阴道念珠菌病患者体内白念珠菌抗氧化基因的表达

目的检测阴道念珠菌病患者体内感染状态下白念珠菌抗氧化基因的表达,初步了解抗氧化机制在阴道念珠菌病发病机制中的关系。方法选取7例阴道念珠菌病患者阴道分泌物分离株,培养鉴定为白念珠菌,选取PDA斜面培养3天(体外培养静止期)及临床阴道分泌物检体,用Trizol法提取总RNA反转录为cDNA后进行荧光定量PCR,检测体外培养静止期与体内检体抗氧化基因(CAT,SOD2,SOD5)及抗氧化转录因子(CaSkn7,CaHog1,CAP1)的基因表达情况,运用Ct值比较法进行表达量的相对定量分析。结果白念珠菌阴道病患者体内标本中CaSkn7,CAP1,SOD2,SOD5基因表达量比体外培养静止期少,分别为体外表达量的0.273,0.635,0.039,0.632;而CaHog1及CAT基因表达比体外培养静止期高,分别为体外表达量的3.5倍及1.67倍。经Wilcoxon检验,显示阴道分泌物标本中仅CaSkn7基因表达量较体外培养静止期低,差异有统计学意义P0.05,其余基因与体外培养静止期差异无统计学意义,P均0.05。结论白念珠菌黏膜感染状态下抗氧化相关的基因表达较少,抗氧化机制在念珠菌性阴道炎发病过程中作用不明显。     

实时荧光定量PCR检测石蜡标本中麻风菌DNA

目的：评价实时定量荧光PCR(Real-time PCR)法检测石蜡标本中麻风菌DNA的应用价值。方法：根据基因库(GenBank)发表的M. leprae的全基因组序列,以一段重复序列(repetitive ele￣ment,RLEP)为扩增靶序列,合成引物和探针,构建质粒pGEMT-101作为标准品,用Real-time PCR对石蜡标本进行麻风菌DNA检测,并评价其敏感性。结果：对52例麻风患者的石蜡包埋组织标本麻风菌进行了检测,不同型别麻风(LL：8;BL：10;BT：28;TT：6)的石蜡标本检测阳性率分别为100％(8/8)、80％(8/10)、78.57％(22/28)、50％(3/6)。结论： Real-time PCR方法可在石蜡标本中快速灵敏的检测到麻风菌DNA。     

荧光多重实时PCR检测单纯疱疹病毒

目的建立单纯疱疹病毒的荧光多重实时PCR检测及分型技术，为生殖器疱疹的诊断及病毒分型提供快捷、敏感、特异的方法。方法以细胞培养法为对照，用Smart Cycler System作为实验平台，以DNA探针荧光标记技术建立荧光多重实时PCR，用于检测生殖器疱疹患者临床标本中的1型和2型单纯疱疹病毒(HSV1、HSV2)DNA。结果荧光多重实时PXR检测HSV1和HSV2 DNA的敏感性和特异性均为100％，可检测出低至1～5拷贝的HSV DNA，30min左右即可完成整个检测过程．而细胞培养的敏感性和特异性分别为70．10％和100％。结论基于Smart Cycler System的荧光多重实时PCR是一种易于操作、扩增效率高、封闭式的核酸扩增技术，可用一次PCR反应就能快速、敏感、准确地对临床标本中的单纯疱疹病毒进行检测和分型。     

实时荧光定量PCR技术在婴儿HIV感染早期诊断中的应用

目的 评价实时荧光定量PCR技术作为婴儿HIV感染早期诊断方法的可行性。方法 2019年4月至2020年8月对大理州和德宏州出生的HIV暴露婴儿51例在五个阶段采集干血斑,用实时荧光定量PCR检测HIV-1DNA。对6周龄干血斑同时进行罗氏HIV-1DNA定性检测。同期对21例已知HIV感染婴儿的干血斑进行了检测。结果 共对送检的51例婴儿的235份干血斑进行了检测,结果全部是HIV-1DNA阴性,与罗氏HIV-1核酸定性结果一致。21例已知感染婴儿的干血斑实时荧光定量PCR检测结果全部是HIV-1DNA阳性（病毒载量均值为4428 copies/1x106cells）。结论 实时荧光定量PCR技术可以准确诊断暴露婴儿的HIV感染情况,为及时实施抗病毒治疗提供科学依据。     

实时荧光定量PCR技术对淋球菌感染的诊断价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术对淋球茵感染的临床诊断价值。方法201例淋茵性尿道炎患者分别采用PCR法及涂片（Smear）法染色进行检测，并对阳性检出率进行比较。结果201例中PCR法、Smear法阳性检出率分别为29．35％、5．97％，PCR法明显高于Smear法（P〈0．05）。结论PCR法检测淋球菌优于涂片法，并具有快速、特异性高、敏感性强等特点，对临床诊断及治疗有重要的指导意义。     

