外周血白细胞Fas、FasL、Bcl-2表达与细胞凋亡

细胞凋亡是一个多种因子参与的复杂过程 ,如促凋亡因子Ｆａｓ、ＦａｓＬ ;抑凋亡因子Ｂｃｌ 2、Ｂａｘ等。为便于病理研究 ,作者对正常人外周血白细胞Ｆａｓ、ＦａｓＬ和Ｂｃｌ 2抗原的表达及与细胞凋亡的关系进行了观察 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1.1　材料　 2 0 0 2年 3月在本院进行体检的健康人 3 0例 (男 18例 ,女 12例 ) ,年龄 2 2～ 5 6岁。1.2　方法1.2 .1　标本处理　空腹取静脉血 0 .5ｍｌ,ＥＤＴＡ Ｋ2 抗凝。用ＩｍｍｕｎｏＰｒｅｐ溶血剂将红细胞破坏 ,经ＰＢＳ缓冲液(ｐＨ7.2 ,以下均相同 )洗涤、离心、弃上清液 ,即得…     

充血性心力衰竭病人心肌细胞凋亡及Fas／FasL系统的调节作用

目的 观察充血性心力衰竭（CHD）病人心肌细胞是否存在细胞凋亡以及Fas/FasL蛋白、caspase-3和心肌氧化性应激的调节作用。方法 实验以进行常规CPB的无肺动脉高压的ASD病人为对照组（n＝5），以合并CHD的RHD病人为观察组（n＝5）。体外循环术前留取右心室标本。用原位TUNEL技术检测凋亡心肌细胞。用流式细胞仪技术测定右心室Fas和FasL蛋白表达。用Z－DEVD－AMC底物降解法和TBARS方法分别测定右心室心肌caspase-3酶活性和脂质过氧化物含量（MDA）。结果 RHD病人右心室心肌细胞凋亡数、caspase-3活性、MDA以及Fas、FasL蛋白表达均明显高于ASD病人（P分别咪0．026、0．013，0．002，0．004和0．033）。结论 心肌细胞凋亡参与CHD的病理生理过程。CHD病人的心肌细胞凋亡与心肌细胞Fas、FasL蛋白表达上调、caspase-3激活以及心肌氧化性应激增高有关。     

胃癌组织Fas、FasL的表达及其临床意义

目的　探讨细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法　对 74例手术切除胃癌标本 ,应用免疫组化SP法检测Fas、FasL蛋白在癌组织中的表达。结果　在高、中分化型胃癌Fas和FasL的阳性表达率一致性显著高于低分化型胃癌 (P <0 .0 5)。而在早期和进展期胃癌间 ,有淋巴结转移和无淋巴结转移胃癌间Fas和FasL的阳性表达率无显著性差异 (P >0 .0 5)。结论　Fas和FasL的异常表达可能是胃粘膜癌变过程中细胞凋亡抑制的重要机制之一 ,并与胃癌的分化和免疫逃逸有关     

大肠癌细胞胃泌素的表达与Fas、FasL的关系

目的研究大肠癌细胞胃泌素（GAS）的表达与Fas、FasL的关系。方法采用免疫组化方法检测60例大肠癌细胞的GAS、Fas、FasL的表达情况，并分析他们之间的关系。结果在60例大肠癌细胞中，FasL在DukesC、D期的阳性表达率明显高于DukesA、B期的阳性表达率，差异有统计学意义（P〈0.05）。并且FasL的表达随着GAS表达增强而增强，呈明显的正相关（P〈0.05）。而Fas的表达在各临床病理特征之间无明显区别，与GAS的表达也无相关性。结论GAS在大肠癌细胞中可能是通过提高FasL的表达来杀伤淋巴细胞，从而逃避免疫监视，促进增殖和转移。     

