菜油烟冷凝物诱导大鼠气管上皮细胞转化的研究

利用本室建立的大鼠气管上皮细胞体内－体外转化模型，研究菜油油烟冷凝物凝物对大鼠气管上皮细胞的转化作用，结果显示，气管内滴注总量０．１ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ的菜油油烟冷凝物具增强转化的趋势，滴注１．５ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ则可显著提高大鼠气管上皮细胞的转化率。本研究从细胞转化角度，为验证菜油油烟为肺癌的非吸烟可疑病因之一提供了理论依据。     

菜油油烟冷凝物诱导大鼠气管上皮细胞转化的研究

利用本室建立的大鼠气管上皮细胞体内－体外转化模型，研究菜油油烟冷凝物对大鼠气管上皮细胞的转化作用。结果显示，气管内滴注总剂量０．１ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ的菜油油烟冷凝物具增强转化的的趋势，滴注１．５ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ则可显著提高大鼠气管上皮细胞的转化率。本研究从细胞转化角度，为验证菜油油烟为肺癌的非吸烟可疑病因之一提供了理论依据。     

致癌物和X射线对人支气管上皮细胞的遗传毒理作用

从组织块长出的人支气管上皮细胞培养于MCDB151无血清培养基中,利用非程序性DNA合成(UDS)和微核试验检测化学致癌物和X射线对人支气管上皮细胞的遗传毒理作用。直接作用致癌物MNNG对所测试的7例上皮细胞均可分别引起UDS或微核增高,并具有剂量反应关系。X射线对4例都可引起微核增高。然而间接作用致癌物NNK和BaP引起的反应有明显个体差异。UDS试验中,NNK处理5例中有3例增高,BaP处理的4例中有3例增高。微核试验表明NNK处理的5例中3例为阳性,BaP处理4例中3例为阳性。本实验结果提示,NNK,BaP和X射线可能是人支气管上皮细胞潜在的致癌物。     

快速筛选食管致癌物的体内试验

甲基苄基亚硝胺为强致癌物．具有明显的组织亲和性．在大鼠可诱发食管鳞癌．在小鼠可诱发前胃鳞癌．小鼠前胃为食管的延伸部分。皆被覆角化鳞状上皮细胞．我们用封闭群昆明种小鼠进行试验．甲基苄基亚硝胺剂量为0．25mg、0．5mg和1mg／kg体重灌胃．每一剂量组雌雄小鼠各3只．动物于灌胃后36h处死．取食管和胃，平铺固定于10％缓冲福尔马林，石蜡包埋，切片Feulgen染色．     

肺泡上皮细胞间质转化对肺癌细胞转移影响的研究

目的:通过以TGF-β1诱导肺腺癌细胞系A549细胞出现上皮细胞-间质细胞转化(EMT),并探讨EMT过程的信号转导途径及肺EMT与肺癌转移之间的关系。方法:体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,用荧光实时定量PCR检测上皮及间质细胞标志的mRNA表达,蛋白质印迹法检测上皮及间质细胞标志的蛋白表达、信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1和Snail2的表达及基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达,通过倒置相差显微镜观察肺EMT过程中细胞形态学的变化。结果:TGF-β1干预后,A549细胞上皮细胞标志(E-cad、CK19)的mRNA和蛋白表达下调(P<0.01),间质细胞标志(Vimentin、α-SMA)的mRNA和蛋白表达上调,P<0.05;信号转导蛋白P-Smad 2/3和Snail1上调(P<0.05),Snail2弱表达,P>0.05;基质金属蛋白酶MMP-2上调(P<0.05),MMP-9弱表达,P>0.05;倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。结论:在TGF-β1的诱导下,肺腺癌细胞从上皮细胞向间质细胞转化,其与Smad 2/3和Snail1信号转导途径相关,同时伴随了MMP-2的表达增强,因此肺泡上皮细胞向间质细胞的转化可能通过改变细胞形态学和增加基质金属蛋白酶的表达,增强了癌细胞的侵袭性,促进肺癌的转移。而通过阻断肺癌细胞的EMT过程及其信号转导途径有可能抑制肺癌的转移。     

