VEGF_(121)反义核酸抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的增殖及血管生成

目的:探讨VEGF121反义核酸对裸鼠胰腺癌移植瘤的增殖及血管生成的影响,探索通过VEGF反义核酸抑制肿瘤生长.方法:将稳定转染有VEGF反义核酸pcDNA3-ASVEGF121的胰腺癌细胞系Bx-PC-3接种于裸鼠背部皮下.将实验鼠分为实验组、对照组和空白组.定期测定裸鼠移植瘤体积,免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤VEGF、Flk-1表达水平.测定裸鼠移植瘤微血管密度.结果:VEGF反义核酸转染BxPC-3细胞后,裸鼠胰腺癌移植瘤生长明显减缓.移植瘤VEGF表达明显受到抑制,Flk-1表达水平上调.裸鼠胰腺癌移植瘤微血管密度明显降低.结论:人反义核酸VEGF121能显著抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的增殖,并能抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的血管生成.     

脂质体生存素反义寡核苷酸抑制胃癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用

目的探讨脂质体生存素反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及机理。方法将24只裸鼠建立人胃癌细胞系HS-746T皮下移植瘤模型,用不同的转染液处理后随机分成6组：空白对照组,脂质体组,正义链组,100、200和400nmol／L反义链组(ASODN组)。于注射相应试剂后2,4,8,12,16,20d观测裸鼠移植瘤体积,计算抑瘤率和肿瘤缩小率,观察移植瘤细胞形态变化,免疫组化SP法检测生存素的表达,并用逆转录聚合酶链反应技术(RT—PCR)和Western blot蛋白免疫印迹法比较治疗后不同时间各组肿瘤组织中生存素mRNA和蛋白表达的变化。结果注射后20d空白组、脂质体组和正义链组裸鼠的抑瘤率无明显差异,而ASODN组移植瘤的体积随着时间和浓度的增加而减小,肿瘤缩小率则增大,抑瘤率均大于对照组,400nmol／LASODN组抑瘤率最大为93％。光镜下见ASODN组移植瘤凋亡细胞数增多,生存素表达减弱,6例(6／12)肿瘤组织有坏死液化灶。各ASODN组均能够下调移植瘤细胞生存素mRNA含量,抑制生存素蛋白表达,注射20d后400nmol／L ASODN组蛋白表达为空白对照组的36．8％。结论生存素基因反义寡核苷酸能够通过诱导人胃癌裸鼠皮下移植瘤细胞凋亡,下调生存素mRNA和蛋白的表达,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。     

Ets-1反义寡核苷酸抑制裸鼠胃癌生长的实验研究

目的 研究Ets-1反义寡核苷酸对裸鼠胃癌生长的影响及其机制。方法 建立裸鼠胃癌皮下种植模型,分别应用Ets-1反义、正义寡核苷酸与PBS行瘤内注射,观察种植瘤生长的变化;应用逆转录聚合酶链式反应检测瘤组织Ets-1 mRNA的变化,并应用免役组织化学检测瘤组织微血管密度的差异。结果 经Ets-1反义寡核苷酸治疗后,反义Ets-1组较正义组及PBS组裸鼠胃癌生长明显受到抑制[(0.60±0.11)g vs(1.18±0.11)g vs(1.28±0.13)g,P<0.01];瘤组织Ets-1 mR-NA表达降低,微血管密度显著低于正义组与PBS组[(10.4±3.1)vs(24.5±8.4)vs(20.6±7.5),P<0.01]。结论 Ets-1反义寡核苷酸能够抑制裸鼠胃癌的生长,其机制可能与减少微血管形成有关。     

