雌激素对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用的研究

目的　研究外源性雌激素替代对大鼠局灶性脑缺血 再灌注损伤的神经保护作用。方法　将12 0只大鼠分为对照组、双侧卵巢切除 (OVX)组、OVX +雌二醇 (E2 )组 (E2 2 0 0 μg/kg ,皮下注射每周 1次 ,连续 4周 )。 4周后用线栓法建立脑缺血再灌注模型 ,在缺血再灌注不同时间观察大鼠脑梗死体积、病理改变、凋亡细胞数及检测血浆雌激素水平。结果　缺血再灌注不同时间均以OVX +E2 组脑梗死体积最小 ,OVX组最大 ,两组比较有显著差异 (均P <0 0 1)。凋亡细胞数OVX组明显多于OVX +E2 组 (P <0 0 5 )。结论　雌激素对缺血 再灌注后脑损伤具有明显的保护作用     

吡格列酮对脑缺血再灌注损害的保护作用及对血小板活化因子和P-选择素表达的影响

目的 研究吡格列酮对脑缺血再灌注损害的保护作用及对血小板活化因子(PAF)和P-选择素(Ps)表达的影响.方法 用线栓法建立脑缺血再灌注大鼠模型.制模前7d起,分别予以大剂量吡格列酮组大鼠20 mg/(kg·d)、小剂量吡格列酮组大鼠10 mg/(kg·d)吡格列酮灌胃,对照组大鼠给等量生理盐水灌胃,连续7d.在缺血再灌注24 h后,给大鼠进行神经功能缺损评分,脑组织2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色、苏木精-伊红染色,观察脑梗死体积、脑水肿程度及病理学变化.采用免疫组化法检测大鼠脑组织PAF和Ps的表达.结果 与对照组比较,大剂量吡格列酮组和小剂量吡格列酮组的神经功能缺损评分显著降低、脑梗死体积显著缩小(P ＜0.05 ～0.01);病理改变明显较轻.大剂量吡格列酮组的脑水肿程度显著低于对照组(P＜0.05),小剂量吡格列酮组与对照组脑水肿程度的差异无统计学意义.大剂量和小剂量吡格列酮组脑组织PAF阳性细胞数、Ps阳性血管数明显少于对照组,大剂量吡格列酮组的PAF阳性细胞数明显少于小剂量吡格列酮组(P ＜0.05～0.01).结论 吡格列酮预处理能减轻缺血再灌注脑损害,降低脑组织PAF和Ps的表达,其可能是通过减轻缺血再灌注后的炎症反应而起到脑保护作用.     

托吡酯对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的探讨托吡酯(TPM)对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其机制。方法将健康30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和TPM干预组。用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,TPM干预组给予TPM80mg/kg腹腔注射,2次。缺血再灌注24h时进行神经功能评分、TTC染色法测量梗死体积、高效液相色谱分析法测定脑组织谷氨酸(Glu)及γ-氨基丁酸(GABA)的含量;免疫组化法检测GABAA受体阳性表达。结果(1)与缺血再灌注组比较,TPM干预组神经功能评分明显增高(P<0.01),脑梗死体积减少(P<0.05);(2)TPM干预组缺血侧脑皮质Glu含量显著低于缺血再灌注组(P<0.01),与假手术组比较差异无显著性;GABA含量显著高于假手术组和缺血再灌注组(均P<0.01);(3)TPM干预组缺血侧脑皮质GABAA受体阳性细胞数显著高于缺血再灌注组(P<0.01)。结论TPM对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其机制可能为TPM降低兴奋性递质Glu水平、增加抑制性递质GABA的释放及GABAA受体的表达。     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的时间窗及其作用机制的探讨

