斯钙素2在糖尿病视网膜病变中的表达和意义

目的研究斯钙素2（STC2）在糖尿病视网膜病变(DR)大鼠玻璃体组织中的表达水平,并探究其与血管内皮生长因子（VEGF）的关系。方法Wistar大鼠随机分为正常对照(control)组和DR组,DR模型通过注射链脲佐菌素构建而成。RT-qPCR、Westernblot和ELISA检测大鼠玻璃体中STC2和VEGF的表达水平;用VEGFA处理大鼠视网膜神经节细胞,RT-qPCR、Westernblot和ELISA检测STC2的表达水平;用STC2蛋白处理大鼠视网膜神经节细胞,RT-qPCR、Westernblot和ELISA检测VEGF的表达水平,免疫共沉淀检测VEGF与STC2的相互作用。结果相对于control组,DR模型大鼠玻璃体中STC2的mRNA和蛋白水平显著升高,VEGF的表达水平也显著升高（P<0.01）,两者呈正相关;VEGFA可以诱导大鼠视网膜神经节细胞中STC2的表达,并促进其分泌;STC2蛋白可以诱导大鼠视网膜神经节细胞中VEGF的表达和分泌,并且VEGF与STC2存在蛋白相互作用。结论STC2在DR大鼠玻璃体中表达显著升高,并且其表达与VEGF紧密相关。     

多巴胺对糖尿病视网膜病变模型大鼠视网膜组织中氧化应激和VEGF表达的影响

目的探讨多巴胺对糖尿病视网膜病变(DR)模型大鼠视网膜组织中氧化应激和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法随机将90只大鼠分为3组,分别为对照组、模型组和多巴胺组,每组各30只。通过连续4周高糖高脂饮食建立DR模型,对照组和模型组不给予药物干预,多巴胺组大鼠眼部玻璃体内注射50 mg/kg多巴胺溶液。光学显微镜下观察3组大鼠苏木精-伊红染色视网膜组织的情况,采用酶联免疫吸附试验检测3组大鼠视网膜组织中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)和VEGF水平,并通过Western Blot检测3组大鼠的VEGF表达。结果对照组大鼠视网膜内界膜平整,新生血管内皮细胞突入玻璃体较少,未见与内界膜相连的到达玻璃体内的新生血管。与对照组比较,模型组大鼠突破内界膜的血管内皮细胞较多,可见内界膜下的细胞增殖明显。与模型组比较,多巴胺组大鼠视网膜内界膜欠平整,新生血管内皮细胞突入玻璃体较少,可见内界膜下的细胞增殖减少。与对照组比较,模型组CAT和SOD水平均降低,MDA、MCP-1、IL-6和VEGF水平均升高,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,多巴胺组CAT和SOD水平均升高,MDA、MCP-1、IL-6和VEGF水平均降低,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论多巴胺可以上调DR大鼠视网膜组织中CAT和SOD水平,下调MDA、MCP-1、IL-6水平和VEGF表达。     

