氧化低密度脂蛋白及溶血卵磷脂对巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响

目的:观察氧化低密度脂蛋白(OxLDL)及其成分溶血卵磷脂(LPC)对小鼠腹腔巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响及其机制的初步探讨。方法:(1)以载脂蛋白AI(apoAI)分别诱导OxLDL和乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)负载小鼠腹腔巨噬细胞所形成的巨噬泡沫细胞, 观察其胆固醇外流情况。(2)分离正常及apoE基因缺陷(E⁰)小鼠腹腔巨噬细胞, 以AcLDL负载形成巨噬泡沫细胞, 分别以LPC及apoAI作为诱导物, 观察其胆固醇外流情况。结果:(1)apoAI能引起AcLDL组巨噬泡沫细胞胆固醇大量外流, 而OxLDL组外流明显受阻。(2)LPC能引起正常组小鼠腹腔巨噬泡沫细胞胆固醇外流, 且呈剂量效应关系, 但E⁰组未见明显外流;apoAI能引起两组的胆固醇外流, 且外流量显著高于LPC。结论:(1)OxLDL能造成胆固醇外流途径受阻。(2)LPC能促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流, 可能主要通过apoE途径来进行。     

溶血卵磷脂对巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响

目的：探讨溶血卵磷脂（LPC）对巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响，为动脉粥样硬化（AS）的防治研究提供理论依据。方法：分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，密度梯度超速离心法分离人血浆低密度脂蛋白（LDL），乙酰化后形成乙酰化低密度蛋白（AcLDL),用AcLDL负载巨噬细胞使之形成巨噬泡沫细胞模型。用酶学荧光法检测细胞胆固醇外流，用乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒检测培养基中LDH活性来反映LPC的细胞毒性。结果：LPC处理巨噬泡沫细胞24h后，培养基中胆固醇含量明显高于对照组（1．7－4倍），细胞内胆固醇含量明显低于对照组。且LPC引起细胞胆固醇外流增加同时，培养基中LDH活性并没有明显差异。结论：在10－80μmol/L剂量范围内，LPC可以剂量依赖性地促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流，且这一效应与LPC的细胞毒性之间没有关系。     

溶血卵磷脂对巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响

目的:探讨溶血卵磷脂(LPC)对巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响,为动脉粥样硬化(AS)的防治研究提供理论依据。方法:分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,密度梯度超速离心法分离人血浆低密度脂蛋白(LDL),乙酰化后形成乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL),用AcLDL负载巨噬细胞使之形成巨噬泡沫细胞模型。用酶学荧光法检测细胞胆固醇外流,用乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测培养基中LDH活性来反映LPC的细胞毒性。结果:LPC处理巨噬泡沫细胞24h后,培养基中胆固醇含量明显高于对照组(1.7-4倍),细胞内胆固醇含量明显低于对照组。且LPC引起细胞胆固醇外流增加同时,培养基中LDH活性并没有明显差异。结论:在10-80μmol/L剂量范围内,LPC可以剂量依赖性地促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流,且这一效应与LPC的细胞毒性之间没有关系。     

重组腺病毒介导INF—γ基因转染的巨噬细胞的体外免疫效应功能…

巨噬细胞既是免疫效应细胞又是抗原提呈细胞，为研究ＩＮＦ－γ基因转染的巨噬细胞过继回输疗法，以重组腺病毒为载体将小鼠ＩＮＦ－γｃＤＮＡ转染入小鼠腹腔巨噬细胞，观察了对其体外免疫功能的影响，表明重组腺病毒载体能将ＩＮＦ－γ基因成功地转染入巨噬；细胞并增强巨噬细胞免疫效应功能。     