目的　研究胶质细胞源性神经营养因子 (glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对脑缺血再灌注损伤保护作用的时间窗及其保护作用机制。方法　应用免疫组织化学方法观察 GDNF对缺血半暗带Caspase-3及 TNFα蛋白表达的影响 ;TTC染色测定梗死灶体积。结果　与对照组比较 (3 2 3 .1± 49.6) ,0 h及 1h给药组梗死灶体积减小 (193 .4± 53 .8,2 41.1± 57.5) ,0 h组 Caspase-3蛋白表达减少 (10 7.2± 9.5及 92 .3± 6.5) ,各组 TNFα蛋白的表达差异均无显著性。结论　 GDNF对脑缺血再灌注损伤保护作用的时间窗在 3 h之内 ,其作用机制可能与抑制 Caspase-3介导的细胞凋亡有关     

藻酸双酯钠对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞保护作用的研究

目的探讨藻酸双酯钠(PSS)对脑缺血再灌注后神经细胞的保护作用。方法采用线栓法制作大脑中动脉阻断(MCAO)再灌注大鼠模型。PSS治疗组大鼠于再灌注即刻及再灌注24 h、48 h分别给予PSS(18.75 mg/kg)腹腔注射;对照组、假手术组和正常组均同时给予等量生理盐水腹腔注射。观察大鼠神经功能、脑梗死体积、组织学、超微结构和凋亡细胞数的改变。结果(1)PSS治疗组和对照组神经功能评分分别为(1.83±0.75)分和(2.83±0.75)分,脑梗死体积分别为(107.9±12.1)mm3和(150.3±30.5)mm3,两组比较差异有显著性(均P<0.05);(2)PSS治疗组大鼠脑组织缺血损伤改变明显轻于对照组,神经细胞的组织学和超微结构接近正常;(3)PSS治疗组细胞凋亡数于再灌注后1 h和3 h与对照组相比,差异均无显著性(均P>0.05),再灌注6 h、12 h、24 h、48 h及72 h凋亡细胞数明显少于对照组(P<0.05~0.01)。结论PSS能明显减轻大鼠脑缺血再灌注后的神经功能障碍和神经细胞损害,缩小脑梗死体积,抑制神经细胞凋亡,从而对神经细胞具有保护作用。     

纳络酮对全脑缺血大鼠的神经保护作用研究

全脑缺血后如何保护脑功能、减轻缺血/再灌注损伤是目前研究热点,但有效的神经保护剂并不多,仅tempol、MK-801等在实验中证明有效。纳络酮,作为传统意义的阿片受体拮抗剂,在许多实验和临床研究中亦被证明有神经保护作用,但仍存在较多争议。最近研究揭示纳络酮具有抑制钙超载的作用,本文通过研究其对钙结合蛋白表达的影响来探讨纳络酮的神经保护作用。1材料与方法实验选用健康SD大鼠29只,雌雄不拘,体重185.5～294.0g,建立窒息 艾司洛尔的大鼠心肺骤停模型[1],实验参数设计和记录均参照实验研究的Utstein模型。实验动物随机分为4组:假手术组…     

甘氨酸受体激动剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的 观察5种甘氨酸受体激动剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,从中筛选出作用最佳的氨基酸.方法 大鼠70只,随机分为假手术组、对照组、牛磺酸组、L-丝氨酸组、甘氨酸组、β-丙氨酸组、L-α-丙氨酸组,每组10只.用大脑中动脉线栓法制作大鼠缺血再灌注模型,再灌注时各组分别腹腔注射相应的药物,对照组注射等剂量生理盐水,12 h后各组重复注射1次.所有动物于再灌注后24 h进行神经行为学评分,各组中6只采用TTC法测量脑梗死体积,剩余4只用尼氏染色观察脑组织病理学改变.结果 5种甘氨酸受体激动剂中,牛磺酸组、L-丝氨酸组与对照组相比,可明显改善大鼠神经功能缺损(均P＜0.01),减少脑梗死体积(均P＜0.05),同时逆转脑缺血损伤侧顶叶皮质神经元的变性坏死与丢失;而其余氨基酸的神经保护作用不明显.结论 5种甘氨酸受体激动剂中,L-丝氨酸、牛磺酸的抗脑缺血损伤效果最佳.     

