大肠埃希菌O157血清型分离株的脉冲场凝胶电泳分型

目的了解杭州地区分离的产志贺毒素和不产志贺毒素大肠埃希菌O157菌株的分子流行病学特征。方法对杭州地区于1997～2005年间自散发腹泻患者和动物中分离的10株大肠埃希菌O157血清型菌株,PCR检测毒力基因stx1、stx2、eae和ehxA,eae阳性者进行eae基因分型;按标准化的脉冲场凝胶电泳法(pulsefieldgelelectrophoresis,PFGE)进行分子分型,并与国内其他省份分离的产志贺毒素大肠埃希菌(Shigatoxin_producingEscherichiacoli,STEC)O157∶H7菌株进行比较。结果杭州分离菌株HZ1_11携带毒力基因stx2、γ型eae和ehxA,为浙江省检获的首株STECO157∶H7;3株杭州O157∶NM分离菌株(2_1、26_1和SR05株)仅携带β型eae基因;其他6株杭州O157∶H?分离菌株中,均未检出毒力基因。PFGE揭示,在杭州人源O157菌株中,STECO157∶H7HZ1_11株与近年江苏和安徽分离STECO157∶H7菌株密切近缘,且其图谱与江苏菌株几乎完全相同;3株eae阳性的O157∶NM分离菌株聚类成与STECO157∶H7菌株较远的一簇,杭州1株stx阴性的O157∶H?(1_68株)则处于另一独立的一簇。5株杭州O157∶H?动物分离菌株与其他人源菌株图谱差异极大。结论浙江省首株STECO157∶H7可能是源自近年在江苏流行的STECO157∶H7菌株。β型eae阳性的大肠埃希菌O157∶NM菌株可能具有引起散发腹泻的能力。     

不同来源产志贺毒素大肠埃希菌分布特征

目的探讨不同标本中产志贺样毒素大肠埃希菌（STEC）的分布特征。方法采集动物粪便、肉类食品和排污口污泥样品，常规分离大肠埃希菌，血清学分型，PCR鉴定产志贺样毒素（stx1，stx2）菌株。结果293份标本中鉴定出8株STEC，1株为产志贺毒素O157：H7型，2株为不产志贺毒素O157：H7型，5株为产志贺毒素非O157：H7型。结论STEC存在于不同来源的标本中，菌株表型与毒力因子存在一定差异。     

浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7的分子生物学特性研究

目的:了解自浙江省杭州市腹泻婴儿中分离的1株大肠埃希菌O157:H7(HZ1-11株)的分子生物学特性.方法:应用ATB1525细菌半动化生化鉴定系统鉴定菌种.应用O157特异性抗血清玻片凝集试验、H7特异性抗血清试管凝集试验、以及PCR检测O抗原特异性rfbE基因和H7特异性fliC基因,进行菌株血清型的鉴定.应用多重Real-timePCR和常规PCR检测stx1、stx2、hly和eae毒力基因.对菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,并与国内代表菌株进行比较.ATB1525药敏检测仪和纸片法检测菌株的抗药性.结果:细菌生化鉴定为大肠埃希菌,山梨醇阴性.血清型为O157:H7.毒力基因stx2、hly和eae均阳性,stx1阴性.PFGE谱带同江苏分离O157:H7菌株几乎完全相同,带型的相似度为97%.结论:该菌株为浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)O157:H7,与国内近年在江苏等地流行的STECO157:H7菌株密切相关.STEC O157:H7已开始对浙江地区的人民健康构成了威胁.     

浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌0157：H7的分子生物学特性研究

目的：了解自浙江省杭州市腹泻婴儿中分离的1株大肠埃希菌O157：H7（HZI-11株）的分子生物学特性。方法：应用ATB1525细菌半动化生化鉴定系统鉴定菌种。应用0157特异性抗血清玻片凝集试验、H7特异性抗血清试管凝集试验、以及PCR检测O抗原特异性rfbE基因和H7特异性fliC基因，进行菌株血清型的鉴定。应用多重Real-time PCR和常规PCR检测stx1、stx2、hly和eae毒力基因。对菌株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型，并与国内代表菌株进行比较。ATB1525药敏检测仪和纸片法检测菌株的抗药性。结果：细菌生化鉴定为大肠埃希菌，山梨醇阴性。血清型为O157：H7。毒力基因stx2、hly和eae均阳性，stx1阴性。PFGE谱带同江苏分离O157：H7菌株几乎完全相同，带型的相似度为97％。结论：该菌株为浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）O157：H7。与国内近年在江苏等地流行的STEC O157：H7菌株密切相关。STEC O157：H7已开始对浙江地区的人民健康构成了威胁。     

