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1.
Acrp30是脂肪来源的血浆蛋白,其生理学功能包括调节糖、脂代谢,提高胰岛素敏感性,抗动脉粥样硬化等。新近的研究表明,Acrp30有抗炎保肝的效果,有可能成为一种新的肝病治疗药物。Acrp30表达调控是与代谢相关的多种因素综合作用的结果,其中肾脏在Acrp30生物降解和清除中起重要作用,但目前Acrp30在体内的作用机制还有待于进一步研究。 相似文献
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血管生成素基因在大肠杆菌中的表达、纯化及活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:利用原核表达系统获得重组血管生成素(Ang)并研究其生物学活性。方法:构建高效融合表达载体pGEx4T—Ang,诱导表达后利用亲和层析的方法纯化目的蛋白,经切割后获得非融合的重组人Ang,利用Westem印迹检测表达产物的特异性,通过鸡胚尿囊膜血管增生实验检测重组蛋白的生物学功能。结果:表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的20%,亲和层析纯化蛋白的纯度在90%,能够与Ang抗体产生特异性反应,并具有明显的促进血管新生的活性。结论:原核表达的重组Ang具有良好的生物学活性。 相似文献
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目的:研究金黄色葡萄球菌(金葡菌)毒素的调控机制,构建pET—trap表达载体,在大肠杆菌中表达金葡菌毒素调控的重要分子TRAP蛋白。方法:从金葡菌中提取基因组DNA,用特异引物钓取trap基因。通过亚克隆的方法构建了pET—trap表达载体,在大肠杆菌中诱导表达,经亲和柱层析分离纯化。制备纯化蛋白的多抗血清,利用Western印迹检测多抗与天然蛋白的反应。结果:目的基因在大肠杆菌中获得高表达,超声破碎后,表达产物主要存在于上清中,制备的多抗血清可以与天然蛋白发生特异性反应。结论:通过原核表达获得了天然的TRAP蛋白,为研究金葡菌毒素调控机制及防治金葡菌感染奠定了基础。 相似文献
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目的:克隆表达大肠杆菌莽草酸脱氢酶基因aroE,并测定其生物学活性。方法:根据大肠杆菌中aroE基因的序列设计了一对引物,利用PCR技术扩增得到aroE基因,将其克隆入高效原核表达载体pBV220,以双脱氧法进行测序,然后对该重组子利用温度诱导表达,并测酶的生物活性。结果:构建了aroE基因的克隆和表达重组子,aroE基因获得高效表达,SDS-PAGE图谱显示新增30×103蛋白带,酶活性测定结果表明奎尼酸脱氢酶的相对酶活性是5.6倍。结论:实现了莽草酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的高效表达,证明了其具有奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌种奠定了基础。 相似文献
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脱氢奎尼酸合成酶基因aroB在大肠杆菌中的克隆和表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 :克隆表达大肠杆菌脱氢奎尼酸合成酶基因aroB ,并测定其生物学活性。方法 :根据大肠杆菌中aroB基因的序列设计了一对引物 ,利用PCR技术扩增得到aroB基因 ,将其克隆入pGEM Teasy载体中 ,以双脱氧法进行测序 ,然后再克隆入高效原核表达载体pBV2 2 0 ,对该重组子的SD序列进行调节后利用温度诱导表达 ,并测酶的生物活性。结果 :构建了aroB基因的克隆和表达重组子 ,经SD序列调节后 ,aroB基因获得高效表达 ,SDS PAGE图谱显示新增 38.8× 10 3 蛋白带 ,酶活性测定结果表明脱氢奎尼酸合成酶的相对酶活性为 5 .4。结论 :实现了脱氢奎尼酸合成酶基因在大肠杆菌中的高效表达 ,为构建产脱氢奎尼酸工程菌种奠定了基础。 相似文献
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本研究通过反转录PCR得到人GM-CSF基因片段后,通过重组插入pBV220载体质粒的EcoRⅠ、BamHⅠ之间,构建了重组表达质粒phGM91。借助计算机分析,优化了构建质粒的转译起始区,采取定点诱变以消除SD序列和ATG区的强二级结构,提高了表达水平。将GM-CSF基因进行序列测定,与文献报导完全一致,所对应的氨基酸序列与天然氨基酸序列一致。将带有表达质粒phGM91的DH5α菌在42℃诱导,表达了预期的15KD的蛋白,约占菌体总蛋白的20%,并探讨了不同菌株对表达水平的影响。用MTT法测定所表达的GM-CSF生物活性,比活性可达到1×10~7IU/mg,表明所表达的GM-CSF具有生物学作用。 相似文献