Fas, FasL和Bcl-2在胃癌发生发展中的表达意义

目的：探讨Fas，FasL和Bcl-2在胃癌发生发展中的表达及临床病理意义．方法：收集93例不同胃粘膜标本，应用免疫组化技术检测不同病变阶段胃粘膜的Fas，FasL和Bcl-2表达．结果：在正常粘膜(n=20)、癌前病变(n=23)、高．中分化胃癌(n=25)、低分化胃癌(n=25)组织中Fas阳性表达率分别为95．0％，91．3％，60．0％和40．0％．FasL阳性表达率分别为25．0％，56．5％，88．2％和84．0％．Bcl-2的阳性表达率分别20．0％，78．3％，80．0％和64．0％．结论：Fas，FasL，Bcl-2表达失衡与胃癌的发生发展有着密切关系．     

Fas、FasL的表达与感染性早产胎盘滋养细胞凋亡的关系

目的　探讨胎盘Fas、FasL的表达及滋养细胞凋亡在感染性早产中的作用。方法　采用dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)、免疫组化技术分别对四组 (感染性早产组 2 5例、早产无感染组 2 5例、足月感染组 3 1例及足月无感染组 3 1例 )胎盘组织 112例进行检测细胞凋亡和Fas、FasL基因的表达。结果　感染性早产组胎盘滋养细胞、羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞的凋亡指数较其它三组显著升高 (P <0 0 0 5 )。感染性早产组Fas阳性率最高 ,与其余三组比较有显著性差异 (P <0 0 0 5 ) ;感染性早产组FasL表达高于早产无感染组及足月无感染组 (P <0 0 0 5 )。感染性早产组 ,足月感染组胎盘、胎膜细胞凋亡指数 ,Fas、FasL表达均较其对应无感染组升高 ,但感染性早产组较早产无感染组FasL的升高幅度( 7 2 9% )显著低于Fas表达的升高幅度 ( 13 5 % ) (P <0 0 0 5 )。各组中胎盘胎膜细胞凋亡指数与Fas表达呈正相关 (P <0 0 0 1)。结论　在感染性早产中胎盘滋养细胞凋亡指数增加 ,同时Fas、FasL表达上调 ,可能Fas、FasL通过自分泌和旁分泌作用介导了胎盘滋养细胞的凋亡 ;但是FasL表达上调程度相对较低 ,可能导致母胎间免疫耐受失调 ,与感染性早产的发病有关。     

凋亡基因Bcl—2、Bax、Fas、FasL在肝细胞癌中的表达

目的了解凋亡基因Bc1-2、Bax、Fas、FasL在肝细胞癌中的表达及意义.方法免疫组化SP法,对57例肝细胞癌组织、29例肝硬变组织进行染色,统计学处理采用x2检验.结果57例肝细胞癌中的阳性率分别为40.4%、89.5%、50.9%、50.9%.29例肝硬变组织中的阳性率分别为69.0%、86.2%、86.2%、86.2%.其中Bcl-2、Fas、FasL在肝细胞癌组织中的表达明显低于肝硬变组织(P＜0.05.P＜0.01、P＜0.01),而Bax则持续较高表达,且在肝细胞癌组织中Bax的表达与Bcl-2表达差异有高度显著性(P＜0.01),Bax的阳性表达较Bcl2敏感且广泛.在肝细胞癌组织中,上述基因表达水平与组织学分级之间无显著差异(P＞0.05).结论Bax在肝细胞,损伤、增殖及癌变过程中持续存在.肝细胞癌的发生可能与Bcl-2、Fas、FasL表达减少,Bcl2与Bax的比例发生变化有关.     

