去分化肌肉干细胞神经分化潜能的探讨

目的探讨去分化肌肉干细胞经条件培养诱导,具有神经干细胞性质并分化为终末神经细胞的潜能。方法依次用神经干细胞增殖及神经细胞分化条件培养基,对去分化肌肉干细胞进行体外诱导,促使其向神经干细胞转变以及向终末神经细胞分化,并通过形态学、免疫细胞化学、RT-PCR等实验手段研究其性质并加以鉴定。结果 (1)去分化肌肉干细胞在神经干细胞增殖条件培养基诱导下,可形成神经球,EdU标记阳性,抗Nestin、Neurofilament-m(NFm)、GFAP、CNPase阳性;Myogenin表达水平下调,而Nestin、Sca-1表达上调;(2)经神经细胞分化条件培养基诱导,神经球细胞可分化为形态学上典型的、抗NFm阳性神经元,以及抗GFAP、CNPase阳性神经胶质细胞。结论去分化肌肉干细胞具有神经系的多分化潜能。     

碱性成纤维细胞因子对SD大鼠表皮干细胞分化为神经干细胞的影响

目的 研究碱性成纤维细胞因子(bFGF)对大鼠表皮干细胞分化为神经细胞的影响。 方法 分离获得饲养了1~3天的新生SD大鼠表皮基底层组织,利用10 min快速贴壁法消化、分离获得表皮干细胞,于倒置显微镜下观察表皮干细胞的形态。培养表皮干细胞的培养基为K-SFM,然后按照不同密度表皮干细胞进行分组处理(0.1×10⁷/mL,0.3×10⁷/mL,0.5×10⁷/mL,0.1×10⁶/mL),每组加入20 ng/mL的bFGF,利用细胞免疫组织化学法检测细胞标志物Nestin和NSE的变化,以及观察细胞形态发生的变化。 结果 成功分离得到SD大鼠表皮干细胞;bFGF诱导后,0.3×10⁷/mL组和0.1×10⁷/mL组细胞第3天即可见细胞开始伸展生长,在约1周时细胞开始分化成神经细胞;且在细胞形态发生双极化改变的数目趋势上也具有一致性;Nestin和NSE检测均呈阳性表达。     

共移植体对神经干细胞向神经元分化的影响

目的:探讨共移植体所构成的微环境对神经干细胞移植后向神经元分化的影响。方法:48只同一基因背景的Wistar大鼠,随机分为:NSCs移植组,共移植体移植组。在新生的同一基因背景鼠海马取神经干细胞和大脑皮质取血管内皮细胞,把单独NSCs和共移植体移植入同一基因背景大鼠MCAO造模后24h缺血半暗带区,Brdu标记其中NSCs,利用免疫荧光双标于3d,7d,14d,60d分别观察NSCs向神经元分化情况。结果:在7d,14d,60d三个时间点神经干细胞向神经元分化中,共移植体组神经元分化率高于NSCs组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:共移植体对移植入MCAO模型大鼠的NSCs向神经元分化有促进作用。     

神经干细胞诱导分化调控新进展

长期以来 ,人们认为中枢神经细胞是终末分化的细胞 ,近年已经从胚胎及成年中枢神经系统不同部位分离出并证实了神经干细胞的存在。神经干细胞具有以下两个基本特性 :(1 )自我复制能力 ;(2 )多向分化潜能。神经干细胞的发现彻底改变了以往认为中枢神经系统神经元不能再生的认识 ,还为从事神经损伤修复的研究者提供了一种新的治疗策略。但神经干细胞的临床应用目前尚有时日 ,这期间首要解决的难题便是如何控制神经干细胞的定向分化。目前 ,神经干细胞增殖、分化的机制的研究已成为世界神经科学界关注的热点。本文简介 2 0 0 1年在美国圣地亚哥…     

