自体窦房结组织移植治疗心脏传导阻滞的研究

目的:观察兔窦房结组织同体移植后心脏电生理的变化以及窦房结与心肌细胞连接,以期为房室传导阻滞的治疗探索新思路与方法.方法:将兔窦房结组织移植于同体右心室心外膜下,于1,2,3,4 wk观测右心室心电生理及移植后的窦房结组织学及超微结构变化.结果:移植窦房结组织可以存活,并与心肌细胞建立桥粒连接,但细胞连接数目不多,不能起搏心室.心脏电生理无明显变化.结论:移植入同体心室的窦房结组织细胞可以和心肌细胞建立细胞连接.     

自体窦房结细胞异位移植治疗缓慢型心律失常的实验研究

目的 探索自体窦房结细胞异位移植,构建心室异位起搏灶治疗缓慢型心律失常的可行性.方法 将健康成年犬16只随机分为移植组和对照组(每组8只).移植组切取窦房结组织并制成细胞悬液后,注射到自体右心室近心尖部心肌内,对照组切取窦房结后,于右心室相同部位注射等量培养液.2周后建立完全性房室传导阻滞动物模型并进行电生理检查.对移植组犬经股静脉注射异丙肾上腺素和阿托品,研究心率变化.免疫荧光染色观察移植的细胞存活状况及其与心室肌细胞形成的缝隙连接结构.结果 消化分离成年犬窦房结得到的自主搏动的细胞结构和活性保持良好.建立完全性房室传导阻滞模型1 h后,移植组犬心率(91±14)次/min高于对照组(49±11)次/min(t=6.672,P＜0.01),且此室性心律起源于细胞移植部位.注射异丙肾上腺素后,移植组室性心率由(95±11)次/min增加至(118±15)次/min(t=3.497,P＜0.01),而注射阿托品后室性心律无明显改变[分别为(95±11)次/min和(101±17)次/min](t=0.838,P＞0.05).免疫荧光染色法证实,移植的细胞在移植部位存活,且细胞间有缝隙连接蛋白形成.结论 成年犬窦房结细胞移植到自体右心室壁,能够提高完全性房室传导阻滞后的心室率,且对异丙肾上腺素反应良好,对阿托品无明显反应.移植的细胞可与周围细胞形成缝隙连接.     

犬窦房结组织带蒂自体移植治疗完全性房室传导阻滞疾病的实验研究

目的将窦房结组织带蒂移植入自体心室中,通过观察带蒂移植的窦房结组织能否存活并与心室肌建立细胞连接;射频消
融希氏束建立完全性房室传导阻滞动物模型,观察其能否起搏心室;为完全性房室传导阻滞探索新的治疗思路和方法。方法健
康家犬10只,随机分为移植组和对照组,每组各5只。安置临时心外膜起搏导线后,将犬窦房结组织带蒂移植于实验组自体右
心室心外膜下,对照组仅切除窦房结组织,于第1、2、3、4周观测体表心电图变化。4周后射频消融希氏束,建立完全性房室传导
阻滞动物模型。建立模型后对两组动物经股静脉微泵注射异丙肾上腺素（ISO）,观察心率变化。并观测带蒂移植后的窦房结组
织学及超微结构变化。结果体表心电图无明显变化。射频消融希氏束后,移植组和对照组均表现为完全性房室传导阻滞心电
图,两组室性心率无明显差别（P>0.05）。注射ISO后,两组室性心率改变不明显（P>0.05）。带蒂移植的窦房结组织可以存活,
并与心室肌细胞建立桥粒连接,但细胞连接数目不多,不能起搏心室。结论带蒂移植入自体心室的窦房结组织细胞可以和心肌
细胞建立细胞连接。
     

自体表皮细胞移植联合中药治疗白癜风

目的观察自体表皮细胞移植联合中药治疗白癜风的疗效。方法应用自体表皮细胞移植联合中药治疗白癜风39例,中药疗法为中医辨证,分两型内服中药,3个月为1疗程,观察用药后的疗效。结果自体表皮细胞移植联合中药治疗白癜风效果明显,总有效率达95%以上。结论自体表皮细胞移植联合中药治疗白癜风疗效满意、经济、简单实用,值得临床推广。     