rAAV2-NTF2对糖尿病大鼠血视网膜屏障的保护作用

目的：观察2型重组腺相关病毒－核运输因子2（rAAV2-NTF2）对糖尿病大鼠血视网膜屏障功能损伤的拮抗作用。方法:伊凡思蓝（EB）灌注铺片观察糖尿病大鼠视网膜血管分布和形态。亚克隆构建pSNAV－NTF2载体,腺相关病毒包装形成rAAV2-NTF2。成年雄性Wistar大鼠,以右眼为实验眼,玻璃体腔注射4μLrAAV2-NTF2,左眼为对照眼,玻璃体腔注射rAAV2-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）4μL。1个月后取4只大鼠左眼,固定后取视网膜制备全视网膜铺片,荧光显微镜下观察EGFP表达情况。再行STZ腹腔注射诱导糖尿病,同时设单纯糖尿病组（diabetes,D组）和正常组（normal,N组）。糖尿病1个月后以45mg/kg剂量静脉注射EB,循环2h后1%多聚甲醛枸橼酸缓冲液灌注并摘除眼球取视网膜,置于甲酰胺中浸泡提取染料,用分光光度计测量甲酰胺中染料的浓度。结果:正常组大鼠可见在低背景荧光下视网膜血管对EB有很好的屏障作用,糖尿病2周大鼠视网膜血管仅见背景荧光增强,糖尿病1月后血管出现异常节段性扩张,局部血管周围EB渗漏。糖尿病1个月大鼠视网膜内EB浓度是正常组的4.67倍,P<0.01,提示糖尿病大鼠血-视网膜屏障受损。玻璃体腔注射rAAV2-NTF2,视网膜内EB浓度为(8.30±4.16)μg/g视网膜干重,较对侧眼(22.13±8.43)μg/g视网膜干重明显减少,可以部分改善血-视网膜屏障的破坏,降低EB-白蛋白渗漏（P<0.05）。结论:玻璃体腔注射rAAV2-NTF2可减轻糖尿病大鼠视网膜血-视网膜屏障功能的破坏,为糖尿病视网膜病变的基因治疗提供了实验依据。     

糖尿病患者视网膜病变与血管内皮生长因子的关系

糖尿病视网膜病变是糖尿病患者重要的慢性并发症之一。血管内皮生长因子 (ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ)是目前所知最强的促血管生成因子 ,参与多种生理病理性新生血管形成过程。本文通过测定糖尿病视网膜病变不同周期患者血清中ＶＥＧＦ水平 ,观察ＶＥＧＦ与糖尿病视网膜病变的相关性。对象和方法1　对象　对照组 3 0例 ,为健康查体无糖尿病史与眼底疾病者 ,年龄 ( 5 7 3± 15 6)岁 ;糖尿病患者根据视网膜病变分为 3组 :①无视网膜病变 3 3例 ,男 16例 ,女 17例 ,平均年龄 ( 5 0 3±17 5 )…     

血清VEGF及NO在早期糖尿病视网膜病变患者中的水平及其应用价值

目的:通过对早期糖尿病视网膜病变(DR)患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)和一氧化氮(NO)水平的检测,探讨其在DR治疗方面的应用价值。方法:收集2019年3月至2020年6月榆林市第二医院2型糖尿病患者59例,按照DR分级标准分为无糖尿病视网膜病变(NDR)组(32例)和背景期糖尿病视网膜病变(BDR)组(27例),同期医院体检中心健康体检者29例作为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清VEGF水平,采用硝酸还原酶法(一步法)检测血清NO水平,采用Pearson分析各组血清VEGF与NO水平相关性,并采用Logistic回归模型对DR的危险因素进行分析。结果:与对照组比较,BDR组患者血清VEGF及NO水平差异均有统计学意义(均 P<0.05)。各组血清中VEGF与NO水平均呈正相关(均 P<0.01)。糖尿病病程、吸烟、糖化血红蛋白(HbA1c)、血清VEGF及NO水平为DR的高危因素。 结论:血清VEGF和NO水平可能是2型糖尿病患者后期发生微血管并发症的潜在病理机制,二者相互作用,可能诱发或加速DR的进展,期望其在DR的治疗方面提供一种补充或联合治疗的新思路。     

