total hepatic cytochrome P-450 levels were decreased 14% from control values, while the specific mixed-function oxidase activity (per nmole of cytochrome P-450) was inhibited almost 40% in infected animals. Furthermore, drugs used to treat trypanosomiasis (Suramin and Melarsoprol B) are themselves potent in vitro inhibitors of hepatic mixed-function oxidase activity. These two trypanocides also produced a decrease in mixed-function oxidations and an increase in pentobarbital sleeping time when administered intraperitoneally in vivo. These results demonstrate that mice with trypanosomiasis or undergoing trypanosome chemotherapy have a significantly impaired capacity to metabolize foreign compounds.     

高脂高糖食诱导的糖尿病小鼠肝脏清道夫受体B1的表达

目的：探讨糖尿病小鼠肝脏SR-B1表达变化，及其与血脂的关系。 方法： 进正常食C57BL/6J小鼠10只、进高脂高糖食8周小鼠5只、进高脂高糖食16周小鼠10只，测定血脂、血清胰岛素（INS）、空腹血糖（FBG），及肝脏SR-B1蛋白表达。 结果： ① 高脂高糖食16周的小鼠血清甘油三酯（TC）、FBG明显高于正常小鼠（P＜0.05)，其胰岛素水平与正常小鼠无显著差异（P＞0.05）。② 高脂高糖食小鼠肝脏SB-B1表达高于正常动物，16周强于8周的小鼠。 结论： 糖尿病小鼠肝脏SR-B1表达高于正常小鼠，血清HDL-C降低可能与肝脏的SR-B1蛋白表达增高有关。