自体胰岛细胞移植治疗慢性胰腺炎的研究

慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)是由多种病因造成的一种进行性、破坏性不可逆的炎性疾病.虽然部分患者可以通过止痛药缓解病情,但大部分CP患者仍需要进一步的治疗措施如内镜支架、胰腺外引流、甚至胰腺切除手术.对于慢性胰腺炎伴顽固性疼痛的患者全胰切除术是最有效的治疗手段,但是术后会出现各种并发症如难控性高血糖等.目前,全胰切除术后辅以自体胰岛细胞移植(islet autotransplantation,IAT)可以有效防止术后糖尿病的发生,其效果及成熟经验逐渐得到世界同道的认识,应于国内推广与应用.     

自体表皮细胞悬液移植治疗白癜风

目的 研究自体表皮细胞悬液移植治疗白癜风的疗效。方法 用负压吸疱的方法,取正常皮肤的表皮,胰酶消化后,涂布于用磨削术去掉表皮的白斑区。结果 30例患者移植后均有不同程度色素恢复,17例取得较为满意疗效,治疗3个月后色素恢复率大于80％。结论 自体表皮细胞悬液移植治疗白癜风有较好的治疗效果,操作简便,适应于较大面积稳定期白癜风患者的治疗。     

转基因间充质干细胞自体移植治疗猪完全性房室传导阻滞

目的将携带人超极化激活环核苷酸门控通道2(hHCN2)基因的自体间充质干细胞(MSCs)移植入完全性房室传导阻滞(CHB)猪模型的希氏束中,探讨构建自体生物起搏器的可行性。方法构建包含hHCN2基因的重组腺病毒,转染猪MSCs。构建猪的CHB模型。将转基因的MSCs移植入希氏束后,观察其心率变化及对儿茶酚胺的反应性。对移植部位的心肌行组织学及免疫荧光检查。结果成功构建重组腺病毒pAd.hHCN2并转染猪MSCs。自体移植于CHB动物模型希氏束后,与对照组相比,转基因MSCs显著提升了实验组的心率(P<0.01),且其心律具有儿茶酚胺反应性。移植部位心肌取样检查显示MSCs在心肌中存活并且表达hHCN2蛋白。结论在猪CHB模型中,移植入希氏束的转hHCN2基因的自体MSCs短期内可以发挥生物起搏器的功能。     

细胞移植对心肌梗死后心脏功能的影响的研究进展

溶栓和急诊经皮经腔冠状动脉血管成形术(PTCA)等血运重建技术，可以使急性心肌梗死的梗死区早期再灌注，减少梗死面积，保护心功能，提高患者的生存率，但是却不能逆转已经坏死的心肌。成体心肌细胞是分化完全的细胞，缺乏再生能力，坏死后由无收缩能力的纤维组织填充，梗死区扩张、变薄(即延展)，非梗死区则出现离心性肥厚，心脏发生重构，心腔扩大，最终导致心力衰竭，尽管血管紧张素转换酶抑制剂及β-受体阻滞剂等药物使心力衰竭患者的预后得以改善，但是并不能改变心肌细胞数量减少这一心力衰竭的根本原因。因此，心力衰竭已成为心肌梗死后的主要并发症和死亡原因。     

猪心窦房结组织学观察

目的　观测猪心窦房结形态学结构特点。方法　用组织学连续切片 ,HE染色 ,观测 10例猪心窦房结位置、形态和组织结构。结果　猪心窦房结位于界沟的静脉窦侧 ,长轴与界沟一致 ,结的上、中部宽 ,下端变细形成“尾”。结内细胞有P细胞、T细胞等。P细胞位于结的中部 ,细胞呈多边形 ,核较大 ,位于细胞中央。T细胞为柱形 ,位于结的周边。结大小为 9.88mm× 3.78mm× 1.17mm。结论　猪心窦房结位于界沟偏腔静脉窦侧 ,组织学结构与人和其他动物略不同 ,P细胞及动脉分布的形式可能影响窦房结的起博功能。     

自体干细胞移植治疗缺血性糖尿病足

目的:观察自体干细胞移植治疗缺血性糖尿病足的临床疗效及部分影响因素.方法:我院自2004年7月起应用自体干细胞移植治疗缺血性糖尿病足17例,患者移植前均予内科常规治疗2～6 个月以上,临床症状体征无改善,动员、分离外周血干细胞或骨穿、分离骨髓干细胞,将干细胞悬液按3 cm×3 cm距离进行缺血肢体移植术.结果:移植后l周内及2个月后其皮温、间隙性跛行、下肢毛细血管密度、疼痛、溃疡均有明显改善,未出现移植相关并发症及不良反应,平均费用约2万元人民币.结论:自体干细胞移植术是治疗缺血性糖尿病足的一种有效、安全、简单、价廉的方法之一.     

