甲状腺激素对睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

目的：观察甲状腺激素对睾丸间质细胞（Leydig细胞）睾酮分泌的影响。方法：以不同浓度(0μg/ml、0．1μg/ml、1和10μg/ml）三碘甲状腺原氨酸（T3）刺激培养大鼠睾丸间质细胞（Leydig细胞）,观察细胞基础和应激状态时睾酮分泌的变化;同时测定不同甲状腺功能大鼠体外睾酮分泌水平。结果：直接用T3刺激培养的睾丸Leydig 细胞,睾酮分泌水平无显著变化;而将高甲状腺激素血症大鼠和低甲状腺激素血症大鼠Leydig细胞进行培养显示,无论在 基础还是在负荷情况下睾酮分泌能力均显著下降（P＜0．01）。结论：体外培养的睾丸Leydig细胞对甲状腺激素的刺激无反应。高甲状腺激素和低甲状腺激素状态时睾丸Leydig细胞分泌睾酮的能力均降低。     

共培养大鼠睾丸体细胞组织工程技术构建雄激素分泌组织

目的：探讨应用组织工程技术体内外构建具有一定形态和睾酮分泌功能组织的可行性。方法：雄性Wister大鼠,无菌切取双侧睾丸,制备去势及移植鼠动物模型。睾丸去包膜,剪碎,胶原酶消化,经差速贴壁或直接混合共培养方法,分别获取睾丸间质细胞（Leydig细胞）和共培养的睾丸多种体细胞,两类细胞分别与可降解生物材料聚羟基乙酸（PGA）纤维复合并进行体外培养,光、电镜观察体外组织形成过程,定期检测培养液内睾酮分泌水平。取体外培养7d细胞-材料复合物,分别移植于去势鼠睾丸鞘膜腔或大网膜内（n=6）,不同时间点取材,通过大体观察、组织学染色和免疫细胞化学方法,检测移植鼠体内雄激素分泌组织的形成过程及血睾酮水平。结果：两类细胞均与PGA具有良好的亲和性,体外可形成具有一定睾酮分泌功能的细胞-材料复合物,体内移植2个月后,两类细胞-材料复合物在大网膜和睾丸鞘膜内均可形成具有一定形态的雄激素分泌组织,再生组织具有良好的血管化。血睾酮检测及统计分析结果表明,移植6周后,单纯Leydig细胞组血睾酮水平为（0．604±0．04）μg/L,共培养细胞组血睾酮水平为（0．854±0．03）μg／L,均明显高于单纯去势鼠血睾酮水平（0．564±0．05）μg/L（P〈0．01）,两组移植鼠相比,共培养细胞移植组血睾酮水平明显高于单纯Leydig细胞移植组（P〈0．01）。结论：以共培养睾丸体细胞作为种子细胞在体内外构建雄激素分泌组织具有可行性,共培养睾丸内体细胞是雄激素分泌组织构建的良好种子细胞。     

大鼠TNF-α对大鼠睾丸Leydig细胞作用的研究

目的 探讨大鼠TNF-α对大鼠Leydig细胞分泌功能的影响。方法 Leydig细胞纯化后进行原代培养。加入不同浓度的大鼠TNF-α(0．1、1、10ng／m1),hCG(50IU／ml)处理。放免方法测定上清液的睾酮含量。结果 TNF-α在0．1、1、10ng／ml浓度时,能够以剂量及时间依赖性地抑制睾丸kydig细胞睾酮的基础分泌及hCG刺激的分泌,差异显著。结论 大鼠TNF-α对睾丸Leydig细胞睾酮的基础分泌及hCG刺激引起的分泌均具有抑制作用。     

睾丸Leydig细胞移植提升老年大鼠血浆睾酮和抗疲劳的研究

目的观察老年大鼠Leydig细胞移植后的血浆睾酮和抗疲劳能力的变化。方法受体鼠为18个月龄的老年鼠60只，分为一次移植组、二次移植组和对照组，每组20只。供体鼠采用90只1个月龄的同种大鼠，经体外细胞培养后取纯化的Leydig细胞行细胞移植。结果老年鼠睾丸呈退行性改变，生精上皮、间质细胞数都显着减少；血浆睾酮下降。Leydig细胞移植后大鼠血浆睾酮明显升高，动物负重游泳试验显示：移植组大鼠游泳时间较对照组延长。结论老年大鼠Leydig细胞移植可以提高血浆睾酮水平，提升大鼠耐缺氧能力，对延缓老年PADAM有一定帮助。     

体外培养的人睾丸间质细胞对绒毛膜促性腺激素刺激的反应

目的：探讨体外培养的人睾九间质(Leydig)细胞对绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激的反应。方法：随机选择人离体睾九20份进行Leydig细胞原代及传代培养，同一人份Leydig细胞分成4组，不同时间用hCG刺激，连续收集培养上清液，用磁性分离免疫酶联测定法测定睾酮含量。结果：原代细胞对首次hCG的刺激反应敏感，连续刺激则睾酮的分泌受抑制，间隔2天再次刺激时虽有反应，但明显减弱。传代后的Leydig细胞对hCG的刺激几乎无反应。结论：原代Leydig细胞对hCG刺激的反应受刺激时间、刺激次数的影响，临床使用hCG治疗时应注意。     