茶氨酸对脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的观察茶氨酸对脑缺血再灌注损伤的保护作用,为临床脑缺血再灌注损伤的预防和治疗提供实验依据。方法将24只健康家兔随机分为四组：假手术组、脑缺血组、茶氨酸予处理组和茶氨酸治疗组。麻醉后分离血管,采用基底动脉、双侧颈总动脉结扎法制备急性全脑缺血再灌注动物模型。假手术组仅分离动脉不结扎,予处理组在缺血前应用茶氨酸,治疗组在缺血后应用茶氨酸,缺血组不作特殊药物处理。各组分别在规定时间点即缺血前、再灌注后30min、1h、2h采血测定神经特异性烯醇化酶(NSE)含量,取脑组织活检观察超微结构,处死动物测定脑含水量。结果茶氨酸予处理组和治疗组以上各项指标均较脑缺血组有显著的改善,提示茶氨酸具有神经保护作用。实验还显示茶氨酸予处理组在再灌注30min时NSE含量与假手术组比较无差异,提示用茶氨酸予处理后可能使缺血后脑损害的发生延迟,为进一步的治疗争取了宝贵时间。结论茶氨酸对脑缺血再灌注损伤有保护作用,值得进一步研究。     

白藜芦醇对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用

目的探讨白藜芦醇(Res)预处理对脑缺血再灌注大鼠神经功能损伤的作用及其机制。方法将80只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、Res组、Res+PI3K抑制剂组,每组20只。以线栓法建立大脑中动脉阻塞后缺血再灌注模型。造模前6 d,Res组和Res+PI3K抑制剂组腹腔注射Res(15μg/g,1次/d),假手术组和模型组腹腔注射等体积生理盐水;造模前30 min,Res组和Res+PI3K抑制剂组先腹腔注射Res(15μg/g),然后,Res+PI3K组用微量注射器向右侧脑室注射PI3K抑制剂3-MA 5μl(50μg),假手术组和模型组右侧脑室注射等体积生理盐水。造模后24 h处死大鼠采用TTC染色法评估大鼠脑梗死面积,取材前行神经功能评分;以尼氏染色以及透射电镜观察神经细胞尼氏体和自噬体数量;通过Q-PCR法检测脑组织自噬基因mRNA水平,免疫印迹法检测脑组织PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白及磷酸化表达水平。结果与假手术组相比,模型组神经功能评分明显增高(P<0.05),脑梗死体积明显增大(P<0.05),损伤脑组织尼氏体明显减少(P<0.05),自噬相关基因Beclin1 mRNA水平明显升高(P<0.05),PI3K、mTOR和Akt蛋白表达水平无显著变化(P>0.05),而各自蛋白磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。相比于模型组,Res组上述变化明显改善(P<0.05),而PI3K抑制剂明显抑制Res的作用(P<0.05)。结论Res能有效减轻缺血再灌注模型大鼠脑组织造成的神经功能损伤,可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路促进细胞自噬有关。     

硫酸镁对脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的：探讨不同时间、不同剂量硫酸镁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能的保护作用。方法：50只雄性SD大鼠被随机分为再灌注前高硫酸镁组、再灌注前低硫酸镁组、再灌注后高硫酸镁组、再灌注后低硫酸镁组和对照组共五组。采用改良的Longa′s法制作脑缺血再灌注模型,术后4h予以再通。术后6h采用胡氏脑组织微量分析法,测定梗死脑组织的Na^ 、K^ 、水含量,术后24h先进行神经病学评分,再断头取脑染色后进行梗死灶体积的测定。结果：硫酸镁治疗组与对照组相比,梗死灶体积缩小,脑水肿减轻,神经功能恢复好。治疗效果高硫酸镁组优于低硫酸镁组,再灌注前组又优于再灌注后组,其中再灌注前高硫酸镁组效果最为显著。结论：硫酸镁对脑缺血后再灌注损伤有明显地神经保护作用,且治疗效果与治疗时间早晚和剂量大小密切相关。     