三氧化二砷诱导宫颈癌细胞凋亡与Fas/FasL表达的研究

目的:研究三氧化砷(Arsenic trioxide,As2O3)体外诱导宫颈癌Hela和Si Ha细胞株凋亡作用及凋亡相关机制。方法:采用凝胶电泳、流式细胞术等方法进行凋亡检测,免疫组织化学方法检测As2O3诱导对宫颈癌Hela和Si Ha细胞株细胞Fas和FasL表达的影响。结果:2.5μmol/L和5μmol/L浓度的As2O3作用Si Ha和Hela细胞株48h可以观察到细胞出现典型的凋亡变化。琼脂糖凝胶电泳DNA片段观察到DNA梯形条带。流式细胞仪分析细胞凋亡率显示,As2O3诱导两种细胞株凋亡具有剂量和时间依赖性(P<0.05)。而且细胞免疫组化显示As2O3诱导两种细胞株凋亡同时上调Fas蛋白表达(P<0.05)。5μmol/L浓度的As2O3诱导Hela细胞株凋亡过程同时伴FasL蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:As2O3能诱导Si Ha和Hela细胞株凋亡,其机制可能与Fas基因的表达上调有关。     

大鼠实验性肾缺血/再灌注引起肾小管上皮细胞凋亡及其与Bcl-2,Fas/FasL表达变化的关系

目的：探讨大鼠实验性肾缺血再灌注引起肾脏损伤、肾小管上皮细胞凋亡情况及其与Bcl—2，Fas／FasL表达变化的关系．方法：建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型，在不同时间点处死动物取肾组织石蜡包埋切片，HE染色分析肾组织病理损伤程度，用TUNEL法标记检测肾小管上皮细胞凋亡的变化，SABC免疫组化方法检测Bcl—2，Fas与FasL蛋白表达的变化．结果：缺血再灌注后肾组织的病理损伤主要发生在肾小管，肾小管上皮细胞凋亡指数增加，且随缺血再灌注时间延长而进一步上升，48h达高峰(P＜0．05).Bcl—2蛋白在对照组呈弱阳性表达，缺血30min，60min后再灌注0h有少量表达，再灌注24，48及72h呈阳性表达，48h达高峰(P＜0.05)，并以远曲小管为主．Fas，FasL蛋白在对照组呈阴性表达，缺血30，60min后再灌注0h有少量表达，再灌注24，48及72h呈阳性表达，以72h时达高峰(P＜0.05)，多表达在远曲小管．HE染色可见肾缺血再灌注后各组均有不同程度的肾小管上皮组织片状坏死灶，以近曲小管为主，坏死灶周围有炎性细胞浸润．结论：肾缺血再灌注可诱导肾小管上皮细胞凋亡，Bcl—2，Fas／FasL系统可能在肾小管上皮细胞凋亡过程中发生着重要的调控作用．     

CD44S在脑内胶质瘤和转移瘤的表达

目的探讨CD44S对脑胶质瘤侵袭的影响. 方法利用免疫组织化学SP法和半定量方法研究CD44S在脑胶质瘤、脑内转移瘤的表达强度. 结果 CD44S在10例正常人脑组织表达强度为"±",主要定位在星形细胞膜上,在45例脑胶质瘤中显胞膜和/或细胞质染色43例.11例脑内转移瘤表达则全部阳性,但表达强度均为"+".高度恶性胶质瘤表达强度较脑内转移瘤和中低度恶性胶质瘤强,以""多见(P<0.01). 结论 CD44S可能与胶质瘤侵袭有关,存在某种量效关系.     

肾小球肾炎时肾组织CD34的表达

目的：探讨多种类型肾小球肾炎时肾组织中CD34的表达及病理学意义。方法：对66例原发性和继发性肾小球肾炎患者肾活检组织进行CD34、α-平滑肌肌动蛋白的免疫组织化学染色，探讨二者的关系。结果：在病理条件下，肾小球系膜细胞出现CD34的表达；肾小球系膜细胞可同时表达CD34和α-平滑肌肌动蛋白，二者显著相关。结论：CD34是系膜细胞表型转化的一种有效标志物。     