Norrin在氧诱导的视网膜病变中的时空表达及其意义

目的：探讨视网膜新生血管疾病动物模型-氧诱导的视网膜病变（OIR）小鼠视网膜中Norrin的时空表达变化及意义。方法：荧光素灌注铺片观察OIR小鼠视网膜血管分布和形态。RT－PCR检测对照组P7、P10、P12、P17小鼠和OIRP7、P8、P12、P12.5、P13、P14、P15、P17、P19小鼠视网膜中Norrin、VEGFmRNA的表达。免疫组化法检测Norrin蛋白在视网膜中的表达和分布位置。结果：OIR小鼠P12时在视网膜后极部形成无灌注区,P17时有大量新生血管形成。NorrinmRNA在正常小鼠视网膜中表达水平低且稳定。缺氧12h后,NorrinmRNA有显著升高,缺氧1d到达高峰,然后缓慢下降,其变化趋势与VEGFmRNA一致。Norrin蛋白在正常小鼠各时点免疫组化均未能检出,在OIR模型中P15见弱表达,P17-P19表达明显增强。主要分布在视网膜外层,以内外节层、外丛状层为主。结论：Norrin在mRNA和蛋白水平都在缺氧视网膜中明显升高,主要分布在视网膜外层。Norrin很可能参与新生血管的形成,并起着重要的调控作用。     

糖尿病视网膜病变患者糖化血红蛋白及血管内皮生长因子的表达及临床意义

目的分析糖尿病视网膜病变(DR)患者糖化血红蛋白(HbAlc)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达及临床意义。方法选取2018年3月至2019年12月本院收治且经内分泌科确诊的86例糖尿病患者作为研究对象,其中DR患者39例,无视网膜病变(NDR)者47例。另选取同一时期在本院接受体检的50例健康体检者作为对照组。比较三组研究对象HbAlc和VEGF表达水平,并分析HbAlc与VEGF诊断DR的敏感性和特异性。结果 DR组、NDR组患者HbAlc与VEGF水平均明显高于对照组,且DR组HbAlc与VEGF水平明显高于NDR组(P0.05)。HbAlc诊断DR的敏感性、特异性分别为79.49%、87.18%;VEGF诊断DR的敏感性、特异性分别为82.05%、84.62%;两种检测方法诊断DR的敏感性和特异性均无统计学差异(P0.05)。结论 DR患者HbAlc与VEGF水平呈高表达,对DR诊断敏感性和特异性均较高,可作为早期诊断DR的检测指标。     

血管内皮生长因子及其受体在糖尿病小鼠视网膜的表达

目的：观察血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)及其受体flk-1在糖尿病视网膜细胞的表达,以期阐明VEGF与糖尿病性盲的关系。方法：应用免疫组织化学这及发病组视网膜VEGF和flk-1阳性细胞,并计算单位面积视网膜中神经节细胞VEGF阳性率和flk-1阳性细胞数,结果：发病组视网膜神经节细胞VEGF阳性率和flk-1阳性神经节细胞数从3月龄时开始增多（P＜0．05）,并随着病程延长有上升趋势,VEGF在6月龄后增多更显著,flk-1在8月龄后增加也更为明显。结论：VEGF和flk-1在糖尿病视网膜神经节细胞表达量增加,VEGF通过与flk-1相互作用,不仅使血管内皮细胞增殖,导致视网膜新生网管形成,而且还可能通过改变神经节细胞及Muller细胞膜上的受体数量而对神经节细胞功能活动产生影响。     

血管内皮生长因子与糖尿病性视网膜病变

随着糖尿病发病率的增高 ,其并发症——糖尿病性视网膜病变 (DR)已成为致盲的主要原因之一 ,并日益受到人们的重视。目前发现一种细胞生长因子——血管内皮生长因子 (VEGF)与糖尿病性视网膜病变的发生发展有着极为密切的关系。本文就 VEGF的生物学特点及其在 DR中的作用简要做一综述     