神经鞘糖脂生物合成抑制剂D-PDMP对神经干细胞增殖、分化能力的影响

目的探讨神经鞘糖脂生物合成抑制剂DPDMP对神经干细胞增殖和分化能力的影响。方法用不同浓度的DPDMP处理体外培养的神经干细胞,通过神经球直径大小和数量、细胞计数、MTT分析和诱导分化实验,评价其对神经干细胞增殖和分化能力的影响。结果经DPDMP处理后培养的神经球减小,细胞计数和MTT分析都表明细胞增殖能力明显受到抑制,较高DPDMP浓度可导致神经干细胞死亡;神经干细胞的诱导分化能力也明显减弱,分化的细胞数较少,但仍可诱导成神经元和星形胶质细胞。结论神经鞘糖脂生物合成抑制剂DPDMP能抑制体外培养的神经干细胞增殖,甚至导致细胞死亡,并可减弱神经干细胞的诱导分化能力。     

冬虫夏草含药血清诱导神经干细胞分化的研究

目的:研究神经干细胞具有自我更新、未分化和多向分化潜能,冬虫夏草中的氨基酸,核苷和糖蛋白等能诱导神经干细胞的定向分化.方法:取新生24h内的wistar仔鼠海马区分离培养神经干细胞三代后,加入低,中,高浓度冬虫夏草含药血清与对照血清进行培养,观察其对神经干细胞影响,免疫组化法检测神经干细胞向神经元分化的情况.结果:新生...     

电针刺激促进神经干细胞的增殖和分化

神经系统疾病致不可逆神经元死亡一直是医学难题,如何改善患者的神经功能,为该领域的攻克重点。近年来研究表明,神经系统并非不可再生,具有分裂分化潜能的内源性神经干细胞(eNSC)大量存在于成年中枢神经系统(CNS)中,平时处于静止状态,在病理状态下如缺氧、损伤时,eNSC可能被激活,进一步增殖和分化,参与神经系统的修复。传统医学中国针灸在治疗神经系统疾病尤其是神经系统的损伤上有着独特的优势,其治疗机制在分子生物学研究上尚不清楚,是否能够促进eNSC的增殖和分化,尚需进一步的研究。     

神经营养素对培养的新生大鼠神经干细胞分化的影响

为了了解不同神经营养因子对体外培养不同时间的大鼠脑神经干细胞(NSCs，Neural stem cells)分化的影响，采用BDNF、GDNF、CNTF、NGF和PDGF，以及腺苷酸环化酶激动剂forskolin等对新生大鼠脑神经干细胞进行诱导。研究发现，BNDF、GDNF、CNTF对体外培养3个月内的NSCs分化为神经元均有不同程度的作用，其     

EGB对大鼠神经干细胞分化为星形胶质样细胞的影响

目的：观察银杏叶提取物（EGB）对大鼠海马神经干细胞（NSCs）增殖及分化为星形胶质样细胞的影响。方法：取新生24h内的Wistar大鼠海马组织的细胞进行体外培养，1周后将其接种在培养板中．观察不同浓度的EGB对细胞的生长作用．并检测胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果：各实验组NSCs的生长明显好于对照组．免疫细胞化学显示：同一时间内，诱导NSCs分化为星形胶质样细胞的百分率增高；同一浓度的EGB，诱导神经干细胞分化为星形胶质样细胞的百分率随着时间的延长呈上升的趋势。结论：EGB能促进神经干细胞的存活、增殖及向星型胶质样细胞的方向分化。     

新生小鼠神经干细胞体外培养、分化及鉴定

目的 简化神经干细胞原代培养的取材及步骤,明确体外定向诱导分化条件,为进一步神经干细胞移植相关实验提供基础条件。方法 新生24 h昆明种小鼠无菌条件下冰上取大脑组织,经机械分离加胰酶消化吹打后,加入含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子和B27的DMEM/F12培养基中培养;加入不同浓度胎牛血清诱导其分化,应用免疫荧光技术行巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、微管相关蛋白2染色,对培养细胞鉴定。结果 新生小鼠提取神经干细胞可形成神经球,并稳定增殖传代,经诱导可定向分化为神经元及星形胶质细胞。结论 新生小鼠较胎鼠取材简单,可培养高质量神经干细胞,血清浓度同向星型胶质细胞方向的分化概率呈正相关。     

