二烯丙基二硫在RORα抑制人胃癌细胞上皮间质转化中的作用

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）是否上调维甲酸相关孤核受体α（RORα）抑制人胃癌细胞株MGC803 细胞上皮- 间质转化（EMT）。方法相差显微镜观察MGC803 细胞形态的改变。逆转录PCR（RTPCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT 的相关分子表达。裸鼠实验检测DADS 与沉默RORα对移植瘤生长的影响。结果相差显微镜显示,沉默RORα细胞较MGC803 细胞大小与形状差异更明显。DADS作用后,细胞大小较一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞减少,异型性下降。RT-PCR与Western blot显示,DADS 处理后较处理前各组RORα mRNA 与蛋白表达上调（p <0.05）。DADS 作用对照组与空载体组较沉默组效果更为明显（p <0.05）。RORα沉默较对照组和空载体组细胞锌指转录因子（Snail）和波形蛋白（Vimentin）mRNA与蛋白表达上调,而E- 钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA 与蛋白下调（p <0.05）。DADS处理后,各组Snail蛋白下调、Vimentin mRNA与蛋白下调和E-cadherin mRNA与蛋白上调（p <0.05）。免疫荧光显示,沉默组细胞Snail与Vimentin阳性表达较对照组增强,而E-cadherin阳性表达减弱。DADS作用后,结果相反。裸鼠移植瘤实验显示,RORα沉默组移植瘤较对照组生长加快和体重增加（p <0.05）,增殖细胞核抗原（Ki-67）、Snail、CD34及Vimentin 阳性表达较对照组增加,而E-cadherin阳性降低。DADS 处理各组移植瘤生长与体积减慢与减小,Ki-67、Snail、CD34与Vimentin阳性表达较对照组减弱,而E-cadherin阳性表达增强。结论DADS 通过上调RORα 可体内外抑制人胃癌MGC803 细胞EMT。     

二烯丙基二硫对人胃癌细胞维甲酸相关孤核受体α表达的影响

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)处理前后人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体α(RORα)表达变化情况.方法 将胃癌SGC7901、MGC803细胞分为对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养及细胞形态学观察,采用免疫细胞化学、Western blot分析RORα的表达;半定量RT-PCR检测RORα核酸水平的表达.结果 DADS处理24 h后,胃癌SGC7901、MGC803细胞形态学发生明显改变;RORα在人胃癌SGC7901、MGC803细胞核中呈强阳性表达,与对照组比较表达显著上调;半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24 h后,SGC7901、MGC803细胞中RORα的表达量[(1.09±0.01)与(0.97±0.01)]较对照组[(0.45±0.03)与(0.44±0.02)]显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.01);Western blot分析及灰度扫描显示,DADS处理人胃癌MGC803、SGC7901细胞8、12、24 h后,RORα蛋白表达量较未处理组显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 DADS可诱导人胃癌细胞分化,其诱导分化作用可能与上调RORα表达有关.     

沉默LIMK1抑制人胃癌MGC803细胞迁移与侵袭

探讨沉默LIM激酶1(LIMK1)对人胃癌MGC803细胞迁移与侵袭的影响。采用RNA干扰技术沉默MGC803细胞LIMK1基因,RT-PCR和Western blot检测干扰效率,MTT、流式细胞术、细胞划痕和侵袭实验分别检测沉默LIMK1对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移与侵袭能力的影响。结果显示,成功构建稳定沉默LIMK1基因MGC803细胞。MTT显示,LIMK1沉默组细胞在24、48、72、96 h分别较对照组与空载体组的抑制率为61.0%、36.9%、12.1%、1.6%和54.7%、46.2%、13.5%、1.5%(P<0.05)。流式细胞术显示,沉默组G2/M期17.96%明显高于MGC803组11.45%和空载体组11.68%(P<0.05)。划痕实验显示,24 h后,沉默组划痕距离(155.9±7.6)较对照组(65.9±11.0)和空载体组(73.2±5.1)明显增加(P<0.05)。侵袭实验显示,沉默组穿膜细胞(25.1±1.3)较对照组(42.4±2.8)和空载体组(45.2±3.0)明显减少(P<0.05)。沉默LIMK1可抑制MGC803细胞增殖、迁移与侵袭和阻滞G2/M期。     