灯盏花素对人视网膜色素上皮细胞和糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响

目的:观察灯盏花素对高糖环境下人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19中VEGF、VEGFR2和p-ERK蛋白的表达及对2型糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响。方法:培养ARPE-19细胞,分为对照组、灯盏花素组、高糖组和高糖+灯盏花素组,ELISA检测VEGF的分泌水平,Westernblot检测细胞VEGF、VEGFR2和p-ERK的蛋白水平;取正常大鼠,随机分为正常对照组、灯盏花素组、糖尿病模型组和糖尿病灯盏花素治疗组,16周后取各组大鼠眼球,观察大鼠视网膜的病理变化并评分,免疫组化观察VEGF的表达情况。结果:(1)细胞实验结果显示,灯盏花素组VEGF、VEGFR2和p-ERK的蛋白水平与正常对照组比较均减低(P<0.05);高糖组细胞上述蛋白水平与正常对照组比较均增加(P<0.05);高糖+灯盏花素组上述蛋白水平与高糖组比较表达均减少(P<0.05);(2)大鼠视网膜病理学评分显示糖尿病组与正常对照组、糖尿病灯盏花素治疗组相比差异显著,灯盏花素组与正常对照组相比差异无统计学意义。糖尿病大鼠与正常对照组、灯盏花素组相比,视网膜VEGF的表达增加;糖尿病灯盏花素治疗组中VEGF的表达较糖尿病组有所降低(P<0.05)。结论:灯盏花素可以降低ARPE-19细胞VEGF、VEGFR2和p-ERK的蛋白表达水平,抑制糖尿病大鼠视网膜VEGF的表达,提示灯盏花素可能通过降低糖尿病大鼠视网膜细胞和组织中VEGF的表达,缓解其糖尿病视网膜病变进程。     

康柏西普对糖尿病视网膜病变患者血清中VEGF与IGF-1的影响研究

目的 观察康柏西普对糖尿病视网膜病变患者的治疗效果及其对血清中血管内皮生长因子(VEGF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平的影响.方法 选取2014年5月至2016年5月我院收治的糖尿病视网膜病变患者86例(86眼),将所有患者随机分为对照组与观察组,每组患者各43例,对照组患者采取一次性玻璃体腔中注射药物曲安奈德0.1mL,观察组患者采取一次性玻璃体腔中注射药物康柏西普0.05mL.采取酶联免疫吸附法(ELISA)测定治疗前及治疗后1个月、3个月两组患者血清中VEGF与IGF-1的水平,评价两组患者治疗3个月后的临床疗效以及调查患者生活质量,记录治疗后1个月不良反应情况.结果 对照组与观察组患者在药物治疗前后血清中VEGF与IGF-1的水平差异有统计学意义;两两比较的结果显示,与治疗前相比,对照组与观察组治疗后1个月和3个月患者血清中的VEGF和IGF-1水平较治疗前均降低,差异有统计学意义;对照组与观察组治疗后3个月患者血清中的VEGF和IGF-1水平均低于治疗后1个月,差异有统计学意义.同一时间点,观察组与对照组的比较结果显示,治疗后1个月和治疗后3个月观察组患者血清中VEGF与IFG-1水平均低于对照组,差异有统计学意义;观察组患者治疗后的总有效率为95%高于对照组(79%);治疗3个月后观察组患者自理能力、活动能力、社交和心理能力方面评分均高于对照组(P<0.05);治疗1个月后观察组患者前房炎性反应、角膜水肿和高眼压的发生率均明显低于对照组(P<0.05).结论 康柏西普能够明显降低糖尿病视网膜病变患者血清中VEGF与IGF-1的水平,延缓血管的生成,提高患者的生活质量,具有很好的临床疗效和安全性.     