脂自噬通过减少巨噬细胞脂质含量抑制泡沫细胞形成

目的:观察泡沫细胞形成不同时间脂自噬的水平,探讨脂自噬是否参与调节泡沫细胞脂质含量从而抑制泡沫细胞的形成。方法:体外培养THP-1单核细胞,采用佛波酯诱导THP-1单核细胞48 h分化成为巨噬细胞,再用50 mg/L氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导形成泡沫细胞。油红O染色脂质观察泡沫细胞形成,计算脂质含量;采用胆固醇含量测定试剂盒测量泡沫细胞内的总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,计算胆固醇酯(CE)含量及CE/TC比值;胆固醇外流试剂盒检测泡沫细胞的胆固醇外流率;Western blot检测自噬相关蛋白5(Atg5)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62的表达。荧光染料分别标记脂滴(LD)和LC3抗体,激光共聚焦显微镜检测细胞中LD与LC3的共定位以确定脂自噬水平,再分别采用自噬诱导剂雷帕霉素(Rap)和阻断剂3-甲基腺嘌呤(3MA)干预泡沫细胞,观察细胞内脂自噬水平、胆固醇含量及胆固醇外流的变化。结果:50 mg/L oxLDL作用24 h后细胞内LD大量聚集,CE/TC比值大于50%,泡沫细胞形成。泡沫细胞形成24 h内胆固醇外流率升高,在48 h胆固醇外流率下降(P&...     

黄芪多糖对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的：以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，观察不同浓度黄芪多糖对胆固醇流出和ABCA1基因表达的影响。方法：将THP-1细胞诱导分化成泡沫细胞，用不同浓度黄芪多糖对其干预24 h，γ计数仪检测胆固醇流出，RT-PCR及流式细胞仪检测ABCA1的表达。结果：黄芪多糖呈剂量依赖性（10-100 mg/L）促进胆固醇流出；增加ABCA1的表达。结论：黄芪多糖可能通过增加ABCA1的表达而促进胆固醇流出。     

蛹虫草多糖促进CETP-tg小鼠胆固醇逆转运

目的:本研究验证蛹虫草多糖(CMPS)在体内外促进胆固醇逆向转运(RCT)的效应,并探讨相关机制。方法:采用CETP-tg小鼠作为动物模型,通过同位素示踪技术检测体内的RCT效率;酶法测定血浆脂质水平。采用RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞作为细胞模型,油红O染色和总胆固醇试剂盒检测泡沫细胞胆固醇外排后剩余脂质含量。Western blot分析泡沫细胞及小鼠肝脏内涉及胆固醇转运、摄取、转化的相关蛋白水平。结果:CMPS灌胃4周后,高脂饮食CETP-tg小鼠血浆总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇浓度分别降低24%、23%和22%,体内RCT过程加速,血浆、胆汁、肠道及粪便外排通路中3H-胆固醇放射活性明显升高,同时,肝脏中胆固醇受体SR-B1和LDLR及转化酶CYP7A1蛋白表达上调,分别增加了105%、71%和58%。体外实验显示:CMPS促进了巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇外排,细胞内脂质和TC水平明显降低,同时,上调了巨噬细胞PPARγ-LXRα-ABCA1/ABCG1信号通路相关蛋白的表达。结论:CMPS促进了外周巨噬细胞中多余胆固醇的流出和体内胆固醇经肝脏途...     

甲基莲心碱对RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响

目的探讨甲基莲心碱(Nef)对巨噬泡沫细胞形成的作用及机制。方法采用体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,ox-LDL诱导建立泡沫细胞模型,用Nef进行干预。油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶比色法定量细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化,免疫荧光和流式细胞术分析CD36受体蛋白表达,RT-PCR检测CD36受体mRNA表达。结果与ox-LDL诱导组相比,Nef保护组巨噬细胞的油红O染色阳性细胞数和细胞内脂质含量均显著减少;同时CD36受体蛋白和mRNA表达明显降低。结论Nef可抑制ox—LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化,该作用可能与Nef下调巨噬细胞CD36受体表达,从而减弱巨噬细胞对ox—LDL的摄取有关。     

