平痫冲剂对幼龄癫痫大鼠脑组织神经元ICAM-1、Cx43蛋白表达的影响研究

目的研究平痫冲剂对幼龄癫痫大鼠海马及皮质区神经元ICAM-1、Cx43蛋白表达的影响,探讨其抗痫的相关作用机制。方法 28天龄Wistar大鼠在癫痫模型建成后随机分为空白组、模型组、西药组(0.36g/kg)、平痫冲剂组(3.22g/kg),每组60只。连续灌胃3周后取材,HE染色观察大鼠海马神经元的形态变化,免疫组织化学法观察大鼠海马神经元ICAM-1、Cx43蛋白表达的变化。结果治疗21天后,HE染色显示西药组、平痫冲剂组与模型组比较,神经元细胞水肿消退,核形态恢复完整,细胞形态恢复趋向正常组织。免疫组化显示西药组、平痫冲剂组与模型组比较ICAM-1、Cx43阳性表达减弱(P0.01);另外西药组、平痫冲剂组在用药24h后与模型组相比较,皮质区ICAM-1、Cx43的MOD值即下降(P0.05);至用药72h始,与上一时间点相比较,皮质区ICAM-1、Cx43的MOD值明显下降(P0.01);与西药组比较,平痫冲剂组皮质区MOD值无统计学意义(P0.05)。结论平痫冲剂可能是通过下调ICAM-1、Cx43蛋白表达进而影响BBB的结构与功能发挥抗痫作用。     

平痫冲剂对戊四唑致痫大鼠脑组织中γ-氨基丁酸含量的影响

γ-氨基丁酸(GABA)是脑组织中的游离氨基酸,GABA是中枢神经系统中最重要的抑制性神经递质。癫痫的发病与GABA的消长密切相关,当脑内的GABA含量降低时癫痫易于发生。通过平痫冲剂对实验性癫痫幼龄大鼠脑组织中GABA含量的影响,探讨平痫冲剂抗癫痫的作用机制。实验结果显示平痫冲剂能升高实验性癫痫大鼠脑组织中GABA的含量,与空白对照组对比有显著性意义;其平痫冲剂抗癫痫的作用机制可能是通过抑制大脑颞叶皮质及海马兴奋性神经递质受体的活性与表达,从而降低大脑皮质的兴奋性,有效抑制癫痫的形成及发展。     

平痫颗粒对戊四唑点燃癫痫模型大鼠海马区凋亡调控基因蛋白表达的影响

目的:观察平痫颗粒在阻抗癫痫形成中对大鼠海马区凋亡调控基因Bcl-2,Bax蛋白表达的影响,探讨其抗癫痫作用的分子生物学机制。方法:选择60只45 d龄Wistar大鼠,随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、平痫低剂量组、平痫高剂量组,每组12只。除正常对照组,其余各组大鼠均以戊四唑亚惊厥剂量35 mg.kg-1腹腔注射诱导癫痫模型。造模同时平痫高、低剂量组分别以1.66,0.42 g.mL-1的生药含量2 mL.d-1灌胃;阳性对照组给予等量3.6 g.L-1的苯巴比妥混悬液灌胃;模型组和正常对照组胃饲等量双蒸水,持续5周。采用免疫组化染色(SABC法)于3,5周末分别测定Bcl-2,Bax免疫阳性细胞。结果:①给大鼠连续注射戊四唑过程中,模型组大鼠癫痫发作级别随点燃周次增加逐渐升级,由第1周的Ⅰ～Ⅱ级至第4周时的Ⅵ级大发作。治疗组发作次数和级别相对明显降低,最高级别Ⅳ级,且组间发作级别、次数比较无显著性差异。②随着点燃周次的增加,在3,5周末Bcl-2表达模型组明显低于正常对照组(P<0.01),Bax表达模型组明显高于正常对照组(P<0.01);阳性对照组、平痫高、低剂量组Bcl-2表达均明显高于模型组(P<0.01),Bax表达阳性对照组、平痫高、低剂量组与模型组比较有明显降低(P<0.01)。结论:平痫颗粒可能是通过促进抗凋亡调控基因Bcl-2蛋白的表达,以及抑制促凋亡调控基因Bax蛋白的表达,从而减少神经元细胞的凋亡来阻抗癫痫。     

