结直肠肿瘤细胞球的干细胞相关特性研究

目的:无血清悬浮培养生成5种人结直肠肿瘤细胞球,体外稳定传代培养,研究其在体外增殖、分化及转移等生物学特性.方法:人结直肠癌细胞SW480、SW620、LOVO、HT29和HCT116在添加了细胞生长因子的无血清培养基(Serum-free medium,SFM)中悬浮培养,稳定传代并诱导分化.选择其中HCT116细胞...     

磷脂酸磷酸酶2域1A在不同结直肠癌细胞中的表达

目的探讨磷脂酸磷酸酶2域1A(PPAPDC1A)在人结直肠癌细胞中的表达及意义。方法取结直肠癌细胞系高转移潜能细胞LOVO、SW620和低转移潜能细胞SW480、RKO、HCT116、DLD-1进行常规培养,待细胞生长至对数生长期时,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测不同结直肠癌细胞中PPAPDC1A mRNA表达,Western blot检测不同结直肠癌细胞中PPAPDC1A蛋白表达。结果 6种人结直肠癌细胞中PPAPDC1A mRNA和蛋白表达比较差异均有统计学意义(F=41.213、344.116,P<0.05)。高转移潜能细胞LOVO、SW620中PPAPDC1A mRNA和蛋白表达显著高于DLD-1、HCT116、RKO、SW480细胞(P<0.05);高转移潜能细胞LOVO中PPAPDC1A蛋白表达显著高于SW620细胞(P<0.05);DLD-1细胞中PPAPDC1A蛋白表达显著高于HCT116、RKO、SW480细胞(P<0.05);低转移潜能细胞HCT116中PPAPDC1A蛋白表达显著高于RKO、SW480细胞(P<0.05);RKO细胞中PPAPDC1A蛋白表达显著高于SW480细胞(P<0.05)。高转移潜能细胞LOVO与SW620细胞中PPAPDC1A mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05);SW480、RKO、HCT116、DLD-1细胞中PPAPDC1A mRNA表达两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PPAPDC1A在结直肠癌细胞系中存在差异性表达,其可能与结直肠癌的侵袭和转移有关。     

人结直肠癌干细胞微球体培养及鉴定

目的 探索结直肠癌细胞系干细胞微球体培养方法,并对Colo205细胞微球体是否具有肿瘤干细胞特性进行鉴定.方法 结直肠癌Lovo、Colo205及SW480细胞在含生长因子无血清培养基(SFM)中悬浮培养.流式细胞术、裸鼠成瘤实验、Transwell小室实验分别检测Colo205细胞及其微球体表面标记分子CD133、CD44表达,体内成瘤能力和体外侵袭能力.微球体细胞在含血清培养基中贴壁培养后流式检测CD44分子表达变化.RT-PCR分析Colo205细胞及其微球体CD44、Musashi-1及Oct4 mRNA的表达.结果 3种细胞系均能在特殊配制的SFM中形成可以稳定传代的微球体,SFM新鲜配制、用细胞分离剂Accutase替代胰酶传代以及保持细胞的悬浮状态均有利于微球体的形成和增殖.Colo205微球体中CD44+细胞比例显著增多,贴壁分化后逐渐减少至与Colo205细胞无明显差异.与Colo205细胞相比,微球体具有更强的侵袭能力和体内成瘤能力,并高表达干细胞标记分子Musashi-1及Oct4 mRNA.结论 利用特制SFM悬浮培养可得到结直肠癌细胞系微球体,这种微球体富集了肿瘤干细胞.     

亚硒酸钠对结直肠癌HCT 116和SW480细胞中β-catenin及下游靶基因cyclin D1表达的影响

目的研究亚硒酸钠对结直肠癌HCT116和SW480细胞中β-catenin及下游靶基因cyclin D1表达的影响。方法采用10μmol/L亚硒酸钠处理HCT116和SW480细胞,Western blot及RT-PCR检测亚硒酸钠处理后不同时间HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1的表达情况,并观察蛋白酶体抑制剂MG132预处理后对HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1表达的影响。采用免疫共沉淀方法检测亚硒酸钠对HCT116和SW480细胞中β-catenin与T细胞因子4(TCF4)相互作用的影响。结果亚硒酸钠可降低HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1的表达水平,用蛋白酶体抑制剂MG132预处理可增加亚硒酸钠处理后HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1的表达水平。免疫共沉淀实验结果显示,亚硒酸钠能破坏β-catenin与TCF4间的相互作用。结论亚硒酸钠可降低结直肠癌HCT116和SW480细胞中β-catenin及cyclin D1的表达水平,蛋白酶体介导的降解途径可能在这一过程中发...     