阿托伐他汀对巨噬细胞肝X受体表达及胆固醇外流的影响

目的:他汀类药物是目前治疗脂代谢的有效药物,通过研究阿托伐他汀对巨噬细胞的肝X受体(LXR)及其下游的一些目的基因的表达和胆固醇外流的影响,探讨他汀类药物对LXR信号系统的作用。方法:分离人外周血的单核细胞,并转化为巨噬细胞。在阿托伐他汀的作用下,观察巨噬细胞的aopA-I介导的胆固醇外流的变化和LXR以及其下游目的基因ABCA1、SREBP2、CETP、PLTP、apoE、MMP-9和MIP-1α的mRNA及蛋白LXRα、ABCA1、MMP-9和MIP-1α的表达。结果:阿托伐他汀上调LXRα、ABCA1、SREBP2、CETP、PLTP基因的表达,而下调MMP-9和MIP-1α基因的表达,同时增强aopA-I介导的胆固醇外流。结论:巨噬细胞在阿托伐他汀的作用下,胆固醇外流增强,这种效应与阿托伐他汀上调LXR及其下游的影响胆固醇代谢的目的基因有关,同时,也抑制一些炎症反应的基因的表达。提示他汀类药物的治疗作用,与其影响巨噬细胞LXR信号途径有关,从而影响泡沫细胞的形成。     

硫酸吲哚酚对THP-1源性泡沫细胞ATP结合转运子A1和G1表达的调控

目的观察硫酸吲哚酚（is）是否调节巨噬泡沫细胞脂滴的蓄积，以及对巨噬泡沫细胞ATP结合转运子Al（ABCAl）和ATP结合转运子G1（ABCGl）表达的影响。方法体外佛波酯（PMA）诱导人源单核细胞系THP．1分化为巨噬细胞，随后加入氧化低密度脂蛋白（OX．LDL）刺激下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的IS以及OX．LDL共同作用24h，油红O染色法观察细胞内脂滴的含量，RT．PCR法检测ABCAl和ABCGlmRNA水平．Western blotting法检测ABCAl和ABCGl蛋白表达。结果Is干预可明显促进细胞内脂滴蓄积。下调单核／巨噬细胞泡沫化过程中ABCAl和ABCGlmRNA和蛋白的表达，且此作用呈浓度依赖性。结论IS可通过下调ABCAl和ABCGlmRNA和蛋白的表达，增加细胞内脂滴蓄积，从而促进动脉粥样硬化的发生发展。     

载脂蛋白A-Ⅰ对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响

目的：以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，观察载脂蛋白A-I对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的影响,从而探讨载脂蛋白A-I对动脉粥样硬化(As)发生发展的影响。方法:用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出, 高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量, 运用逆转录-多聚酶链反应和Western 印迹分别检测ABCA1 mRNA 与ABCA1蛋白的表达,用流式细胞术检测细胞平均ABCA1荧光强度。 结果:载脂蛋白A-I引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯呈时间依赖性减少, 而ABCA1蛋白质水平、细胞平均ABCA1荧光强度以及细胞内胆固醇流出呈时间依赖性增加,但ABCA1 mRNA没有明显变化。巯基蛋白酶抑制剂(leupeptin 和ALLN)增加ABCA1蛋白质水平,而其它蛋白酶抑制剂(pepstatin A、aprotinin及phosphoramiddon)不增加ABCA1蛋白质水平,蛋白体抑制剂(lactacytin)和溶酶体抑制剂(NH4Cl)也不影响ABCA1蛋白质水平。 结论:巯基蛋白酶可降解THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质,而载脂蛋白A-I可阻碍巯基蛋白酶降解ABCA1蛋白质,从而提高THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1 蛋白质水平, 增加细胞内胆固醇流出, 降低细胞内胆固醇聚积。     

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用

目的:以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象, 探讨ABCA1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法:用液体闪烁计数器检测胆固醇流出。RT-PCR方法检测ABCA1mRNA的表达。结果:氧化型低密度脂蛋白可增加THP-1巨噬细胞胆固醇流出, 22(R)-羟基胆固醇剂量依赖性增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出, 而DIDS剂量依赖性减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出;逆转录聚合酶链反应显示, 22(R)-羟基胆固醇可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达, DIDS可抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达。结论:ABCA1在巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中起着重要的作用, 并为开发和寻找对ABCA1表达有特异性调控作用的药物提供了新的思路。     