二烯丙基二硫对人胃癌细胞RORα蛋白表达的影响

目的研究二烯丙基二硫(DADS)处理前后人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体α(R ORα)蛋白表达变化情况。方法实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养及细胞形态学观察,采用免疫细胞化学、Western blot分析RORα蛋白水平的表达;半定量RT-PCR检测RORα核酸水平的表达。结果DADS处理24 h后,细胞形态学发生明显改变;R ORα蛋白在人胃癌MKN28、MGC803细胞核中呈强阳性表达,与对照组相比表达明显上调;半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24 h后,RORα蛋白表达在MGC803、MKN28细胞中的(0.97±0.01)、(0.91±0.01)较对照组的(0.44±0.02)、(0.72±0.01)显著上调(P<0.01或P<0.05);Western blot分析及灰度扫描显示,DADS处理人胃癌MGC803、MKN28细胞8、12和24 h后,RORα蛋白表达分别为(0.71±0.03)和(0.79±0.01)、(0.87±0.01)和(0.88±0.02)以及(1.31±0.01)和(0.96±0.02)较未处理组的(0.32±0.01)和(0.68±0.02)明显上调,差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。结论DADS可诱导人胃癌细胞分化,其诱导分化作用可能与上调R ORα蛋白表达有关。     

DADS下调Cathepsin D抑制人胃癌MGC803细胞侵袭转移

目的研究二烯丙基二硫（ DADS ）是否通过下调组织蛋白酶D （ Cathepsin D ）的表达抑制人胃癌MGC803细胞侵袭转移。方法 RT-PCR和Western blot检测DADS及干扰Cath-D对人胃癌MGC803细胞Cath-D mRNA与蛋白表达变化;细胞划痕实验和Transwell实验分别检测DADS及干扰Cath-D对人胃癌MGC803细胞侵袭转移能力的变化。结果 DADS作用人胃癌MGC803细胞24 h后,Cath-D mRNA与蛋白表达水平明显下降（ P〈0.05）,划痕距离明显增宽（P〈0.05）,穿膜细胞数明显减少（P〈0.05）;siRNA干扰Cath-D后,Cath-D mRNA与蛋白的表达水平明显下降（P〈0.05）,划痕距离明显增宽（P〈0.05）,穿膜细胞数明显减少（P〈0.05）。结论DADS能抑制人胃癌MGC803细胞的侵袭转移能力,其机制可能与下调Cath-D 的表达有关。     

二烯丙基二硫下调p38活性抑制乳腺癌MCF-7细胞侵袭和转移

目的探讨大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)对乳腺癌MCF-7 细胞侵袭转移的作用及其机制。方法采用不同浓度（0, 100,200,400 μmol/L）DADS处理MCF-7人乳腺癌细胞24 h,Transwell侵袭实验检测DADS对细胞侵袭的作用,划痕愈合实验 观察DADS对细胞迁移的改变,Western blotting 检测细胞中上皮标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、间质标志蛋白波形蛋白 （Vimentin）和基质金属蛋白MMP-9的表达和p38活性;TGF-β1上调p-p38表达后上述作用的变化。结果Transwell和划痕愈 合实验发现DADS呈浓度依赖性抑制MCF-7 细胞的侵袭和迁移能力,Western blotting 结果表明DADS可抑制Vimentin 和 MMP-9 的蛋白表达,上调E-cadherin 的表达而下调p38 活性;TGF-β1 可上调p-p38 和MMP-9 表达,明显抵消DADS对MCF-7 细胞的抑制效果。结论DADS可下调p38活性,抑制MCF-7细胞的侵袭转移。     