大肠埃希菌O157:H7嵌合荧光RAM检测分析

目的建立大肠埃希菌O157：H7的嵌合荧光法（SYBR Green I）实时网状分枝扩增（RAM）检测技术.方法将产志贺样毒素大肠埃希菌O157：H7靶基因递比稀释确定SYBR Green I实时RAM的灵敏度,并进一步检测临床分离的菌株.结果SYBR Green I实时网状分枝扩增技术最低能检测10个产志贺样毒素大肠埃希菌O157：H7,检测信号出现的时间与靶基因的浓度成正比,临床分离3株产志贺样毒素大肠埃希菌O157为阳性,而非致病性大肠埃希菌为阴性.结论SYBR Green I实时RAM是一种快速、灵敏、准确、实时、环保的检测大肠埃希菌O157：H7的新核酸扩增技术.     

江苏省1999年大肠埃希菌O157：H7宿主动物带菌情况调查

目的 了解江苏省不同地区大肠埃希菌O157：H7宿主动物带菌情况及其毒力基因阳性率。方法 在不同流行强度的地区分别设立监测点，采集猪、鸡，羊，牛等家畜家禽粪便标本，用免疫磁珠法进行病原菌分离培养，并用多重引物聚合酶链反应进行毒力基因分析。结果 6个监测点共采集猪、鸡、羊、牛等家禽粪便标本1767份，共检出大肠埃希菌O157：H7170株，总带菌率为9.62%。其中，以牛、羊带菌率较高，分别为19.05%和12.01%。对85株菌进行SLT1、SLT2、eaeA和hly4种毒力基因的检测，56.47%的菌株毒力基因阳性，且以同时带有SLT2、eaeA和hly3种毒力基因最为常见，占带毒菌株的79.17%。结论 宿 主动物带菌率与当地疾病流行强度有关，即有确诊病人的地区宿主动物带菌率及菌株毒力基因阳性率最高，其次为仅有零星病例的地区，而无相关病例的地区最低，提示加强宿主动物大朦胧怕埃希菌O157：H7监测，对疫情的分析和疫情预测具有重要意义。     

大肠埃希菌O157∶H7携带stx2::IS1203v基因研究

目的了解中国部分地区大肠埃希菌O157：H7菌株携带志贺毒素基因变异状况。方法采用聚合酶链反应扩增志贺毒素基因，使用核苷酸序列测定判断是否存在志贺毒素的新变种，用HeLa细胞毒性实验研究其细胞毒性的变化。结果1992—2002年中国部分地区分离到的289株产志贺毒素的大肠埃希菌O157：H7中有3株菌携带的志贺毒素2（stx2）基因有1．3kb的插入序列（IS）插入，且这段IS和IS1203变种（IS1203 variant，IS1203v）有100％的核苷酸序列同源性。IS1203v插入到3株大肠埃希菌O157：H7 stx2基因的位置及开放性读码框（ORF）方向有所不同。除此之外，3株菌原有的stx2基因序列完全一致且为Stx2原型毒素。和Stx2原型毒素相比，这3株携带stx2：：IS1203v基因的菌株对HeLa细胞的毒性明显降低。结论分离到IS1203v插入stx2基因的大肠埃希菌O157：H7菌株；IS1203v的插入可导致对HeLa细胞的细胞毒性降低。     