KATP开放剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的观察ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂尼可地尔（nicorandil）对大鼠脑缺血／再灌注（I／R）损伤的保护作用及其机制。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为4组：A组（假手术组）、B组（脑缺血再灌注组）、C组（脑缺血再灌注＋尼可地尔组）及D组（脑缺血再灌注＋尼可地尔＋5-HD组），采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，各组于脑缺血2h后进行再灌注，再灌注22h后观察各组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、线粒体标志酶活性和脂质过氧化降解产物丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量。结果（1）B、C、D组再灌注22h后神经功能评分显著低于A组，脑梗死体积、脂质过氧化物MDA含量均显著高于A组，线粒体标志酶活性SDH、CO表达显著低于A组（P〈0.01）；（2）与B、D组比较，C组神经功能评分明显升高，脑梗死体积、MDA含量明显减少，SDH、CO活性明显增高（P〈0.01）；（3）B组和D组各指标之间比较差异均无显著性（P〉0.05）。结论尼可地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制可能与开放mitoKATP通道、维护线粒体功能、减少氧自由基产生有关。     

脑缺血再灌注损伤机制研究进展

脑缺血一定时间恢复血液供应后，其功能不但未能恢复，却出现了更加严重的脑机能障碍，称之为脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury，CIR）。缺血再灌注损伤涉及极其复杂的病理生理过程，其中各个环节、各种影响因素间的相互作用尚未完全阐明。现对脑缺血再灌注损伤一些重要机制进行简述如下。     

神经节苷脂对大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护作用

目的探讨神经节苷脂对大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。方法采用线栓法制作缺血再灌注大鼠模型,分别用神经节苷脂(治疗组)和生理盐水(对照组)腹腔注射。观察两组大鼠缺血90min、缺血90min再灌注24h的脑梗死面积、神经功能缺损程度、细胞凋亡数、细胞凋亡率。结果治疗组大鼠于相同时间点脑梗死面积较对照组明显减小,仅表现轻度的神经功能缺损,且神经细胞的凋亡数较对照组显著减少(均P<0.01)。结论神经节苷脂能明显减小大鼠实验性脑缺血的脑梗死面积,减轻脑缺血再灌注后神经功能缺损程度,显著减轻缺血区神经元损害,具有显著的脑保护作用。     

线粒体分裂抑制剂在大鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制

目的 探讨线粒体分裂抑制剂(Mdivi-1)在大鼠脑缺血再灌注损伤线粒体凋亡过程中的保护作用及其机制. 方法 按随机数字表法将成年健康雄性Wistar大鼠60只分为假手术组、模型组和Mdivi-1预处理组,每组各20只,其中模型组和Mdivi-1预处理组大鼠采用线栓法经左侧颈外-颈内动脉插线建立脑缺血再灌注损伤模型,并于脑缺血前15 min预先尾静脉给予等容量二甲基亚砜和Mdivi-1(1.2 mg/kg).再灌注24 h后应用TUNEL法观察各组大鼠脑组织神经细胞凋亡情况,SABC免疫组化染色检测细胞色素C(CytC)阳性细胞表达,Western blotting检测CytC蛋白表达,RT-PCR检测CytC mRNA表达. 结果 与假手术组比较,模型组神经细胞凋亡率、Cyt C阳性细胞率、Cyt C蛋白及mRNA表达水平(4.16％±0.25％vs 45.49％±0.77％;4.22％±0.20％vs55.12％±1.47％;0.395±0.002 vs 0.932±0.001;0.467±0.003 vs 0.789±0.009)显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).应用Mdivi-1预处理后神经细胞凋亡率、CytC阳性细胞率、CytC蛋白及mRNA表达水平(30.76％±0.51％; 35.07％± 1.42％; 0.594±0.002;0.523±0.004)较模型组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 Mdivi-1通过阻断线粒体-Cyt C途径从而抑制细胞凋亡,减轻脑缺血再灌注损伤.     