大鼠气管上皮细胞的转化及其机制的研究

利用本室建立的大鼠气管上皮细胞(RTE)转化模型．我们观察到甲基硝基亚硝基胍(MNNG)。苯并芘(Bap)、香烟烟雾冷凝物．香烟中特异亚硝胺甲基亚硝胺吡碇基丁酮（NNK)及菜油油烟冷凝物等可以引起RTE细胞的转化，为确立香烟及菜油油烟为肺癌的可疑病因提供了理论依据．在同一模型中，我们还研究了蔬菜(主要是卷心菜)中的提取成分异硫氰酸苯已烷(PEITC）和异硫氰酸苯已烷（PHITC)对肺癌的预防作用，     

EGCG抑制苯并(a)芘诱导大鼠气管上皮细胞转化的研究

本文利用大鼠气管上皮细胞体内—体外转化模型,对绿茶提取成分—没食子酰表没食子儿茶素(epigallocatechin gallate,EGCG)。的抗突变抗转化作用进行了初步研究。结果显示,腹腔注射总剂量为300mg/kg.bw,600mg/kg.bw的EGCG可以明显抑制苯并(a)芘(benzo(a)pyrene,BP)诱导的活体大鼠气管上皮细胞转化(大鼠气管内滴注BP,25mg/ks.bw),并可抑制BP诱导的大鼠气管上皮细胞的微核形成。本研究提示了茶叶防治肿瘤的可能性。     

人永生化食管上皮细胞恶性转化的验证

目的 检查永生化人胚食管上皮细胞系（SHEE）的恶性表型、成瘤性和侵袭力,证实此细胞系传至85代（SHEE85）已完全恶性转化。方法 培养的SHEE85细胞用光镜和电镜观察细胞形态;以流式细胞仪检查细胞周期;行细胞软琼脂培养;以裸小鼠和SCID小鼠接种检测其成瘤性;以细胞培养于羊膜的体外方法和移植至SCID小鼠腹腔的体内方法测定其侵袭力。结果 SHEE85在光镜下细胞生长拥挤,大小不一;电镜下见细胞呈增殖状态。DNA组方图统计细胞增殖指数为47％,高倍体细胞12％。软琼脂培养多细胞大集落形成率4％。接种的4只裸小鼠和4只SCID小鼠皆成瘤。结论 SHEE85已完全恶性转化,并且有较强侵袭力。此细胞系可作为研究食管癌癌变细胞和分子机制可靠的模型。     

DNMT1高表达在MNNG诱导哈萨克族食管上皮细胞恶性转化中的作用

目的：利用已构建的哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞模型,探讨DNMT1高表达在MNNG诱导食管上皮细胞恶性转化中的作用,为研究食管癌发病机制提供理论依据。方法：以MNNG为诱导剂,MTT法和克隆形成实验确定MNNG的恶性转化剂量;对哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞和正常上皮细胞采用隔代染毒的方式进行染毒,每次染毒1 h,软琼脂集落形成实验观察不同染毒和传代次数的细胞集落形成情况;裸鼠成瘤实验观察哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞及其转化细胞的恶变程度。结果：MTT法和克隆形成实验发现MNNG转化浓度为1.50×10^-5 mol/L,软琼脂集落形成实验发现染毒14次第27代的哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞在软琼脂上有细胞集落形成,并且随着MNNG染毒剂量、次数和细胞传代次数的增加,出现细胞形态不规则等恶性转化特点,接触抑制逐渐消失,耐受性逐渐增强,生长速度逐渐增加,而正常上皮细胞未出现阳性结果,细胞固缩死亡。接种哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞的裸鼠出现局部肿块,但病理鉴定仅为结构紊乱,并未出现鳞癌,而接种转化细胞的裸鼠出现肿瘤,经病理鉴定为鳞癌。结论：成功构建了哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞恶性转化模型,DNMT1高表达可促进MNNG致细胞恶性转化,加快其恶变速率和恶变程度。     

