耐拉米夫定乙肝病毒变异株的人工构建及其限制性片段长度多态性分析

目的　建立简便易行的筛检常见的耐拉米夫定乙肝病毒变异株的方法。方法通过PCR定向点突变 ,构建最常见的耐拉米夫定乙肝病毒变异株 (YMDD变异株 ) ,并建立相应的错配PCR结合限制性片段长度多态性分析 (RFLP)检测此变异株。结果PCR成功引入点突变 ,构建了YMDD变异株的克隆 ,同时错配PCR结合限制性片段长度多态性分析可有效区分YMDD变异株和HBV野毒株。结论采用PCR的方法可诱导定向点突变 ,错配PCR结合限制性片段长度多态性分析可用于筛检临床常见的耐拉米夫定乙肝病毒变异株 (YMDD变异株 ) ,为临床监测提供了一种很好的模式。     

广西壮族人群载脂蛋白B基因限制性片段长度多态性分析

目的 :探索广西地区壮、汉两族人群ApoB基因多态性的分布特点及其与冠心病、脑梗塞发病之间的关系。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)对广西壮族 17名冠心病患者 (CHD)、14名动脉粥样硬化性脑梗塞患者 (ACI)和 62名健康人的ApoB基因的XbaI、EcoRI位点的限制性片段长度多态性 (RFLP)进行了研究。结果 :无论是广西壮族人群冠心病组、脑梗塞组与正常对照组在XbaI位点以X- X- 为主要基因型 ,少见X+ X+ 、X+ X- 基因型 ;在EcoRI位点以E+ E+ 为主要基因型 ,少见E+ E- 、E- E- 基因型。X+ 等位基因在壮族三组人群中的频率分别为 :0 117、0 0 714、0 0 4 92 ,两两之间没有显著性差异 (P >0 0 5 ) ;E-在广西壮族三组人群中的频率为 :0 0 3 85、0 10 7、0 0 4 84 ,两两之间的差异未达统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 :广西壮族人群冠心病、脑梗塞的发病与XbaI、EcoRI位点等位基因的分布没有明显的关联     

人巨细胞病毒株DNA限制性片段长度多态性分析

为深入开展人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的分子流行病学和发病机理研究，作者从不同人群获得１０株ＨＣＭＶ，经培养、传代和增殖后提取病毒ＤＮＡ，而后分别用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲＩ消化，用３２Ｐ标记的ＨＣＭＶＤＮＡＨｉｎｄⅢ亚克隆片段（ｐＣＭ１０１５、ｐＣＭ１０３５）做探针，进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和限制性片段长度多态性分析。结果显示：该１０株ＨＣＭＶ的主要限制性片段与标准株ＡＤ１６９相同，证明该病毒基因组的结构相当稳定，但其Ｌ－Ｓ结合区和末端片段有变异，表现为酶切位点的丢失或获得；流行病学上相关毒株限制性酶谱相似，而无相关毒株的限制性酶谱则有所不同。由此表明，以ＥｃｏＲＩ酶切片段与ｐＣＭ１０３５探针杂交易于发现其基因组变异。临床毒株的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析可用于ＨＣＭＶ感染的分子流行病学和发病机理的研究。     

应用错配PCR和限制性片段长度多态性分析技术检测HBV YMDD变异株

目的：建立简便易行的检测乙型肝炎病毒（HBV）多聚酶基因（P基因）上YMDD变异株的方法，评价运用拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患对此变异的影响，方法：采用套式／错配聚合酶链反应（PCR）结合限制性片段长度多态性（RFLP）分析技术对108例治疗前HBV DNA（PCR）阳性正在拉米夫定治疗中的慢性乙型肝炎患者的HBV YMDD变异情况进行检测。结果：运用上述技术能有效区分HBV YMDD野生株和变异株，上述108例患者经拉米夫定治疗后，HBV DNA阴转者63例（58．3％），HBV YMDD野生株和变异株分别为23例（21．3％）和22例（20．4％），结论：建立的套式／错配PCR－RFLP分析技术可用于HBV YMDD变异株的临床监测，拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者可导致部分患者的HBV多聚酶基因上YMDD发生变异。     

Ha-ras在正常人和胃癌患者DNAs的限制性片段长度多态性研究

以癌基因 Ha-ras 为探针,对10例正常人组织和22例人胃癌组织的 DNA 用限制性内切酶 Bam HI 酶切后,再通过瑟慎印迹法(Southern Blot)杂交,发现正常组织中的 Ha-ras 常见等位片段的出现频率高于胃癌组织,而稀有等位片段的出现频率低于胃癌组织;正常组织中Ha-ras常见等位基因纯合子的出现频率高于胃癌组织,而稀有杂合子的出现频率低于胃癌组织。提示 Ha-ras 限制性片段长度多态性(RFLPs)和胃癌可能存在着连锁关系。     