侵袭性马尔尼菲青霉感染实时荧光定量PCR检测技术的初步建立

目的:建立一种快速、稳定、灵敏且可定量的检测马尔尼菲青霉病的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。方法:根据马尔尼菲青霉ITS序列,设计并合成引物,通过常规PCR扩增目标序列后,将鉴定正确的目的基因片段克隆入pGEM-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,得出拷贝数与循环阈值之间的线性关系曲线表达式,并做灵敏性、特异性试验。结果:荧光定量PCR标准曲线阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为1.938,最低检测的拷贝数为8.5个/反应管。结论:建立了检测马尔尼菲青霉病的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断及定量分析感染程度及对治疗的指示作用奠定了良好的基础。     

荧光定量PCR检测疱疹病毒与临床分析

生殖器疱疹(GH)是单纯疱疹病毒(HSV)感染生殖器部位皮肤粘膜所引起的炎症、成簇水疱、溃疡性疾病，是常见的性传播性疾病(STD)之一，HSV-2为其主要病原体。CH的临床表现多种多样，其发生、复发及产生的各种并发症严重危害人类健康，近年来发病率不断上升，已逐渐被人们所重视。我们从2000年12月～2002年10月对234例生殖器疱疹的患者用荧光定量     

携带G487T和T916C的白念珠菌ERG 11及外流泵基因表达与氟康唑耐药的关系

目的:检测携带相同突变的耐氟康唑白念珠菌多个耐药基因的表达。方法:选取耐氟康唑白念珠菌14株(均携带相同的ERG11突变G487T和T916C),氟康唑敏感白念珠菌14株,通过实时定量PCR反应检测两组多个耐药基因的表达。结果:14株携带相同突变的耐氟康唑白念珠菌主动外排基因CDR1和CDR2 mRNA表达较敏感组显著增加(P0.01);而ERG11、FLU1和MDR1基因mRNA水平较敏感株表达无明显差异(P0.05)。结论:携带G487T和T916C突变的白念珠菌的耐氟康唑机制可能与主动外排泵基因CDR1和CDR2的高表达密切相关。     

聚合酶链式反应快速检测白念珠菌

我们应用聚合酶链式瓜技术体外扩增编码白含珠菌细胞色素Ｐ４５０Ｌ１Ａ１的基因片段，在７小时内可以检测出５００μ１中含有３０个酵母菌的临床标本。对２２份临床标本（其中５份阴性，１７份阳性）同时进行的ＰＣＧ检测和真菌学鉴定：两者具有较满意的一致结果。这匀份阳性标本包括４份血标本，５份尿标本，６份痰标本及２份分泌物标本。另５份为阴性血标本。ＰＣＲ技术在白含珠菌感染乃至其它真菌感染的快速诊断方面显示了良好的     

自身淬灭探针荧光定量PCR检测淋病奈瑟菌

目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的淋病奈瑟菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-CPPB作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系,并进行方法学评价及临床应用。结果所建立方法的线性检测范围为101～109拷贝/μL,灵敏度为10拷贝/μL,特异性为100%。天间变异系数(CV)为2.38%,批内CV为1.32%,批间CV为2.75%。该方法比培养方法更快速、灵敏。结论以自身淬灭探针技术为平台的淋病奈瑟菌荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,对淋病的早期快速诊断有较高价值。     

白色念珠菌检测在龟头炎诊断中的临床应用效果分析

目的:探析白色念珠菌检测对龟头炎的诊疗过程的指导作用。方法:回顾性分析我院门诊2012年1月至2014年3月期间收治的118例龟头炎患者的临床资料,真菌镜检均为阳性,行菌株培养和鉴定以及体外药敏试验,分析菌株检出率、病原菌分布情况以及药敏试验结果。结果:118例患者真菌镜检均为阳性,念珠菌阳性率为94.92%;白色念珠菌106株(94.64%)。培养菌株对制霉菌素和克霉唑敏感率100.00%;白色念珠菌对氟康唑、伊曲康唑敏感性分别为56.86%、60.78%;1株近平滑念珠菌对咪康唑中度敏感,对其他药物均敏感;光滑念珠菌对所有药物均敏感;克柔念珠菌对咪康唑耐药,其余药物均敏感。结论:白色念珠菌仍为真菌性龟头炎主要病原菌,其确诊依赖于真菌镜检和菌种培养鉴定,体外药敏试验为临床用药提供重要的参考依据,有利于彻底根治龟头炎,提高临床治疗效果,进而促进患者生活质量的改善。     