艾灸关元、足三里穴对戊四氮致痫大鼠血清中IL-6的影响

目的:通过研究艾灸关元、足三里穴对戊四氮致痫大鼠血清中IL-6含量的影响,探讨其抗癫痫的可能机制.方法:取27只雌性Wistar大鼠,体重(200±15)g,分为4组:空白组(3只)、模型组(8只)、药物组(8只)和艾灸组(8只).腹腔注射戊四氮35.0 mg/kg诱发大鼠点燃致痫模型,艾灸组大鼠艾灸关元、足三里穴进行治疗,每天1次,每次15 min.药物组给予丙戊酸钠15.75 mg/100 g灌胃,每日1次.模型组、空白组不给予任何治疗.治疗20天后利用酶联免疫法测大鼠血清中IL-6的含量.结果:空白组和模型组、模型组和艾灸组相比有明显差异(P＜0.01),艾灸组和空白组、药物组和空白组比较无统计学意义(P＞0.05).结论:艾灸关元和足三里穴治疗癫痫大鼠有效,其机制可能与降低血清中IL-6相关.     

抗痫灵对癫痫大鼠脑电图及海马NMDAR1表达的影响

目的:观察中药复方抗痫灵对戊四氮点燃癫痫大鼠模型脑电图及海马NMDAR1表达的影响。方法:Wistar雄性大鼠60只,体质量180～220g,随机分成空白组、模型组、抗痫灵高、中、低剂量组、丙戊酸钠(VPA)组各10只。点燃后各组大鼠描记脑电图,低温条件下迅速断头取脑,用免疫印迹(Westernblot)方法观察各实验组大鼠海马的NMDAR1活性变化。结果:抗痫灵组、丙戊酸钠组、模型组阳性细胞表达与空白组相比有显著性差异(P0.05),抗痫灵组显著低于模型组(P0.01)。结论:抗痫灵对戊四氮点燃大鼠癫痫发作有显著对抗作用,其作用机制可能与其降低模型大鼠海马NMDAR1活性有关。     

平痫颗粒对癫痫大鼠海马神经元细胞凋亡及基因表达的影响

目的探讨平痫颗粒在阻抗癫痫形成中对大鼠海马区神经元细胞凋亡影响的分子生物学机制。方法 60只45日龄Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组及平痫小、大剂量组。除正常对照组外,其余各组大鼠均以戊四唑亚惊厥剂量35 mg/kg腹腔注射诱导癫痫模型。同时平痫大、小剂量组以1.66、0.42 g/mL原药材含量2 mL/d灌胃,阳性对照组给予等量的3.6 mg/mL苯巴比妥混悬液灌胃,模型组、正常对照组胃饲等量双蒸水,持续5周。HE染色观察海马神经元细胞病理形态学改变,免疫组化染色（SABC法）观测bcl-2、bax蛋白阳性细胞的表达。结果给大鼠连续注射戊四唑过程中,模型组大鼠1～4周逐渐出现Ⅰ～Ⅵ级癫痫发作。各治疗组发作次数和级别明显降低,最高为Ⅳ级,组间发作级别、次数相比差异无统计学意义。HE染色显示,各治疗组海马神经元细胞病理表现改善明显。第3、5周末模型组bcl-2表达明显低于正常对照组（P〈0.01）,bax表达明显高于正常对照组（P〈0.01）;各治疗组bcl-2表达均明显高于模型组（P〈0.01）,bax表达均明显低于模型组（P〈0.01）。结论平痫颗粒可能是通过促进bcl-2蛋白并抑制bax蛋白的表达,从而减少神经元细胞的凋亡,以达到阻抗癫痫的目的。     

