抗酸性同功铁蛋白重组免疫细胞因子的制备及其特性研究

目的构建并表达抗酸性同功铁蛋白(acidicisoferritin,AIF)的免疫细胞因子,并研究其抗肿瘤特性。方法在克隆小鼠趋化因子CXCL10全长基因的基础上,构建抗AIF单链抗体与CXCL10组成的重组免疫细胞因子,并在小鼠骨髓瘤细胞NSO中进行表达;使用流式细胞技术(FCM)和体外细胞趋化试验等方法来研究该重组蛋白的抗肿瘤特性。结果重组免疫细胞因子(IP10scFv)真核表达产物的相对分子质量(Mr)约为41.1×103,纯化后的蛋白浓度为68mgL,抗体亲和常数(KDIP10scFv)为2.28×10-8molL。IP10scFv能够特异识别分泌AIF的SMMC7721细胞,并能与激活后的小鼠T淋巴细胞表面CXCR3受体特异性结合,对小鼠激活的T淋巴细胞有较强的趋化作用。结论成功地制备了抗AIF单链抗体与趋化因子CXCL10构成的重组免疫细胞因子,该免疫细胞因子是肿瘤治疗的潜在制剂。     

抗人胎盘酸性铁蛋白McAb的制备及其鉴定

本文应用人胎盘酸性铁蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经细胞融合制备出３株抗人胎盘酸性铁蛋白（ＰＡＦ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测证明，此单抗对人胎盘酸性铁蛋白的酸性部分反应较强，而与碱性部分反应较弱；间接免疫荧光法检测此单抗与体外培养的肝癌细胞株７７２１起反应，而与白血病细胞株Ｄａｕｄｉ、肺癌细胞株９２６，以及外周血单个核细胞均不起反应。     

抗人胎盘酸性铁蛋白McAb的制备及其鉴定

本文应用人胎盘酸性铁蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经细胞融合制备出３株抗人胎盘酸性铁蛋白（ＰＡＦ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测证明，此单抗对人胎盘酸性铁蛋白的酸性部分反应较强，而与碱性部分反应较弱；间接免疫荧光法检测此单机与体外培养的肝癌细胞株７７２１起反应，而与白血病细胞株Ｄａｕｄｉ、肺癌细胞株９２６，以及外周血单个核细胞均不起反应。     

小鼠胸腺基质细胞单克隆抗体PF18—3的特性研究

用免疫组织化学及流式细胞计(FACS)对抗小鼠胸腺基质细胞(Thymic stromal cells,TSC)的单克隆抗体PF18-3进行了系统研究。免疫组织化学结果:PF18-3与小鼠胸腺髓质TSC和皮质胸腺细胞呈阳性反应;FACS分析显示,在活细胞染色时,PF18-3不能与膜表面分子结合,经甲醛固定丙酮增加细胞膜通透性后才能使各免疫细胞亚群呈阳性反应,固定后细胞染色结果为:胸腺细胞中,PF18-3~ 细胞为84.4％;在分离的CD4~-8~-、CD4~ 8~-、CD4~-8~ 胸腺细胞中,PF18-3~ 细胞分别为2％,69.3％,62％;在脾、颌下淋巴结、外周血淋巴细胞中,PF18-3~ 细胞分别为37.9％,51.5％,26.7％;PF18-3~ CD3~ 双阳性细胞在总T淋巴细胞中分别占54.6％,59.8％,20.2％;PF18-3~ B220~ 细胞在总B细胞中分别占35.1％,38.1％,37.6％;PF18-3对大部分巨噬细胞(71.6％)和极少数粒细胞(6.1％)也呈阳性反应。以上结果说明PF18-3识别的抗原主要分布于胸腺基质细胞膜表面和胸腺及外周免疫细胞的胞浆。提示它可能介导了TSC诱导的T细胞发育;可能也参与了免疫反应中不同种类细胞间的相互作用。     

抗人乳腺癌单克隆抗体BG6的免疫组织化学研究

Paraffin sections from a series of human tissues were examined by an indirect immunoperoxidase method with BG6 antibody. Data showed that primary breast cancer (96%) or lymph nodes with metastatic tumors (94%) gave positive result with BG6 antibody. Weak staining was observed in some sections of nonbreast tumors and no evidence of positive immunoperoxidase staining was obtained in benign breast hyperplasia, normal tissues and embryonic tissues examined. It is considered that McAb BG6 might be used as a specific marker for breast cancer.     

晚期妊娠时酸性铁蛋白和甘胆酸的变化

晚期妊娠时酸性铁蛋白和甘胆酸的变化刘俊驰，杜素君我们观察５７例晚期妊娠妇女体内ＡＩＦ（酸性铁蛋白），ＣＧ（甘胆酸）浓度变化，并对晚期妊娠与ＡＩＦ，ＣＧ关系进行了探讨。本院妇产科晚期妊娠（３２～４０周孕）妇女５７例，经Ｂ超，超声心动图，肝功试验，甲状腺...     

