KAI-1基因在肝细胞癌中的表达及其临床意义

为研究KAI-1在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与临床病理特征的关系，笔者对48例HCC手术切除的新鲜标本和10例正常肝组织经常规方法应用SABC免疫组化法，以KAI-1单克隆抗体对切片进行染色。检测KAI-1在HCC中的表达及其与临床病理特征的关系。结果显示 KAI-1在HCC癌组织中的阳性率为58.33%，明显低于癌旁及正常肝组织(P<0.05)，KAI-1在有转移与无转移HCC中的评分分别是1.76±1.51和2.90±1.82，前者明显低于后者(P<0.05)，而与其他临床病理特征无显著关系。提示KAI-1在HCC中的表达明显降低，且转移者明显低于不伴转移者。提示KAI-1可能抑制了HCC的发生发展和转移。     

肝细胞肝癌中p15基因产物的表达及其意义

用免疫组织化学方法 (SABC法 )检测p15基因在 5 3例肝细胞肝癌 (HCC )标本中的表达。p15基因阳性表达率为 64 .2 % ( 3 4/5 3 )。病理I ,II级p15阳性率明显高于III级 (均为P <0 .0 5 ) ;临床分期T1 ,T2 期p15阳性率均明显高于T3期 (均为P <0 .0 5 )与T4 期 (均为P <0 .0 1)。提示p15基因的异常表达在HCC的发生、发展中可能起重要作用 ;p15基因表达可以作为病程、预后判断的候选检测指标 ,对HCC的基因治疗有潜在的价值和意义。     

肝细胞癌高表达新基因BC047440功能的研究

目的探讨肝细胞癌高表达新基因BC047440在肝癌形成中的作用。方法通过DOTAP^TM脂质体介导的转染技术，将BC047440基因反义真核表达载体导入HepG2肝癌细胞，经G418筛选，获得稳定表达BC047440反义基因的HepG2肝癌细胞，采用半定量RT—PCR检测反义基因对转染细胞的内源性BC047440基因抑制效果，噻唑蓝（MTT）比色法观察转染细胞生长曲线及流式细胞术比较细胞周期的变化。结果转染BC047440反义基因的肝癌细胞内源性BC047440基因受到有效抑制，细胞生长速度明显减慢，细胞周期中G1期细胞比例明显增高。结论肝细胞癌高表达基因BC047440可能是一个新的肝癌相关基因，在肝癌中的异常高表达可能对肝癌的发生发展具有一定的促进作用。     

RhoC基因在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨RhoC基因与肝细胞癌 (HCC)的发生发展和侵袭转移的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)在半定量水平检测 2 5例HCC及其相对应的癌旁肝组织和 4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中RhoCmRNA的表达 ;同时采用PCR产物单链构象多态性 (PCR SS CP)银染法检测RhoC基因的突变情况。结果本组 2 5例HCC中RhoCmRNA的表达较癌旁肝组织高 ,其光密度比值分别为 1 8± 1 1和 1 0± 0 7,P <0 0 1,差异有显著意义 ;4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中的RhoCmRNA的表达较相对应的肝内肝癌病灶高 ,其光密度比值分别为 3 3± 0 5和 2 0± 0 7,P <0 0 1,差异有显著意义 ;将 2 5例HCC分为RhoC基因过表达组和高表达组后发现 ,过表达组中肝癌细胞分化较差 ,静脉受侵严重 ,且以结节性肝癌居多 (P <0 0 5 ) ;而 2 5例HCC经PCR SSCP银染法分析未发现异常泳动条带。结论RhoC基因与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关 ,且可能是通过表达升高而非突变发挥作用。     

BC047440基因RNA干扰抑制肝癌HepG2细胞增殖

目的 构建shRNA并干扰肝癌HepG2细胞中BC047440基因,观察其对肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法 根据BC047440基因序列,设计和合成两条特异表达该基因shRNA序列并克隆载体pGenesil-1,转染肝癌HepG2细胞并用定量PCR观察抑制BC047440基因表达的效果,并通过MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖及细胞周期的变化.结果 酶切和序列测定提示成功构建了特异表达BC047440基因的shRNA1和shRNA2两个质粒.shRNA1和shRNA2对BC047440 mRNA的抑制率分别为80.22%和58.63%.干扰BC047440基因后,肝癌HepG2细胞增殖受到明显抑制,主要停滞在S期.结论 构建的shRNA能有效干扰肝癌HepG2细胞BC047440基因的表达,并抑制肝癌HepG2细胞的增殖,提示BC047440基因和肝癌HepG2细胞增殖有关.     

