分支杆菌分子菌种鉴定方法的研究进展

由于全球范围内肺结核及非结核分支杆菌病的发病呈逐年上升趋势,准确而快速的菌种鉴定技术对结核病的诊断和鉴别诊断及有效化疗都有极其重要的意义。目前国内外采用传统的分支杆菌菌种鉴定方法需依据细菌生长速度、色素产生及多种生化试验等结果综合分析才能获得结果;而ＢＡＣＴＥＣＴＢ460、ＴＢ960培养基系统虽快速(2～6ｄ),但只能初步鉴定结核分支杆菌复合群和非结核分支杆菌,不能将细菌鉴定至种。近年来建立的色谱方法虽能达到部分菌种鉴定的目的,但需特殊仪器,临床尚未普遍开展。目前国内外研究者都致力于使分支杆菌菌种鉴定从细胞表型水平进入分子基因水平。现对分支杆菌分子菌种鉴定方法的研究进展综述如下。     

16S-23S rDNA内转录间隔区序列寡核苷酸探针鉴定分支杆菌菌种的研究

目的研究以16S-23S rDNA内转录间隔区(intemal transcribed spacer,ITS)序列为靶基因设计分支杆菌菌种寡核苷酸探针,应用PCR-反向杂交技术快速鉴定分支杆菌菌种.方法应用PCR-反向杂交技术检测26种36株分支杆菌标准株,24株分支杆菌临床分离株.结果分支杆菌标准株和临床分离株经PCR扩增,依菌种不同可见一条约340bp～450bp范围DNA片段.探针特异性试验表明,21种寡核苷酸探针除草分支杆菌探针MPH与微黄分支杆菌亦杂交外,其余探针均为特异的.5株结核分支杆菌临床分离株鉴定为结核分支杆菌复合群,19株非结核分支杆菌临床分离株鉴定至种水平.结论 16S-23S rDNA ITS PCR-反向杂交鉴定分支杆菌菌种简便、快速、准确,具有较高应用价值.     

采用16SrRNA序列分析方法鉴定第四次全国结核病流调的非结核分支杆菌

目的 从核苷酸序列水平建立一种非结核分支杆菌的鉴定方法，以用于其流行病学调查。方法 对第四次全国结核病流行病学抽样调查获得的49株非结核分支杆菌，采用16SrRNA基因片段序列分析的方法进行鉴定，结果 五株标准菌株的测序结果与其命名完全相符。49株流调非结核分支杆菌中．41株可明确鉴定，4株不能明确鉴定到种，4株扩增失败无法鉴定。所占比例较高的菌种为：不产色分支杆菌(7/41)，土地分支杆菌(6／41)，胞内分支杆菌(5／41)，偶然分支杆菌(4／41)。结论 在基因水平上较客观地了解我国目前可引起可疑肺结核症状的非结核分支杆菌的流行状况。16SrRNA基因片段序例分析鉴定非结核分支杆菌的方法快速、简便、准确并可发现一些新的菌种。     

复方PCR用于分支杆菌菌种鉴定的初步研究

目的　寻找新的、快捷简便的分支杆菌菌种鉴定技术,进一步提高临床结核病诊断的水平。方法 将3套分支杆菌基因组DNA的不同标记引物同时放入一个体系中,并在同一退火温度下进行PCR扩增,通过对扩增产物的不同带型进行分析,对已知标准株和部分临床株进行菌种鉴定。结果 复方PCR方法可将结核复合群中的结核分支杆菌、牛结核分支杆菌与非结核分支杆菌一次性地区分开,特异性达到100%,灵敏度为10ng/反应。结论 复方PCR技术是一种有效而又简捷的分支杆菌诊断方法,可用于临床上分结核与非结核分支杆菌或分支杆菌与非分支杆菌的初步区分。     

复方PCR用于分支杆菌菌种鉴定的初步研究

目的 寻找新的、快捷简便的分支杆菌菌种鉴定技术，进一步提高临床结核病诊断的水平。方法 将3套分支杆菌基因组DNA的不同标记引物同时放入一个体系中，并在同一退火温度下进行PCR扩增，通过对扩增产物的不同带型进行分析，对已知标准株和部分临床株进行菌种鉴定。结果 复方PCR方法可将结核复合群中的结核分支杆菌、牛结核分支杆菌与非结核分支杆菌一次性地区分开，特异性达到100％，灵敏度为10ng／反应。结论 复方PCR技术是一种有效而又简捷的分支杆菌诊断方法，可用于临床上分结核与非结核分支杆茵或分支杆菌与非分支杆菌的初步区分。     