Survivin反义寡核苷酸对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用研究

目的探讨survivin反义寡核苷酸（ASODN）对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法30只裸鼠建立人乳腺癌MCF-7细胞移植瘤动物模型。成瘤后动物随机分3组，每组10只。分别于瘤周及瘤体注射阳离子脂质体（1ipofectin，Lip），ASODN／Lip及NODN／Lip，每5天1次，共3次。观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和裸鼠体重的变化。用TUNEL法，透射电镜观察体内瘤体的细胞调亡情况；用Western—blot检测各组肿瘤的survivin蛋白表达情况。结果成功建立了裸鼠皮下移植瘤模型。ASODN／Lip治疗组的肿瘤体积在治疗期内减少，抑瘤率达70．10％；而NODN／Lip治疗组和Lip对照组肿瘤体积增加。各组裸鼠体重无明显变化。ASODN／Lip组细胞凋亡率为38．6％明显高于其他两组，差异有显著性（P〈0．05）。ASODN／Lip组肿瘤的survivin蛋白表达明显降低。结论survivin反义寡核苷酸可有效地抑制人乳腺癌裸鼠皮下肿瘤的生长速度，并促进诱导肿瘤细胞的凋亡。     

脂质体介导的VEGF-C反义寡核苷酸对肺癌微淋巴管及微血管生成的影响

目的 观察脂质体介导的血管内皮生长因子C(VEGF-C)反义寡核苷酸对肺癌裸鼠皮下原位种植瘤模型微淋巴管及微血管生成的影响.方法 建立BALB/C小鼠皮下肺癌模型30只,随机分为磷酸盐缓冲液对照组、正义寡核苷酸对照组(SODN组)和反义寡核苷酸干预组(AODN组).接种人肺腺癌细胞株A549后24 h内,用PBS、SODN及AODN分别行皮下注射,观察小鼠肿瘤的生长情况.建模4周后,处死动物,留取瘤体标本,采用RT-PCR、Western Blot和免疫组织化学方法检测VEGF-C反义寡核苷酸对种植瘤中VEGF-C表达水平和微淋巴管及微血管生成的影响.结果 种植瘤内VEGF-C mRNA和蛋白表达量AODN组低于对照组 (P<0.05),种植瘤内微淋巴管密度AODN组亦较对照组减少(P<0.01).种植瘤内微血管密度各组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 脂质体介导的VEGF-C反义寡核苷酸可以显著降低肺癌裸鼠皮下原位种植瘤模型VEGF-C的表达水平,并对其微淋巴管生成具有较强的抑制作用.     

MMP-2反义寡核苷酸抑制人膀胱癌裸鼠异体移植瘤生长的实验研究

目的：探讨基质金属蛋白酶2（MMP2）反义寡核苷酸对人膀胱癌裸鼠异体移植瘤生长的抑制作用。方法：制备膀胱癌裸鼠移植瘤模型18只,随机分为3组：MMP2反义寡核苷酸（ASODN）治疗组、MMP2正义寡核苷酸（SODN）治疗组及对照组,每组6只。待瘤结节直径≥5mm后,分别在肿瘤细胞接种部位周围及中心皮下注射反义寡核苷酸／阳离子脂质体复合物、正义寡核苷酸／阳离子脂质体复合物和生理盐水。每周2次,连续4周,断颈处死裸鼠,计算肿瘤体积,称量瘤重。常规切片,HE染色,观察组织学形态并进行病理学评估。应用免疫组织化学技术（SP法）检测各组移植瘤组织中PCNA蛋白表达。结果：与对照组瘤重（7．49±0．53）g比较,ASODN组瘤重（4．18±0．53）g明屁降低（P〈0．01）;ASODN组、正义寡核苷酸（SODN）组抑瘤率分别为44．19％、8．41％（P〈0．01）;ASODN组、对照组增殖指数（PI值）分别为27．63％、88．39％,抑制率为60．76％（P〈0．01）;ASODN组瘤体病理学特征改善。结论：MMP-2反义寡核苷酸能抑制裸鼠体内移植瘤生长,通过反义寡核苷酸下调MMP-2的表达,降低癌细胞的增殖活性,有效逆转肿瘤的恶性表型。为膀胱癌的基因治疗提供了实验依据。     