Rapid identification of Candida albicans and its related species Candida stellatoidea and Candida dubliniensis by a single PCR amplification using primers specific for the repetitive sequence (RPS) of Candida albicans

BACKGROUND: Candidiasis is caused by several Candida species, of which Candida stellatoidea and C. dubliniensis are phenotypically close to C. albicans. Although current molecular biology-based techniques can distinguish between C. albicans and C. dubliniensis, a convenient tool that can distinguish C. stellatoidea from C. albicans has not yet been developed. OBJECTIVE: To develop a system that can simply, rapidly and specifically distinguish C. albicans from the related Candida species C. stellatoidea and C. dubliniensis. MATERIALS: Genomic DNAs were purified from various yeast species and amplified by primers specific for the repetitive sequence (RPS) of C. albicans. The PCR products were purified and sequenced in order to test the specificity of the PCR amplification. RESULTS: The PCR primers only amplified several products from C. albicans, C. stellatoidea and C. dubliniensis. Sequence analysis of the products revealed that C. stellatoidea and C. dubliniensis both had RPSs including alt repeats, similar to C. albicans. After the PCR amplification, each of the three Candida species showed a unique amplification profile. Furthermore, RFLP analysis of the PCR products using EcoRI and ClaI produced species-specific restriction profiles. CONCLUSIONS: This PCR-based technique targeting the alt repeats in the RPS is useful as a tool for the rapid identification and distinction of C. albicans, C. stellatoidea and C. dubliniensis.     

Pathomechanisms in Candida albicans infections

The adherence of the pathogen to the host cell is the first and decisive step in Candida albicans infections of the human organism. The mechanisms involved are mostly examined in human epithelial cells which are newly exfoliated and which therefore have a limited life expectancy. In this case, the glycoproteins on the cell surface of Candida albicans--mainly the mannan--are of central importance. They are the main component of the fungus to adhere to the host cell as well as to bind and activate the serum complement. Finally, the role of mannan in the interaction with host defence mechanisms is stressed.     

白念珠菌氟康唑耐药机制的研究进展

白念珠菌作为现代医学最重要的机会性致病酵母菌,严重威胁患者的生命.氟康唑为临床治疗念珠菌感染的首选药物,其广泛使用,使得念珠菌耐药日益增加.本文综述白念珠菌氟康唑耐药机制的研究进展.     

PCR法扩增角鲨烯环氧化酶鉴定白念珠菌的研究

目的：通过扩增角鲨烯环氧化酶基因的开放读框,进行PCR来鉴定白念珠菌。方法：根据白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因的开放读框中编码1MSSVKY^6的序列设计上游引物5‘－ATGAGTTCAGTTAAGTATG－3‘,编码^492NEIVR^496的序列设计下游引物5‘-CTATCTTACAATCTCGTTC-3‘,对白念珠菌ATCC11006,22株临床分离株,7株其它致病性念珠菌,8株致病性丝状真菌,1株新生隐球菌及1份人的基因组DNA进行了PCR扩增,并对PCR产物用酶切方法鉴定,结果：所有23株白念菌均可获得约1．5kb大小的PCR产物,16株其它致病性真菌及人的DNA标本均无扩增产物,PCR产物经BamHI酶切,产生两个大小分别约为1．0kb和500bp的片段。结论：利用设计的引物,扩增角鲨烯环氧化酶基因的开放读框,可以特异地鉴定白念珠菌。     

白念珠菌的毒力因子研究新进展

白念珠菌是一种重要的人类致病真菌,其毒力因素主要包括黏附因子、利于侵入酶的因子、白念珠菌的形态发生及表型转换等。白念珠菌毒力因子检测方法主要包括脲裂解方法,分裂基因法,用系统化处理方法来分析基因功能以及通过差异显示逆转录聚合酶链反应寻找可能的与毒力相关的基因。     

白念珠菌毒力因子的研究进展

念珠菌是侵袭性真菌感染的主要致病菌之一,其中以白念珠菌感染最为多见,多发生于免疫缺陷、器官移植、介入治疗、广谱抗生素和糖皮质激素广泛应用的患者中.白念珠菌毒力因子和致病性密切相关,其毒力因子主要包括表型转换、黏附素、侵袭性酶以及溶血因子等.表型转换可以帮助白念珠菌适应宿主的组织环境;黏附素可以辅助其识别组织和定植;侵袭性酶破坏黏膜组织的完整性,增强其毒力;溶血因子帮助其获得营养物质供其生存繁殖.进一步阐明白念珠菌毒力因子和致病性的关系有望为白念珠菌病的预防和治疗提供新思路.