金丝桃苷对大鼠局灶性脑缺血／再灌注损伤的脑保护作用

目的研究金丝桃苷(Hyp)在缺血性脑血管病中的神经保护作用。方法78只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血对照组、Hyp组,后2组又根据观察时间点不同分为脑缺血2h后再灌注1、3、6、12、24、48h 6个亚组,每组6只,线栓法建立大鼠缺血再灌注模型,固定取脑干,湿比重法测定脑组织含水量。结果自3h起同时间点对照组和Hyp组脑水含量均显著高于假手术组(P<0.05),其中Hyp组显著低于对照组(P<0.05)。结论Hyp能有效减轻大鼠缺血/再灌注早期脑水肿,有显著脑保护作用。     

槲皮素-3半乳糖苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注炎症损伤机制的影响

目的研究槲皮素-3-半乳糖苷(金丝桃苷)对缺血性脑血管病的神经保护作用。方法78只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血对照组、金丝桃苷缺血组(Hyp组),后2组又根据观察时间点不同分为脑缺血2h后再灌注,3h、6h、12h、48h六个亚组,每组各6只,线栓法建立大鼠缺血再灌注模型。SABC免疫组化染色法分别记录各组不同时间点的P-选择素和E-选择素阳性反应血管数。结果自3h起同时间点金丝桃苷苷组P-选择素、E-选择素水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论金丝桃苷能有效抑制大鼠缺血/再灌注早期P、E-选择素的表达,有显著脑保护作用。     

水通道蛋白4在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的研究水通道蛋白4(AQP4)在缺血再灌注损伤大鼠脑内表达及作用。方法以大脑中动脉线栓法建立大鼠缺血再灌注模型,采用干湿法测定模型的脑组织含水量及伊文氏蓝含量;免疫蛋白印记(WesternBlot)技术分析在缺血再灌注不同时程脑内AQP4的表达情况,以及AQP4与脑含水量和伊文氏蓝水平的相关性,并与对照组比较。结果与对照组相比,实验组大鼠脑组织含水量及伊文氏蓝水平在缺血再灌注后不同时间点明显高于对照组(P<0.05～0.01);AQP4蛋白表达明显增高(均P<0.05),并随着缺血再灌时间的延长,其表达量亦逐渐增加,在再灌后24～48h达到高峰。缺血再灌注后AQP4脑内的表达与脑组织含水量及伊文氏蓝水平呈正相关(r=0.38、r=0.45,均P<0.05)。结论AQP4的高表达参与了脑缺血再灌注后继发的血脑屏障的开放和脑水肿的发生,是脑水肿产生的重要分子基础。     

Therapeutic time window of picroside on cerebral ischemia reperfusion injury in rats