无血清悬浮培养舌鳞癌Tca8113细胞系及肿瘤干细胞样亚群筛选

目的:比较有血清培养基(Serum-supplemented medium,SSM)培养的细胞中和无血清培养基(Serum-free medium,SFM)培养的肿瘤干细胞球体中肿瘤干细胞样亚群的比例,以期获得较好富集肿瘤干细胞的方法.方法:SFM培养细胞,观察形成肿瘤干细胞球过程中的细胞形态;更换培养基为SSM诱导其...     

无血清培养法分选舌癌侧群细胞及其特性的鉴定

目的探索人舌鳞癌细胞株Tca8113中侧群细胞的分选方法。方法利用流式细胞仪分选传统含血清培养方法获得的人舌鳞癌细胞系Tca8113中的侧群细胞(SP),并与无血清培养方法分离出的侧群细胞(TSC-SP)进行形态学比较和平板形成克隆实验及成瘤实验的比较,富集并验证肿瘤干细胞相关亚群。结果人舌癌细胞系Tca8113中SP细胞的含量为0.2%,而Tca8113细胞系的细胞在无血清培养基中能够成活,3~5 d后增殖并形成悬浮的肿瘤干细胞球,并随着培养时间的延长而肿瘤干细胞球体积增大和更加致密;而应用无血清悬浮法培养的Tca8113细胞系中TSC-SP细胞的含量为0.4%;SP与TSC-SP细胞在平板形成克隆实验的形成率均为100%;接种16 d后,104、105数量级的TSC-SP和SP接种裸鼠背部均出现瘤体。结论人舌鳞癌细胞系Tca8113中含极少量的SP细胞,利用无血清培养基可以达到富集肿瘤干细胞亚群的目的。     

乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群初步研究

目的:检测不同乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群含量,并探讨使乳腺癌细胞系MCF-7中肿瘤干细胞相关亚群富集的方法.方法:利用流式细胞仪检测3种乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s中SP细胞(side population cells)比例及CD44 CD24-/low细胞比例.用Percoll不连续密度梯度法分离MCF-7细胞亚群,利用流式细胞仪筛选出SP细胞富集的亚群.用添加生长因子的无血清培养液培养MCF-7,检测其中CD44 CD24-/low细胞的比例.结果:MCF-7、MDA-MB-435s中SP细胞比例分别为3.61%和2.72%,MDA-MB-231中未检测到SP细胞.3种细胞系中CD44 CD24-/low细胞比例分别为0.87%、0.59%和94.04%.MCF-7经Percoll分选,D亚群SP细胞富集,比例高达25.23%.MCF-7中CD44 CD24-/low细胞比例随着无血清培养时间的增加而增加,3周时达29.35%.结论:SP检测与CD44 CD24-/low细胞检测是目前乳腺癌干细胞检测的两种常用方法,但两者在同一乳腺癌细胞系中的检测结果并不一致,两种方法均有一定的局限性.另外,Percoll分选或无血清培养均能使MCF-7中肿瘤干细胞相关亚群(SP细胞或CD44 CD24-/low细胞)富集.     

内皮细胞对结肠癌细胞系SW480中CD133~+细胞表达VEGF的影响

目的 从结肠癌细胞系SW480中分离结肠癌干细胞,并检测内皮细胞对这些细胞表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响.方法 分别利用免疫磁珠分选技术和尤血清培养法富集CD133+细胞,利用MTT法和平板克隆形成实验检测其生物学特性;采用细胞免疫荧光法检测SW480细胞和CD133+细胞中CD133及VEGF的表达;将SW480细胞或磁珠分选CD133+细胞分别在6种培养条件下进行培养:SW480细胞在含血清培养基(serum-supplied medium,SSM)中培养、SW480细胞在尤血清培养基(serum-free medium,SFM)中培养、磁珠分选CD133+细胞在SFM中培养、SW480细胞与内皮细胞在SSM中共培养、SW480细胞与内皮细胞在SFM共培养、磁珠分选CD133+细胞与内皮细胞在SFM共培养,利用免疫组织化学法检测不同培养条件下结肠癌细胞中CD133及VEGF的表达情况.结果 SW480细胞系中存在少量的CD133+细胞,这些细胞能够连续传代并且表现出更强的增殖潜力以及克隆形成能力.经细胞免疫荧光法检测发现SW480细胞高表达VEGF,低表达CD133,而免疫磁珠分选的CD133+细胞所形成的细胞球低表达VEGF,高表达CD133.无血清培养条件下的SW480细胞随着时间的延长CD133表达率逐渐增加,添加内皮细胞诱导后无血清培养的SW480细胞与前者相比CD133阳性率显著增加(P<0.05).经过1周的连续培养后,CD133+细胞表达VEGF的比例没有变化,添加内皮细胞诱导1周后,CD133+细胞表达VEGF的比例显著增加(P相似文献   

