雷帕霉素诱导大鼠肝星状细胞凋亡的研究

目的观察雷帕霉素(RAPA)对大鼠肝星状细胞系rHSCs-99增殖、凋亡的影响。方法将rHSCs-99分成4组:对照组(A组),RAPA 50 nmol/L组(B组),RAPA 100 nmol/L组(C组),RAPA 150 nmol/L组(D组)。RAPA作用72 h后,分别用MTT法检测rHSCs-99增殖,ELISA法检测I型胶原表达,流式细胞仪Annexin-V FICT/PI法检测细胞凋亡情况,Wright-Giemsa染色法观察细胞形态学改变,细胞免疫组化法检测Fas、P53与Bcl-2的表达变化。结果 RAPA作用后,rHSCs-99增殖受到抑制,I型胶原含量降低,凋亡率增高,Fas、P53表达增多,Bcl-2表达减少。结论 RAPA能抑制rHSCs-99的增殖及I型胶原合成。促进rHSCs-99凋亡,其机制可能是通过开启Fas/FasL凋亡途径及上调凋亡相关基因P53、下调Bcl-2的表达来实现。     

NF-κB和糖尿病β细胞凋亡

核因子κB(NF-κB)通过促进细胞因子、活性氧簇和Fas相关基因的表达介导的β细胞凋亡,可以诱发1型糖尿病。阻断依赖NF-κB的信号通路,对抗β细胞凋亡,能为糖尿病(特别是1型糖尿病)的防治提供新的手段。     

雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠病理结构及结缔组织生长因子表达的影响

目的 观察雷帕霉素对糠尿病肾病(DN)的保护作用.方法 应用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型.24只SD大鼠随机分为3组:对照组、糖尿病组、雷帕霉素组.第5周起雷帕霉素组予雷帕霉素1 mg·kg-1·d-1干预8 w.12 w末观察各组大鼠血糖、内生肌酐清除率(Ccr)、24 h尿微量白蛋白(24hUalb)、肾重/体重等的变化.光镜观察肾组织病理变化并测定肾小球平均体积及系膜基质扩张指数(EMMI).RT-PCR及免疫组化法检测肾皮质结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及蛋白表达.结果 与对照组相比,糖尿病组及雷帕霉素组大鼠血糖、Ccr、24hUalb均显著上升,大鼠肾脏明显肥大,肾小球平均体积、EMMI、毛细血管基底膜厚度均显著增加;肾皮质CTGFmRNA及蛋白表达显著上调.雷帕霉素干预后,上述指标除血糖外均部分被抑制.结论 小剂量雷帕霉素能够减轻肾脏肥大,抑制系膜外基质聚集,下调CTGF的表达,延缓DN的进展.     

NF-κB和糖尿病β细胞凋亡

核因子κB(NF-κB)通过促进细胞因子、活性氧簇和Fas相关基因的表达介导的β细胞凋亡,可以诱发1型糖尿病.阻断依赖NF-κB的信号通路,对抗β细胞凋亡,能为糖尿病(特别是1型糖尿病)的防治提供新的手段.     

核因子—κB活化与糖尿病肾病的关系及其机制

糖尿病肾病(DN),引起终末期肾衰的重要原因,也是引起糖尿病患者死亡的主要原因之一。近年来研究发现核因子-κB(nuclear factor of kappa B,NF-κB)的活化与DN相关密切。可以通过炎症反应、氧化应激、AnglI、PKC、细胞因子和细胞凋亡等多种途径引起DN的发生、发展。相信随着对NF-κB作用机制的进一步研究,及其相关药物的临床应用,必将为DN的防治提供新的思路和方法。     

NF-κB和糖尿病β细胞凋亡

核因子κB(NF-κB)通过促进细胞因子、活性氧簇和Fas相关基因的表达介导的β细胞凋亡，可以诱发1型糖尿病。阻断依赖NF-κB的信号通路，对抗β细胞凋亡，能为糖尿病(特别是1型糖尿病)的防治提供新的手段。     

雷帕霉素靶分子在糖尿病肾病发病机制中的作用

哺乳动物雷帕霉素靶分子位于胰岛素/胰岛素样生长因子通路的下游,同时接受营养信号和能量信号,参与细胞、器官和生物体肥胖的调控,引起胰岛素抵抗,促进血管内皮细胞生长因子的表达,可能在2型糖尿病及糖尿病肾病的发生发展中起重要的作用.     

糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用

目的观察糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用,探讨雷帕霉素是否通过调节自噬、内质网应激和细胞凋亡对糖尿病大鼠主动脉产生保护作用。方法雄性SD大鼠用随机数字表法分为正常对照组、糖尿病组和雷帕霉素干预组。采用链脲佐菌素制备1型糖尿病大鼠模型。雷帕霉素干预组给予雷帕霉素2mg/(kg·d)灌胃。于实验第8周留取血标本,用于血生物化学指标和脂联素水平检测,然后处死动物并迅速取出胸主动脉和腹主动脉,测定主动脉Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)、p62、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Caspase-12、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血清脂联素水平显著降低(P0.05),主动脉壁增厚,内皮严重受损,主动脉Beclin1、LC3的mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P 0. 05),主动脉p62、CHOP、Caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表达水平及Bax mRNA表达水平显著升高(P0.05)。与糖尿病组比较,雷帕霉素干预组大鼠血清脂联素水平显著升高(P0.05),主动脉组织病理改变显著减轻,主动脉Beclin1、LC3的mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2 mRNA表达水平显著升高(P0.05),主动脉p62、CHOP、Caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表达水平及Bax mRNA表达水平显著降低(P0.05)。结论糖尿病大鼠主动脉组织自噬水平降低,雷帕霉素可能通过激活自噬和减轻内质网应激和细胞凋亡水平对糖尿病大鼠主动脉产生保护作用。     

核因子-κB在糖尿病大鼠肾脏的表达水平及贝那普利的调节作用

目的 探讨NF-κB在糖尿病大鼠肾脏中的表达水平及贝那普利的调节作用.方法 将34只Wistar大鼠随机分为正常对照(n)组、糖尿病肾病(DN)组、贝那普利治疗(DNB)组.腹腔注射STZ诱导糖尿病模型,处理12 w末检测血糖、血胆固醇、血肌酐、尿素氮、尿蛋白,应用免疫组织化学方法检测肾脏NF-κB的表达水平.结果 DNB组大鼠血胆固醇、肌酐及尿白蛋白排泄较DN组明显减少(P<0.01或P<0.05).免疫组化显示:DNB组大鼠肾脏NF-κB表达明显低于DN组(P<0.01).结论 贝那普利对糖尿病大鼠肾脏有保护作用,可能通过抑制糖尿病大鼠肾脏NF-κB的表达,减少细胞外基质沉积.     

低剂量雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠nephrin表达的影响

目的 探讨低剂量雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠足细胞超微结构及nephrin表达的影响.方法 将22只雄性SD大鼠随机分为正常组(C组,n=7),糖尿病组(D组,n=7),雷帕霉素治疗组(R组,n=8).造模后第5周起R组大鼠给予雷帕霉素1 mg/kg/d灌胃,C组和D组给予等体积的羧甲基纤维素溶液灌胃.12 w末,观察各组大鼠血糖、24h尿蛋白量、体重校正的内生肌酐清除率(Ccr),以及透射电镜观察足细胞的超微结构;并通过免疫组化、RT-PCR检测nephrin的蛋白及其mRNA的表达.结果 至12 w末,与C组相比,D组大鼠血糖、Ccr、24 h尿蛋白量增加(P＜0.01),nephrin蛋白及其mRNA表达下调(P＜0.01);R组Ccr及24 h尿蛋白量较D组降低(P＜0.01),nephrin蛋白及其mRNA表达增加(P＜0.01).结论 低剂量雷帕霉素可能通过上调nephrin表达改善足细胞超微结构,从而延缓糖尿病肾病的进展.     