平痫冲剂对戊四唑致痫大鼠脑组织中谷氨酸含量的影响

谷氧酸（GLU）是脑组织中的游离氨基酸,是中枢神经系统中最重要的兴奋性神经递质。癫痫的发病与GLU的消长密切相关,当脑内的GLU含量升高时,癫痫易于发生。通过平痈冲剂对实验性癫痫幼龄大鼠脑组织中谷氯酸含量的影响,探讨平痫冲剂抗癫痫的作用机制。实验结果显示平痫冲剂能明显降低实验性癫痫大鼠脑组织中GLU的含量,与空白对照组对比有显著性意义;其平痈冲剂抗癫痫的作用机制可能是,通过抑制大脑颞叶皮质及海马兴奋性神经递质受体的活性与表达,从而降低大脑皮质的兴奋性,有效抑制癫痫的形成及发展。     

平肝止痫复方联合卡马西平干预HMGB1/TLR4信号炎症通路的相关作用研究

目的 研究平肝止痫复方联合卡马西平对难治性癫痫作用及机制。方法 海人酸注射于Wistar大鼠海马CA3区的造模方法制作癫痫模型,予0.03 g/(kg·d)苯妥英钠连续灌胃14 d后结合Racine分级及脑电图筛选成功制作难治性癫痫模型78只。将制作完成的癫痫大鼠随机分为模型组、平肝止痫复方组、CBZ组、CBZ+平肝止痫复方低、中、高剂量组(L、M、H),每组13只,再加假手术组7只,共7组。分组后给予假手术组、模型组灌胃生理盐水,剩余大鼠分别以CBZ 0.03 g/(kg·d),平肝止痫复方1.32 g/(kg·d),CBZ+平肝止痫复方低剂量(CBZ+L)、CBZ+平肝止痫复方中剂(CBZ+M)、CBZ+平肝止痫复方高剂量(CBZ+H)组分别给予：0.03+0.66 g/(kg·d),0.03+1.32 g/(kg·d),0.03+2.64 g/(kg·d),灌胃给药8周;观察各组大鼠治疗前后体质量、各致痫组大鼠治疗后发作级别变化、各致痫组大鼠治疗后防卫反应分级变化、各致痫组发作平均持续时间变化,并对各组大鼠治疗后进行脑电图监测;8周药物灌胃结束后股动脉取血,ELISA分别检测各组...     

艾灸关元和足三里穴对癫痫大鼠细胞因子IL-2影响的研究

目的:通过艾灸戊四氮癫痫大鼠关元、足三里穴,研究艾灸关元、足三里穴对于癫痫大鼠血清IL-2含量变化的影响。方法:取健康成年雌性SD大鼠腹腔注射戊四氮35.0 mg/kg诱发大鼠点燃致痫模型,参照Racine的6级评分标准,记录行为学表现。造模成功后分为空白组(3只)、模型组(8只)、药物组(8只)和艾灸组(8只)4组,对艾灸组大鼠艾灸关元及双侧足三里穴15 min,药物组给予15.75mg/kg丙戊酸钠灌胃治疗。每日1次,治疗20天。模型组、空白组不给予任何治疗。治疗结束后,用酶联免疫法测量血清中IL-2含量。结果:空白组与模型组、模型组与艾灸组相比较均有明显差异(P<0.01),艾灸组与药物组相比无明显差异(P>0.05)。结论:艾灸关元和足三里穴治疗癫痫大鼠有效,机制可能与升高IL-2有相关性。     

血府逐瘀汤对冠心病模型鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:观察血府逐瘀汤对冠心病模型鼠的治疗作用,探讨其对PI3K-AKT信号通路相关蛋白的影响.方法:将45只SD大鼠随机分为空白组、模型组及中药组,每组15只.将模型组及中药组大鼠冠心病造模,中药组用2 g/mL血府逐瘀汤药液灌胃,空白组及模型组用等量的生理盐水灌胃,3组均连续灌胃10 d.观察各组大鼠造模前后ST段变...     