兔窦房结组织急性损伤后细胞形态结构改变的动态观察

目的探讨用甲醛湿敷致兔窦房结组织急性损伤后窦房结细胞形态学的动态变化规律.方法将60只日本大耳白兔随机分组,用20%甲醛湿敷窦房结区建立窦房结急性受损术后2 h、1、2、3周及4周(每组10只)实验组模型,对照组与术后2 h组于湿敷后2 h、其余各组分别于相应时间点切取窦房结组织留取标本;观察用TUNEL法检测窦房结细胞凋亡情况.结果光镜下,各实验组均有不同程度的窦房结细胞损伤,主要表现为细胞明显肿胀、粒细胞浸润、细胞坏死及胶原纤维增生等病变.电镜下各实验组细胞超微结构病变亦明显,主要表现在线粒体肿胀及嵴变短、紊乱或断裂甚至消失;内质网则广泛解体、离断;核膜极不规整,核仁裂解,染色质边聚肌丝模糊,片状溶解或坏死.对照组兔窦房结均未见明显的细胞凋亡.实验组兔窦房结均可见不同程度的细胞凋亡,与对照组相比凋亡率均有显著性差异(P＜0.01),但实验组之间凋亡率无统计学意义(P＞0.05).结论用甲醛湿敷法损伤窦房结组织不仅导致窦房结细胞不可逆性损伤,而且可诱发窦房结细胞凋亡.     

Primary culture and identification of sinoatrial node cells from newborn rat

Objective To establish a reliable approach to primary culture and identification of sinoatrial node (SAN) cells.Methods The SAN cells were cultured from SAN tissue removed from neonatal Wistar rats and purified with differential attachment and 5’-bromodeoxyuridine (BrdU) treatment. The obtained cells were morphologically observed with inverted microscopy and transmission electron microscopy. Its action potential was recorded using electrophysiological methods.Results Three distinctly different cells were observed in the cultured SAN cells: spindle, triangle and irregular. Of these, the spindle cells comprised the greatest proportion, with their shape, structure and electrophysiological characteristics consistent with those of the pacemaker cells of SAN. The triangle cells were similar in features to the similarly shaped myocytes located in the atrial myocardium.Conclusions The culture method of differential attachment combined with BrdU treatment is a reliable approach to growing SAN cells. Of the cells cultured from SAN, the spindle cells appear to function as pacemaker cells.     

成熟自体心肌细胞移植到心肌梗死区的实验研究

目的:研究成年兔左心耳心肌细胞自体移植到梗死区心肌后的存活情况,及其对周围血供、心律的影响,和对左室功能的改善情况.方法:将成年兔随机分为移植组(n=8)和对照组(n=8),所有成年兔均结扎的冠状动脉前降支,建立心肌梗死模型.4周后获取自体左心耳组织,急性消化分离为单细胞后经DAPI标记后,分别将细胞悬液和培养基注射到移植组和对照组梗死区内.4周后行心电图及超声心动图检查,并取移植区组织进行组织学观察.结果:移植4周后移植组与对照组兔子全部存活.心电图检查显示,移植组心率高于对照组(P＜0.05),未见异位心律.超声心动图检查提示,至移植后第4周,移植组左室功能优于对照组.心肌组织切片见对照组梗死区内为典型心梗后改变,移植组梗死区内有"细胞岛"形成,荧光检测证明移植的心耳肌细胞在移植区存活.结论:急性分离的自体左心耳心肌细胞移植到梗死区心肌内可以存活并能够改善左室功能.     