DADS通过Rac1/LIMK1/cofilin1通路增强沉默LIMK1抑制人胃癌BGC823细胞迁移侵袭

探讨二烯丙基二硫(DADS)通过Rac1/LIMK1/cofilin1通路对沉默LIMK1抑制BGC823细胞迁移侵袭的影响。划痕实验和侵袭实验观察迁移和侵袭能力;RT-PCR、Western blot、免疫组化检测LIMK1、Rac1、Rock1、Pak1与Cofilin1和p-Cofilin1表达。结果显示,DADS处理沉默组疤痕距离较对照组和沉默组增加(P<0.05)。DADS处理沉默组穿膜细胞低于对照组、空载体组与沉默组(P<0.05) 。沉默组LIMK1表达低于对照组和空载体组,DADS后,各处理组低于处理前各组(P<0.05)。并且,沉默组、对照组和空载体组的Rac1、Rock1、Pak1与p-cofilin1表达下调 (P<0.05)。表明DADS可增强沉默LIMK1抑制BGC823细胞迁移侵袭,机制可能与阻断Rac1/LIMK1/cofilin1通路有关。     

DADS抑制XIAP介导的人胃癌HGC27细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究二烯丙基二硫(DADS)对X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)过表达胃癌HGC27细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法建立XIAP过表达HGC27细胞株;实验设置为Vector组、Vector+DADS组、XIAP组和XIAP+DADS组;DADS处理细胞后,Western blotting检测各组XIAP;MTT和平板克隆实验分析各组细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力。结果XIAP过表达细胞增殖率和克隆形成率增高,迁移和侵袭的细胞数增加;DADS处理XIAP过表达细胞后,XIAP表达降低的同时,细胞增殖率和克隆形成率下降,迁移和侵袭的细胞数减少。结论过表达XIAP促进HGC27细胞增殖和迁移侵袭;DADS下调XIAP,抑制HGC27细胞增殖、迁移和侵袭。     

内质网蛋白29过表达慢病毒载体的构建及其对胃癌细胞生物学行为的影响

目的：构建内质网蛋白29（ERp29）慢病毒过表达载体,探讨ERp29过表达对胃癌MGC803和SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：构建带有红色荧光蛋白标签的ERp29基因表达质粒的慢病毒（pCDH-ERp29）和对照质粒（pCDH-Vector）,分别感染MGC803和SGC7901细胞;荧光显微镜观察细胞感染情况;CCK-8和平板克隆实验检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的增殖能力;Transwell小室实验分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭能力;应用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平。结果：酶切鉴定显示成功构建pCDH-ERp29过表达载体,荧光显微镜下观察到成功感染胃癌细胞。CCK-8实验和平板克隆实验检测,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞增殖能力无明显变化（P>0.05）;Transwell小室实验,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。pCDH-ERp29组细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平明显高于pCDH-Vector组（P<0.05）。结论：成功构建过表达ERp29基因的慢病毒载体,过表达ERp29基因可明显抑制胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭。     

二烯丙基二硫下调β-catenin抑制人胃癌MGC803细胞EMT

目的　研究二烯丙基二硫（DADS）抑制人胃癌MGC803细胞EMT与形态学变化。　方法　应用相差显微镜与透射电镜观察30　mg·L^-1　DADS处理后的MGC803细胞形态学与超微结构的变化。RT-PCR与Western　blot检测β-catenin和EMT标记E-cadherin与Vimentin表达。　结果　30　mg·L^-1　DADS处理MGC803细胞24　h后,相差显微镜显示,与未处理比较,细胞圆形、椭圆形,核浆比值降低,巢状分布,均未见伪足。透射电镜显示,细胞表面微绒毛数目减少,细胞核变规整,核浆比值下降,异型性降低,细胞与细胞之间出现连接结构,细胞器增多。RT-PCR与Western　blot表明,DADS可呈时间依赖性分别下调MGC803细胞β-catenin和Vimentin　mRNA与蛋白和上调E-cadherin　mRNA与蛋白。　结论　DADS可通过下调β-catenin上调E-cadherin与下调Vimentin抑制EMT和伪足形成。     

膜联蛋白A7低表达对人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭的影响

目的 探讨膜联蛋白A7(A N X A7)低表达对人胃癌M G C-803细胞迁移和侵袭的影响.方法 培养人胃癌MGC-803细胞并分成3组,采用脂质体转染法,将靶向ANXA7的siRNA转染于干扰组细胞,阴性siRNA转染阴性对照组,空白对照组常规培养.转染48h后应用Western blotting检测各组ANXA7的表达以鉴定转染效率;细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell实验检测细胞的侵袭能力;Western blotting检测ANXA7低表达后E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP-9)表达水平的变化.结果 靶向ANXA7的siRNA显著抑制其在M G C-803细胞中的表达(P<0.05);干扰组细胞的迁移及侵袭能力均明显低于阴性组和空白组(P<0.05);E-cadherin的表达显著上调(P<0.05),MMP-9的表达显著下调(P<0.05).结论 ANXA7低表达可能通过调控E-cadherin和MMP-9的表达来抑制MGC-803细胞的迁移和侵袭能力.     