老年大鼠睾丸Leydig细胞移植后血浆睾酮和抗疲劳的观察

目的:观察老年大鼠Leydig细胞移植后的血浆睾酮和抗疲劳能力的变化。方法:受体鼠为18个月龄的老年鼠60只,分为移植一组、移植二组、对照组,每组20只。供体鼠采用90只1月龄的同种大鼠,手术摘取睾丸经体外细胞培养后取纯化的Leydig细胞行细胞移植。结果:老年鼠睾丸呈退行性改变,生精上皮、间质细胞数都显著减少;血浆睾酮下降。Leydig细胞移植后血浆睾酮明显升高,负重游泳试验显示:游泳时间移植组较对照组显著延长。结论:Leydig细胞移植可以提高老年大鼠血浆睾酮水平,提升抗疲劳能力,对延缓中老年男子雄激素部分缺乏综合征有一定帮助。     

ATP50对生长激素诱导大鼠睾丸问质细胞睾酮分泌的影响

目的：研究ATP50在SD大鼠睾丸Leydig细胞中对生长激素（Growth hormone,GH）诱导睾酮合成及生长激素受体功能的影响。方法：采用离体细胞体外孵育法,观察反义ATP50寡脱氧核苷酸（Oligo deoxy nucletides,ODN）对GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的影响及GH受体功能的影响,以睾酮放射免疫试剂盒测定睾酮合成的情况,cAMP放免试剂盒检测cAMP含量来评定GH受体的功能,免疫组织化学检测ATP50蛋白的表达。结果：反义ATP50ODN呈剂量依赖性抑制GH诱导睾丸Leydig细胞睾酮的分泌（P〈0．05）,同时使Leydig细胞中ATP50蛋白表达下降,而无义tat ODN则没有相应的作用,免疫组织化学显示ATP50蛋白阳性颗粒在Leydig细胞中中呈密集性分布,表达强度明显高于GH组（P〈0．05）。结论：在SD大鼠睾丸Leydig细胞中,ATP50可能通过增强GH受体的功能,进而刺激GH诱导睾酮的合成。提示ATP50参与GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞睾酮的分泌过程。     

用Percoll分离的大鼠睾丸间质细胞对绒毛膜促性腺激素刺激的反应

目的:了解用分离液Percoll分离的Leydig细胞对人绒毛膜促性腺激素刺激的反应规律。方法:将大鼠睾丸间质细胞混悬液用不连续梯度(20%～80%)Percoll分离液分离并进行为期5d的培养,观察不同培养时间Leydig对不同剂量hCG刺激的反应。结果:Percoll分离、纯化的Leydig细胞纯度可达80%～85%;随着培养时间的延长,Leydig细胞功能逐渐减低,对hCG刺激反应以培养d1和d2最大;小剂量hCG(1IU/ml)即可使睾酮分泌达到峰值,加大剂量则会抑制细胞分泌睾酮的功能。结论:Percoll分离液能明显的提高Leydig细胞纯度;培养的d1～2为最佳刺激时间,hCG用量以1IU/ml为宜     

胰岛素样生长因子-I和人绒毛膜促性腺激素对成年大鼠Leydig细胞葡萄糖转运蛋白基因表达调控

目的:研究胰岛素样生长因子I(IGF I)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)对成年大鼠睾丸Leydig细胞中葡萄糖转运蛋白(GLUT)基因表达的影响,为进一步探讨Leydig细胞中睾酮的合成、分泌与葡萄糖代谢的关系提供依据。方法:采用改良的Klinefelter方法从成年大鼠睾丸中分离获得Leydig细胞;用反转录聚合酶链技术检测IGF I和hCG对原代培养的Leydig细胞中GLUT基因表达的调控作用。结果:分离得到纯度为98%的大鼠Leydig细胞,并与对照组比较,hCG可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达水平(P<0.001),且此作用具有剂量依赖性与时效性。当在试验组细胞中单独加入IGF I或IGF I和hCG作用于细胞后,发现IGF I(100ng mL)可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达(P<0.01),也可与hCG协同作用显著提高GLUT8基因的mRNA表达,该结果与IGF I(100ng mL)和hCG(10ng mL)能协同作用极显著增加睾酮合成水平(P<0.001)的结果是相吻合的。在大鼠Leydig细胞中,无论10ng mL或100ng mL还是两者同时作用于细胞,都不能影响GLUT1和GLUT3基因的mRNA水平。结论:在成年大鼠Leydig细胞中,IGF I和hCG对细胞中的GLUT8基因表达的调节作用具有特异性,其协同作用能显著提高细胞中GLUT8基因mRNA水平,增强细胞摄取葡萄糖的能力,给细胞提供更多的代谢能源,最终增加Leydig细胞睾酮的合成与分泌。     