HLJ1基因在肝细胞癌组织中的表达及其生物学意义

目的:探讨HLJ1基因在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及其生物学意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测32例HCC组织及其对应的癌旁肝组织（PLCT）中HLJ1基因的mRNA表达水平;分析HLJ1与肝硬化、HCC的结节数目、静脉浸润、分化程度和肝外转移等临床病理特征的关系。结果:HCC组织中HLJ1 mRNA的表达水平显著性低于PLCT［（1.18±0.82）vs.（1.92±1.15），P＜0.05）］，其HLJ1 mRNA低表达组(n=18)和高表达组(n=14)在静脉浸润（P=0.001）和细胞分化程度（P=0.010）方面差异显著，而在性别、有无肝硬化、结节数目和肿瘤直径等因素的组间差异无显著性（P>0.05）。结论:HLJ1在HCC中表达显著性下调;HLJ1有可能参与HCC的细胞分化和侵袭转移。     

TUSC3基因在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨TUSC3基因在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法:收集92例行肝切除术且术后病理证实为HCC患者的石蜡组织标本及其临床病理资料,用免疫组化法检测TUSC3在HCC组织及相对应癌旁组织中的表达,分析TUSC3的表达情况与HCC患者临床病理因素的关系;用qRT-PCR及Western blot方法检测20对冷冻HCC及癌旁组织中TUSC3 mRNA与蛋白的表达。结果:92例石蜡组织标本的免疫组化结果显示,56例(60.9%)HCC组织中TUSC3表达下调,癌旁组织中33例(35.9%)TUSC3表达下调,差异有统计学意义(P0.001);TUSC3在HCC组织中的低表达与肿瘤Edmondson分级(P=0.008)、TNM分期(P=0.031)、肿瘤直径有关(P=0.0 2 0)。20对新鲜标本的qRT-PCR与Western blot检测结果显示,肝癌组织中TUSC3的mRNA[(0.99±1.46)vs.(1.96±2.18)]与蛋白[(0.49±0.35)vs.(1.04±0.43)]相对表达量均明显低于癌旁组织(均P0.05)。结论:TUSC3基因在HCC中的表达下调,其低表达可能与HCC的恶性进程密切相关。     

肝细胞癌Ki-67抗原表达及其意义

目的　探讨Ki67抗原表达与原发性肝细胞癌(HCC)临床病理因素的关系及其预后意义。方法　对20例正常肝组织、20例肝硬化组织、5例局灶性结节性增生(FNH)、85例HCC和85例癌旁组织Ki67抗原表达进行免疫组化检测。结果　HCC的Ki67抗原表达显著高于癌旁肝组织、肝硬化组织、正常肝组织及FNH(P<0.01),Ki67抗原的表达与肿瘤分化程度(P<0.01)、肿瘤大小(P<0.01)、门静脉有无瘤栓形成(P<0.01)、包膜是否完整(P<0.05)密切相关;而与术前AFP水平、HBsAg、病灶个数无关(P>0.05);与预后密切相关,术后平均无瘤生存期Ki67指数<200者为53个月,Ki67指数≥200者为18个月(P<0.01)。结论　检测Ki67抗原表达有助于鉴别HCC和FNH,Ki67指数可能作为判断HCC的恶性程度及预后的指标。     

CT9和CT10基因在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的检测肿瘤睾丸抗原CT9和CT10基因mRNA在肝细胞癌（HCC）中的表达情况。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法对HCC病人的癌组织和相应癌旁组织及对照（肝硬化和正常肝组织）中CT9和CT10mRNA的表达进行了检测,随机选取每一种抗原RT-PCR呈阳性的产物4例进行DNA序列测定,结合AFP、抗HCV、HgsAg、肿瘤直径、分化程度等临床指标进行分析。结果56例HCC病人中,CY9、CT10基因mRNA阳性率分别是51．8％（29／56）和44．6％（25／56）,至少表达一种CTA者达66．1％（37／56）,表达两种者为30．4％（17／56）;电泳显示PCR产物与阳性对照大小一致;而癌旁组织中仅有CT9基因nRNA表达为阳性,阳性率为7．1％（4／56）,但表达强度明显弱于在癌组织中的表达,进一步的病理检查未发现CY9表达呈阳性的癌旁组织中有癌细胞。所测10例肝硬化和10例正常肝组织均未检测到CT9和CT10的表达。DNA测序结果表明RT-PCR产物确为CT9和CT10cDNA。CT9和CT10的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性（P〉O．05）。而在部分AFP正常（〈25ng／L）HCC病人中存在CT9和CT10基因的表达。结论CT9和CT10基因在HCC中呈高比例、高特异表达,为HCC免疫治疗提供了新的理想靶位;CT9和CT10同时在HCC中表达,为应用以这些肿瘤抗原为基础的多价瘤苗治疗HCC提供了实验依据。     