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目的:分离编码人hIL-15的cDNA并大肠杆菌中克隆与表达,方法:采用PHA刺激人外周血白细胞提取mRNA,并利用RT-PCR方法获得hIL-15的cDNA将其定向插入PUC19载体中,DNA序列分析表明分离的hIL-15的序列与文献报道一致,以pBV220为表达载体构建并筛选出重组于pBVhIL-15;重组子转化E.coliDH5α菌株,经42℃诱导表达。结果:相对分子质量为14000的hIL 相似文献
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目的:利用COS7细胞表达角质细胞生长因子(KGF)并检测其活性。方法:利用脂质体把KGF基因转入COS7细胞中,再用Western印迹和ELISA方法检测KGF蛋白的表达,然后用MTT法检测其活性。结果:KGF基因在COS7中得到了表达,并对小鼠肠上皮细胞(IEC-6)具有刺激增殖作用。结论:KGF有望成为肠型放射病治疗的新型药物。 相似文献
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目的:克隆人KGF-2基因,并在大肠杆菌中进行表达。方法:通过PCR扩增,从人胎肝cDNA文库中获得编码人KGF-2的cDNA,并将其分别克隆入pBV220,pLEX和pGEX4T-1质粒中,研究其在不同表达质粒和大肠杆菌中的表达情况。结果:克隆得到的KGF-2cDNA经测序证明与文献报道的序列一致。将其克隆于pBV220质粒中,在E.coli JM109中表达量相对最高,约占茵体总蛋白的4%;克隆于pLEX质粒中,在E.coli G1724中的表达量约占全茵总蛋白的5%;克隆于pGEX4T-1中,在E.coli JM109中的表达量可占到全茵总蛋白的20%。结论:采用GST融合蛋白表达质粒pGEX4T-1对KGF-2进行表达,较pBV220和pLEX具有明显优势,能实现对KGF-2的高效表达,为进一步的功能研究奠定了基础。 相似文献
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目的:通过观察影响HCV C基因在大肠杆菌中表达的因素,研制高表达工程菌株,制备重组抗原,用于免疫诊断和生物学功能研究。 相似文献
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丙型肝炎病毒T细胞表位的筛选及其在大肠杆菌中的克隆与表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:在丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)不同变异株中,筛选高保守的能涵盖多种MHC限制类型的T细胞表位,并构建重组表位抗原的原核表达质粒。方法:检索文献并结合MHC限制型,从中遴选出功能明确的T细胞表位;利用Goldkey软件,建立HCV全长蛋白序列数据库;从中分别截取各个表位所在区段,对所选取的表位进行同源性比较;从中选取保守性强的部分表位,用化学法合成表位基因,插入原核表达载体pBVIL1中,构建多个融合表达质粒并在E.coli表达。结果:从文献中获得HCV免疫优势性T细胞表位18个,在由55条全长HCV序列组成的数据库中进行比较,获得了大量有关表位保守性的信息,并进行了统计分析,所构建的5个表达质粒pBVIL1—T1—T5经鉴定后,在大肠杆菌中均获得了高效表达。结论:本研究有助于深入认识HCV T细胞表位的特性,为表位的筛选提供了方法学依据,所选取的表位及原核表达的重组蛋白,为HCV治疗性疫苗的实验研究提供了候选抗原。 相似文献
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目的:利用大肠杆菌表达具有生物活性的人降钙素(hCT)。方法:以人类基因组DNA,为模板,经PCR扩增获取hCT基因片段,测序分析克隆到pUC19载体中的PCR产物,确定得到两种CT基因序列,其中1^#与文献报道完全一致,2^#序列中含有(G64/A)点突变,采用带有热诱导启动子的高效表达载体pBV220,对所获得的基因进行了表达,并利用大鼠降血钙实验,对表达产物的活性进行了检测。结果:所获得的r 相似文献