核转录因子κB在糖尿病大鼠坐骨神经中的表达及其与传导速度的关系

目的研究核转录因子出（NF-κB）在糖尿病大鼠坐骨神经中的表达动态变化及其意义。方法建立糖尿病大鼠模型后，分别在实验1个月、3个月、6个月时测定坐骨神经的传导速度和NF-κB的表达量。结果（1）坐骨神经传导速度：与正常对照（NC）组相比，糖尿病模型1个月组大鼠坐骨神经传导速度未见明显下降，3个月、6个月组则明显下降（P〈0．05）；（2）EMSA电泳条带灰度分析：与NC相比，NF-κB表达在糖尿病各组均明显增强（P〈0．05）。结论NF-κB在糖尿病大鼠坐骨神经中持续活化，推断NF-κB在糖尿病周围神经病变的发病机制中起重要作用。     

替米沙坦对糖尿病大鼠肾脏组织中内质网应激介导相关细胞凋亡的保护作用

探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病大鼠肾脏组织中内质网应激相关的细胞凋亡的影响.31只雄性SD大鼠分为正常对照组、糖尿病组、替米沙坦干预组.12周试验结束后测量大鼠体重、24h尿蛋白量,检测血糖、血胰岛素、血肌酐等.肾脏细胞凋亡用TUNEL法检测;肾脏细胞内质网应激信号通路分子糖调节蛋白78( GRP78)、caspase12和CHOP用免疫组化及实时定量PCR法检测.糖尿病组的血糖、24h尿蛋白量、血肌酐显著高于对照组(P＜0.05);体重和血胰岛素较对照组低(P＜0.05).替米沙坦干预组的24h尿蛋白量、血肌酐较糖尿病组明显减少(P＜0.05),凋亡指数也显著低于糖尿病组(P＜0.05).大鼠内质网应激信号通路分子GRP78、caspase12、CHOP蛋白及其mRNA的表达,糖尿病组显著高于对照组和替米沙坦干预组(P＜0.05).内质网应激参与了糖尿病大鼠肾脏细胞的凋亡,替米沙坦对内质网应激介导相关的肾脏细胞凋亡有保护作用.     

血糖波动对糖尿病大鼠肾脏氧化应激与凋亡的影响

目的 观察血糖波动对肾小管上皮细胞凋亡的影响及氧化应激的作用.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),给予稳定高糖或波动高糖干预,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖.以SD大鼠建立链脲佐菌素糖尿病模型,并错时腹腔注射胰岛素及葡萄糖,造成血糖波动模型.12周后,测24h尿蛋白、血尿素氮、肌酐、超氧化物岐化酶(SOD)及丙二醛,免疫组化测肾组织NOX-4、Bcl2和Bax蛋白,TUNEL法测肾小管上皮细胞凋亡,观察超微结构改变.结果 与稳定高糖比较,波动高糖更加明显抑制体外肾小管上皮细胞增殖;与稳定高血糖比较,血糖波动大鼠血尿素氮、肌酐、24h尿蛋白、丙二醛升高而SOD下降[(21.50±1.72对12.50± 1.85)mmol/L,(97.51±7.84对82.12± 11.48)μmol/L,(1.57±0.09对1.04±0.12)mg/24 h,(23.50±1.87对14.82±2.96)nmoL/ml,(17.22± 1.12对21.11±1.80)U/ml,均P＜0.05],Bc12蛋白表达减少而Bax、NOX-4增加,凋亡细胞数增加,病理损伤加重.结论 与稳定高糖比较,波动高糖明显抑制肾小管上皮细胞增殖,加速肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与氧化应激水平增高有关.     

乙型肝炎病毒P22e蛋白经核因子-κB抑制HepG2细胞凋亡

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在乙型肝炎病毒P22e蛋白抑制HepG2细胞凋亡中的作用.方法 用含HBV P22e基因的重组pEGFP-C2HBVP22e质粒的肝癌细胞HepG2,以放线菌素-D(Act-D)、肿瘤坏死因子(TNF)α诱导该细胞凋亡,采用激光共聚焦显微镜、核蛋白电泳迁移率等技术,观察在HBV P22e抑制TNFα诱导HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞的凋亡过程中NF-κB的核转移、活化等情况.用NF-κB抑制剂ALLN抑制其信号通路,检测以Act-D、TNFα诱导的HepG2、HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞凋亡率的变化.对实验结果的数据分析用秩和检验和t检验. 结果激光共聚焦显微镜及电泳迁移率实验观察到HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞在发生凋亡前后,有明显的NF-κB向核内迁移活化现象.NF-κB抑制剂ALLN可使以Act-D、TNF α诱导HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞的凋亡率明显升高(6.19%±1.58%与39.99%±7.620/0,t=7.515,P<0.01).结论 在HBV P22e蛋白抑制肝癌细胞凋亡过程中,NF-κB信号途径起着重要作用.     