敲低Piezo2对人结肠癌细胞HCT116和SW620增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨敲低机械敏感性离子通道Piezo2对人结肠癌细胞HCT116和SW620增殖、迁移侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测结直肠癌组织及其相应癌旁组织中Piezo2的mRNA和蛋白表达情况;Western blot检测Piezo2在正常结肠上皮细胞NCM460、结肠癌细胞SW480和HCT116、结肠癌淋巴结转移细胞SW620的表达;将HCT116、SW620细胞系稳定转染Piezo2敲低慢病毒载体,利用RT-qPCR和Western blot检测转染后HCT116和SW620细胞的Piezo2表达情况;CCK-8法检测转染后HCT116和SW620细胞的增殖能力;Transwell法和细胞划痕修复实验检测转染后HCT116和SW620细胞的侵袭和迁移能力;通过裸鼠皮下成瘤检测HCT116和SW620细胞敲低Piezo2后肿瘤大小变化,通过免疫组化检测ki67表达。结果 RT-qPCR及Western blot实验显示,癌组织Piezo2的mRNA和蛋白表达均高于癌旁组织（P均<0.05）;Wes...     

手术切除的结直肠癌组织中的肿瘤干细胞的培养及鉴定

目的获得结直肠癌患者手术切除癌组织的肿瘤干细胞（CSC）,培养并鉴定其干细胞特性。方法通过原代培养手术切除 结直肠癌组织获得结直肠癌细胞,再通过有限稀释法和无血清培养法筛选结直肠癌CSC,软琼脂集落实验检测CSC和对照组人 结直肠癌细胞株SW480 的增殖能力;用低数量级细胞裸鼠皮下成瘤实验,检测结直肠癌CSC和SW480 的成瘤能力;并运用 Western blot及免疫荧光方法,检测CSC和SW480的免疫表型。结果临床结直肠癌标本原代培养的CSC,加入血清培养可使 CSC分化。软琼脂集落形成实验结果显示,原代培养的CSC克隆形成率为56.64%和54.45%,对照组人结直肠癌细胞株SW480 的克隆形成率为4.41%,CSC与SW480集落形成率的差异具有统计学意义（P<0.01）。裸鼠皮下成瘤实验中,原代培养的CSC 皮下注射500 个细胞可形成皮下瘤,而SW480 皮下注射500 个细胞不形成皮下瘤。CSC 表达CD133、CD44,不表达CK7; SW480细胞不表达CD133、CD44,表达CK7。结论原代培养的手术切除结直肠癌组织标本获得的肿瘤细胞,再行无血清培养 可形成CSC,鉴定具有CSC的自我更新及分化能力。     

卵巢癌

在英国卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤,每年大约有4400例患者死亡。与欧洲的其他国家相比,英国的死亡率更高。     

肿瘤干细胞在甲状腺癌中的研究进展

肿瘤干细胞（cancer stem cells, CSCs) 是一类具有自我更新、多向分化和高致瘤能力的细胞亚群。CSCs与肿瘤的发生、发展以及治疗抵抗密切相关。CSCs在甲状腺癌发生发展中的作用及机制尚不完全清楚。本文对甲状腺癌肿瘤干细胞（thyroid cancer stem cells, TCSCs)的研究进行综述,探讨TCSCs在甲状腺癌研究中的前景,以期更好地诊治甲状腺癌。     

Second primary cancer following treatment for cervical cancer

A follow-up study of 7535 women in Ontario was carried out to assess the occurrence of second primary cancers following the treatment of invasive carcinoma of the cervix between 1960 and 1975. The study was part of a larger international investigation of late radiation effects in patients with cervical cancer. Data were collected on the date and the type of treatment for cervical cancer and on the occurrence of second primary cancers diagnosed before 1980. Observed and expected numbers of second primary cancers, the latter determined according to Ontario incidence rates, were compared for individual sites and for all sites combined. There were significantly more primary cancers of the lung than expected (64 v. 15.52) but significantly fewer second primary cancers of the breast (56 v. 105.01) and colon (27 v. 43.31). Overall, there were significantly fewer (p less than 0.05) observed second primary cancers than expected (280 v. 394). Although the median follow-up period was less than 10 years there was no marked evidence of an excess of radiation-induced second primary cancers.