第四次全国结核病流行病学调查分支杆菌菌种鉴定及分析

目的 通过对第四次全国结核病流行病学抽查调查分离出的菌株进行分支杆菌菌种鉴定，进一步了解全国的分支杆菌菌种的构成和分布及其受检查者的治疗情况。方法 依照《结核病细菌学检验规程》（中国防痨协会，1995）和《Public health Mycobecteriology,a guide for the level Ⅲ Iaboratory》（U.S.Department of Health and Human Service/Public Health Service/Centers of Disease Control)对所有待测菌株进行生化试验鉴定。结果 第四次全国结核病流行病学抽样调查分离出的441株菌结核分支杆菌占11．1％（49／441）。数据提示第四次全国结核病流行病非结核分支杆菌分离率高于，90年。分离出非结核分支杆菌的受检中有30．6％（15／49）接受过抗结核治疗。结论 研究数据显示我国非结核分支杆菌分离率呈上升趋势。建立准确，快速的鉴定方法，关注体质弱者是必要的。     

地高辛核酸探针在分支杆菌菌种鉴定中的应用

地高辛标记的结核分支杆菌全染色体核酸探针膜呈色杂交法的建立,表明该探针显示良好的灵敏度和特异性。此种探针具有效期长、操作方便、反应快速等特性,优于同位素标记探针。其全染色体核酸细胞杂交法可适用于结核分支杆菌复合群和非结核分支杆菌的临床分离株的菌种鉴定。     

90株非结核分支杆菌耐药情况的分析

目的观察分析我院1986~1997年非结核分支杆菌的耐药情况?方法对90株非结核分支杆菌用传统的方法进行菌种鉴定及药敏试验?结果非结核分支杆菌对PAS呈高度的耐药性,对SM?INH?RFP?EBM等耐药性也较高,对KM?TH较敏感?堪萨斯分支杆菌对抗结核药物较敏感,鸟?胞内?次要?土地?偶然等分支杆菌对抗结核药物耐药的较多?另外,非结核分支杆菌除对PAS的低浓度与高浓度的耐药率较一致外,对其它六种药物低?高浓度的耐药率有较大差异?说明许多非结核杆菌对抗结核药物呈天然的抗药性?结论针对以上情况,有待解决的是研制新药与更有效的治疗手段。     

应用BACTEC 460 TB系统区分出的非结核分支杆菌进一步菌种鉴定意义的探讨

本文对 １９９１～１９９４年从临床痰标本中以 ＢＡＣＴＥＣ　ＮＡＰ法区分出并保留下来的５２株非结核分支杆菌进行了菌种鉴定，结果；鸟－胞内分支杆菌２５株（４８．１％）；龟－偶然分支杆菌６侏（１１．５％）；瘰疬分支杆菌４株（７．７％）；戈登分支杆菌８株（１５．４％）；微黄分支杆菌３株（５．８％）；结核分支杆菌４株（７．７％）；未定菌种２株（ ３．８％）。与此同时，对其中病历资料较为完整的％株菌株所对应的２９份病历与临床进行了核实。结果：确诊为肺结核病的１７例（株）；诊断为非结核分支杆菌病的７例（１４株）；另有５例（株）诊断为肺炎、癌症及稳定结核病灶等其它肺部疾病。由此可见，只有将菌种鉴定结果与相应的临床病例相结合，才具有实际意义。     

分支杆菌分子分类鉴定研究进展

分支杆菌的菌种报道越来越多,迄今已达150种以上。结核分支杆菌与麻风分支杆菌是分支杆菌属内典型的、代表性菌种,其余菌种的命名既往五花八门,现统称为非结核分支杆菌(ＮＴＭ)。分支杆菌在生物学上已有公认的分类地位。其中,伯吉细菌分类鉴定系统是最具权威的且一直在沿用着,对包括分支杆菌在内的细菌分类、鉴定仍将发挥着巨大的作用。但这类传统的分类、鉴定系统主要以形态和生理生化特征的综合指标为依据,存在着很大的异质性,也不能揭露生物间的进化关系,是不太可靠的,而且须综合指标,操作繁杂,鉴定一种菌种费时约4周,有其局限性。因此,…     