冰片对大鼠脑微血管内皮细胞 ICAM-1 表达量的影响

目的：研究冰片对大鼠脑微血管内皮细胞ICAM－1表达量的影响。方法：采用自由落体撞击硬脑膜致伤方法制成大鼠脑挫裂伤模型,将大鼠伤侧脑皮质制成石蜡切片,运用免疫组化学染色技术观察空白对照组（C组：只灌服石蜡油）、冰片组（B组：灌服等量冰片石蜡油）、脑外伤组（M组：脑挫裂伤组）和脑外伤加冰片组（M＋B组：脑挫裂伤大鼠灌服冰片石蜡油）大鼠脑皮质微血管内皮细胞（EC）膜表面细胞间粘附分子－1（ICAM－1）量的表达,并进行半定量分析。结果：C组EC无表达或有少量表达,服用冰片不能使ICAM－1表达增强,脑外伤后ICAM－1表达有明显增强（P＜0．001）,及脑外伤大鼠服用冰片可使ICAM－1表达明显减弱。结论：证明冰片促血脑屏障（BBB）开放与ICAM－1无关,冰片对脑外伤大鼠脑组织具有一定的保护作用。     

连术消渴颗粒对2型糖尿病模型大鼠肠道菌群、肠黏膜屏障功能及水通道蛋白的影响

目的:研究连术消渴颗粒对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠肠道菌群、肠黏膜屏障功能及水通道蛋白的影响。方法:选取60只SD大鼠,随机分为空白组、模型组、连术消渴颗粒低剂量组、连术消渴颗粒中剂量组、连术消渴颗粒高剂量组及二甲双胍组。模型组、连术消渴颗粒低剂量组、连术消渴颗粒中剂量组、连术消渴颗粒高剂量组及二甲双胍组大鼠采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备T2DM模型,成模后连术消渴颗粒低剂量组、连术消渴颗粒中剂量组、连术消渴颗粒高剂量组及二甲双胍组分别给予连术消渴颗粒2.92、5.84、11.68 g/(kg·d)及盐酸二甲双胍片0.17 g/(kg·d)灌胃,空白组及模型组给予相同体积纯净水灌胃,各组大鼠均治疗30 d。检测各组大鼠空腹血清胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用粪便培养检测大肠杆菌、双歧杆菌及乳酸杆菌菌落数的对数值; 采用酶联免疫法检测各组大鼠血清肠黏膜屏障功能指标D-乳酸(D-LA)、连蛋白(Zonulin)及乳脂球表皮生长因子-8(MFG-E8)含量; 采用Western blot法检测各组大鼠结肠组织水通道蛋白4(AQP4)、水通道蛋白8(AQP8)表达。结果:与空白组比较,模型组FINS降低,FBG及HOMA-IR升高(均P<0.05),粪便培养大肠杆菌数量增加,双歧杆菌及乳酸杆菌数量降低,血清D-LA、Zonulin含量升高,MFG-E8含量降低,结肠组织AQP4、AQP8表达降低(均P<0.05)。与模型组比较,连术消渴颗粒低剂量组、连术消渴颗粒中剂量组、连术消渴颗粒高剂量组及二甲双胍组FINS升高,FBG、HOMA-IR降低,粪便培养大肠杆菌数量降低,双歧杆菌及乳酸杆菌数量增加,血清D-LA、Zonulin含量降低,MFG-E8含量升高,结肠组织AQP4、AQP8表达升高(均P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:连术消渴颗粒可改善T2DM模型大鼠糖代谢,修复肠黏膜屏障功能,提高结肠水通道蛋白表达,其机制可能与改善肠道菌群有关。     

益气活血法对气虚血瘀脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性及ICAM-1、MMP-9/-2的影响

目的:研究益气活血法对气虚血瘀脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障(BBB)通透性及细胞间粘附分子(ICAM-1)、基质金属蛋白酶(MMP-2/9)的影响。方法:采用游泳力竭法制作出大鼠气虚血瘀模型,然后用线栓法阻断大鼠大脑中动脉(MCA)2h,再灌注3d、7d后,测定脑组织脑含水量、伊文思蓝(EB)含量,用免疫组化法测定ICAM-1、MMP-2/9蛋白表达的变化。结果:与模型组比较,各治疗组脑含水量、EB含量、ICAM-1、MMP-2/9蛋白表达水平显著降低,益气活血法优于益气法、活血法。结论:益气活血法具有降低BBB通透性的作用,其机制可能是通过减少ICAM-1、MMP-2/9蛋白表达而发挥BBB保护作用。     