牛蒡子苷调控血管内皮生长因子抑制糖尿病视网膜病变的机制研究

目的探讨牛蒡子苷(Arc)是否通过调控血管内皮生长因子(VEGF)表达进而抑制糖尿病视网膜病变。方法体外培养人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs),用不同浓度的Arc处理HRCECs,同时将si-VEGF或pcDNA3.1-VEGF分别转染入HRCECs,MTT法检测HRCECs增殖能力;Western blot检测p21、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、载脂蛋白M(ApoM)、VEGF蛋白表达。结果与LG组相比,HG组HRCECs的OD值明显升高(P<0.05),cyclinD1、TNF-α、MCP-1、ApoM、VEGF水平均显著升高(P<0.05),而p21表达下调(P<0.05),Arc作用后可显著逆转HG对HRCECs增殖、cyclinD1、TNF-α、MCP-1、ApoM、VEGF及p21表达的作用,且Arc不同剂量组间均存在显著性差异(P<0.05);抑制VEGF表达可明显减弱高糖作用下的HRCECs增殖能力并降低相关炎性因子表达;过表达VEGF能逆转Arc对高糖诱导的HRCECs增殖及炎症反应的抑制作用。结论牛蒡子苷可能通过降低高糖诱导的HRCECs细胞中VEGF的高表达进而抑制HRCECs增殖,并可通过减轻炎症反应保护细胞免受损伤。     

血管内皮生长因子3’非翻译区936C/T 突变与糖尿病视网膜病变的关系

目的: 探讨血管内皮生长因子(VEGF)936C/T突变与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法: 按WHO的糖尿病(DM)诊断和排除标准及分型标准,选取无亲缘关系的2型糖尿病患者254例,分为非增殖性视网膜病变(NPDR)组、增殖性视网膜病变(PDR)组和单纯2型糖尿病(DM)组,选取健康体检人群120例作为正常对照组(NC)。采用PCR-RFLP方法确定全部人员的基因型,对不同组间的临床与生化指标及VEGF浓度、936C/T多态性进行了统计分析。结果: NPDR 和PDR组的CC基因型频率及C等位基因频率显著高于DM组(²=7.490,²=4.448, P<0.05;²=8.333,²=5.227,P<0.05)和NC组(²=9.934,²=4.899, P<0.05; ²=10.895,²=5.714, P<0.05),而NPDR 和PDR组(CT+TT)基因型频率及T等位基因频率显著低于NC组(²=9.934,²=10.895, P<0.01;²=4.899,²=5.714, P<0.05)和DM组(²=7.490,²=8.333,P<0.01;²=4.448,²=5.227,P<0.05)。DR多重危险因素分析显示血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平以及VEGF浓度和DR发病呈正相关,而VEGF 936C/T突变与DR发病危险呈负相关(β=-1.027,OR=0.343,P<0.01,CI:0.157-0.723)。结论: 中国汉族人群中存在VEGF 936C/T突变。VEGF 936C等位基因及CC基因型可能是中国汉族糖尿病患者易于发生DR的危险性遗传标志,而VEGF 936T等位基因和携带T等位基因的基因型(936TT基因型和936CT基因型)可能是DR发病风险降低的遗传标志。血浆VEGF、 LDL-C、TC和HbA1c水平可能是2型糖尿病患者易发DR的危险因素。     

核转录因子κB抑制剂PDTC对高糖培养大鼠肾成纤维细胞VEGF和PEDF表达的影响

目的:探讨核转录因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对高糖培养大鼠肾成纤维细胞(NRK)血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法:NRK按培养条件分为常糖组:5.6mmol/L葡萄糖;高糖A组:15mmol/L葡萄糖;高糖B组:30mmol/L葡萄糖;PDTC对照组:5.6mmol/L葡萄糖+5.0μmol/LPDTC;PDTCA组:15mmol/L葡萄糖+10μmol/LPDTC;PDTCB组:30mmol/L葡萄糖+20μmmol/LPT-DC。采用半定量RT-PCR方法及ELISA测定各组培养24h、48h后NRK的VEGF及PEDFmRNA及蛋白的表达。结果:与常糖组相比,高糖各组NRK的VEGF蛋白含量及mRNA表达明显升高(P<0.01,P<0.05);与高糖B组相比,PDTC干预各组NRK的VEGF蛋白含量及mRNA表达呈下降趋势(P<0.01,P<0.05)。与常糖组相比,高糖各组NRK的PEDF蛋白含量及mRNA表达明显下降(P<0.01,P<0.05);与高糖B组相比,PDTCB组NRK的PEDF蛋白含量及mRNA表达明显升高(P<0.01)。结论:PDTC能明显抑制高糖培养大鼠NRK的VEGF表达并明显上调PEDF的表达,间接提示NF-κB可能通过参与VEGF和PEDF的表达失衡导致糖尿病肾病(DN)的发生。     