90株非结核分支杆菌耐药情况的分析

目的 观察分析我院１９８６￣１９９７年非结核分支杆菌的耐药情况。方法 对９０株非结核分支杆菌用传统的方法进行菌种鉴定及药敏试验。结果 非结核分支杆菌对ＰＡＳ呈高度的耐药性，对ＳＭ、ＩＮＨ、ＲＦＰ、ＥＢＭ等耐药性也较高，对ＫＭ、ＴＨ较敏感。堪萨斯分支杆菌对抗结核药物较敏感，鸟，胞内、次要、土地、偶然等分支杆菌对抗经物耐药的较多。另外，非结核分支杆菌除对ＰＡＳ的低浓度与高浓度的耐药率较一致外，对其它六     

非结核分支杆菌的致病性与鉴定技术的研究进展

非结核分支杆菌的致病性与鉴定技术的研究进展庄玉辉关键词分支杆菌属．非结核性，细菌学技术结核分支杆菌和麻风分支杆菌以外的分支杆菌一直统称为非典型分支杆菌。无论从细菌学还是临床特点看，“非典型”的命名是不合理的，因为每一种分支杆菌都有其固有的生物学特征。...     

应用BACTEC 460 TB系统区分出的非结核分支杆菌进一步菌种鉴定意义的探讨

本文对１９９１￣１９９４年从临床痰标本中以ＢＡＣＴＥＣ ＮＡＰ法区分出并保留下来的５２株非结核分支杆菌进行了菌种鉴定，结果：鸟－胞内分支杆菌２５株（４８．１％）；龟－偶然分支杆菌６株（１１．５％）；瘰疬分支杆菌４株（７．７％）；戈登分支杆菌８株（１５．４％）；微黄分支杆菌３株（５．８％）；结核分支杆菌４株（７．７％）；未定菌种２株（３．８％）。与此同时，对其中病历资料较为完善的３６株菌株所对应的２     

应用噬菌体裂解法快速鉴定结核分支杆菌

目的 研究噬菌体裂解试验对结核分支杆菌快速鉴定的意义。方法 应用结核分支杆菌噬菌斑技术快速检测结核分支杆菌、非结核分支杆菌和非分支杆菌及肺结核患者痰标本。结果 结核分支杆菌H37Rv、牛分支杆菌和非洲分支杆菌噬菌体裂解试验均为阳性,10株常见非结核分支杆菌和7株非分支杆菌均为阴性;30株结核分支杆菌临床分离株本法检测结果全部阳性;20份涂阳培阳肺结核患者痰标本,本法阳性19份（95％）;21份涂阴培阳痰标本,本法阳性15份（71％）;19份涂阴培阴痰标本,5份阳性（26％）。结论 噬菌体裂解试验可以快速鉴定结核分支杆菌,用其检测痰标本中的结核分支杆菌具有很高的特异性和较高的敏感性。     

Analysis of the identification of Mycobacterium species in strians during the period 1987～1996 in Shanghai

目的对上海市1987年~1996年鉴定的5619株分支杆菌菌种鉴定结果进行分析,对其中非结核分支杆菌耐药性测定结果进行探讨?方法全部菌株的鉴定按1984年全国结核病细菌学检验规程进行?结果人型5465株(97.3%)?牛型22株(0.4%)?非结核分支杆菌132株(2.3%),其中偶发42株?胞内30株?龟型17株?瘰疬10株?堪萨斯9株?戈登9株?浅黄6株?草分支4株?不产色2株?金色2株?溃疡1株?非结核分支杆菌(MOTT)对PAS?INH?SM?RFP?EMB与KM的耐药率分别为72.4%?61.2%?49.0%?43.9%?31.6%和27.6%?对1~6种药物的耐药率分别为13.3%?21.4%?24.5%?16.3%?10.2%和6.1%?结论上海市肺结核患者感染菌种主要为人型结核分支杆菌(97.3%),而牛型(0.4%)和非结核分支杆菌(MOTT,2.3%)所占比重很小,明显低于全国水平?MOTT耐药率高应引起重视。     

上海市1987年～1996年分支杆菌菌种鉴定结果分析

目的对上海市1987年~1996年鉴定的5619株分支杆菌菌种鉴定结果进行分析,对其中非结核分支杆菌耐药性测定结果进行探讨?方法全部菌株的鉴定按1984年全国结核病细菌学检验规程进行?结果人型5465株(97.3%)?牛型22株(0.4%)?非结核分支杆菌132株(2.3%),其中偶发42株?胞内30株?龟型17株?瘰疬10株?堪萨斯9株?戈登9株?浅黄6株?草分支4株?不产色2株?金色2株?溃疡1株?非结核分支杆菌(MOTT)对PAS?INH?SM?RFP?EMB与KM的耐药率分别为72.4%?61.2%?49.0%?43.9%?31.6%和27.6%?对1~6种药物的耐药率分别为13.3%?21.4%?24.5%?16.3%?10.2%和6.1%?结论上海市肺结核患者感染菌种主要为人型结核分支杆菌(97.3%),而牛型(0.4%)和非结核分支杆菌(MOTT,2.3%)所占比重很小,明显低于全国水平?MOTT耐药率高应引起重视。     