大肠癌及癌旁粘膜p21~(ras)表达及意义

应用免疫组织化学方法对 12 8例人大肠癌及 32例不同距离癌旁粘膜进行研究。探讨 p2 1ras检测的临床病理学意义。结果 ,正常大肠粘膜、大肠癌、近癌旁粘膜、癌旁 1cm、2 cm、3cm及 5 cm粘膜 p2 1ras阳性率分别为 5 .0 % (1/ 2 0 )、5 2 .3% (6 7/ 12 8)、2 4.7% (18/ 73)、18.8% (6 / 32 )、15 .6 (5 / 32 )、9.4% (3/ 32 )及 9.4% (3/ 32 )。癌旁 3cm、5 cm粘膜的p2 1ras阳性率、阳性强度及分布均与正常粘膜相似 ,但癌旁 1cm、2 cm粘膜 p2 1ras阳性率较高且其中 5 0 %表达强度为(+ + )、(+ + + ) ,提示有 p2 1ras过表达现象。 p2 1ras表达与大肠癌临床病理因素无关。结论 :大肠癌中存在 p2 1ras过表达 ,且在癌旁 1cm、2 cm以内粘膜也存在 p2 1ras过表达可能 ,因此建议 ,在临床行大肠癌切除时 ,安全切缘至少在 3cm以上。     

p21~(ras) p53 PCNA蛋白在胃癌组织中的表达

应用免疫组化Ｓ Ｐ法,检测５５ 例胃癌组织中ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３、ＰＣＮＡ 蛋白的表达,结果发现：ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３、ＰＣＮＡ 阳性率分别为３８－２％ 、２９－１％ 、８３－６％ 。ｐ２１ｒａｓ、ＰＣＮＡ过表达与胃癌浸润深度有关,ｐ５３、ＰＣＮＡ 过表达与胃癌淋巴结转移有关;在不同分化程度胃癌组间ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３、ＰＣＮＡ表达均无显著差异。ＰＣＮＡ和ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３ 表达组间均呈正相关,且ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３ 协同表达可能在胃癌发生、发展中起重要作用。     

造血细胞生长因子对脐血CD34+细胞短期体外扩增的作用

目的 探讨造血细胞生长因子(HGF)的不同组合对脐血CD34 细胞短期体外扩增的作用．方法 用免疫磁珠法分高纯化脐血CD34 细胞，培养于无血清培养液中。加入不同的细胞因子，于第4，7，10，14天检测CD34 细胞百分率和有核细胞(NC)总数。结果 和对照组相比，各组的NC扩增倍数随着培养时间的延长虽不同程度的增加，干细胞在FL、TPO，GM-CSF、SCF、IL-6、G-CSF、EPO和IL-3等因子作用下，NC扩增倍数在培养第14天达高峰，为328．96倍；而CD34 细胞扩增倍数在培养第7天达最高峰，但在FL、TPO、GM-CSF、SCF，IL-6、G-CSF等因子作用下，CD34 细胞扩增倍数最大，7d后达25．23倍，而后随着培养时间的延长而逐渐下降。结论 脐血CD34 细胞在HGF作用下，扩增时间以7-10d为最佳。     

结直肠癌中CD_(44) V_6 PCNA的表达及其与浸润转移的关系

目的　探讨CD44V6和PCNA在结直肠癌中的表达及其与肿瘤浸润转移的关系。方法　应用免疫组织化学S P法检测 87例结直肠癌组织中CD44V6和PCNA的表达情况。结果　 87例结直肠癌组织中CD44V6蛋白的表达阳性率为 5 8.6 % ,PCNALI为 5 6 .5 1± 18.82。CD44V6阳性表达率和PCNALI在侵及浆膜层者明显高于侵及肌层者 ,淋巴结转移阳性组高于淋巴结转移阴性组 ,DukesC、D期明显高于A、B期 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。PCNA高LI者CD44V6阳性率明显高于PCNA低LI者 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　CD44V6和PCNA在结直肠癌浸润转移过程中发挥重要作用 ,可作为反映结直肠癌恶性程度的生物学标记物。     