下调泛素样含PHD和环指域1基因的表达对喉癌Hep-2细胞增殖侵袭能力的影响

目的 探讨下调泛素样含PHD和环指域1(ubiquitin-like protein containing PHD and RING finger domains 1,UHRF1)基因在喉癌Hep-2细胞中的表达后对其增殖,凋亡,侵袭迁移能力的影响.方法 实验分为空白组,阴性对照组和干扰组.利用UHRFl-siRNA干扰UHRF1在喉癌Hep-2细胞中的表达,采用qRT-PCR、Western blot检测UHRF1的表达变化.采用MTT法、流式细胞术、Transwell实验检测下调UHRF1表达后Hep-2细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的变化.Western blot检测下调UHRF1表达后Hep-2细胞内Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达的变化情况.结果 与空白组和阴性对照组相比干扰组下调UHRF1的表达后可明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖能力(P ＜0.001).空白组,阴性对照组,干扰组凋亡率分别为(5.47±2.77)％,(3.95±0.66)％,(18.95±1.10)％,干扰组凋亡率明显提高(P ＜0.001).空白组,阴性对照,干扰组每视野侵袭细胞数分别为(213.7 ±13.1),(221.3±10.3),(97.7±7.5),干扰组侵袭细胞数明显降低(P＜0.001).空白组,阴性对照,干扰组每视野迁移细胞数分别为(230.7±5.5),(222.7±11.2),(111.7±7.6),干扰组迁移细胞数明显降低(P ＜0.001).干扰组细胞Bax蛋白表达上调(P ＜0.001),Bcl-2蛋白表达下调(P ＜0.001),MMP-2蛋白、MMP-9蛋白表达下调(P ＜0.001).结论 在喉癌Hep-2细胞中下调UHRF1的表达后可明显抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞的侵袭迁移能力.     

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞JNK、ATR、cyclinB1的影响

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)调节JNK和ATR活性、cyclinB1表达与人胃癌MGC803细胞增殖的关系. 方法 实验分为两组:未处理组和30 mg/L DADS处理组,采用Western blot、免疫细胞化学及图像分析等方法,观察DADS对人胃癌MGC803细胞的JNK、ATR、cyclinB1的影响. 结果 Western blot结果显示:30 mg/L DADS刺激了MGC803细胞中JNK1的活化,刺激后10～20 min作用效果最强,30 min恢复正常(P<0.05);磷酸化ATR在MGC803细胞中DADS处理15 min后被激活,并呈时间依赖性(P<0.05),而ATR总蛋白表达均无改变.免疫细胞化学及图像分析结果显示,未处理组cyclinB1表达呈弱阳性,而DADS处理组表达呈强阳性,阳性率明显高于未处理组,且DADS处理组光密度值显著高于未处理组(P<0.05). 结论 JNK1与ATR活化及cyclinB1表达增强与DADS抗人胃癌MGC803细胞增殖有关.     