聚合酶链反应与限制性片段长度多态性分析检测沙门菌

沙门菌是常见的人畜共患致病菌 ,有 2 32 4个血清型。在我国发现 2 6个菌群 ,16 1个血清型 ,人群中最常见的是伤寒杆菌 (Ｓ ,ｔｙｐｈｉ) ,肠炎沙门菌(Ｓ ,ｅｎｔｅｒｉｔｄｉｓ)等 10余种 ,临床上常见的为肠炎型 ,口服此型细菌污染的食物引起中毒 ,潜伏期短 ,发病急。目前对沙门菌的检测仍沿用传统分离培养及血清学方法 ,不仅繁琐 ,需要 4～ 7天才能出报告 ,而且检出率低 ,已不适于临床的快速诊断。因此 ,建立快速而特异的检测方法具有重要的流行病学意义和临床应用价值。本文在传统聚合酶链基础上 ,引入限制性内切酶片段长度多态性分析法 …     

T-RFLP快速分析慢性腹泻患者肠道菌群及其应用研究

目的 建立快速检测分析人体肠道菌群的方法，协助慢性腹泻病原学诊断。方法 上游引物的5’端用6-FAM进行荧光标记，PCR反应结束后选择适当的限制性内切酶酶切消化，在测序仪上通过毛细管电泳即可检测5’末端荧光标记的限制性片段。利用不同细菌产生的不同峰谱达到快速对细菌定性、定量的目的。对30例慢性腹泻患者和221例健康人进行肠道菌群分析，从而探讨菌群变化情况。结果 该法能够对人体肠道菌群进行定性和定量分析，30例腹泻患者均发现肠道菌群紊乱。结论 该法快速、特异、敏感。一个样品中能同时检测多种细菌，是一种很有希望的新技术。     

聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测载脂蛋白E基因多态性及初步应用

目的 :建立聚合酶链反应—限制性片段长度多态性 (PCR- RFL P)分析结合 DNA直接银染技术检测载脂蛋白 E基因多态性。方法 :选择江苏地区汉族健康人 16 8例及冠心病 6 3例 ,PCR扩增 Apo E基因第 4外显子包含编码第 112位和第 15 8位氨基酸残基的基因序列 ,cfo I限制性内切酶酶切后电泳 ,银染色后分析 Apo E基因型。结果 :汉族健康人群及冠心病人群 Apo E基因型频率分别为 :ε2 /2 0 .6 % ,0 ;ε2 /3 11.9% ,14.3% ;ε2 /4 1.2 % ,4.8% ;ε3/4 10 .7% ,17.5 % ;ε3/3 75 .0 % ,6 1.9% ;ε4/4 0 .6 % ,1.6 % ;Apo E等位基因频率分别为 :ε2 7.14% ,9.5 2 % ;ε386 .31% ,77.78% ;ε46 .5 5 % ,12 .70 %。结论 :PCR- RFL P方法快速、简便、准确性和可靠性高 ,适合普通实验室开展及大规模研究     

St14/BclⅠ限制性片段长度多态性基因频率

St14-1(DXS52)是位于人X染色体长臂远端的一段DNA顺序,与第Ⅷ凝血因子(FⅧ:C)基因紧密连锁.用其作探针,BcII酶切,对人基因组DNA进行Southern印迹杂交分析,可检测到一限制性片段长度多态性(RFLP).我们分析广东地区汉族人群中st14/BcII RFLP,等位基因片段长度分别为17.4kb和16·6kb(见附图).15条无遗传关系的X染     

限制性片段长度多态性分析对杜氏肌营养不良症携带者的检测

用Southern印迹杂交法,选DMD的4种基因组探针(754、pERT87-8、pERT87-15和p20)对3个DMD家系作了限制性片段长度多态性连锁分析。结果在3个家系共5名具有50%携带者风险的女性中,检测出2名为DMD携带者,3名为非携带者。     

天麻扩增酶切片段长度多态性反应体系的建立

目的: 以天麻为试验材料,建立扩增酶切片段长度多态性(AFLP)分析体系.方法: 对天麻DNA提取、酶切 - 连接、预扩增和选择性扩增等试验过程进行研究.结果: 得到了清晰的天麻AFLP指纹图谱.结论: 该体系具有良好的稳定性和重复性.     

基金论文优先优惠发表

尊敬的作者：为了使优秀论文能够尽快发表，2006年起本刊将对基金论文采取优先优惠政策，各级基金项目的论文在同等条件下优先发表。国家级基金论文发表费优惠50％，省部级基金论文发表费优惠30％，厅局级基金论文发表费优惠15％。各级基金项目须附相应证明材料的复印件和加盖公章的单位证明。     

丙型肝炎病毒基因NS_5区酶切分型研究

目的 :了解丙型肝炎病毒 (HCV)感染的基因型及其与临床的关系。方法 :用逆转录套式聚合酶链反应 (RT PCR)和限制性片断长度多态性 (RFLP)分析的方法 ,对 78例HCV感染患者进行HCVNS5区基因分型。结果 :HCV 1b型感染 71例 (91% ) ,HCV 2a型 7例 (9% ) ,未发现其它基因型 ;丙型肝炎患者有无输血史、是否重叠HBV感染 ,其基因分型构成比均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;1b型HCV血清ALT异常者 (6 3.4% )明显多于 2a型(14.3 % ) (P <0 .0 5 )。结论 :本组HCV感染的基因型多数为 1b型 ,少数为 2a型 ,1b型更易致肝细胞损伤 ,并可能与活动性肝病有关     

