雷帕霉素靶分子在糖尿病肾病发病机制中的作用

哺乳动物雷帕霉素靶分子位于胰岛素/胰岛素样生长因子通路的下游,同时接受营养信号和能量信号,参与细胞、器官和生物体肥胖的调控,引起胰岛素抵抗,促进血管内皮细胞生长因子的表达,可能在2型糖尿病及糖尿病肾病的发生发展中起重要的作用.     

雷帕霉素对KKAy小鼠体重及胰岛素抵抗的影响

目的 探讨雷帕霉素对KKAy小鼠体重及胰岛素抵抗(IR)的影响.方法 16周KKAy小鼠34只,随机分为对照组(NC组,12只)、雷帕霉素治疗组(R组,12只)、胰岛素治疗组(Ins组,10只),6只同龄C57BL与5只KKAy小鼠作为治疗前对照.结果 治疗前KKAy小鼠体重、血糖、TG明显高于C57BL小鼠(体重36.2±1.9 g vs 29.3±1.0 g;血糖13.4±1.7 mmol/L vs 7.8±0.5 mmol/L;TG1.59±0.16 mmol/L vs 0.75±0.09 mmol/L;P均＜0.01).治疗4周后R组体重(33.7±2.3 g),低于NC组(38.2±1.5 g)和Ins组(37.4±1.1 g),差异有统计学意义(P均＜0.05);R组血糖(17.2±7.3 nmol/L),低于NC组(29.1±3.2 mmol/L),差异有统计学意义(P＜0.05);治疗8周后R组体重(32.2±3.1 g),低于NC组(39.3±2.8 g),差异有统计学意义(P＜0.05);血糖(18.2±3.7 mmol/L),低于NC组(24.4±5.1 mmol/L),差异无统计学意义(P=0.06).胰岛素敏感试验表明R组在注射胰岛素60 min后,血糖降幅明显大于NC组(4.88±0.73 mmol/L vs 2.65±2.12 mmol/L,P＜0.05).结论 雷帕霉素可减轻KKAy小鼠体重、改善IR、降低血糖.     

雷帕霉素通过下调微小RNA-27a介导的雷帕霉素靶分子信号通路调控糖尿病肾脏疾病大鼠足细胞自噬的影响研究

目的 探讨微小RNA-27a(miR-27a)介导的雷帕霉素靶分子（mTOR）信号通路调控DKD大鼠足细胞自噬的作用。方法 将30只SD大鼠随机分为正常对照组（NC,n=10）、糖尿病模型组（DKD,n=10）和雷帕霉素治疗组（Rap,n=10）。检测各组肾功能相关指标和细胞凋亡率,HE染色及免疫组化评估肾组织形态学变化。Western blot法检测各组肾组织中自噬相关指标Beclin1、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)及mTOC蛋白表达,qRT-PCR检测足细胞特异性蛋白miR-27a、Podocalyxin、Nephrin、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Bax、Beclinl mRNA表达量。结果 与NC组比较,DKD组第6、12周FPG、24 hUAlb、BUN、血肌酐（Scr）、肾脏指数（KI）表达升高（P<0.05）。与NC组比较,DKD组细胞凋亡、mTOC蛋白、miR-27a、mTOR、Bax mRNA表达升高（P<0.05）,Beclinl、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、Podocalyxin、Nephrin mRNA...     

糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用

目的观察糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用,探讨雷帕霉素是否通过调节自噬、内质网应激和细胞凋亡对糖尿病大鼠主动脉产生保护作用。方法雄性SD大鼠用随机数字表法分为正常对照组、糖尿病组和雷帕霉素干预组。采用链脲佐菌素制备1型糖尿病大鼠模型。雷帕霉素干预组给予雷帕霉素2mg/(kg·d)灌胃。于实验第8周留取血标本,用于血生物化学指标和脂联素水平检测,然后处死动物并迅速取出胸主动脉和腹主动脉,测定主动脉Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)、p62、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Caspase-12、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血清脂联素水平显著降低(P0.05),主动脉壁增厚,内皮严重受损,主动脉Beclin1、LC3的mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P 0. 05),主动脉p62、CHOP、Caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表达水平及Bax mRNA表达水平显著升高(P0.05)。与糖尿病组比较,雷帕霉素干预组大鼠血清脂联素水平显著升高(P0.05),主动脉组织病理改变显著减轻,主动脉Beclin1、LC3的mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2 mRNA表达水平显著升高(P0.05),主动脉p62、CHOP、Caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表达水平及Bax mRNA表达水平显著降低(P0.05)。结论糖尿病大鼠主动脉组织自噬水平降低,雷帕霉素可能通过激活自噬和减轻内质网应激和细胞凋亡水平对糖尿病大鼠主动脉产生保护作用。     

雷帕霉素免疫抑制作用机制的研究进展

雷帕霉素 (ｒａｐａｍｙｃｉｎ ,ＲＰＭ )是 2 0世纪 70年代初 ,由加拿大Ａｙｅｒｓｔ研究所从放线菌 (Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ)培养液中分离出来的大环内酯类抗生素[1,2 ] 其相对分子质量为 914 2。 2 0世纪 70年代末期 ,Ｍａｒｔａｌ等首先发现ＲＰＭ具有免疫抑制作用 ,近年来发现ＲＰＭ的化学结构与他可莫司 (ＦＫ5 0 6)很相似。本文将雷帕霉素免疫抑制作用的研究进展综述如下。1　作用机制ＲＰＭ与ＦＫ5 0 6具有相似的分子结构 ,也能与ＦＫＢＰ12 结合 ,ＲＰＭ ＦＫＢＰ12 复合物与“哺乳类雷帕霉素靶蛋白…     

雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠病理结构及结缔组织生长因子表达的影响

目的 观察雷帕霉素对糠尿病肾病(DN)的保护作用.方法 应用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型.24只SD大鼠随机分为3组:对照组、糖尿病组、雷帕霉素组.第5周起雷帕霉素组予雷帕霉素1 mg·kg-1·d-1干预8 w.12 w末观察各组大鼠血糖、内生肌酐清除率(Ccr)、24 h尿微量白蛋白(24hUalb)、肾重/体重等的变化.光镜观察肾组织病理变化并测定肾小球平均体积及系膜基质扩张指数(EMMI).RT-PCR及免疫组化法检测肾皮质结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及蛋白表达.结果 与对照组相比,糖尿病组及雷帕霉素组大鼠血糖、Ccr、24hUalb均显著上升,大鼠肾脏明显肥大,肾小球平均体积、EMMI、毛细血管基底膜厚度均显著增加;肾皮质CTGFmRNA及蛋白表达显著上调.雷帕霉素干预后,上述指标除血糖外均部分被抑制.结论 小剂量雷帕霉素能够减轻肾脏肥大,抑制系膜外基质聚集,下调CTGF的表达,延缓DN的进展.     

雷帕霉素对铁蓄积高转换骨质疏松小鼠骨生成的影响

目的 研究雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)抑制剂雷帕霉素(rapamycin, Rapa)对铁蓄积高转换骨质疏松骨生成的影响。方法 将16只8周龄野生(wide type, Wt)雌性小鼠和48只8周龄铁调素敲除(△Hep)转基因雌性小鼠予以卵巢切除(OVX),分为四组(Wt+OVX组、△Hep+OVX组、△Hep+OVX+羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose, CMC)组和△Hep+OVX+Rapa组)。Rapa为腹腔注射,3mg/(kg·d),持续2个月。CMC为Rapa溶剂,注射剂量及持续时间同Rapa。末次注射结束后4组小鼠处死取血清和骨组织标本。用股骨微型计算机断层扫描(micro computed tomography, micro-CT)检测股骨骨量及骨密度(bone mineral density, BMD)等参数,扫描电镜、HE染色检测骨量及骨小梁结构,生物力学实验检测股骨弯曲弹性模量、弯曲能量、最大弯曲应力、弯曲刚性系数,血清成骨指标如碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,...     