白细胞介素增强因子3 对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及机制

目的 探讨白细胞介素增强因子3（ILF 3）对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及相关机制。方法 免疫组织化学技术检测ILF3 在胃癌组织、转移淋巴结组织、正常胃黏膜组织中表达情况;收集患者临床资料,分析ILF3 与胃癌患者临床病理特征的关系。Western blot 检测不同胃癌细胞株中ILF3 表达。合成针对ILF3的小干扰RNA 转染人胃癌细胞株MGC803 ;MTT 法检测MGC803 细胞活性;细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测细胞的迁移侵袭能力;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blot 检测MMP -7、MMP -9、TIMP -1 基因的mRNA 和蛋白表达情况。结果 胃癌组织中ILF3 蛋白阳性率高于癌旁组织;转移淋巴结中ILF3 蛋白阳性率高于胃癌组织（P <0.05）。胃癌组织中ILF3 蛋白阳性表达与患者的肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移、临床分期有关（P <0.05）。各胃癌细胞株中MGC803 的ILF3 蛋白表达最强,抑制MGC803 细胞内源性ILF3 表达后细胞的活性减弱;迁移和侵袭能力也降低（P <0.05）。ILF3-siRNA转染MGC803 后细胞的MMP-2、MMP-7 表达减弱,而TIMP-1 的表达增高（P <0.05）。结论 ILF3 对胃癌的侵袭转移有促进作用,ILF3 可能是通过调节MMP -7、MMP -9、TIMP -1 基因而参与了胃癌的侵袭转移。     

二烯丙基二硫下调uPA和MMP9抑制乳腺癌细胞侵袭迁移

目的 研究大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)对MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞侵袭迁移的作用。方法采用不同浓度(0,0,200,0 μmol/L)DADS处理MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞24 h,Transwell侵袭实验检测DADS对细胞侵袭能力的影响;划痕愈合实验观察DADS对细胞迁移能力的改变;western blot检测两种细胞中尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。结果Transwell实验发现DADS呈浓度依赖性抑制MCF-7和MDA-MB-231两种乳腺癌细胞的侵袭,划痕愈合实验则发现DADS呈浓度依赖性抑制两种乳腺癌细胞的迁移。与此同时,Western blot结果显示DADS可浓度依赖性下调侵袭迁移相关蛋白uPA和MMP9的表达。结论DADS可下调uPA和MMP9表达,抑制乳腺癌细胞侵袭迁移。     

靶向调控miR-21-5p上调TIMP3抑制膀胱癌SCSP-571细胞ECM和EMT的机制研究

目的 探讨靶向调控miR-21-5p上调金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP3)抑制膀胱癌细胞外基质降解(ECM)和上皮间质转化(EMT)的作用效果与机制。 方法 96孔板培养膀胱癌SCSP-571细胞，分对照组、空载质粒组、miR-21-5p沉默组、TIMP3沉默组、miR-21-5p+TIMP3沉默组。对照组常规培养，空载质粒组加空载质粒共培养，miR-21-5p沉默组加入miR-21-5p inhibitor；TIMP3沉默组加入TIMP3-shRNA慢病毒感染质粒；miR-21-5p+TIMP3沉默组同时加入miR-21-5p inhibitor和TIMP3-shRNA慢病毒感染质粒。培养72 h，采用荧光定量PCR实验测定各组miR-21-5p和TIMP3的mRNA表达，WB实验测定各组ECM和EMT标志物的表达，Transwell小室实验测定各组细胞迁移能力和侵袭能力。 结果 与对照组相比，miR-21-5p沉默组E钙粘蛋白和TIMP3蛋白表达水平升高，同时N钙粘蛋白、纤维蛋白、MMP-2、MMP-7、MMP-9蛋白表达水平，细胞迁移与侵袭能力降低；TIMP3沉默组E钙粘蛋白和TIMP3蛋白表达水平降低，同时N钙粘蛋白、纤维蛋白、MMP-2、MMP-7、MMP-9蛋白表达水平，细胞迁移与侵袭能力升高，差异有统计学意义(均P＜0.05)。miR-21-5p+TIMP3沉默组的各项指标介于miR-21-5p沉默组与TIMP3沉默组之间，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论 靶向调控miR-21-5p能够起到抑制膀胱癌细胞侵袭与转移的效果，作用机制可能与提高了TIMP3表达，从而抑制了MMPs介导的ECM与EMT有关。      