从农村耕牛粪便中检出产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7

目的：调查东阳市家畜、家禽中O157：H7的携带状况,并进一步了解分离到的1株STEC O157：H7的分子生物学特性。方法：随机采集全市各乡镇的家畜、家禽粪便及其生鲜肉样品,进行大肠埃希菌O157：H7的检测,应用O157和H7特异性抗血清凝集试验进行菌株血清型的鉴定;选用ATB全自动微生物鉴定仪和VITEK 2-COMPACT进行常规生化及药敏试验;使用PCR检测O、H抗原编码基因和SLTl、SLT2、hly、eaeA 4种毒力基因。结果：在109份样品中,分离出1株经细菌生化鉴定为大肠埃希菌O157,血清型为O157：H7的菌株;使用PCR检测到O157：H7的O、H抗原编码基因和毒力基因SLT2、hly、eaeA,但未检测到毒力基因SLTl。结论：从东阳市的一头农村耕牛粪便中分离到1株STEC O157：H7,提示疾控中心要加强主动监测,及时发现可能发生的疫情,通过有效干预,防范肠出血性大肠杆菌O157：H7所致食源性疾病的发生。     

江苏省1999年大肠埃希菌O157∶H7宿主动物带菌情况调查

目的　了解江苏省不同地区大肠埃希菌O15 7∶H7宿主动物带菌情况及其毒力基因阳性率。方法　在不同流行强度的地区分别设立监测点 ,采集猪、鸡、羊、牛等家畜家禽粪便标本 ,用免疫磁珠法进行病原菌分离培养 ,并用多重引物聚合酶链反应进行毒力基因分析。结果　 6个监测点共采集猪、鸡、羊、牛等家畜家禽粪便标本 176 7份 ,共检出大肠埃希菌O15 7∶H7170株 ,总带菌率为 9.6 2 %。其中 ,以牛、羊带菌率较高 ,分别为 19.0 5 %和 12 .0 1%。对 85株菌进行SLT1、SLT2、eaeA和hly 4种毒力基因的检测 ,5 6 .4 7%的菌株毒力基因阳性 ,且以同时带有SLT2、eaeA和hly 3种毒力基因最为常见 ,占带毒菌株的 79.17%。结论　宿主动物带菌率与当地疾病流行强度有关 ,即有确诊病人的地区宿主动物带菌率及菌株毒力基因阳性率最高 ,其次为仅有零星病例的地区 ,而无相关病例的地区最低。提示加强宿主动物大肠埃希菌O15 7∶H7监测 ,对疫情的分析和疫情预测具有重要意义     

2005～2007年中国食品中疑似O157大肠埃希菌的鉴定及毒素基因的检测

目的对中国2005～2007年食源性疾病监测网分离疑似O157大肠埃希菌进行鉴定,了解各种不同类型监测食品中大肠埃希菌O157的分布及毒力基因的携带情况。方法运用API20E生化试剂条进行初步鉴定,使用血清分型和PCR方法确定菌株,并检测毒力基因。结果(1)通过API20E生化初步鉴定共获得154株疑似O157大肠埃希菌。(2)通过血清学方法和特异基因的检测,共确定89株大肠埃希菌O157,其中42株是O157:H7(47%),其余的菌株为O157:NM和O157:hund(未确定型)。(3)毒力基因的检测:42株O157:H7和6株O157:NM携带eaeA+hlyA基因;共29株菌携带stx基因,主要分布在不发酵山梨醇O157:H7菌株中。(4)监测的生羊肉、生牛肉、生猪肉、生鸡肉、蔬菜沙拉等食品中均检出了携带stx基因的O157:H7。结论鉴定结果显示中国部分监测食品中均分离到有一定程度致病力的大肠埃希菌O157。     

衢州市2000-2009年肠出血性大肠埃希菌O157∶H7监测

目的了解浙江省衢州市肠出血性大肠埃希菌O157∶H7人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况。方法在流行季节采集腹泻患者、动物粪便以及各类食品、苍蝇等样本,MEC肉汤增菌后,用特异性免疫磁珠集菌,以科玛嘉显色平板分离,纯化的菌株进行生化鉴定、血清分型及毒力基因检测。结果 2000-2009年,共检测样本12 292份,检出EHEC O157∶H7 19株,总检出率为0.15%。其中4种宿主动物粪便样本中检出18株,检出率分别为羊2.14%、牛1.29%、猪0.45%、鸭0.19%;食品中从生猪肉中检出1株,检出率0.17%;腹泻患者和苍蝇样本中均未检出。经毒力基因检测,其中16株stx2+hly+eaeA阳性,1株hly+eaeA阳性,其余2株不带毒力基因,带毒率89.47%。结论浙江省衢州市部分动物中产毒的EHEC O157∶H7带菌率较高,表明该地区存在暴发或流行的潜在危险,应加强综合监测。     