应用流式细胞术研究食管上皮细胞恶性转化的特性

本文用先进的流式细胞技术(Flow Cytometry)研究了三种不同状态的大鼠食管上皮细胞:正常(NRE),不典型增生(DRE)和恶性转化的RE_(25-3),结果发现NRE和DRE的DNA指数(DI)相似为1.0,而RE_(25-3)则高达1.6—3.36,显示出明显的差异;细胞周期分析,S期细胞比例NRE为5.04％,DRE和RE_(25-3)均明显上升为29.92％和48.85％,差异十分明显。将RE_(25-3)接种至裸鼠,其S期细胞比例下降为12.24％,表现出宿主的影响。     

NNK及X-射线诱导大鼠气管上皮细胞转化的研究

本文采用无血清F12培养基培养大鼠气管上皮(RTE)细胞。RTE细胞可在该种培养基中生长,增殖。形成典型的上皮细胞集落。当无血清培养基换成含血清的选择性培养基时,正常细胞停止生长进而退化死亡,而转化的RTE细胞则可以继续生长,成为转化集落。转化集落经多次传代可在裸鼠体内引起肿瘤。大鼠暴露于致癌物NNK或X射线后,收集其RTE细胞,先在体外进行无血清培养然后再进行选择性培养,其转化率明显高于对照组。RTE细胞体内—体外转化实验对于探究人类肺癌发生机制有一定意义。     

上皮细胞间质转化与肿瘤

上皮细胞间质转化（EMT）是胚胎发育中基本的生理过程,最新研究发现,EMT对肿瘤的浸润和转移也具有重要影响,在肿瘤演进过程中,EMT涉及到多种分子机制及其构成的复杂网络。因而,对其机制及标记物的深入研究对侵袭性肿瘤具有重要的诊疗意义。     

上皮细胞间质转化与肿瘤

上皮细胞间质转化(EMT)是胚胎发育中基本的生理过程,最新研究发现,EMT对肿瘤的浸润和转移也具有重要影响,在肿瘤演进过程中,EMT涉及到多种分子机制及其构成的复杂网络.因而,对其机制及标记物的深入研究对侵袭性肿瘤具有重要的诊疗意义.     

贫铀诱发人支气管上皮细胞恶性转化

背景与目的：实验研究和流行病学调查结果表明,铀可广泛地影响人体健康,但其远期效应,特别是致癌性,还缺乏明确的结论。本文模拟人吸入贫铀（depleted uranium,DU)气溶胶的情形,研究难溶性贫铀诱发人支气管上皮细胞恶性转化及肺癌相关基因表达谱。方法：用难溶性贫铀氧化物（dUO2)作用腺病毒-12/SV40病毒永生化的人支气管上皮细胞（BEAS-2B）,通过观察不同代龄细胞的倍增时间,血清抗性,半固体琼脂克隆形成率及裸鼠成瘤性,鉴定细胞的恶性转化特性;用213个肺癌相关基因的芯片对贫铀诱发的转化BEAS-2B细胞的基因表达谱进行检测。结果：贫铀作用后的第5代BEAS-2B细胞倍增时间明显缩短,血清抗性显著增强;第10代细胞具有锚着独立性生长特性（半固体琼脂克隆形成）;第15代裸鼠体内成瘤。二甲亚砜（DMSO）对贫铀诱发的BEAS-2B细胞恶性转化有明显保护效果。213个肺癌相关基因的芯片检测结果表明,转化细胞中有70多个基因的表达水平发生明显改变,其中10余个基因表达水平明显下降。结论：贫铀在体外具有致癌性。     