穴位注射“冰片液”对血脑屏障通透性的影响

目的 :探讨“冰片液”穴位注射对SD大鼠血脑屏障通透性的影响 ,为临床提高某些中枢神经治疗药疗效提供实验依据。方法 :采用“哑门”穴位注射自制“冰片液” ,观察不同浓度“冰片液”穴位注射对伊文斯蓝 (Even’sBlue,EB)透过血脑屏障的作用 ,并与电针刺激组比较。结果 :“冰片液”穴位注射和电针刺激均可促进EB透过血脑屏障 (P <0 0 0 1 ,P <0 0 5) ,穴位注射“冰片液”高、低剂量组均优于电针组 (P <0 0 5) ,但“冰片液”高、低剂量组间无明显差异 (P >0 0 5)。结论 :“冰片液”穴位注射是促血脑屏障开放的一种有效方法 ,其作用优于电针刺激。     

益气活血药对心肌梗死大鼠心脏结构和Cx43表达的影响

目的 探讨益气活血药对心肌梗死（myocardial infarction,MI）大鼠心脏结构及心肌电偶联的关键结构缝隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）表达的影响.方法 结扎雄性SD大鼠冠状动脉前降支建立MI模型,将30只MI大鼠随机分为模型组、益气活血组（参芍片0.25 g/kg联合复方丹参片0.75 g/kg）和倍他乐克组（12 mg/kg）,每组10只,于造模成功后24 h开始灌胃,1次/日,连续4周.另设假手术组10只,给予等量去离子水灌胃.4周后取材进行苏木素-伊红染色观察心肌组织病理,图像分析测量左室内径和心肌梗死百分比,免疫组织化学法检测心肌Cx43的表达.结果 与假手术组比较,术后4周模型组大鼠左室内径明显增大,心肌Cx43表达的平均光密度值（average optical density,AOD）、阳性表达面积（Area）和积分光密度（integral optical density,IOD）明显降低（P〈0.01）.与模型组比较,益气活血组和倍他乐克组的左室内径和心肌梗死百分比均明显减少（P〈0.05或P〈0.01）,在心肌Cx43的表达上,仅益气活血组心肌Cx43表达的AOD和IOD明显增加（P〈0.05或P〈0.01）.结论 益气活血治疗能减少MI大鼠左室内径和心肌梗死百分比,增加心肌Cx43表达强度和部分好转Cx43弥散表达状态,对MI后缺血心肌有保护作用,可能是稳定MI后心肌细胞间电偶联的机制之一.     

双参通冠方对急性心肌缺血再灌注模型核因子-κB信号途径及细胞间隙连接通讯的影响

目的观察双参通冠方(SSTG)对急性心肌缺血再灌注损伤动物模型心肌梗死面积及重量,心肌核因子-κB(nuclear factor—kappa B,NF—κB)信号途径及心肌细胞间隙连接蛋白Cx43的影响．方法用冠状动脉结扎／放松法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,N—BT染色法测量心肌梗死范围;免疫组织化学法检测心肌组织NF—κB p65表达;双抗体夹心ABC—ELISA法测定各组血清肿瘤坏死因子(TNF—α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量;免疫组织化学法测定心肌细胞通讯间隙连接蛋白Cx43表达。结果模型组大鼠心肌梗死面积及梗死区重量、NF-κB p65表达、血清中TNF-α及ICAM—1含量明显升高(P<0．05);心肌连接蛋白Cx43大量降解。SSTG理后心肌梗死面积及重量减轻;血清中TNF—α、ICAM-1水平下调(P<0．05);NF—κB p65表达及Cx43降解抑制．结论缺血再灌注时,心肌梗死严重,NF—κB信号途径可被激活,Cx43降解严重。SSTG能抑制NF-κB的活化,抑制血清中TNF-α、ICAM—1的过量分泌和抑制Cx43的降解,减小心肌梗死面积及重量。     