自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足(附1例报道)

目的评价自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足的临床疗效及影响因素.方法确诊2型糖尿病伴糖尿病足患者1例,在硬膜外麻醉下进行骨髓采集(300 ml),分离出干细胞,配成干细胞混悬液.将干细胞混悬液小腿肌肉注射进行左侧下肢移植.同时进行左足第三跖趾关节远端切除术.结果自体骨髓干细胞移植后,患者患肢冷感、麻木、疼痛、间歇性跛行明显好转,切除坏疽足趾伤口完全愈合,移植后1个月后患者踝肱压指数(ABI)明显上升,未出现并发症和不良反应.结论采用自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足患者,方法简便、安全有效,值得临床推广和深入研究.     

模拟缺血预适应对原代培养乳鼠窦房结细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的通过观察不同时间、不同次数的模拟短暂缺血刺激对随后较长时间缺血/再灌注乳鼠窦房结细胞活性的影响,以探讨模拟缺血预适应(IP)对原代培养乳鼠窦房结细胞的保护作用.方法取培养2 d的窦房结细胞,分为对照组、模拟缺血/再灌注(I/R)组及IP1(缺血5 min/再灌注5 min)组、IP2(5 min/5 min×2)组、IP3(5 min/5 min×3)组、IP4(10 min/10 rmin)组、IP5(10min/10min×2)组、IP6(10min/10min×3)组、IP7(20 min/20min)组、IP8(20 mir/20min×2)组、IP9(20 min/20min×3)组,在模拟缺血3 h/再灌注4 h结束后,通过PI染色及MTT比色法检测各组乳鼠窦房结细胞PI染色阳性率及D490值的变化.结果①各实验组乳鼠窦房结细胞D490值均较对照组明显降低(P＜0.01),但IP2组、IP3组、IP4组、IP5组及IP7组D490值却较I/R组明显升高(P＜0.01).②各实验组PI染色阳性窦房结细胞百分率均较对照组明显增高(P＜0.01),但IP2组、IP3组、IP4组、IP5组及IP7组PI染色阳性率却较I/R组显著降低(P＜0.01).结论模拟IP对随后较长时间I/R的乳鼠窦房结细胞具有保护效应,而这种保护作用的产生可能与累计的模拟缺血刺激"总时程"有关.     

牛磺酸对甲状腺功能亢进豚鼠心脏窦房结电生理特性的影响

目的 :观察牛磺酸 (Taurine)对甲状腺功能亢进 (以下简称甲亢 )豚鼠离体心脏窦房结细胞动作电位的变化 ,探讨牛磺酸对甲亢豚鼠离体心脏窦房结细胞电生理特性的影响及作用机制。 方法 :通过给豚鼠肌肉注射生理盐水 [或甲状腺素Na(L T4 Na) ]建立了对照组 (或甲亢组 )。 结果:(1)在 5、10、2 0mmol/L牛磺酸作用下 ,甲亢组豚鼠Vmax明显降低 ,SDR明显降低 ,APD50 、APD90 明显延长 ;(2 )在 10、2 0mmol/L牛磺酸作用下 ,对照组豚鼠Vmax、SDR明显降低 ,APD50 、APD90 明显延长 ;(3)Vmax、SDR在无牛磺酸作用下甲亢组比对照组明显增高 ,APD50 、APD90 明显缩短。 结论 :(1)牛磺酸抑制对照组豚鼠离体心脏窦房结细胞动作电位的Vmax、SDR ,可能与其具有钙拮抗作用有关 ;(2 )牛磺酸抑制甲亢组豚鼠离体心脏窦房结细胞动作电位的Vmax、SDR ,明显延长APD50 、APD90 ,可能与其调节心肌细胞内Ca2 稳态及促进K 外流有关。     

原代培养乳鼠窦房结细胞的形态学研究

目的 通过对原代培养乳鼠窦房结细胞进行光、电镜观察，了解培养窦房结细胞的形态结构特征。方法 取新生24h Wistar乳鼠的窦房结组织，用差速贴壁结合BrdU处理进行原代细胞纯化培养。结果 在培养的窦房结细胞中观察到有3种不同形态的细胞，即梭形细胞、三角形细胞与不规则形细胞，其中梭形细胞最多，博动频率最快，肌原纤维稀疏排列紊乱，细胞器不发达；三角形细胞与心房肌三角形细胞特征相似。结论 在培养的乳鼠窦房结细胞中，细胞体积小搏动频率快的细胞即是窦房结的起搏细胞。