我国4个旋毛虫分离株DNA限制性酶切片断长度差异的比较研究

报告我国云南、河南、沈阳（猪）以及长春（犬）４个旋毛虫分离株，用１０种限制性内切酶分析比较其基因组ＤＮＡ酶切片断长度差异。结果表明：来自猪体与来自犬体的旋毛虫酶切图谱不同，显示宿主的不同比地理位置、气候条件差异在旋毛虫的分类上更有意义。     

PCR-RFLP方法检测PARL基因Leu262Val多态性的实验研究

目的探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP）检测PARL基因Leu262Val多态性的最适实验条件.方法在PCR实验中,运用降落PCR（touchdown PCR,TD-PCR）方法优化PCR条件;对引物终浓度设定0.8μmol/L、0.6μmol/L、0.4μmol/L和0.32μmol/L四个浓度梯度进行扩增;通过2%琼脂糖凝胶电泳观察结果.在RFLP实验中,在内切酶量10 U不变的情况下,PCR产物量分别设定为5μL、10μL、15μL;酶切时间分别设定为12 h、8 h、4 h、2 h、1 h酶切,反应完毕后通过2%琼脂糖凝胶电泳观察结果.结果 （1）降落PCR方法能有效降低或避免非特异性扩增;（2）引物浓度为0.4μmol/L时,PCR产物量高且引物二聚体较少;（3）10μL的PCR产物进行酶切,电泳结果清晰;（4）在37℃条件下酶切4 h能完全消化一个酶切体系中的PCR产物.结论 PCR实验中,TD-PCR优化了PCR条件,为扩增目的条带提供了快速、特异、可靠的方法,最适引物浓度为0.4μm/L;RFLP实验中,最有效酶切方案为20μL的体系中加10μL产物和10 U内切酶,37℃消化4 h.     

共同引物PCR/RFLP方法对直肠癌组织中人乳头瘤病毒的检测及分型

为探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与直肠癌的关系，应用共同引物聚合酶链式反应扩增ＨＰＶ高保守区Ｌ１区序列，扩增产物经限制性内切酶ＤｄｅＩ，ＸｂａＩ，ＡｃｃＩ，ＰｓｔＩ酶切后，进行限制性片段长度多态性分析（ＲＦＬＰ），可对ＨＰＶ６，１１，１６，１８等常见的型别进行快速检测及鉴定。用该法对１１２例直肠癌和６３例正常直肠粘膜组织中ＨＰＶ进行检测。结果：直肠癌ＨＰＶ检出率（１８．７５％）与正常直肠粘膜（７．９３％）差异无显著性（Ｐ＞０．０５），但直肠癌ＨＰＶ１６检出率（１６．０７％）高于正常直肠粘膜（１．５８％），差异有高度显著性（Ｐ＜０．０１），表明ＨＰＶ１６可能与直肠癌的发生有密切关系，是直肠癌的高危致癌因素。该检测系统敏感性高，可检出每个二倍体细胞内０．１拷贝的ＨＰＶ１６ＤＮＡ，操作简便，适用于大批量标本ＨＰＶ的筛检，值得推广应用     

皖南地区汉人亚甲基四氢叶酸还原酶基因型的检测

目的　建立聚合酶链反应 限制性片段长度多态性技术 (PCR RFLP) ,分析皖南地区汉人亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因型。方法　利用该基因 6 77碱基T替换C具有TagⅠ酶多态性 ,采用PCR RFLP结合银染技术分析皖南地区汉人MTHFR基因型。结果　皖南地区汉人MTHFR基因型频率分别为 :AA 34 5 5 % ,AV38 18% ,VV 2 7 2 7% ;等位基因A的频率为 5 3 6 4% ,等位基因V的频率为 46 36 %。结论　皖南地区汉人MTHFR等位基因频率与日本人比较具有极显著差异 ,与法籍加拿大人比较无差异。     

T-RFLP快速分析慢性腹泻患者肠道菌群及其应用研究

目的建立快速检测分析人体肠道菌群的方法,协助慢性腹泻病原学诊断。方法上游引物的5'端用6-FAM进行荧光标记,PCR 反应结束后选择适当的限制性内切酶酶切消化,在测序仪上通过毛细管电泳即可检测5'末端荧光标记的限制性片段。利用不同细菌产生的不同峰谱达到快速对细菌定性、定量的目的。对30例慢性腹泻患者和22例健康人进行肠道菌群分析,从而探讨菌群变化情况。结果该法能够对人体肠道菌群进行定性和定量分析,30例腹泻患者均发现肠道菌群紊乱。结论该法快速、特异、敏感。一个样品中能同时检测多种细菌,是一种很有希望的新技术。