电离射辐致大鼠离体Leydig细胞对hCG反应性变化机理的初探

本实验采用幼年雄性大鼠睾丸Leydig细胞离体单层培养法,研究hCG对Leydig细胞睾酮和cAMP生成的影响,并探讨了不同剂量X线对Leydig细胞辐射效应的发生机理。实验结果表明,hCG能明显促进Leydig细胞睾酮和cAMP生成。细胞预培养24h接受不同剂量X线照射,停照后加入外源性hLCG(0.05IU/ml)继续培养48h,小剂量辐射(25～250mGy,剂量率12.5mGy/min)在25,50mGy剂量组引起Leydig细胞对hCG反应性增高,睾酮生成量明显高于对照组,细胞内cAMP含量也发生相应变化;大剂量辐射后(0.5～8.0Gy,剂量率0.5Gy/min),Leydig细胞在各剂量组对hCG反应性均降低,睾酮生成量和cAMP含量变化一致,并与照射剂量呈线性负相关。     

非酶糖基化终末产物介导的ERK1/2信号转导通路在大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌中的作用

目的：探讨非酶糖基化终末产物(AGEs)对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响及其潜在机制。方法首先,原代培养大鼠睾丸间质细胞,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定;其次,MTT法测定不同浓度的AGEs (25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)及200μg/mL BSA作用Leydig细胞后的细胞活力;最后,用不同浓度的AGEs及200μg/mL BSA预处理Leydig细胞12 h,之后更换含相应浓度AGEs或BSA的培养基并加入终浓度为4 U/mL的hCG,其中对照组不含AGEs和BSA,ELISA法和Western blot分别检测睾酮分泌量和p-ERK1/2的表达量。结果 MTT法表明AGEs (≤200μg/mL)对Leydig细胞的活力在本实验所研究的时间内没有影响;ELISA法和Western blot结果显示,不同浓度AGEs处理后,hCG诱导的Leydig细胞睾酮合成量和ERK1/2蛋白的磷酸化都呈现浓度依赖性下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 AGEs通过抑制ERK1/2的磷酸化降低大鼠Leydig cells睾酮的分泌。     

hCG调节原代培养小鼠睾丸Leydig细胞Atrn mRNA和Atrn蛋白的表达及与睾酮分泌的相关性

目的探讨hCG刺激的Leydig细胞睾酮分泌与Atrn mRNA和Atrn蛋白表达的关系。方法将原代培养的Leydig细胞分为5组,分别在培养液中加入0、0．1、1、10、100ng／mLhCG,培养24h后吸取培养液用于测定睾酮分泌量。同时提取细胞mRNA和总蛋白,用实时定量RT—PCR和Westernblot方法分别检测Leydig细胞中AtrnmRNA和Atrn蛋白表达量。结果刺激24h后,与0ng／mLhCG剂量组相比较,0．1,1,10,100ng／mLhCG剂量组睾酮生成量都明显增加,统计学差异较大（P〈0．01）。Leydig细胞AtrnmRNA表达量增加（0．1ng／mLhCG组P〈0．05,其余剂量组P〈0．01）。睾酮生成量与Atrn蛋白表达量（r=0．987,P〈0．01）和AtrnmRNA表达量（r=0．982,P〈0．01）呈正相关。结论原代培养的Leydig细胞在hCG刺激下,睾酮生成量、AtrnmRNA和Atm蛋白表达量都呈现hCG剂量依赖性的增加。     

人骨髓间充质干细胞向Leydig细胞或产类固醇激素细胞体外诱导分化的研究

目的探讨体外诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)向睾丸Leydig细胞分化,并确定诱导条件。方法将分离培养所获得的第3代MSCs细胞经含黄体生成素(LH)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、血小板衍化生长因子(PDGF)及白介素-1α(IL-1α)的诱导液诱导,按诱导液中各因子浓度不同分为A、B、C组和对照组,分别于7d、14d、21d时观察细胞形态变化,并行3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)免疫细胞化学染色和免疫荧光染色,检测各组细胞3β-HSD的表达。以人睾酮ELISA试剂盒检测诱导细胞分泌类固醇的功能情况。结果诱导10～14d后,细胞具有Leydig细胞的形态特点;免疫细胞化学染色及免疫荧光染色显示,本研究条件下,随着诱导液中各因子浓度加大及诱导时间延长,诱导细胞3β-HSD表达阳性数和阳性率逐渐增多,以A组浓度及21d为最佳诱导浓度及时间(P<0.05),并且A组诱导21d分泌睾酮量最高(P<0.05)。结论人骨髓MSCs经体外诱导后可以分化为Leydig细胞或产类固醇细胞。     

芹菜素对雄性大鼠睾丸间质细胞作用机制的研究

目的 研究芹菜素对大鼠睾丸间质细胞(Leydig cells)的作用机制。方法 应用Perooll不连续密度梯度法分离培养大鼠睾丸问质细胞,观察芹菜素对间质细胞睾酮生成的影响。应用MTT方法和流式细胞术观察芹菜素对间质细胞增殖及凋亡的影响。结果 芹菜素作用于大鼠睾丸间质细胞时,以剂量依赖方式使原代培养的大鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌量明显减少。MTT及FCM分析显示芹菜素能促进间质细胞凋亡及抑制增殖。结论 芹菜素能不同程度抑制大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮并促进睾丸间质细胞凋亡及抑制其增殖。