稳定高表达RORα基因的人胃癌MGC803细胞系的构建与鉴定

目的 构建维甲酸相关孤核受体α(RORα)基因的真核表达载体,并建立稳定高表达RORα的人胃癌MGC803细胞,为研究RORα的功能奠定基础。方法根据RORα基因的cDNA全序列,设计一对带有限制性酶切位点的引物。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成RORα cDNA第一链,并用上述引物扩增目的基因全序列,然后经双酶切插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),转化大肠杆菌DH5α;用氨苄青霉素筛选pcDNA3.1(+)-RORα的阳性菌株,双酶切和测序进行鉴定。用经鉴定的重组质粒pcDNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞,G418筛选获得RORα/MGC803细胞株;Real-time PCR和Western blot检测该细胞株RORα的表达情况。结果经双酶切鉴定,构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα包含有大约1 640 bp的插入片段,与预期大小一致;表达载体经测序鉴定,其插入片段碱基序列与RORα基因的cDNA序列完全一致。用构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞后,筛选到可稳定传代的RORα/MGC803细胞株。Real-time PCR与Western blot检测显示,RORα/MGC803细胞RORα mRNA和蛋白表达增高。结论成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα和建立高表达RORα基因的RORα/MGC803细胞。     

干扰整合素转接激酶表达对口腔鳞癌细胞迁移侵袭影响研究

目的 研究干扰整合素转接激酶(ILK)表达对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 以口腔鳞癌SCC-25细胞为研究对象,细胞转染小干扰RNA阴性对照(siRNA control)和ILK小干扰RNA(ILK siRNA)分别记为si-NC组和ILK siRNA组,同时以没有转染的SCC-25细胞作为对照组。RT-PCR和Western blot法检测转染效果;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;Western blot法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达。结果 si-NC组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目以及细胞中的MMP-9、MMP-2蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ILK siRNA组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目和细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显低于对照组和si-NC组(P<0.05)。结论 干扰ILK能够下调口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

二甲双胍对TNF-α诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响及其机制

【】目的：观察二甲双胍对TNF-α诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响并探讨其可能的分子机制。方法：将TNF-α作用于血管平滑肌细胞,并用二甲双胍进行干预。实验设对照组(control)、TNF-α组(TNF-α)、二甲双胍 TNF-α组(Metformin TNF-α)、二甲双胍组(Metformin)。分别用划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力;ELISA检测MMP-2、MMP-9的分泌;RT-PCR检测MMP-2、MMP-9 mRNA的表达;Western blot检测MMP-2、MMP-9以及各组细胞核内NF-kB、胞浆IkB的表达。结果：划痕实验和Transwell实验均显示TNF-α组细胞迁移能力显著高于对照组(P<0.01),Metformin组细胞迁移能力显著低于对照组(P<0.05),Metformin TNF-α组细胞迁移能力低于TNF-α组(P<0.01); TNF-α组MMP-2、MMP-9、NF-kB的表达显著高于对照组,IkB的表达则降低(P<0.01)。Metformin TNF-α组较TNF-α组MMP-2、MMP-9、NF-kB的表达则显著下降,IkB的表达则升高(P<0.01)。Metformin组细胞内MMP-2、MMP-9的表达与对照组比较有显著差异(P<0.05),但上清中MMP-2、MMP-9的含量以及细胞内NF-kB、IkB蛋白的表达与对照组相比并无显著差异(P>0.05)。结论：二甲双胍能抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞迁移,其抑制作用与MMPs表达量的下调及NF-kB信号通路的阻断有关。     

银杏叶提取物下调SPHK1、MMP-2、MMP-9表达抑制胃癌MGC-803细胞增殖、迁移及侵袭能力

目的探讨银杏叶提取物(EGB761)对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法分别采用0 mg·L~(-1)、10 mg·L~(-1)、20 mg·L~(-1)、50 mg·L~(-1)、100 mg·L~(-1)EGB761处理胃癌MGC-803细胞12h、24h、48h、72h,采用MTT实验检测细胞增殖能力,采用Transwell实验及细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白印迹方法检测鞘氨醇激酶1(SPHK1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。结果 EGB761可明显抑制胃癌MGC-803细胞增殖,且呈现一定剂量依赖性;10mg·L~(-1)EGB761可明显抑制胃癌MGC-803细胞迁移及侵袭能力;EGB761可明显下调SPHK1、MMP-2、MMP-9表达,且呈现一定剂量依赖性。结论 EGB761对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移及侵袭能力具有明显抑制作用,推测其作用机制为下调SPHK1、MMP-2、MMP-9基因表达。