不同细胞外基质对神经干细胞分化影响的实验研究

目的:通过观察不同的细胞外基质对神经干细胞(NSCs)分化的影响,寻找促使NSCs向神经元分化的最佳细胞外基质,为NSCs定向分化培养及NSCs共移植体的构建提供实验依据。方法:利用无血清培养和细胞克隆培养技术,从新生大鼠海马分离NSCs,进行体外扩增、悬浮培养、传代;将层粘连蛋白(LN)、Matrigel、多聚赖氨酸与NSCs贴壁混合培养14d;采用免疫细胞化学和免疫荧光技术,观察NSCs的分化情况。结果:通过上述实验表明,在利用不同的细胞外基质混合培养时,LN组MAP2阳性细胞数明显高于其它两组;多聚赖氨酸组和Matrigel组GFAP阳性细胞数明显高于LN组。结论:LN有助于NSCs向神经元定向分化,是NSCs共移植体较理想的细胞外基质。     

红景天苷对神经干细胞作用的研究

目的:观察红景天苷药物血清对新生大鼠海马神经干细胞分化为神经元的影响。方法:从新生24h内的W istar大鼠脑中分离扩增获得大量神经干细胞后,加入低、中、高剂量的红景天苷药物血清,观察其对神经干细胞分化为神经元的影响,并通过免疫细胞化学染色检测神经干细胞分化为神经元的状况。结果:低、中、高剂量的红景天苷药物血清组单位视野内神经元特异烯醇化酶(N SE)阳性细胞个数与对照组相比有显著差异(P<0.01),并呈一定的剂量依赖性。结论:红景天苷药物血清在体外可促进神经干细胞向神经元方向分化,为红景天药物应用于相关神经系统疾病的临床治疗提供了试验依据。     

全反式视黄酸促进胚胎神经干细胞诱导分化的研究

目的本研究观察全反式视黄酸（atRA）对于体外分离培养的胚胎神经干细胞（ENSCs）生长增殖和诱导分化的作用及其可能的分子机制。方法分离培养孕15dSD大鼠（E15 d SD Rattus）海马回ENSCs,采用不同组合成分的神经干细胞培养基培养ENSCs,利用MTF法检测其对于ENSCs存活和增殖的影响;采用不同组合成分的神经细胞诱导分化培养基培养ENSCs,利用细胞免疫荧光染色法鉴定ENSCs及atRA对于其诱导分化的影响。结果MTT实验结果表明,atRA^＋组、atRA^-组和DMSO组均出现ENSCs的增殖效果,而对照组则没有明显的增殖现象,其中atRA^-组最明显,DMSO组次之,atRA^＋组最弱。AtRA^＋组与atRA^-的ENSCs经过诱导分化后产生的神经细胞类型有较明显差异,并且atRA组处理产生的神经元是对照组的3倍左右。结论atRA能够抑制ENSCs的增殖,并且抵消神经生长因子对于ENSCs的促进有丝分裂作用,atRA还可以促进ENSCs定向诱导分化为神经元。     

BFGF、EGF联合应用对新生大鼠海马神干细胞分化的影响

目的:探讨EGF和bFGF联合应用后对新生大鼠海马神经干细胞增殖分化的影响。方法:联合应用EGF和bFGF培养海马神经干细胞及诱导贴壁的细胞分化,并用免疫细胞化学技术研究神经干细胞的分化情况。结果:bFGF和EGF联合应用可以明显扩增海马神经干细胞,并诱导细胞向神经元和星形胶质细胞分化。结论:bFGF和EGF除了具有促神经干细胞有丝分裂作用外,还可以诱导神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化。     

Survival and differentiation of transplanted neural stem cells in mice brain with MPTP-induced Parkinson disease

AIM: To determine survival and differentiation of cultured neural stem cells (NSCs) into viable and functional neurons upon transplantation into mice brain of MPTP-induced Parkinson disease (PD). METHODS: Mouse model of PD was established with two subcutaneous (sc) injections of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP, 40 mg/kg) twice, 16h apart. NSCs isolated from rat embryo midbrain were cultured in clonal density. After labeled with 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU), the NSCs were transplanted into the uni-or bi-lateral striatum of PD mouse. Tyrosine hydroxylase (TH) immunofluorescence was used to evaluate the toxicity of MPTP on the neural cells in the substantia nigra. Immunohistology and laser confocal microscope were used to detect the survival and differentiation of transplanted NSCs. RESULTS: The cultured NSCs generated neurospheres and differentiated into neuron and astrocyte. It indicated that the cultured NSCs were multipotent and self-renewal in vitro. TH-positive neural cells were     