新基因BC047440在多种肿瘤组织中的表达及其意义

目的 探讨新基因BC047440在多种恶性肿瘤及对应癌旁组织中的表达，对该基因的癌表达谱进行初步研究。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测肝癌、胆管癌、胃癌、大肠癌、神经胶质瘤、乳腺癌及其相对应的癌旁组织中BC047440 mRNA的表达。结果在48例肿瘤中，BC047440基因的mRNA表达在肝癌、胃癌、胆管癌、大肠癌中较其对应癌旁组织高，差异有统计学意义（P〈0．05或0．01）；在神经胶质瘤及瘤旁脑组织中均呈高表达，表达量差异无统计学意义（P〉0．05）；在乳腺癌及其对应癌旁组织中不表达或低表达（P〉0．05）。临床病理学分析提示，BC047440基因的表达水平与肝癌及胃肠道肿瘤的生长、侵袭和转移能力有关。结论 BC047440基因在肝癌、胃癌、胆管癌、大肠癌及神经胶质瘤中广泛高表达，在这些肿瘤发病过程中可能是一个通过表达升高而发挥功能的结构基因。     

NF-κB在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的：探讨NF-κB基因在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-blot免疫组织化学技术检测32例肝癌组织及癌旁肝组织中的NF-κB基因的mRNA和蛋白表达水平及蛋白定位。结果：NF-κB基因在肝癌组织中的表达较癌旁肝组织显著性增高(P<0.05)。免疫组化结果显示，NF-κB蛋白在肝癌细胞胞浆和胞核中均有表达，而在癌旁肝细胞中仅在胞浆中有表达。结论：NF-κB基因在肝癌组织中呈显著高表达，提示其可能参与了肝癌的发生发展。NF-κB表达定位在癌细胞和癌旁肝细胞中的差异，提示NF-κB活化后，进入胞核，通过调节下游基因的转录，促进肝癌的发生。     

稳定表达线粒体融合素基因2肝癌细胞株的建立及其意义

目的探讨将线粒体融合素基因2（mfn2）转染培养人肝癌细胞株HepG2，建立长期表达mfn2的肝癌细胞模型的可行性。方法基因重组构建mfn2真核表达质粒pEGFPnffn2，用脂质体将质粒转染培养人肝癌细胞株HepG2，经G418筛选阳性细胞克隆，逆转录-聚合酶链反应检测转染后30d细胞mfn2 mRNA的表达水平；Western—blot检测线粒体融合蛋白的表达。结果（1）成功构建表达真核质粒pEGFPmfn2；（2）成功将质粒pEGFPmfn2转染肝癌细胞株HepG2，并获得阳性细胞克隆；（3）经脂质体转染的人肝癌细胞株HepG2可较稳定表达mfn2。结论成功地建立稳定表达mfn2的肝癌细胞株，为进一步研究mfn2在肝癌发生发展中的作用奠定了基础。     

5 LOXmRNA和VEGFmRNA在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的研究5脂氧合酶（5-LOX）在胰腺癌中的表达及其与血管内皮生长因子（VEGF）的关系.方法用RT-PCR检测5-LOXmRNA和VEGFmRNA在35例胰腺癌新鲜组织中的表达.结果5-LOX mRNA和VEGF mRNA在胰腺癌组织中的表达率分别为74.3%及60%,均与胰腺癌的临床分期有关;VEGF还与胰腺癌的分化程度有关.5-LOX mRNA和VEGF有协同作用（P＜0.05）,呈密切正相关（r=0.5 35,P＜0.01）.Ⅲ～Ⅳ期5-LOX mRNA表达明显高于Ⅰ～Ⅱ期（P＜0.05）.结论5-LOXmRNA和VEGFmRNA在胰腺癌中表达增高,与临床分期有关.5-LOXmRNA和VEGFmRNA表达呈正相关.     

p130Cas和paxillin在乳腺癌中表达的研究

目的 研究p130Cas蛋白和paxillin蛋白在乳腺癌组织中的表达,及其与乳腺癌临床特征、病理特征的关系,以评价乳腺癌的预后.方法 采用免疫组化SP法检测53例原发乳腺癌,10例乳腺纤维腺瘤,10例正常乳腺组织中p130Cas和paxillin蛋白的表达情况.结果 与正常乳腺组织和乳腺纤维腺瘤相比较,乳腺癌组织中p130Cas表达显著增高（P＜0.001）,而paxillin表达显著减少（P=0.003）.p130Cas的表达与患者的年龄、绝经状况、肿瘤细胞的ER和PR表达及组织学分级相关,而与肿瘤大小、淋巴结转移状况及病理学分期无关.paxillin的表达与患者的年龄、绝经状况、肿瘤细胞的ER和PR表达及肿瘤大小无关,而与病理学分期、组织学分级和淋巴结转移有关.结论 p130Cas和paxillin与乳腺癌细胞的恶性转化和侵袭转移有关;检测上述两种蛋白表达有助于评价乳腺癌患者的预后.     