Lipoxin A4 promotes ABCA1 expression and cholesterol efflux through the LXRα signaling pathway in THP-1 macrophage-derived foam cells

Adenosine triphosphate-binding cassette transporter A1 (ABCA1) is a crucial cholesterol transporter and plays a central role in the high density lipoproteins (HDL) cholesterol metabolism and lipid clearance from the foam cell. Lipoxin A4 (LXA4) is an endogenous lipid mediator that requires cell-cell interaction or cell-platelet interaction for its synthesis. The roles of LXA4 on inflammatory responses are well described, while its effects on mediating ABCA1 and underlying mechanisms remain unclear. In this study, we showed that LXA4 significantly increases expression of ABCA1 and LXRα in a dose-dependent manner in THP-1 macrophage-derived foam cells. Cellular cholesterol content was decreased while cholesterol efflux was increased by LXA4 treatment. However, after short interfering RNA of LXRα, the effects of LXA4 on ABCA1 expression and cholesterol metabolism were significantly abolished. These results provide evidence that LXA4 increases ABCA1 expression and promotes cholesterol efflux through LXRα pathway in THP-1 macrophage-derived foam cells.     

黄芪甲苷通过调控miR-33a及ABCA1信号发挥抗动脉粥样硬化作用

目的:观察黄芪甲苷是否通过调控微小RNA-33a(miR-33a)而影响下游信号三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达,促进巨噬细胞内胆固醇流出,从而研究黄芪甲苷抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:体内实验:采用HE染色检测各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度real-time PCR和Western blot分别检测小鼠主动脉ABCA1的mRNA和蛋白表达。体外实验:建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞,然后用黄芪甲苷含药SD大鼠血清处理,采用real-time PCR检测细胞miR-33a表达;细胞随机分为空白血清组、黄芪甲苷含药血清组及黄芪甲苷含药血清+miR-33a mimic处理组,real-time PCR和Western blot法检测细胞ABCA1的mRNA和蛋白表达,油红O染色和高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,[3H]法检测细胞内胆固醇流出。结果:体内实验显示,黄芪甲苷组小鼠血管各层结构正常,排列整齐,局部有小灶性的钙化颗粒物沉积,病变轻,斑块小,泡沫细胞和脂质减少,弹力板基本完整,病变程度明显轻于模型组。与模型组相比,黄芪甲苷组小鼠主动脉的miR-33a表达量降低,ABCA1 mRNA和蛋白相对表达量均升高(P 0. 05)。体外实验显示,在不影响THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞活性的情况下,黄芪甲苷含药血清能明显上调ABCA1的mRNA和蛋白表达,但能被转染miR-33 mimic抑制;黄芪甲苷含药血清可减少细胞中的脂质蓄积,但能被细胞中转染miR-33 mimic所弱化;黄芪甲苷减少细胞内胆固醇蓄积与其促进细胞内胆固醇流出有关,细胞中转入过量miR-33a可以抑制胆固醇流出。结论:黄芪甲苷可通过减少miR-33a的生成,进而上调ABCA1表达,促进巨噬细胞中胆固醇流出,这可能是黄芪甲苷抗动脉粥样硬化作用的分子机制之一。     

miRNA-33对Hcy干预RAW264.7巨噬细胞衍生的泡沫细胞表达ABCA1/ABCG1的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)是否通过微小RNA-33 (miRNA-33)抑制三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)和三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)的表达,从而降低胆固醇逆转运(RCT)效率。方法:复制RAW264.7巨噬细胞经氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导为泡沫细胞的模型,油红O染色确定模型是否复制成功,用LipofectamineTM2000将miRNA-33 mimics和miRNA-33 inhibitor分别转染入细胞内,再给予5 mmol/L的Hcy干预24 h后进行实验;用油红O染色观察细胞内脂滴情况;real-time PCR和Western blot检测ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达水平;液体闪烁计数法检测细胞内胆固醇流出率;高效液相色谱分析细胞内胆固醇含量。结果:(1)与空白对照组相比,miRNA-33 mimics组细胞内脂滴含量增加,ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达量降低(P 0.05),细胞内胆固醇含量逐渐增加(P 0.05),细胞内胆固醇流出率逐渐减少(P 0.05);(2)与空白对照组相比,miRNA-33 inhibitor组检测结果与miRNA-33 mimics组的结果相反,差异具有统计学意义(P 0.05);(3)空白对照组、miRNA-33 mimics-NC组和miRNA-33 inhibitor-NC组3组间相比,所有检测结果的差异均无统计学显著性。结论:Hcy可间接通过诱导miRNA-33表达而抑制ABCA1和ABCG1的蛋白表达,降低RCT效率。     