胃癌发生发展中可溶型Fas/FasL的表达及其意义

目的:探讨Fas/FasL基因蛋白在胃癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组化、特定组织蛋白提取及Westem印迹杂交技术,对20例正常胃黏膜,22例癌前病变和35例胃癌组织中Fas/FasL的表达情况加以分析。结果:正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织的Fas阳性率分别为85%、45%、37%;FasL的阳性率分别为20%、27%、46%。Western印迹杂交显示:胃癌细胞产生的Fas蛋白以分子量30 kDa的可溶型Fas(sFas)为主,伴少量的43 kDa膜型Fas(mFas)。结论:Fas在正常胃黏膜和癌前病变、胃癌组织中的表达强度差异有显著性(P<0.05);FasL在胃癌组织和正常胃黏膜、癌前病变中的表达强度差异有显著性(P<0.05)。     

环氧化酶-2、bcl-2与bax在胃癌的表达及意义

目的 研究环氧化酶-2(cox-2)与bcl-2、bax在胃癌中的表达及其与胃癌细胞凋亡的关系。方法 采用SP免疫组织化学法检测胃癌及癌旁组织各60例标本中cox-2、bcl-2、bax的表达，用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测胃癌及癌旁组织的凋亡率。结果 胃癌组织的cox-2、bcl-2的表达明显高于癌旁组织(P＜0．05)，bax的表达明显低于癌旁组织(P＜0．05)，cox-2阳性组胃癌组织的凋亡率显著低于阴性组；cox-2的表达与bcl-2呈正相关，与bax呈负相关。结论 cox-2、bcl-2、bax的异常表达与胃癌细胞凋亡抑制有关；cox-2能够上调bcl-2的表达并下调bax的表达使胃癌细胞凋亡抑制。     

CD34+造血干细胞混合CD3+T细胞移植分离移植物抗宿主病和移植物抗白血病效应

目的探讨在异基因造血干细胞移植中能否采用纯化CD34+造血干细胞混合一定量纯化CD3+T细胞移植达到既控制移植物抗宿主病(GVHD)又保留移植物的抗白血病效应(GVL). 方法 (C57BL/6×615)F1代接种L615白血病细胞株建立小鼠白血病模型作为移植受鼠,利用免疫磁珠纯化骨髓CD34+造血干细胞及脾脏CD3+细胞,流式细胞仪分析纯化前后CD34+、CD3+细胞百分比,观察单纯移植CD34+细胞及混合不同数量级CD3+细胞后受鼠生存时间、GVHD、GVL效应,移植后骨髓造血重建细胞来源. 结果纯化CD34+细胞1×10+6移植组100%死于白血病复发;CD34+细胞+纯化CD3+细胞(1×10+7)移植组生存期明显延长,50%死于白血病复发,无GVHD表现;CD34+细胞+CD3+细胞(5×10+7)移植组长期存活,无白血病复发,无GVHD表现;CD34+细胞+CD3+细胞(1×10+8)移植组62.5%死于GVHD,37.5%长期存活;CD34+细胞+CD3+细胞(1.5×10+8)移植组100%死于GVHD.移植后生存时间>60 d的受鼠骨髓造血重建细胞y染色体检出率为100%. 结论移植物中CD3+细胞数量与GVHD和GVL效应密切相关,通过限定移植物中的CD3+淋巴细胞的含量能够保留GVL作用而有效控制GVHD发生.     

Bcl-2、c-myc与胃癌细胞凋亡的关系

目的：探讨癌基因Ｂｃｌ ２、ｃ ｍｙｃ对细胞凋亡的影响。方法：用免疫组化ＬＳＡＢ法检测两者在６０例胃癌中的表达，并在光镜下对受检组织ＨＥ片进行凋亡细胞计数。结果：Ｂｃｌ ２、阳性胃癌的细胞凋亡指数明显低于阴性胃癌（０４１±０２９比０．８６±０．５１，Ｐ＜００５），ｃ ｍｙｃ阳性组织较阴性组织有更高的凋亡指数（０７１±０．３１比０．３２±０．２０，Ｐ＜００５）。结论：Ｂｃｌ ２与ｃ ｍｙｃ对胃癌细胞凋亡有相反的调控作用。