乙型肝炎病毒x基因与肝细胞肝癌

肝细胞肝癌(HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居我国癌症的第3位。乙型肝炎病毒(HBV)x基因具有相当广泛的功能，它的整合与HCC的形成密切相关。现就HBV x基因的结构、主要功能、在HCC中的表达、对p53及DNA修复蛋白的影响、对原癌基因的反式激活和作为癌基因直接诱导HCC几方面的研究进展进行综述。     

乙型肝炎病毒X蛋白促进肝癌细胞株生长及其分子机制的实验研究

目的:研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对肝癌细胞株中增殖分子、侵袭分子、血管新生分子表达的影响。方法:培养肝癌细胞株HepG2并分为HBx组和对照组,分别转染pcDNA3.1-HBx质粒以及空白的pcDNA3.1质粒。转染后24h和48h,检测细胞中增殖分子Survivin、cyclinD1、c-myc以及侵袭分子CD44v6、MT1-MMP、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP7以及血管新生分子血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管生成素(Ang)-1、Ang-2、成纤维细胞生长因子(FGF-2)的mRNA表达量。结果:转染24、48h后,HBx组细胞中Survivin、cyclinD1、c-myc、CD44v6、MT1-MMP、MMP2、MMP7、VEGF、Ang-1、Ang-2、FGF-2的mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论:HBx能够促进肝癌细胞株中增殖分子、侵袭分子、血管新生分子的表达。     

人异黏蛋白、癌胚抗原相关细胞黏附分子1和乙型肝炎病毒X蛋白在乙型肝炎相关性肝癌组织中的表达

目的探讨乙型肝炎相关性肝癌(HCC)组织中人异黏蛋白(MTDH)、癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)、乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的表达及临床意义。方法选取2014年3月至2016年3月信阳市中心医院保存的乙型肝炎相关性HCC组织标本58例及相应的癌旁组织标本23例,采用免疫组织化学方法检测HCC组织和癌旁组织中MTDH、CEACAM1、HBx表达,并分析三者与乙型肝炎相关性HCC临床病理特征的关系。结果 HCC组织和癌旁组织中MTDH阳性表达率分别为62.07%(36/58)、30.43%(7/23),HCC组织中MTDH阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。HCC组织和癌旁组织中CEACAM1阳性表达率分别为43.10%(25/58)、69.57%(16/23),HCC组织中CEACAM1阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.05)。HCC组织和癌旁组织中HBx阳性表达率分别为79.31%(46/58)、43.48%(10/23),HCC组织中HBx阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.01)。MTDH和CEACAM1在乙型肝炎相关性HCC组织中的表达与患者的年龄、性别无相关性(P>0.05),但与肿瘤直径、TNM分期、门静脉侵袭、淋巴结转移及分化程度有相关性(P<0.05)。HBx在乙型肝炎相关性HCC组织中的表达与患者年龄、性别、肿瘤直径无相关性(P>0.05),但与TNM分期、门静脉侵袭、淋巴结转移及分化程度有相关性(P<0.05)。乙型肝炎相关性HCC组织中MTDH表达与CEACAM1、HBx表达无显著相关性(r=-0.169、0.124,P>0.05),CEACAM1与HBx表达呈负相关(r=-0.316,P<0.05)。结论乙型肝炎相关性HCC组织中MTDH和HBx表达上调,CEACAM1表达下调;MTDH、CEACAM1和HBx表达与乙型肝炎相关性HCC的发生、发展有关。     

肝癌DNA含量与生物学特性关系的临床病理学研究

本文报道应用图像分析技术,对38例肝癌细胞核DNA含量进行定量测定。结果显示:6例为DNA干系二倍体,32例为DNA干系异倍体。肝癌DNA干系水平与肝癌瘤体大小、包膜突破与癌栓形成发生率以及临床预后等生物学特性有明显相关性,而与临床分期、血清AFP含量、病理分级、组织学类型无关。二倍体肝癌中,66.7％的瘤体直径≤3cm,而异倍体肝癌中,75％的瘤体直径>3cm(P<0.05),提示肝癌于3cm大小时可能是其生物学特性发生转变的重要时期。本文结果表明,对肝癌DNA含量的定量分析,可为临床估价肝癌的生物学特性和判断临床预后提供客观而定量的依据。     