肥大细胞改变THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇含量及抑制胆固醇流出

目的：以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，探讨肥大细胞（MC）对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量、分配和流出的影响及机制。方法： THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞在MC颗粒释放物存在或缺乏下与高密度脂蛋白3（HDL₃）共育。高效液相色谱检测泡沫细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和酯化胆固醇(EC)含量，用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出，运用逆转录聚合酶链反应检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA水平，采用琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测HDL₃及apoA-Ⅰ的降解。结果： MC组泡沫细胞内TC、FC明显高于对照组（TC对照组为527.3 mg/g，MC组为917.9 mg/g）；EC/TC比值低于对照组（7.6% vs 47.5%）；细胞内胆固醇流出少于对照组(26.92％±2.6％ vs 40.98％±3.4％,P<0.05)；而泡沫细胞ABCA1的mRNA水平与对照组无明显差异。MC颗粒释放物处理HDL₃后，聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，约有28%的apoA-Ⅰ被降解，在分子量26 kD左右处出现了新的条带，产生了1个26 kD的小多肽。结论：肥大细胞可通过降解HDL₃及apoA-Ⅰ抑制细胞内胆固醇流出而增加细胞内胆固醇蓄积，这个作用与ABCA1表达无直接关系。     

Ghrelin对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1和G1表达的调控作用

目的： 研究单核/巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中ghrelin对人ATP结合盒转运子A1和G1（ABCA1/ABCG1）表达的调控作用。方法: 体外培养人源单核细胞系THP-1,由佛波酯（PMA）作用使其分化为巨噬细胞,后者可在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）存在条件下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的Ghrelin预孵2 h后再加入ox-LDL作用不同时间,油红O染色法观察细胞内脂滴含量,运用PT-PCR法检测ABCA1和ABCG1 mRNA水平,Western blotting法检测ABCA1和ABCG1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内外胆固醇含量并计算胆固醇流出率。结果: Ghrelin干预可明显减少细胞内脂滴的形成,显著增加胆固醇流出率,并能显著增加单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCA1和ABCG1 mRNA 水平和蛋白表达,且此作用呈浓度依赖性而不呈时间依赖性。结论: Ghrelin可能通过上调ABCA1和ABCG1转录翻译水平延缓动脉粥样硬化的发生。     

Increased expression of peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)-α and PPAR-γ in human atherosclerosis

To clarify the mechanism of atherosclerosis development in humans, we studied the mRNA and protein expression of PPAR subtypes in various types of atherosclerotic lesions and their correlation with cell proliferation and macrophage invasion. Human aortas were obtained from 35 autopsied cases, and each sample was divided into halves. One half was used for the analysis of mRNA or protein expression with RT-PCR or Western blotting, respectively. The other was microscopically classified into atheromatous plaque (AP), fatty streak (FS), and diffuse intimal thickening (DIT), and was analyzed immunohistochemically. The mRNA levels of both PPARs increased significantly in atherosclerosis and tended to increase in proportion to the severity of the lesion, and the expression of PPAR-α correlated with that of PPAR-γ in FS and AP. The PPAR-γ protein increased in AP. Monocytes/macrophages, as well as endothelial and smooth muscle cells, expressed the PPAR-γ protein in plaques. This expression in the DIT was noted mainly in macrophages but was not correlated with the density of macrophages, suggesting that only certain macrophages express the PPARs in DIT. Cell proliferation did not correlate with PPARs expression in any lesion type. These findings suggest that PPARs may be associated with atheromatous plaque formation, and that PPAR-γ may be involved in the early stages of human atherosclerosis.