BACKGROUNG: Cerebral schemia may result in cerebral edema and neuronal injury by activating some endogenous mechanisms. It has been confirmed that picrosideⅡ could protect neuronal damage in vitro an ex vitro. OBJECTIVE: The aim of the present study is to explore the neuroprotective effects and the perfect treatment window of picrosideⅡ on brain insult in rats following middle cerebral artery occlusion and reperfusion (MCAO/R). DESIGN, TIME AND SETTING: A randomized, controlled animal experiment was performed at Institute of Cerebrovascular Diseases, Qingdao University Medical College from September 2008 to May 2009. MATERIALS AND METHODS: One hundred and sixty-five adult healthy male Wistar rats were randomly divided into a sham-operation group (n=15), a control group (n=75) and a treatment group (n=75). Rats in the control group and the treatment group were experimented surgery operation of MCAO/R with an intraluminal monofilament suture from left external-internal carotid artery. Those in the treatment group were injected 1.0％ picrosideⅡat a single dosage of 10mg/kg from the tail vein. We evaluated neurological function score by Longa’s method, cerebral infarction volume with tetrazolium chloride (TTC) stain. Then we compared cell apoptosis by terminal deoxynucleotidyl transference-mediated biotinylated deoxyuridine triphosphate nick end labeling technique (TUNEL), and determined the expression alternation of aquaporin-4 (AQP-4) via fluorescence labeling analysis and RT-PCR technique. RESULTS: After MCAO/R, neurological function scores were decreased, and a small infarction focus could be detected in ischemic cortex in the control group at ischemic 0.5h, along with the increased number of positive-apotosis cells and the elevated expression of AQP-4 mRNA and its protein. With the duration of ischemia, neurological scores and infarction sizes obviously increased in the control group during ischemic 1.0h-2.0h. A great deal of positive-apoptotic cells were widespread in the cortex and the striatum in the ischemic ipsilateral. Simultaneously, the expression of AQP-4 mRNA and its protein increased to some extent. PicrosideⅡ treatment significantly improved the loss of neurological function, decreased the infarction volume, and elevated the expression levels of AQP-4 mRNA and its protein compared with those in the control group. The therapeutic effect of picrosideⅡ was notable, especially in the ischemic 1.0h subsection. CONCLUSION: These results demonstrate that picrosideⅡ played a neuroprotective effect on cerebral ischemic reperfusion by inhibiting apoptosis and regulating the expression of AQP-4 mRNA and its protein. The best therapeutic window is at ischemic 1h after MCAO.     

氨基胍对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞损伤的影响

目的　探讨氨基胍 (AG)对脑缺血 再灌注 (IR)神经细胞损伤的影响。方法　用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血 再灌注模型 ,动物缺血 2小时后给予腹腔注射AG 10 0mg·kg-1,取不同再灌注时间测定大鼠脑匀浆NOS活性、髓过氧化物酶 (MPO)活性和脑梗死体积。结果　再灌注后 12～ 72小时 ,AG显著降低了iNOS活性 ,且于再灌注后 2 4小时达最大抑制率。再灌注后 2 4～ 72小时 ,AG减少髓过氧化物酶 (MPO)含量。再灌注后 2 4～ 72小时 ,AG减少梗死体积。结论　AG对脑缺血 再灌注神经细胞损伤具有一定的保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注后血小板活化因子及其受体的病理作用

目的探讨血小板活化因子(PAF)及其受体(PAFR)在大鼠缺血再灌注后的病理性神经毒性作用及其可能的干预方法。方法选用SD大鼠建立一侧大脑中动脉缺血再灌注模型,于缺血再灌注后3h、6h、12h用高效薄层层析法测定大脑皮质缺血侧和缺血对侧PAF含量、RT-PCR检测PAFR基因表达。使用原代野生型小鼠皮质神经元细胞培养系统,将体外培养的神经元分为空白对照组、PAF组和PAF 拮抗剂组,应用碘化物/钙黄绿素染色分别检测各组细胞凋亡情况。结果缺血侧的大鼠皮质在缺血再灌注后3h、6h、12h PAF含量(单位为ng/g)分别为13·71±1·23、17·90±1·14和17·89±1·54;PAFR基因表达(单位为密度)分别为0·5892±0·1222、2·0512±0·1519、2·0168±0·1653,缺血再灌注6h、12h组缺血侧皮质PAF含量及PAFR基因表达与缺血对侧、再灌注3h比较差异有极显著性(均P<0·01);在进一步的体外小鼠皮质神经元细胞培养中,PAF组、PAF 受体拮抗剂组细胞凋亡率分别为(41·92±1·39)%和(18·94±1·18)%,与空白对照组[(10·23±0·59)%]比较差异有极显著性(均P<0·01),PAF 受体拮抗剂组细胞凋亡率与PAF组比较明显降低(P<0·01)。结论缺血性神经损伤作用是由PAF及其受体介导,用PAFR拮抗剂进行干预,对缺血缺氧性神经元损伤具有保护作用。