叶下珠水提物对裸鼠人肝癌移植瘤HBx和VEGFR3表达的影响

目的探讨乙型肝炎病毒x基因(hepatitis B virux x gene,HBx)和血管内皮生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor 3,VEGFR3)基因与乙型肝炎相关肝癌的相关性,以及叶下株水提物(aqueous extract of phyllanthus urinaria L,AEP)对HBx和VEGFR3蛋白表达的干预作用。方法将60只Balb/c-nu裸鼠随机分为10组。分别复制转染HBx、氯霉素乙酞转移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)和VEGFR3基因的HepG2肝癌细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,用AEP进行干预,以生理盐水、环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)作为对照,共治疗6周。观察模型复制后不同时间各组裸鼠的移植瘤生长状况,采用酶联免疫吸附试验检测各组裸鼠血清甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)水平,采用Western blot方法检测移植瘤组织中HBx和VEGFR3蛋白表达水平。结果肝癌移植瘤模型复制成功。各组裸鼠体质量均随着时间显著增长。实验结束时,接种HepG2-HBx细胞的各组中,AEP处理组肿瘤质量显著低于CTX处理组(P0.05),其AFP水平显著高于NS处理组(P0.05),其移植瘤组织中HBx表达水平显著低于NS组(P0.05)。接种相同肝癌细胞的各组中,AEP处理组VEGFR3表达水平最低,但与CTX组VEGFR3表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05);AEP组和CTX组VEGFR3表达水平显著低于NS组(P0.05)。对于相同的处理因素,接种HepG-HBx细胞和HepG-CAT细胞的裸鼠移植瘤组织中VEGFR3表达水平均显著低于接种HepG-VEGFR3细胞的裸鼠(P0.01)。结论 AEP通过直接抑制HBx蛋白和VEGFR3蛋白表达,及通过抑制HBx蛋白表达而间接抑制VEGFR3蛋白表达,达到对肝癌移植瘤生长的抑制作用。     

VEGF的表达与胃癌生物学特性的实验研究

目的:研究胃癌组织中VEGF的表达水平与胃癌生物学特性的关系。方法:应用免疫组化S-P法分析人胃癌组织中VEGF的表达和CD34的表达;应用RT-PCR法检测胃癌组织VEGFmRNA的表达。结果:胃癌组织的VEGF阳性表达率为60.3%,VEGF在肿瘤组织的表达水平明显高于癌旁组织,胃癌组织中微血管分布不均,血管密集区主要集中在癌灶边缘;微血管密度(MVD)与肿瘤的淋巴结转移相关;MVD与VEGF的表达之间存在正相关关系。胃癌组织的VEGFmRNA表达比癌旁组织高。结论:VEGF在胃癌组织中呈高表达状态,该现象与肿瘤的病理学分级、转移情况及微血管形成能力相关。     

hDaxx与乙型肝炎病毒X蛋白的相互作用

目的采用酵母双杂交法研究HBVX蛋白与hDaxx蛋白的相互作用，为探讨HBVX蛋白的致癌机制奠定实验基础。方法构建pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBX重组质粒，分四组转化酵母AHl09，A组为pGADT7和pGBKT7，B组为pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBX，C组为pGADT7-T和pG-BKT7-Lam，D组为pGADT7-T和pGBKT7-p53。将转化菌落接种于SD／-Tip-ku（二缺）固体平板，长出克隆后再接种于SD／-Tip-Leu-His（三缺）和SD／-Tip-Leu-His-Ade（四缺）平板，30℃培养36～72h。裂解酵母菌，提取蛋白，经SDS-PAGE、Western blot检测hDaxx和X蛋白在酵母中的表达。结果仅有共转化pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBx的AHl09可以在三缺及四缺平板上生长。Western blot检测到hDaxx和X蛋白均能在酵母中表达。结论HBV X蛋白与hDaxx能在酵母细胞内发生相互作用。     

乙型肝炎病毒感染与原发性肝癌的相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒感染与原发性肝癌的关系。方法回顾性对比分析92例原发性肝癌患者(病例组)与92例其他类型肿瘤患者(对照组)的乙型肝炎病毒血清标志物检测结果。结果病例组92例合并乙型肝炎病毒感染76例(82.61%),对照组92例合并乙型肝炎病毒感染12例(13.04%),2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中病例组以HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性和HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性多见,分别为20例(21.74%)和41例(44.57%)。结论乙型肝炎病毒感染在原发性肝癌的发病中起着重要作用,其中HBsAg、HBeAg、抗HBe、抗HBc是原发性肝癌的主要危险因素。     

禽流感病毒的生物学特性与防治

流感病毒是流行性感冒病毒的简称,在分类上流感病毒属正粘病毒科,包括甲、乙、丙(也称A、B、C)3个型别.流感病毒可引发人类、禽类和动物类的"流行性感冒",其中禽流感病毒是甲型流感病毒中的某些亚型(如H5N1、H9N2、H7N7等).它们以鸡、鸭等禽类病毒贮存,宿主可以感染人类,早年已有若干先例.而此次出现的禽流感病毒主要为甲型流感病毒中的H5N1亚型.     