雷帕霉素减少GK糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及其机制

目的观察糖尿病肾组织肿瘤坏死因子（TNF-α）、核因子（NF-κB）的表达及其与肾组织细胞凋亡关系以及雷帕霉素对其的影响。方法将20只GK大鼠随机分为DM组（n=10）、DMR组（n=10）,10只Wistar大鼠作为NC组。DMR组予以6mg／kg雷帕霉素灌胃,DM与NC组仅给予等量生理盐水灌胃。TUNEL法检测肾组织细胞凋亡。免疫组织化学法（IHC）检测肾组织TNF-α和NF-κB的表达。结果TUNEL法显示,NC组肾组织未见明显的凋亡细胞;4周及8周DM组凋亡数呈进行性增多（P〈0．01）。IHC显示,NC组肾组织TNF-α、NF-κBp65有轻微阳性表达;4周、8周DM组NF-KBp65、TNF-α表达有逐渐上升的趋势,均显著高于正常对照组（P〈0．01）。NF-κBp65、TNF-α阳性表达呈正相关（P〈0．01）;肾组织NF-a和NF-κBp65表达与肾组织细胞凋亡之间均呈正相关（P〈0．01）;与DM组比较,DMR组4周、8周组肾组织TNF-α和NF-κBp65的过度表达均被显著抑制（P〈0．01）,肾组织细胞凋亡数显著减少（P〈0．01）。结论NF-κB及其诱导的TNF-α在糖尿病肾病损伤中发挥重要作用,雷帕霉素可能通过抑制NF-κB和TNF-α的表达减少减轻肾组织细胞凋亡。     

雷帕霉素免疫抑制的分子机制与临床应用

雷帕霉素(Rapamycin, RAPA)是一种新型、强效免疫抑制剂,近年的研究表明它在预防同种异体肾移植术后排斥反应、各种支架管置入导致的血管再狭窄中具有重要作用[1]。另外,它尚可治疗多种自身免疫性疾病,对肿瘤细胞以及异种移植排斥具明显的抑制作用。无肾毒性、多毛以及齿龈增生等副作用,显示出RAPA的多种生物学活性,引起了人们的极大兴趣和关注。有关RAPA免疫抑制的分子机制和临床应用取得了重要进展[2]。本文对近年来RAPA在这方面的研究进行综述。 1 T细胞的信号通路 1.1 T细胞的早期信号通路 T细胞活化需要三个序列信号(thre…     

联合应用自噬抑制剂增加雷帕霉素引起的肺癌细胞凋亡

目的探讨自噬抑制剂对雷帕霉素引起的肺癌细胞凋亡的影响。方法选用人肺癌A549细胞,MTT方法检测单独利用雷帕霉素(Rapamycin)或者联合自噬抑制剂3-MA对A549细胞存活率的影响,Western印迹检测单独利用雷帕霉素(Rapamycin)或者联合自噬抑制剂3-MA凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP,以及线粒体相关蛋白细胞色素C表达水平的影响。结果 MTT结果显示,Rapamycin可以明显地引起A549细胞存活率的下降,并呈现出剂量依赖性。Western印迹结果显示,Rapamycin可以引起凋亡相关蛋白酶切的PARP、酶切的Caspase-3以及线粒体凋亡相关蛋白细胞色素C(cytochrome c)表达水平明显的上升。MTT结果显示,联合应用自噬抑制可以明显的增加Rapamycin引起的细胞存活率的下降。Western印迹显示,与单独给予Rapamycin相比较,联合应用自噬抑制剂3-MA,凋亡相关蛋白酶切的PARP、酶切的Caspase-3进一步增加。结论自噬抑制剂3-MA可提高人肺癌A549细胞对m TOR抑制剂Rapamycin的敏感性。     