Effect of lead on proliferation and neural differentiation of mouse bone marrow-mesenchymal stem cells

Bone marrow-mesenchymal stem cells (MSCs) are considered to be an ideal source of stem cells for assessing the effects of environmental toxins on the proliferation, multipotency and differentiation of adult stem cells. The aim of this study was to investigate the effect of lead on the proliferation and neuronal differentiation of murine MSCs. MTT assay used in this study revealed that while the proliferation of MSCs is sensitive to higher than 10 μM lead, a 50% reduction in the rate of their proliferation can be achieved in the presence of 60 μM lead. The results of immunocytochemistry and RT–PCR showed that β-mercaptoethanol induced-neuronal differentiation is also reduced after the treatment of MSCs by 60 μM lead. Furthermore, the comet assay analysis of MSCs showed a substantial increase in DNA damage in the lead treated cells compared to the control. In conclusion our results revealed for the first time that lead is not only cytotoxic to the survival and proliferation of MSCs but also inhibits their differentiation to neurons in a dose-dependant manner. Therefore, MSCs appear to be an alternative method for assessing the cytotoxic effects of such environmental hazards.     

脑缺血大鼠脑脊液对神经干细胞存活及分化的影响

目的：探讨脑缺血大鼠脑脊液对新生大鼠海马神经干细胞生存及分化的影响。方法：将脑缺血大鼠脑脊液加入神经干细胞的培养液中，观察神经干细胞存活及贴壁细胞团的分化．并应用免疫细胞化学技术对神经干细胞分化情况进行鉴定。结果：悬浮培养细胞实验组较对照组有明显差异；贴壁培养细胞分化的细胞数量较对照组明显增多。结论：脑缺血大鼠脑脊液可促进体外培养神经干细胞存活，并且促进神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化。     

原儿茶酸调节神经干/祖细胞分化的作用研究

目的观察原儿茶酸调节体外培养的神经干/祖细胞分化及对细胞分化显型的保护作用。方法神经干/祖细胞取自胚胎14 d小鼠海马组织,以单层贴壁方式培养。免疫荧光染色标记分化的细胞,CCK-8试剂盒检测细胞的生存力,流式细胞仪分析凋亡细胞。结果原儿茶酸单独使用不能诱导神经干/祖细胞的分化,但与1%胎牛血清的联合应用时,原儿茶酸(0.06 mmol.L-1)有效地提高神经元的分化比例,介导神经元的成熟并促进突触的伸长;另一方面,原儿茶酸明显提高了分化显型的生存力并抑制了细胞凋亡,同时激活了细胞内源性的抗氧化酶系统。结论原儿茶酸能够有效地促进神经干/祖细胞分化为神经元的比例并提高细胞分化显型的生存力。     

不同局部麻醉药对人脂肪间充质干细胞凋亡及成骨分化的影响

目的 探讨不同局部麻醉药对人脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的凋亡及向成骨方向分化的影响.方法 应用差速贴壁法对人ADMSCs原代培养,鉴定第3代ADMSCs表面抗原CD29、CD105表达,并检测其成脂和成心肌分化能力.将第3代ADMSC,细胞分为4组,3实验组分别加入终浓度为200 mg/L的利多卡因、罗哌卡因和布比卡因干预ADMSCs,对照组加入普通DMEM低糖培养基.分别应用PI-Hoechst33342和茜素红染色法检测各组ADMSCs凋亡率和成骨细胞分化率.结果 经不同局麻药干预3、5、7d后,对照组的细胞凋亡率分别为(10.2±3.5)％、(12.4±3.6)％、(16.9±3.9)％,布比卡因组分别为(15.3±2.8)％、(23.6±3.8)％、(27.4±4.6)％,利多卡因组分别为(31.8±4.2)％、(42.4±5.5)％、(61.6±6.9)％,罗哌卡因分别为(34.8±5.9)％、(43.2±6.8)％、(64.9±5.8)％.利多卡因和罗哌卡因组在不同时点的细胞凋亡数量均明显高于对照组(均P＜0.05),而且也明显高于布比卡因组(均P＜0.05).结论 利多卡因、罗哌卡因能增加ADMSCs细胞凋亡比例,但布比卡因可抑制ADMSC凋亡.