Hypoxia-Induced Deregulation of miR-126 and Its Regulative Effect on VEGF and MMP-9 Expression

Objective: miR-126, the miRNA considered to be specially expressed in endothelial cells and hematopoietic progenitor cells, is strongly associated with angiogenesis. The purpose is to evaluate the role of miR-126 in hypoxia-induced angiogenesis and the possible mechanisms. Methods: The expression of miR-126 was detected in hypoxia-treated RF/6A cells and diabetic retinas using real-time PCR. The miR-126 was up- or down-regulated by transfecting miR-126-mimics or inhibitors into RF/6A cells. Cell cycle analysis was performed using flow cytometry. The protein levels of vascular endothelial growth factor (VEGF) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) were assessed by immunoblotting. Results: A significantly decreased expression of miR-126 was found in hypoxia-treated RF/6A cells in a time-dependent manner compared with normoxic condition. The expression of miR-126 was also reduced in the retina tissue of streptozotocin-induced diabetic rats. The expression of VEGF and MMP-9 proteins was increased in hypoxia-induced RF/6A cells. In the functional analysis, miR-126-mimic significantly reduced the percentage of RF/6A cells in S phases compared with the negative control under hypoxic conditions. Furthermore, the VEGF and MMP-9 protein levels were sharply decreased in hypoxia-induced RF/6A cells pretreated with miR-126-mimics and increased in the cells pretreated with miR-126-inhibitors. Conclusions: miR-126 is down-regulated under hypoxic condition both in vitro and in vivo and may halt the hypoxia-induce neovascularization by suspending the cell cycle progression and inhibiting the expression of VEGF and MMP-9.     

色素上皮衍生因子和血管内皮生长因子在糖尿病大鼠肾脏的不平衡表达

目的检测色素上皮衍生因子（PEDF）和血管内皮生长因子（VEGF）在糖尿病大鼠肾脏的表达，探讨其在糖尿病肾病（DN）发生发展中的作用。方法40只雄性Wistar大鼠随机分为：正常对照组（NC）、糖尿病模型组（DM）。4、8周末，检测血糖、糖化血红蛋白、肾重指数、尿白蛋白排泄率，免疫组织化学法检测肾脏PEDF、VEGF的表达。结果4、8周末，DM组大鼠肾脏PEDF的表达较NC组明显减少（P〈0．01）；VEGF的表达较NC组明显增多（P〈0．01）；肾脏PEDF的表达与VEGF明显负相关（r=-0．823，P〈0．01）。结论PEDF和VEGF在肾脏的不平衡表达可能参与了DN的发病。     

VEGF-binding aptides and the inhibition of choroidal and retinal neovascularization

Age-related macular degeneration and diabetic retinopathy are leading causes of blindness. Vascular endothelial growth factor (VEGF) is known to be the main factor that induces pathological angiogenesis in these diseases. In this study, we investigate the therapeutic potential and safety profiles of high-affinity peptides targeting VEGF which are identified using an ‘aptide’ technology. We show that two VEGF-binding aptides, APT_VEGF1 and APT_VEGF2, demonstrate high binding affinity and specificity to VEGF. Furthermore, they suppress VEGF-induced activation of VEGF receptor-2, in vitro angiogenesis, and in vivo pathological choroidal and retinal neovascularization. Despite potent anti-angiogenic effects, both VEGF-binding aptides do not induce any definite toxicity at the level of cellular viability, histological integrity, and gene expression. Our data show the therapeutic potential of VEGF-binding peptides for the treatment of choroidal and retinal neovascularization.