1型糖尿病研究进展——12thIDS会议侧记

T1DM是遗传易感个体在环境因素触发下,由T淋巴细胞介导的以胰岛B细胞选择性破坏为特征的器官特异性自身免疫性疾病。近年来,TIDM在基础和临床研究领域都有了新进展。本文围绕2012年在加拿大维多利亚市召开的第12届国际自身免疫糖尿病会议（IDS）内容,从发病机制、免疫标志物检测新技术、预防治疗临床研究、动物模型等方面对T1DM的全球研究进展和热点作简要评述。     

2型糖尿病微血管病变患者血清血小板反应蛋白-1水平的变化及临床意义

目的 探讨2型糖尿病T2DM微血管病变与血清血小板反应蛋白-1（TSP-1）的相关性。 方法 将176例受试者研究对象分为糖尿病合并有微血管病变组组（A组,n=58例）、无、未合并微血管病变组（B组,n=64例）和与正常对照组（C组,,n=54例）,检测所有研究对象血清TSP-1水平及相关临床指标,并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛β细胞功能指数（HOMA-β）。 结果 A组及、B组的血清TSP-1水平均显著高于C组（P〈0.05）,A组的血清TSP-1水平显著高于B组（P〈0.05）。相关分析示,血清TSP-1水平与FBG、HbA1Cc、hs-C-RP呈正相关（P〈0.01）,与HOMA-β指数及FINSns呈负相关（P〈0.01）。多元线性逐步回归结果显示：,HbA1Cc、FPG、HOMA-β及FINSns是血清TSP-1水平的独立影响因素（P〈0.05）。 结论 TSP-1在2型糖尿病T2DM微血管病变患者血清中表达升高,其可能参与糖尿病微血管病变病理生理过程,检测血清TSP-1的水平对预测糖尿病微血管病变有一定的价值。     

重视儿童2型糖尿病的临床研究

很多国家和地区发现儿童糖尿病中的2型糖尿病（T2DM）比例逐年增加，但我国儿童T2DM患病率调查报道较少。国内外所报道的患病率差异，除了受地区、种族、经济状况等影响外，还与调查方法、年龄段、敏感性和特异性不同有关，但总的结果是儿童以青春期女性多发。此外儿童T2DM的概念以及病理生理的相关信息均来自成人的研究，国外有研究认为儿童T2DM以胰岛素分泌缺陷为主，与成人T2DM以胰岛素抵抗为主有一定差异。而且儿童T2DM的治疗基本是参考成人方案，但其治疗建议应严格分级。儿童T2DM的患病率、诊断和治疗还存在不少问题，有待进一步研究。     

2型糖尿病患者甲状腺功能与纤维蛋白原关系的研究

目的 探讨T2DM患者甲状腺功能与纤维蛋白原（FIB）的相关性. 方法 选取T2DM患者502例,测定FIB、游离三碘甲腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺激素（TSH）和临床生化指标,采用方差分析、Spearman相关分析及多元逐步回归分析甲状腺功能与FIB的相关性. 结果 （1）FT3与FIB呈负相关（r=-0.331,P＜0.01）.（2）甲减组FIB高于甲亢组[（3.765±1.089）vs（3.346±0.879）pmol/L,P＜0.01],与正常组[（3.232±0.985） pmol/L]比较差异无统计学意义;按FIB由低到高四分位间距分组,FT3依次为（4.54±0.96）,（4.47±0.81）,（3.94±1.13）及（3.67±0.95）pmol/L,P0～组与P25～组均高于P75～组（P＜0.01）.（3）年龄、[脂蛋白LP-（a）]、C-RP、HbA1c是FIB的独立影响因素（β=0.382,0.272,0.552,0.221;P＜0.05或P＜0.01）;FT3与FIB呈负相关（β=--0.289,P＜0.01）,且与C-RP呈依赖性. 结论 T2DM患者年龄、LP-（a）、C-RP、HbA1 c及FT3均与FIB相关,甲状腺激素可能通过炎症机制影响FIB.     