四川省大肠杆菌O157:H7分子流行病学、耐药性及对消毒剂抗性研究

目的研究从四川省分离的大肠杆菌O157：H7菌株流行病学特征。方法用多重PCR测定67株大肠杆菌O157：H7的sit、eaeA、hly毒力基因；对不同来源的大肠杆菌O157：H7进行质粒和PFGE分型；测定67株大肠杆菌O157：H7的耐药性和对消毒剂的抗力。结果62．7％的株菌（42／67）携带有毒力基因，毒力图谱类型主要为slt1＋slt2＋eaeA＋hly。67株菌共有6种质粒谱型和7种PFGE谱型。64．2％（43／67）的菌株分别对7种不同的抗生素耐药，其中有23、35、34株菌分别对氨苄青霉素、四环素和SMZ耐药。不同来源的大肠杆菌O157：H7抗性谱不同，80．6％（54／67）的菌株对酒精和季铵盐产生了抗性，所有菌株对洗必泰敏感。结论四川省不同来源的大肠杆菌O157：H7带毒率相似，但毒力基因谱型不完全相同。细菌有较高的耐药性。菌株对常用消毒剂有很高的抗性，在消毒灭菌时需要用较大剂量的消毒剂才能将其杀灭。不同来源的大肠杆菌O157：H7耐药性、质粒和PFGE谱型有一定的相似性，提示菌株可能在人、动物、食品以及外环境之间相互传播并存在流行的可能。     

四川省大肠杆菌O157∶H7分子流行病学、耐药性及对消毒剂抗性研究

目的研究从四川省分离的大肠杆菌O157∶H7菌株流行病学特征。方法用多重PCR测定67株大肠杆菌O157∶H7的slt、eaeA、hly毒力基因;对不同来源的大肠杆菌O157∶H7进行质粒和PFGE分型;测定67株大肠杆菌O157∶H7的耐药性和对消毒剂的抗力。结果62.7%的株菌(42/67)携带有毒力基因,毒力图谱类型主要为slt1+slt2+eaeA+hly。67株菌共有6种质粒谱型和7种PFGE谱型。64.2%(43/67)的菌株分别对7种不同的抗生素耐药,其中有23、35、34株菌分别对氨苄青霉素、四环素和SMZ耐药。不同来源的大肠杆菌O157∶H7抗性谱不同,80.6%(54/67)的菌株对酒精和季铵盐产生了抗性,所有菌株对洗必泰敏感。结论四川省不同来源的大肠杆菌O157∶H7带毒率相似,但毒力基因谱型不完全相同。细菌有较高的耐药性。菌株对常用消毒剂有很高的抗性,在消毒灭菌时需要用较大剂量的消毒剂才能将其杀灭。不同来源的大肠杆菌O157∶H7耐药性、质粒和PFGE谱型有一定的相似性,提示菌株可能在人、动物、食品以及外环境之间相互传播并存在流行的可能。     

应用多重引物PCR技术检测O157∶H7毒力基因

目的 对江苏省６个不同地区不同宿主动物中分离的Ｏ１５７：Ｈ７菌株进行毒力基因的检测分析。方法 应用肠出血性大肠杆菌（ＥＨＥＣ）的多重引物聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法,以志贺祥毒素（ＳＬＴ２和ＳＬＴ１）基因、“粘附抹平”因子ｅａｅＡ基因和溶血素（ｈｌｙ）基因为靶基因进行检测。结果 江苏省分离的Ｏ１５７：Ｈ７菌株毒力基因携带率为５６．５％,不同地区的分离株携带率有所不同,个别地区高达９０％以上,有的地区     