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏保护作用及对尿VEGF排泄的影响

目的观察辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏保护作用及对尿中血管内皮生长因子（VEGF）排泄的影响。方法Wistar大鼠24只,分为正常对照（NC）组、糖尿病（DM）组、辛伐他汀组（Sim）组。于成模后第2、4、8周时,检测各组的血糖、12小时尿视黄醇结合蛋白（RBP）、白蛋白（Alb）、VEGF排泄率,第8周时用透视电镜检查肾小球基底膜、系膜区的病理改变。结果（1）第2、4、8周时,DM组和Sim组尿Alb、RBP、VEGF排泄率均高于NC组（P〈0.01）,Sim组较DM组明显减少（P〈0.01）;尿VEGF排泄率与尿Alb、RBP排泄率及肾脏肥大指数存在正相关关系。（2）光镜和电镜下Sim组肾小球和肾小管-肾间质病变较DM组明显减轻,同NC组相比仅有少量病变。结论辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏具有保护作用,可能与其抑制肾脏VEGF过度表达有关。     

积雪草酸对糖尿病大鼠肾脏氧化应激及细胞凋亡的影响

目的探讨积雪草酸对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾脏氧化应激及细胞凋亡的影响。方法29只清洁级健康雄性sD大鼠（体质量170～210g,2～3月龄）腹腔注射65μg／g链脲佐菌素,建模成功后将存活的24只大鼠按数字表法随机分至糖尿病组（n=6）、10μg·g^-1·d^-1。积雪草酸组（n=6）、20μg·g^-1·d^-1积雪草酸组（n=6）、40μg·g^-1·d^-1积雪草酸组（n=6）。另以6只健康SD大鼠为正常对照组。干预8周后观察各组大鼠尿白蛋白排泄率、血糖、血尿素氮、血肌酐变化;检测。肾皮质中超氧化物歧化酶、丙二醛水平;采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测肾脏聚ADP-核糖多聚酶表达水平,Westernblot法检测半胱氨酸蛋白酶3表达水平。应用单因素方差分析和LSD法进行数据统计。结果与正常对照组相比,糖尿病组大鼠尿白蛋白排泄率、血糖、血尿素氮、血肌酐显著升高,肾皮质超氧化物歧化酶活性显著下降,丙二醛含量显著升高,肾脏细胞凋亡率、聚ADP-核糖多聚酶表达和半胱氨酸蛋白酶3蛋白表达水平显著升高（分别为31．0％±5．5％VS5．0％±1．2％、3．9±0．5VS1．7±0．6、1．7±0．4vs0．4±0．3,t值分别为0．84、7．45、6．14,均P〈0．01）。与糖尿病组相比,3个积雪草酸干预组尿白蛋白排泄率、血尿素氮、血肌酐明显降低,超氧化物歧化酶活性明显上升,丙二醛含量明显下降,。肾脏细胞凋亡率明显减少（糖尿病组为31．0％±5．5％,10μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为20．6％±4．7％,20μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为15．8％±2．6％,40μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为10．3％±3．3％）,聚ADP-核糖多聚酶表达明显下调（糖尿病组为3．9±0．5,10μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为3．0±0．2,20μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为2．6±0．4,40μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为2．0±0．3）,半胱氨酸蛋白酶3蛋白表达下调（糖尿病组为1．7±0．3,10μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为1．0±0．2,20μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为0．7±0．2,40μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为0．5±0．3）。结论积雪草酸对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾脏病变有一定保护作用,其机制可能与氧化应激反应和细胞凋亡被抑制有关。     