2型糖尿病患者血清生长停滞特异性基因产物6水平的变化及相关因素分析

目的 探讨血清生长停滞特异性基因产物6（GAS6）水平与T2DM、肥胖的相关性及临床意义。方法新诊断T2DM患者（T2DM组）46例和NGT者（NGT组）42名按BMI18．5kg／mz％BMI％24．9kg／m2或≥25k／m2又各自分为正常体重和超重／肥胖亚组。采用ELISA法测定空腹血清GAS6水平。结果T2DM组血清GAS6浓度低于NGT组[（10．63士1．95）VS（14．27±3．82）ng／m1]（P〈0．01）。偏相关分析显示,血清GAS6与BMI、WC、FPG、Hb＆c、C-RP、TNF-a、IL-6呈负相关（r分别为-0．235、-0．266、-0．362、-0．427、-0．268、-0．442、-0．380,Pd0．05或P〈0．01）,与HDL-C呈正相关（r-0．235,P〈0．05）。多元逐步回归分析显示,BMI、HbA1c、TNF-a（β分别为-0．190、-0．483、-0．580）为血清GAS6水平的独立影响因素。结论T2DM患者血清GAS6水平低于NGT者,BMI、HbA1c、TNF-a与GAS6呈独立负相关。     

参苓组方对2型糖尿病大鼠胰岛素样生长因子1干预作用的研究

目的观察参苓组方对2型糖尿病（T2DM）大鼠胰岛素样生长因子1（IGF-1）代谢途径的影响及胰岛素抵抗（IR）相关指标的改善作用。方法建立T2DM大鼠模型并分组,观察各组大鼠IGF-1、FPG、HbA1c、Fins、TG、TC的变化,比较胰岛素敏感性指数（IAI）、胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）。结果参苓组方能升高T2DM大鼠IGF-1水平（P〈0．01）,降低FPG,HbA1c、Fins、TG、TC（P〈0．05）,使IAI升高,HOMA—IR下降（P〈0．05）。结论参苓组方能改善T2DM大鼠IR和IGF-1水平。     

昆明市2型糖尿病患者糖化血红蛋白相关因素分析

目的 探讨昆明市T2DM患者HbA1C与FPG、2hPG和血红蛋白（Hb）的关系,了解HbA1C的影响因素。方法选取昆明市居住5年以上的T2DM患者208例,对HbA,C与FPG、2hpG和Hb进行分析,将高血红蛋白和正常血红蛋白组FPG、2hPG和HbA1C进行比较。结果HbA1C与FPG、2hPG呈正相关,相关系数分别为0．87、0．89,HbA1C与FPG和2hPG的回归方程为Y-1．124＋0．334X,＋0．284x2。不同Hb水平间FPG、2hPG和HbA1C比较差异无统计学意义。结论影响HbA1c的主要因素是FPG和2hPG,Hb对FPG、2hPG和HbA1C的影响无统计学意义。     

156例2型糖尿病PAI-1基因启动子区4G/5G多态性及其相关因素分析

检测156例2型糖尿病（T2DM）和60名正常人血浆纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）启动子4G／5G多态性，与有关临床指标作相关分析，结果提示PAI-1基因4G／SG多态性可能与T2DM发生冠心病相关。     

2型糖尿病患者一级亲属正常糖耐量人群胰岛素抵抗与胰岛β细胞功能的研究

探讨2型糖尿病（T2DM）患者一级亲属糖耐量正常人群胰岛素抵抗（IR）与胰岛β细胞功能状态。结果发现，母亲或双亲糖尿病组一级亲属糖耐量正常人群，空腹胰岛素水平和HOMA—IR明显升高，而糖刺激后30min胰岛素与血糖比值（△I30／△G30）明显降低，因此，T2DM患者一级亲属在糖耐量正常阶段已存在IR和早期胰岛素分泌功能受损。