酸性铁蛋白放免测定中溶血干扰的排除

通过对男、女不同程度溶血标本中ＡＩＦ、Ｈｂ值的测定，找到两者间的相关关系并求回归方程。据此方程估算溶血造成的ＡＩＦ增加值，从而对溶血血清中的ＡＩＦ值进行校正。通过对４０例男性、３０例女性血清标本的测定分析发现：溶血前后血清中ＡＩＦ值差异显著（Ｐ＜０．０１），校正后的ＡＩＦ值同溶血前无显著差异（Ｐ＞０．０５），说明溶血对ＡＩＦ测定确有干扰。此方法对排除这一干扰有显著效果     

血清酸性铁蛋白测定对肝癌诊断价值的探讨

血清酸性铁蛋白测定对肝癌诊断价值的探讨段永强，卓汉宁人酸性铁蛋白（ａｃｉｄｉｃｉｓｏｆｅｒｒｉｔｉｎＡＩＦ）是铁蛋白的一种异构体，存在于肝癌组织和心肌细胞内。免疫组织化学发现正常肝组织富含硷性铁蛋白（是ＳＦ的另一种异构体），而肝癌组织内ＡＦ含量明显升...     

抗AIF单链抗体在大肠杆菌中的可溶性表达和鉴定

目的:获得具有生物活性的抗酸性同功铁蛋白(AIF)单链抗体(scFv)。方法:将AIF4c9scFv基因亚克隆于原核表达载体pPOW3,构建重组表达质粒pPOW4c9,电转化大肠杆菌DH5α,以温度诱导重组抗AIFscFv表达,经镍螯合层析柱纯化后,用ELISA和Westernblot检测表达蛋白与AIF的结合特性。结果:抗AIFscFv抗体在大肠杆菌中获得可溶性表达,亲和力常数KD为3.18×10-8mol/L;纯化后的可溶性AIFscFv含量约为1.6mg/L。重组蛋白能特异识别AIF,并且具有良好的抗体生物学活性。结论:在大肠杆菌中表达并纯化了特异性可溶性抗AIFscFv抗体。     

抗人心肌单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步研究

本文以人心肌抗原免疫BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获2株(2F_1和1F_6)分泌抗人心肌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。免疫印迹试验证明,细胞培养上清及小鼠腹水中的特异性抗体均能与分子量为55KD蛋白带结合。抗原阻断试验结果,证明获得的两株单抗是人心肌抗原特异的。染色体数分别为102条和96条。1F_6和2F_1的Ig亚类型均为IgG_1。间接免疫荧光呈肌束膜型,ABC免疫组化显示肌束膜和肌原型(胞浆)。     

大鼠DC单抗应用于移植排斥反应的初步研究

应用ＷＺＤ１－４细胞株分泌的抗大鼠树突状细胞单克隆抗体作微量细胞毒性试验。考察其对大鼠树突状细胞的特异性杀伤作用；并采用ＷＺＤ１单克隆抗体连续给大鼠体内注射。然后作用同种异体皮肤移植后观察移植皮片的存活时间。结果表明ＷＺＤ１－５单抗对大鼠ＤＣ呈现较高的特异性杀伤活性。杀伤率在６９．３％－７５．３％。ＷＺＤ１单抗能有效地延长移植皮片的存活时间，平均存活时间为１６．６ｄ（对照组平衡为４．６ｄ．ｐ＜０．     

两株鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步研究

目的　研制鼠抗人GL5 0分子单克隆抗体并对其生物学特性进行初步研究。方法　以天然高表达人GL5 0分子的Daudi细胞为免疫原 ,人GL5 0 L92 9转基因细胞为目的单克隆抗体(McAb)的筛选细胞 ,采用B淋巴细胞杂交瘤技术 ,获得分泌特异性鼠抗人GL5 0分子McAb的杂交瘤细胞株 ;免疫荧光标记和流式细胞术分析McAb识别GL5 0的表达 ;Westernblot检测抗体对特异性细胞膜蛋白的识别 ;台盼蓝 (Trypanblue)染色细胞计数法和MTT法检测McAb对Daudi细胞体外生长的抑制作用 ;3 H TdR法检测抗体对GL5 0 L转基因细胞介导的活化T细胞体外增殖的效应。结果　成功制备 2株分泌特异性抗人GL5 0抗体的杂交瘤细胞株 12B11和 11C4 ;两者皆为IgG2a亚型 ;腹水效价皆在 1∶10 0 0以上 ;12B11、11C4特异性地识别GL5 0分子。 11C4McAb可以明显抑制Daudi细胞在体外的生长 ,并可抑制GL5 0 L转基因细胞介导的活化T淋巴细胞的体外增殖效应。结论　成功获得了 2株特异性鼠抗人GL5 0抗体 ,其中 11C4McAb具有诱导表达GL5 0分子的B淋巴瘤细胞Daudi的体外生长抑制作用 ;在T淋巴细胞体外增殖反应中发挥了重要的调节作用。     