大肠癌中VEGF-C分泌水平的检测及其意义

目的 检测大肠癌患者血清及不同的细胞系中血管内皮生长因子C（VEGF-C）和血管生长因子（VEGF）的分泌水平，评估其在诊断大肠癌淋巴结转移中的意义。方法 采用酶联免疫法检测66例大肠癌（观察组）和30例健康者（对照组）血清中及4株大肠癌细胞系培养液中VEGF-C和VEGF的分泌的水平。结果 观察组血清VEGF-C和VEGF均高于对照组（P〈0．01）；有淋巴结转移组的血清VEGF-C和VEGF均高于无淋巴结转移组（P〈0．01）；有淋巴管和／或血管浸润组上述两指标均高于无浸润组（P〈0．01）。血清VEGF-C水平在1438．0pg／mL以上者其灵敏度为81．0％。特异性为76．0％；血清VEGF水平在240．2pg／mL以上者其灵敏度为72．0％，特异性为74．0％。联合检测VEGF-C和VEGF对淋巴结转移阳性率的预测价值达84．6％，阴性预测价值达94．4％，精确度达93．7％。LoVo及LOVo-5FU培养液中VEGF-C分泌水平明显升高（P〈0．01）。结论 检测VEGF-C为判断大肠癌患者淋巴结是否转移可能提供新的诊断依据。VEGF-C可望成为治疗大肠癌淋巴道转移的新靶点。     

胆囊癌组织survivin,caspase-3和Cox-2表达与临床病理特点的关系

目的:探讨survivin，caspase-3及Cox-2蛋白表达与胆囊癌生物学行为及临床病理指标的关系。方法：检测49例胆囊癌、9例胆囊腺瘤、10例慢性胆囊炎组织中survivin，caspase-3及Cox-2的表达。结果：（1）survivin，caspase-3及Cox-2在胆囊癌组织中阳性表达率分别为65.3%（32/49），44.9%（22/49）和75.5%（37/49），显著高于胆囊良性病变组织(分别为P＜0.001，＜0.001及＝0.001)。（2）survivin表达与肿瘤浸润程度、分化程度、淋巴结转移及Nevin分期均无显著关系（均P＞0.05）;caspase-3表达与分化程度有关而与肿瘤浸润程度、淋巴结转移、Nevin分期无关;Cox-2阳性率在淋巴结转移组与非转移组、不同浸润深度以及Nevin分期间差异均有显著性，而与组织学分级无关。三者均与患者的年龄、性别无关。（3）survivin与caspase-3表达呈负相关(r＝－0.373，P＝0.008)，survivin与Cox-2表达呈正相关(r＝0.404，P＝0.004)，caspase-3与Cox-2表达无明显相关性(r＝－0.156，P＝0.284)。结论：胆囊癌组织caspase-3表达较低，而survivin及Cox-2表达较高;survivin和Cox-2的过表达以及caspase-3的失表达在胆囊癌的发生、发展中起重要作用。survivin和Cox-2蛋白可望作为靶点用于胆囊癌靶向治疗。     

胃癌腹腔微转移检测及其临床意义

摘要：目的 探讨胃癌检测胃癌腹腔微转移的作用及临床意义。方法 选择 50例术前及术中检查均未发现腹膜转移的胃癌病例, 术中行道格拉斯窝处的腹膜活检并行HE常规染色和CK 20免疫组化染色检查，同时用RT PCR方法检测胃癌腹腔冲洗液中CK 20 mRNA的表达。结果 全部患者道格拉斯窝活检腹膜HE染色均为阴性。CK 20免疫组化检查的阳性率为24.0％（12/50）；RT PCR检测腹腔冲洗液中CK 20 mRNA的阳性率为36.0％（18/50）；CK 20免疫组化检查阳性的12例患者腹腔冲洗液中CK 20 mRNA检查均为阳性。CK 20 mRNA阳性率与胃癌浸润深度、组织学类型和淋巴结转移数目有关(P<0.05)。CK 20 mRNA阳性和阴性胃癌患者3年生存率分别为22.2％和62.5％(P<0.01)。结论 术前检查或术中探查未发现腹膜转移的胃癌患者,可行腹腔冲洗液RT PCR检查以发现有无腹腔微转移，该项检查可为胃癌正确分期、腹腔内辅助化疗及预后判断提供证据。     