术后龟分支杆菌脓肿亚种的暴发感染

目的研究深圳某医院发生的一起术后暴发感染的致病菌。方法按照中国防痨协会《结核病诊断细菌学检验规程》和《伯杰细菌鉴定手册》第九版,以及《实用临床细菌学检验与进展》介绍的方法,对９７例切口分泌物标本进行细菌培养。在分离出非结核分支杆菌的基础上,以标准株龟分支杆菌龟亚种、龟分支杆菌脓肿亚种和偶然分支杆菌作对照,对临床分离株进行了菌型鉴定。结果从９７例切口分泌物中分离出２６株抗酸染色阳性的速生长非结核分支杆菌,在分离出非结核分支杆菌的基础上,加上医院收集的１５株共４１株,鉴定为龟分支杆菌脓肿亚种。结论此次院内术后暴发感染是由龟分支杆菌脓肿亚种引起的。     

结核分支杆菌与非结核分支杆菌快速鉴别的实验研究

目的 探讨提供一种从菌种水平快速检测和鉴别分支杆菌的方法。方法 应用三对分别对应于分支杆菌(分子量65000)表面抗原、结核分支杆菌插入序列IS6110及人类β-珠蛋白基因的部分序列的特异性寡核苷酸引物对受试菌种及临床标本中的DNA进行多重PCR扩增，其扩增产物分别为439bp、268bp及123bp，并对439bp进行BstE Ⅱ和Hae Ⅲ两种限制性内切酶消化，同时，将135例临床标本进行培养、涂片，和多重PCR联合限制性片段长度多态性分析(mPCR-RFLP)检测。结果 mPCR-RFLP方法可将12种受试的标准菌种分别区分到种及亚种水平。本方法在临床实验中亦体现出较高的灵敏性及特异性。结论 mPCR-RFLP分析是对结核分支杆菌与非结核分支杆菌进行菌种分类鉴定的一种快速有效的方法。     

16S～23S rDNA内转录间隔区序列分析及其在分支杆菌鉴定中的应用价值

目的：研究16S－23SrDNA内转录间隔区（internal transcribed spacr,ITS)序列在分支杆菌鉴定中的应用价值。方法：应用PCR－直接测序法对22例30株分支杆菌参考菌株和16株分支杆菌临床分离菌株16S－23SrDNA ITS测序。对所测定序列以及GenBank所报道的有关序列用Clustal程序（MegAlign Package[Windows Version4.01]；DNASTAR，Madson,Wis)处理分析，计算种间相似性，用PHYLIP Package构建分支杆菌菌种聚类分析树状谱。结果：除结核分支杆菌复合群（MTC）菌种（结核分支杆菌、牛分支杆菌、非洲分支杆菌和田鼠分支杆菌）16S－23SrDNA ITS序列完全一致外，其它分支杆菌菌种间核苷酸排列顺序及长度变异较大，种间相似性为30．4％－86．5％，聚类分析树状谱能将各分支杆菌菌种相分离，结果表明16S－23SrDNA ITS序列分析能将MTC与非结核分支杆菌（NTM）相鉴别，能将NTM鉴定至种的水平。结论：16S－23SrDNA ITS可做为分支杆菌鉴定的靶基因。     

鸟分支杆菌pncB基因的克隆

在分支杆菌菌型鉴定中,常用尼克酸试验鉴定结核分支杆菌与牛分支杆菌及其它非结核分支杆菌[1]。结核分支杆菌能分泌大量的尼克酸至培养基中,而其它分支杆菌则不能[2]。据报道,这是由于结核分支杆菌具有很强的尼克酸二核苷酸(ＮＡＤ)糖水解酶及脱酰胺酶的作用,能将ＮＡＤ迅速分解为尼克酸(ＮＡ),但由于它的尼克酸磷酸核糖转移酶很弱,不能将尼克酸重新合成ＮＡＤ参加循环,而将尼克酸释放到培养基中。为了更深入地了解尼克酸磷酸核糖转移酶的作用,我们筛选了非结核分支杆菌中的鸟分支杆菌噬菌体基因文库,克隆到了编码尼克酸磷酸核糖转移酶的基…