小鼠胸腺基质细胞单抗对胸腺细胞及脾细胞增殖的抑制作用

试验两种大鼠抗小鼠胸腺基质细胞（ＭＴＳＣ）ＭｃＡｂｓＰｆ１８－３、Ｒｓ２１－Ｃ６的生物作用。Ｐｆ１８－３ＭｃＡｂ识别分子表达于胸腺细胞、脾脏Ｔ及Ｂ细胞；Ｒｓ２１－Ｃ６只表达于ＭＴＳＣ。加Ｐｆ１８－３或Ｒｓ２１－Ｃ６于ＭＴＥＣＩ与胸腺细胞或脾细胞的体外培养中，在ＣｏｎＡ存在及不存在下，均可抑制ＭＴＥＣ１诱导胸腺细胞及脾细胞的增殖作用。ＣｏｎＡ活化下，其对胸腺细胞增殖的抑制率Ｐｆ１８－３为９６％；Ｒｓ２１－Ｃ６为９１％。对脾细胞的抑制率Ｐｆ１８－３为７５％；Ｒｓ２１－Ｃ６为５１％。Ｐｆ１８－３对单纯ＣｏｎＡ活化的胸腺细胞增殖也有显著的抑制作用，而Ｒｓ２１－Ｃ６无此作用。包被于平皿的固相Ｐｆ１８－３ＭｃＡｂ，对胸腺细胞、脾细胞均有轻度但显著的促增殖作用。故Ｐｆ１８－３ＭｃＡｂ识别的抗原分子（及其配基）参与Ｔ细胞的活化过程。鉴于Ｐｆ１８－３＋细胞的分布有其特异性，分析此抗原分子的功能有重要的意义。     

gp130单克隆抗体B-S12的生物学特性研究

研究ｇｐ３０单克隆抗体Ｂ－Ｓ１２的生学特性。方法用细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入的方法观察人多发性骨髓瘤细胞株ＸＧ－１和ＸＧ－２在抗ｇｐ１３０的单抗Ｂ－Ｓ１２与它们的Ｆａｂ片段和Ｆ（ａｂ’）２片段作用下，细胞增殖和生长情况；此外，也观察ｇｐ１３０单抗Ｂ－Ｐ８以及ＩＬ－６和ＩＬ－６Ｒ单抗Ｂ－Ｅ８和Ｂ－Ｒ６对Ｂ－Ｓ１２单抗在这２个细胞株上作用的影响。结果Ｂ－Ｓ１２可刺激ＸＧ－１和ＸＧ－２细胞增殖，并维持     

抗人肝癌免疫毫微粒的制备及体外免疫学性质的鉴定

目的 构建人肝癌特异的免疫毫微粒,探讨免疫微粒体外对靶细胞的特异性结合特性及杀伤性活。方法 采用异型双功能交联剂ＳＰＤＰ将人肝癌单抗ＨＡｂ１８与载米托蒽醌的白蛋白毫微粒化学偶联,构建人肝特异的免疫毫微粒;采用玻片凝集试验,免疫荧光法及荧光染色阻断法,花环形成实验及花环形成阻断实验,扫描电镜,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验证明抗体与载药毫微粒偶联及免疫毫微粒能特异性结合并杀伤靶细胞ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌株     

丙型肝炎患者肾小球病变的观察

为了明确丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染与肾脏疾病的关系，采用免疫组化技术和抗－ＨＣＶＮＳ３和抗－ＨＣＶＮＳ５单克隆抗体，检测了２１例丙肝患尸解肾组织中的ＨＣＡｇ，结果１３例阳性（６１．９％），其中１１例为膜增殖性肾炎（ＭＰＧＮ），１例为系膜增殖性肾炎（ＭｓＰＧＮ），１例肾组织大致正常。８例ＨＣＡｇ检测阴性，其中膜性肾病（ＭＮ）１例，膜增殖性肾炎２例，毛细血管内增殖性肾炎１例，余４例肾组织未见明显异常。与乙型肝炎对照组（３３．０％）相比，丙肝患者肾脏病变更为多见，形态多样，以ＭＰＧＮ为主。同时对丙肝患者有肾脏病变者的临床资料进行了分析，病人可表现为高血压，蛋白尿，血尿及早期血清尿素氮（ＢＵＮ）增高，因此认为同乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染后相同，也存在着丙肝相关性肾炎     

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白单克隆抗体2H4的纯化及其免疫学特性研究

目的 纯化抗沙眼衣原体pORF5单克隆抗体2H4并鉴定其免疫学特性.方法 大量培养pORF5单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株并收集培养上清,采用G蛋白免疫亲和层析法纯化2H4单克隆抗体;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定2H4效价及抗体亚类;Western blot鉴定其特异性;免疫荧光试验(IFA)检测2H4单克隆抗体的衣原体种属特异性.结果 纯化后2H4抗体的纯度高达93％;效价为1:1024,免疫球蛋白类型为IgG2a;2H4抗体不仅能特异性识别pORF5融合蛋白,而且能特异性识别Ct血清型A、D、L2、鼠农原体(MoPn)、鹦鹉热嗜农原体(6BC)质粒所编码的内源性pORF5蛋白,但不识别衣原体其他质粒蛋白和肺炎嗜衣原体(Cpn).结论 获得了高纯度的能特异识别pORF5质粒蛋白的单克隆抗体,为进一步研究pORF5蛋白结构和功能以及沙眼衣原体诊断试剂盒的研制奠定了良好的基础.