EphA2与E cadherin在胰腺癌中的表达及其意义

目的 探讨EphA2和E-adherin在胰腺癌组织及细胞中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组织化学SP方法，检测56例胰腺癌及23例癌旁非肿瘤胰腺组织中EphA2和E-cadherin的表达，并分析其与临床病理因素的关系。采用RT-PCR方法检测EphA2在胰腺癌细胞株BXPC-3，PC-3及PANC-1中的表达。结果 胰腺癌组织中EphA2阳性和E-cadherin阴件的表达率分别为66．07％和57．14％，均显著高于癌旁非肿瘤胰腺组织（P〈0．05）；EphA2表达与胰腺癌分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关，E-adherin表达与胰腺癌TNM分期和淋巴结有关。在胰腺癌组织中，EphA2与E-cadherin的表达呈负相关；EphA2在胰腺癌向侵袭力细胞株BXPC-3和PANC-1呈高表达，在低侵袭力细胞PC-3呈低表达。结论 EphA2与E-cadherin的表达和／或功能异常可能共同参与胰腺癌的发生发展与转移；联合检测两种蛋白对于胰腺癌转移潜能的判断具有一定的参考价值。     

环氧合酶-2表达上调与人肝细胞癌新生血管生成的关系

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)表达上调与人肝细胞癌(HCC)新生血管生成的关系。方法采用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应法检测8 0例肝癌组织中COX-2,VEGF,bFGF,Ang-2和CD 3 4的表达情况;用W eidner分析法计算CD 3 4标记的平均微血管密度(MVD)。结果COX-2,VEGF,bFGF和Ang-2在HCC中表达率分别为7 5.0%,6 2.5 0%,6 0.0%和6 1.2 5%。VEGF,bFGF和Ang-2在COX-2强阳性组的免疫染色积分分别是5.9 8±1.1 6,4.5 7±0.2 6和5.8 7±0.1 2;而在COX-2中弱阳性组的积分分别是3.3 0±0.2 2,2.6 1±0.1 6和2.6 3±0.1 3;VEGF,bFGF和Ang-2在COX-2强阳性组的表达率分别是1 0 0.0%(9 5/9 5),9 4.2 9%(3 3/3 5)和9 7.1 4%(3 4/3 5),而在中弱阳性组分别是6 0.0%(1 5/2 5),6 0.0%(1 5/2 5)和6 0.0%(1 5/2 5)。两组的新生血管生成差异有显著性(P<0.0 1);COX-2与VEGF,bFGF和Ang-2表达呈明显正相关性(r分别为0.8 5 7,0.706,0.9 0 1;P分别<0.0 1)。MVD在COX-2强阳性组和中弱阳性组分别为7 3.1 8±1 2.4 3和33.42±7.52(P<0.0 1),COX-2与MVD呈正相关(r=0.8 1 2,P<0.0 1)。结论COX-2高表达与HCC血管生成密切相关。     

新基因BC047440原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化

目的 构建肝癌相关新基因BC047440原核表达载体,表达并纯化出其重组蛋白.方法 从HepG2细胞中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增BC047440cDNA,克隆进质粒pMD19-T,转化E.coliDH5α,测序正确后,酶切目的基因片段,插入质粒pET-28a(+),转化E.coliBL21,IPTG诱导蛋白表达,Ni-NTA柱亲和层析纯化重组蛋白.结果 电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因BC047440长度一致.RT-PCR纯化产物与载体pMD19-T连接后,经蓝白斑筛选,挑出5个白色菌落做酶切鉴定,其中2个菌落被证实为阳性克隆.测定其基因序列,结果显示与Genbank公布的BC047440基因序列完全一致.将BC047440cDNA插入质粒pET-28a(+),转化E.coliBL21,培养过夜后,挑选7个白色菌落做酶切鉴定,证实均为阳性克隆.IPTG诱导其中一个克隆表达蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明,在相对分子质量23000左右出现新的蛋白表达条带,诱导4h后表达蛋白量最多,占菌体总蛋白的22.3%.将诱导3h的菌体超声破碎后,Ni柱亲和层析,50和125mmol/L咪唑洗脱液SDS-PAGE电泳显示出清晰的单一条带.结论 成功构建BC047440基因原核表达载体,表达并纯化出重组蛋白,为深入研究其临床应用打下基础.