安徽省肠出血性大肠杆菌O157:H7宿主动物监测研究

目的了解安徽省肠出血性大肠杆菌O157:H7在宿主动物中的分布及其毒力基因携带状况,为控制O157:H7感染提供依据。方法用免疫磁珠分离法(IMS)对安徽省3个监测点的宿主动物粪便标本进行0157:H7的分离培养,并用多重引物PCR方法(MPCR)检测分离菌株的毒力基因。结果采集宿主动物粪便标本5 560份,检出O157:H737株,阳性率为0.7%,其中牛的阳性率最高,为1.1%。106株O157:H7菌株经过毒力基因测定,65.1%的菌株携带SLT、hly基因。O157:H7感染性腹泻的发病与家禽家畜的带菌正相关(R=0.87,P=0.01)。结论安徽省宿主动物中能检出肠出血性大肠杆菌O157:H7,且菌株携带毒力基因。提示要加强对宿主动物进行O157:H7的流行病学调查和监测工作。     

12株疑似O157:H7大肠菌PCR鉴定研究

目的:对12株疑似O157:H7大肠菌采用PCR法进行鉴定。方法:利用单一PCR和多重聚合酶链反应(mPCR)检测不同来源菌株志贺样毒素(stx1和stx2)、溶血素(hly)、粘附抹平因子(eaeA)、β-葡糖醛酸糖苷酶(u idA)、O157抗原编码(rfbE)、H7鞭毛抗原编码(fliC)基因。结果:4株大肠菌rfbE和fliC基因检测为阳性,确认为EHEC O157:H7,其中1株菌株扩增出全部毒力基因,另3株菌株扩增出除stx1外其它全部毒力基因;2株大肠菌rfbE基因检测阳性,确认为O157:H7-大肠菌;其它均为非O157:H7其它大肠菌。结论:PCR技术的应用能对可疑O157:H7大肠菌进行有效鉴定与分析,应成为今后病原学鉴定的主要技术手段。     

河北省食品中大肠杆菌O157：H7分布及毒力研究

目的:掌握河北省食品中大肠杆菌O157:H7分布状况及菌株的毒力研究。方法:运用免疫磁珠富集进行分离培养,并用PCR进行毒力基因分析。结果:共采集食品530份,检出O157:H7大肠杆菌5株,总检出率为0.9%。其中,以生牛、羊肉检出率较高,分别为6.7%和4.4%。5株O157:H7菌株中,4株带有SLT2、eae和H ly 3种毒力基因,1株带有SLT1、SLT2、eae和H ly 4种毒力基因。结论:掌握食品中O157:H7分布及生物学特性对预防食源性疾病暴发有重要意义。     

食品样品中大肠杆菌O157:H7复合PCR检测方法的研究

根据大肠杆菌O15 7:H7特异性基因fliC ,rfbE ,SLTI与SLTII设计四对引物 ,建立了复合PCR方法 ,扩增产物长度分别为为 5 6 0bp ,6 78bp ,2 10bp与 4 84bp。该方法可以一步检测出O15 7与H7特异性抗原基因 ,并可同时检测该菌产生SLT毒素的类型 ,与 71株试验菌株的基因型完全配合 ,是一种特异、高效的检测方法。该方法适用于牛奶样品中大肠杆菌O15 7:H7的检测 ,经过增菌步骤检测限可达 0 1cfu ml     

浙江省肠出血性大肠杆菌O_(157)∶H_7动物宿主带菌情况调查

目的了解浙江省肠出血性大肠杆菌O157∶H7在动物宿主中的带菌情况。方法采集浙江省2006-2008年监测点的动物粪便进行病原菌培养和毒力基因及耐药性检测。结果共采集动物粪便3915份,检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7阳性20份,带菌率为0.51%,其中以羊和牛的带菌率最高,分别为1.46%和1.43%,散养动物带菌率高于圈养动物(χ2=5.771,P=0.016)。阳性菌株stx2、hly和eaeA3种毒力基因均呈阳性,stxl均呈阴性。对红霉素和利福平耐药,耐药率达90%以上,对其他受试抗生素敏感。结论浙江省动物宿主有一定的带菌率,且菌株具有毒力基因,散养动物的带菌率高于圈养动物,应进一步加强监测,防止O157∶H7引起人群的爆发流行。