复方丹参滴丸对卡马西平在正常大鼠及难治性癫痫大鼠脑内分布的影响

目的研究复方丹参滴丸(CDDP)与卡马西平(CBZ)合用对CBZ在正常和难治性癫痫(RE)大鼠脑内分布的影响。方法将Wistar雄性大鼠随机分为正常大鼠及造模大鼠;正常大鼠分为CBZ对照组及CDDP+CBZ组,造模大鼠分为CBZ模型组、CDDP+CBZ组及维拉帕米+CBZ组,造模大鼠采用脑立体定位技术向大鼠海马体内微量注射红藻氨酸建立RE模型,待模型成功点燃后,正常大鼠及造模大鼠中CDDP+CBZ组均给予CDDP(85 mg/kg),造模大鼠中维拉帕米+CBZ组给予维拉帕米(20 mg/kg),在连续ig给药10 d后各组ig给予CBZ(100 mg/kg)。在不同时间点采集大鼠脑组织样品,通过HPLC-MS/MS法测定CBZ脑药浓度。结果单用CBZ,正常大鼠脑内CBZ浓度明显高于RE模型大鼠;连续给予CDDP 10 d后,与单独给予CBZ相比,正常大鼠及RE模型大鼠所取的脑组织中CBZ浓度均有明显升高。在RE模型大鼠中,CDDP对CBZ脑药浓度的改变与经典的P-糖蛋白(P-gp)抑制剂维拉帕米对CBZ脑药浓度的改变趋势基本一致。结论 CDDP可提高正常及RE模型大鼠血脑屏障(BBB)对CBZ的通透性,增加CBZ在脑内的分布。     

实验性大鼠肺血栓栓塞症中ICAM-1、P-选择素的变化及红花注射液对其的影响

目的动态观察红花注射液对大鼠肺血栓栓塞症（PTE）中血管内皮细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和P-选择素的影响.方法将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组,用颈静脉注入自体血凝块制备动物模型.治疗组在模型建立后立即自鼠尾静脉注射红花注射液2 ml/kg,每天1次,共5天.各组大鼠分别于栓塞后1、3、24、72、120 h处死,行病理观察;采用免疫组化和原位杂交的方法检测肺血管内皮ICAM-1和P选择素蛋白及mRNA的表达水平.结果与正常组比较,模型组大鼠肺栓塞后病理可见肺动脉血栓形成,炎性反应明显;肺血管内皮ICAM-1蛋白及mRNA表达在栓塞后3 h开始增高（P＜0.01）,而P-选择素蛋白及mRNA表达在栓塞后1 h开始增高（P＜0.01）.治疗组大鼠病理损伤减轻,肺血管内皮ICAM-1和P-选择素水平均下降（P＜0.01）.结论红花注射液可减轻大鼠PTE时的肺损伤,这种作用可能是通过下调血管内皮上的黏附分子来实现的.     

中药复方对ED大鼠海绵体Cx43的影响

目的基于"肝藏"理论,从阴茎海绵体平滑肌缝隙链接蛋白Cx43角度研究疏肝养血法对肝郁血虚ED大鼠的干预作用。方法选取经交配后证实有正常勃起功能的雄性SD大鼠30只,随机分为空白组、模型组、疏肝养血组,每组10只,采用尾部放血和悬吊激惹方法配合低铁饮食制备肝郁血虚勃起功能障碍模型,给以四物汤与逍遥散合方煎剂灌胃14天,末次灌胃24小时后处死大鼠,取阴茎海绵体组织,HE染色观察阴茎海绵体组织病理学变化,免疫组化SP法检测阴茎海绵体Cx43表达。结果与空白组相比,模型组阴茎海绵体组织病理学改变不明显,阴茎海绵体平滑肌中Cx43表达明显降低(P0.05);与模型组相比,疏肝养血组阴茎海绵体平滑肌中Cx43表达显著提高(P0.05)。结论改善阴茎海绵体平滑肌中Cx43表达可能是基于"肝藏"理论,疏肝养血法治疗ED的物质基础及作用机制之一。