血管内皮生长因子与实体瘤生物学特性的关系

血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF／VEGF—A）又称血管通透性因子（Vascular permeability factor,VPF）,是一种多功能的细胞因子,其主要功能包括：（1）高度特异性地促进内皮细胞增生、迁移、分化及存活,抑制内皮细胞的老化和凋亡,进而促进新生血管的形成;（2）增加血管的通透性,引起血浆蛋白的外渗,     

流行性乙型肝炎患者血清抗体对乙脑病毒蛋白的反应性及其应用

了解流行性乙型肘炎病毒各蛋白成分在刺激机体免疫应签方面所起的作用，并在此基础上建立一种新的而且可供基层医疗卫生单位使用的乙脑快速诊断方法。方法：建立乙脑病毒免疫转方法，应用免疫转印方法分析乙患者血清ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体对乙病毒蛋白的反应性，并比较免疫转印法与间接免疫荧光法检测乙脑ＩｇＭ抗体差异。     

乙型肝炎病毒X蛋白羧基端氨基酸缺失对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)羧基端缺失了40个氨基酸的突变体(HBx3′-40)和野生型HBx对Huh7和SMMC-7721肝癌细胞的生物学行为的影响。方法脂质体和磷酸钙法介导pcDNA3HBx3′-40和pcDNA3HBx重组体转染HBV(-)的人肝癌细胞Huh7和SMMC-7721。Neo基因PCR及Western印迹方法检测质粒DNA片断插入和HBx蛋白质的表达。借助生长曲线、平板克隆形成、细胞周期、凋亡和裸鼠成瘤实验以及氯霉素乙酰转移酶(CAT)-ELISA法对转染细胞的生物学活性进行检测。结果pcDNA3HBx3′-40组细胞生长速度明显快于pcDNA3HBx和pcDNA3组;pcDNA3HBx3′-40组克隆形成率明显高于pcDNA3HBx和pcDNA3组(P<0·05);流式细胞仪检测结果显示pcDNA3HBx3′-40表达能加速Huh7细胞由G0/G1期→S期的进程;但细胞凋亡检测显示无血清诱导的SMMC-7721细胞HBx3′-40组能部分取消HBx的促凋亡效应,并且该组几乎丧失了HBx的反式激活作用;裸鼠成瘤实验显示,pcDNA3HBx3′-40组成瘤体积明显大于pcDNA3HBx组和pcDNA3组,瘤体重量间差异具有统计学意义(P<0·05)。表明HBx3′-40对肝癌细胞的生长具有明显促增殖作用。结论HBx碳端缺失了40个氨基酸的突变体转染细胞对比野生型HBx显示促增殖能力明显增强,推测HBx通过缺失突变修饰其生物学功能,取消了野生型HBx的反式激活功能和抗增殖效应。另一方面,HBx114~154个氨基酸位点的缺失可能导致p53无法发挥其抑癌作用。     

原发性肝癌内HBV DNA及HBAg的分布与意义

采用原位分子杂交和免疫组化及双标记技术,对44例原发性肝细胞肝癌及痛旁肝组织进行了乙型肝炎病毒DNA及其表达产物x抗原、核心抗原检测。癌组织中HBV DNA、HBxAg、HBcAg检出率分别为70.5％、65.9％及20.5％;癌旁肝组织依次为76.5％、76.5％及29.4％。HBV DNA及HBxAg主要位于肝细胞浆中,在HBcAg阳性组中的检出率高于HBcAg阴性组(P<0.05)。9例枯否氏细胞浆有HBxAg检出。HBVDNA在癌及癌旁组织中的检出有“伴随现象”。HBcAg多位于核内,部分为核浆型,且总是伴随HBV DNA和(或)HBxAe检出,无一例单独检出HBcAg者。此外,HBxAg可由肝内游离型HBV DNA所表达;肝内核型或浆型HBcAg均可反映HBV的复制。因此,肝内HBxAg的检测可作为HBV感染的灵敏指标之一,进一步证实HBV感染与HCC的发生有密切关系。     