人支气管上皮细胞恶性转化相关基因的克隆

[目的]根据克隆的大鼠气管上皮细胞恶性转化EST片段（GenBane Accession Number AF011363)克隆相应的人全长基因并探索其功能。[方法]根据大鼠EST序列进行生物素探针标记,cDNA文库筛选,cDNA快速终扩增延伸目的基因直到获得全长序列。[结果]HRNT－1全长cDNA 4256bp,开放阅读框架2760bp,位于254bp-3016bp之间,编码区内含有9个TRP序列;位于人类染色体Xq13;cDNA序列收录于GenBank中（Accession Number AF223393).HRNT-1在人支气管上皮恶性转化细胞以及肺癌细胞中具有较高表达。[结论]HRNT－10为一功能基因,其高表达与上支气管上皮细胞恶性转化有关。     

凝血酶转化人支气管上皮细胞形态学改变研究

目的:探讨凝血酶转化永生化人支气管上皮细胞(BEP2D细胞)形态学改变。方法:选择典型Giem-sa染色的细胞克隆图片,应用四川大学设计的MIAS-300型图像分析系统,随机选取视野内形态完整的细胞和细胞核进行测定。结果:发生恶性转化的细胞克隆细胞形态发生变化,与非转化型细胞克隆的细胞形态比较,细胞及细胞核面积、周长、最大直径、最小直径、等效直径及形状因子、异形指数、细胞核与细胞浆之比之间均有显著性差异。结论:凝血酶转化永生化人支气管上皮细胞具有恶性细胞表型。     

凝血酶转化人支气管上皮细胞形态学改变研究

目的：探讨凝血酶转化永生化人支气管上皮细胞（BEP2D细胞）形态学改变。方法：选择典型Giem-sa染色的细胞克隆图片,应用四川大学设计的MIAS-300型图像分析系统,随机选取视野内形态完整的细胞和细胞核进行测定。结果：发生恶性转化的细胞克隆细胞形态发生变化,与非转化型细胞克隆的细胞形态比较,细胞及细胞核面积、周长、最大直径、最小直径、等效直径及形状因子、异形指数、细胞核与细胞浆之比之间均有显著性差异。结论：凝血酶转化永生化人支气管上皮细胞具有恶性细胞表型。     

云锡矿粉诱导永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B恶性转化

背景与目的研究云锡矿粉对人支气管上皮细胞的致癌转化效应,以探讨云锡矿工肺癌病因及其机制。材料与方法采用永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B细胞,设200μg/ml及50μg/ml剂量的2个氧化矿染毒组和1个溶剂对照组,细胞染毒72h后,隔代染毒直至第9代。系统观察转化过程中细胞的生物学特性及血清抗性、锚着独立性生长能力等转化表型特征。结果第20代时各组细胞均未表现出血清抗性,第25代200μg/ml组细胞出现血清抗性和倍增时间增长、染色体畸变率增高;第30代时200μg/ml组细胞在软琼脂上可形成小的细胞集落,至第40代时,200μg/ml及50μg/ml剂量组细胞均能在软琼脂上形成克隆。结论云锡矿粉能体外诱发人支气管上皮细胞恶性转化。     

60C0γ射线诱发人支气管上皮细胞恶性转化模型的建立

目的:建立γ射线辐射诱导支气管上皮细胞恶性转化模型。方法:永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B经总剂量22 Gy ~(60)Coγ射线分3次照射后进行传代培养,应用平板克隆实验、血清抗性实验、细胞软琼脂集落实验检测该细胞系恶性程度;裸鼠皮下种植辐射细胞检测其成瘤能力,成瘤组织H-E染色及免疫组化进行病理学观察。结果:(1)平板克隆实验表明照射细胞培养至35代后其增殖能力明显增加(P<0.05或P<0.01),血清抗性实验显示照射组细胞在第45代后克隆形成增加(P<0.01),而在照射后50代细胞软琼脂集落的形成能力明显增加(P<0.01),显示BEAS-2B细胞经辐射后出现了恶性转化。(2)皮下种植22 Gy 50代细胞的8只裸鼠50 d后1只成瘤,种植22 Gy 60代辐射细胞的8只裸鼠中有4只成瘤;成瘤组织病理检测及免疫组化证实为上皮细胞癌。结论:成功地建立了~(60)Coγ射线诱导的支气管上皮细胞恶性转化模型。