卡托普利对糖尿病大鼠肾脏保护机制的研究

目的：研究卡托普利对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法：应用卡托普利对糖尿病大鼠治疗12周,观察大鼠肾脏结构和功能。血丙二醛（MDA）,肾组织中NO,糖基化终末产物（AGES）,环磷腺苷（cAMP),转化生长因子β1（TGFβ1）的改变。结果：卡托普利治疗后能明显降低血肌酐,23小时尿蛋白,阻止肾脏肥大和肾小球硬化,并降低MDA,TGFβ1,AGES含旦,升高NO,cAMP含量,结论：卡托普利通过抗脂过氧化,抑制肾AGEs生成和TGFβ1表达,升高肾脏NO,cAMP保护肾脏。     

Effects of ketamine on proinflammatory cytokines and nuclear factor kappaB in polymicrobial sepsis rats

INTRODUCTION Sepsis/Septic shock is a complex pathophysiologic process characterized by profound hypotension, progressive metabolic acidosis, systemic inflammatory response syndrome (SIRS), multiple organ dysfunction syndrome (MODS), and even death. Altho…     

肝癌组织中核因子κB的表达与肿瘤坏死因子α的相关性分析

目的 探讨核因子κB(NF-κB)在肝癌组织中的表达特点及其与肿瘤坏死因子α(TNF α)、临床病理学特征的关系. 方法以自身配对法收集手术后肝癌及其癌周组织各30份,以免疫组织化学法和酶联免疫吸附法检测肝癌和癌周组织中NF-κB的定位和表达,并以酶联免疫吸附法定量分析肝癌和癌周组织中TNF α的水平.样本均数间的比较先进行方差齐性检验,方差相等时进行t检验或方差分析;样本率之间的比较采用x~2检验;等级资料的比较采用秩和检验;相关性分析采用Pearson相关分析.用Stata7.0统计软件包处理、分析数据.结果 NF-κB蛋白在肝癌组织的胞核和胞质中均有表达,而对应的癌周组织中仅在胞质中有表达;NF-κB表达的阳性率肝癌组织中为100.0%,癌周组织为63.3%,x~2=13.47,P<0.01,差异有统计学意义.NF一κB表达强度:肝癌组织(+)4例、(++)10例、(+++)16例,癌周组织(-)11例、(+)7例、(++)9例,(+++)3例,肝癌组织中NF-κB的表达强度明显高于其对应的癌周组织,u=4.44,P<0.01,差异有统计学意义.核蛋白NF-κB的表达水平.肝癌组织中大约是癌周组织的1.9倍,t=23.17,P<0.01,差异有统计学意义.TNF α的表达水平在肝癌组织中大约是癌周组织的2.3倍.t＝39.22,P<0.01,差异有统计学意义.核蛋白NF-κB及TNF α的表达呈显著正相关,r=0.964,t=19.31,P<0.01.肝癌组织中核蛋白NF-κB的表达水平与肿瘤的分化程度、肿瘤数目、肿瘤大小和HBsAg是否阳性未见明显的相关性,各组间的差异无统计学意义. 结论TNF α可诱导NF-κB活化,进入细胞核内参与肝癌的发生和发展.     

阿托发他汀对糖尿病大鼠外周血和肾组织核因子kB的影响

目的 探讨阿托伐他汀对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾组织与外周血单个核细胞（PBMC）中核因子kB（NF-kB）活性的影响。方法 30只雄性SD大鼠分成对照组、糖尿病组和阿托伐他汀治疗组；酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组大鼠PBMC中NF-kB活性；免疫组化检测各组大鼠肾组织NF-kB、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）。结果 糖尿病大鼠PBMC和肾小球中NF—kB显著高于对照组（P＜0．01）。与糖尿病大鼠相比，阿托伐他汀明显抑制NF-kB活化及MCP-1和纤黏连蛋白（FN）表达（P〈0．05），减少24h尿蛋白排泄，改善肾功能及肾病理学损害。结论 NF-kB在糖尿病肾病发病中具有重要作用，抑制NF-kB的活化可能是他汀类药物发挥肾脏保护作用的机制之一。