乙型肝炎病毒携带者的健康教育

乙型肝炎病毒感染，严重威胁着人类的健康。在我国乙型肝炎流行状况十分严重。据有关资料报道，乙型肝炎表面抗原阳性率大约为10％，即全国有1．2亿人携带乙肝病毒，其中有部分患者可能会转为肝硬化或肝癌。因此，乙型肝炎病毒携带者不但自身受到危害，而且作为乙型肝炎的传染源，也严重威胁着周围的人群，因此，对这一人群     

乙型肝炎病毒X蛋白对血管内皮生长因子的调节通路研究

为研究NF-κB信号转导通路在乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）调节血管内皮生长因子（VEGF）表达中的作用。通过建立稳定转染HBx基因的L02细胞系（L02-HBx）,用不同浓度的NF—κB信号转导通路阻断剂吡咯二硫氢基甲醋酯（PDTC）阻断NF-κB信号转导通路,荧光双标激光扫描共聚焦显微镜观察转染前后及PDTC加入前后NF—κB信号转导通路的激活及失活情况,同时用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测转染前后及PDTC加入前后VEGF在mRNA及蛋白水平的表达变化。发现以L02细胞为参照,转染HBx基因后的L02-HBx细胞NF-κB信号转导通路被激活,     

犬瘟热病毒扬州分离株的生物学特性初步观察

从扬州地区经临床诊断疑似为犬瘟热的病犬组织块，白细胞，脑中分离到病毒，经鉴定为犬瘟热病毒（CDV），分别命名为CDV-YZ-0101株，CDV-YZ-0102株，CDV-YZ-0103株，并对其细胞病变规律。形态特征，细胞毒力，血凝活性，理化特性进行了研究。分离株在Vero细胞上均生长良好，传2-4代毒力稳定，CPE产生明显，TCID50分别为10^-4.6-10^-5.0/ml,10^-4.4-10^-4.9/ml,10^-4.8-10^-5.1/ml；空斑形成为0.4-0.6mm，与参考株CDV-Ond各项特性基本相似。     

HBV x基因与肝癌的研究进展

全球约有3.5亿人感染乙肝病毒,乙肝病毒感染是肝脏疾病的主要原因.乙型肝炎病毒( hepatitis B virus,HBV)简称乙肝病毒,是一种DNA病毒,属于嗜肝DNA病毒科,基因组长约3.2 kb,为部分双链环状DNA.HBV基因组有4个开放读码框,分别为S、C、P、X,这四个开放读码框都能与细胞基因组整合,其中HBV x基因(HBx)整合率最高[1].HBx被认为是HBV致肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的重要因素,HBx能调节细胞的多个基因和蛋白,从而影响细胞信号转导、细胞增殖与分化、细胞凋亡、细胞癌变以及癌症转移等,本文就从以上几个方面介绍HBx与肝癌的关系.     

P16蛋白在原发性肝细胞肝癌及慢性乙型肝炎中表达情况探讨

目的 探讨Ｐ１６蛋白在原发性肝细胞肝癌（ＨＣＣ）及慢性乙型肝炎中的表达情况。方法 用免疫组织化学方法检测１６例ＨＣＣ组织及２５例慢性乙型肝炎标本中Ｐ１６蛋白表达。结果 有５６．２５％（９／１６）的ＨＣＣ Ｐ１６表达缺失;慢性乙型肝炎中８％（２／２５）Ｐ１６蛋白表达缺失。结论 Ｐ１６蛋白缺失与ＨＣＣ相关,而与慢性乙型肝炎无明显相关性。     

肝细胞性肝癌与乙型肝炎病毒感染相关性的研究

肝细胞性肝癌（HenatocellularCarcinoma，HCC）的发生与乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus，HBV）感染的关系已被公认[1]，过去多是用免疫学技术（如酶标记技术）研究两者的相关性，应用分子生物学方法研究两者之间的关系则是近年才开展起来的。本文利用PCR技术检测石蜡包埋的HCC标本中的HBVDNA，以此来探讨HCC组织中HBVDNA与HCC发生的关系，以及PCR的方法技术用来检测HCC组织中感染HBV的有效性。1材料与方法1．1材料对例标本均为1995～1996年患者手术切下的经病理证实为HCC的标本，常规福尔马林固定，石蜡包埋。1．2HCC…