Survivin基因对膀胱癌细胞体内生长的影响

目的探讨通过RNA干扰下调Survivin基因对膀胱癌细胞在体内生长的抑制作用。方法构建Survivin基因shRNA真核表达载体pRNAT-U6.1/neo-survivin,转染人膀胱癌细胞T24并获得稳定的单克隆细胞。观察裸鼠皮下移植瘤内注射靶向Survivin的siRNA及稳定转染pR- NAT-U6.1/neo—survivin对膀胱癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响,肿瘤组织行免疫组织化学检测Survivin蛋白表达。结果经鉴定成功构建靶向Survivin的shRNA真核表达载体pRNAT-U6.1/neo-survivivn,稳定转染重组质粒的T24细胞Survivin mRNA表达下调达92.86%;瘤内注射50 mg siRNA-Survivin能够明显抑制肿瘤生长,与对照比较差异有统计学意义(P<0.01);未转染组在20 -29 d均发展为体积超过2000 mm3的肿瘤,转染组在43 d时形成3个体积不超过62.5 mm3肿瘤;免疫组织化学显示转染组肿瘤Survivin蛋白表达明显降低。结论裸鼠移植瘤内注射siRNA-sur- vivin明显抑制了肿瘤的生长;靶向Survivin的shRNA持久地抑制了膀胱癌T24细胞在体内的生长; Survivin基因可作为膀胱癌基因治疗的良好靶点。     

β1整合素反义寡核苷酸对人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

目的探讨β1整合素反义寡核苷酸（ASODN）对裸鼠人胰腺癌移植瘤生长和基因表达的影响.方法建立裸鼠人胰腺癌皮下移植瘤模型,随机分为3组：对照组（皮下注射脂质体和转染液）、非特异序列（RODN）组（皮下注射RODN、脂质体和转染液）和ASODN组（皮下注射ASODN、脂质体和转染液）.治疗后计算抑瘤率和肿瘤缩小率,检测肿瘤中β1整合素mRNA和蛋白表达.结果RODN组、ASODN组抑瘤率分别为4.75%和72.70%,ASODN组肿瘤缩小10.91%.与其他两组比较,ASODN组裸鼠肿瘤中β1整合素mRNA和蛋白表达水平明显降低.结论靶向β1整合素的反义寡核苷酸对人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的生长具有一定的抑制作用,可能为胰腺癌治疗提供新的方法.     

PCNA、VEGF反义寡核苷酸联合治疗裸鼠肝癌的研究

目的 探讨增殖细胞核抗原（PCNA）反义寡核苷酸和血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸单用或联用对裸鼠人肝癌模型肝癌生长的抑制作用。方法 制作裸鼠皮下肝癌模型24只,分PCNA反义核酸治疗组、VEGF反义核酸治疗组、联合治疗组及对照组,接种后24h之内用PCNA反义核酸和（或）VEGF反义核酸皮下注射进行治疗。观察裸鼠瘤体变化及组织形态学改变。结果 PCNA反义核酸治疗组,VEGF反义核酸治疗组和联合治疗组裸鼠肝癌的生长均受到不同程度的抑制,抑瘤率分别为72．8％、44．9％和87．2％。以联合治疗组的疗效最佳。结论 联合应用PCNA和VEGF2种反义核酸治疗肝癌比应用单种反义核酸有更显著的疗效,2种反义核酸具有协同作用。     

微小RNA-494过表达与RNA干扰抑制Survivin基因对前列腺癌移植瘤生长的比较

目的 比较过表达微小RNA (microRNA)-494与采用RNA干扰抑制前列腺癌PC-3细胞中Survivin基因的表达,对前列腺癌移植瘤生长的影响.方法 将过表达microRNA-494的腺病毒载体Ad-494及负载Survivin短发卡RNA (shRNA)腺病毒载体Ad-sur分别或联合感染PC-3细胞后,将相应PC-3细胞接种于裸鼠右前肢皮下,建立前列腺癌移植瘤模型.并以磷酸盐缓冲液(PBS)组及空载体组(Ad-GFP)作为对照.动态测量肿瘤体积.55 d后处死各组裸鼠,瘤体称重计算抑瘤率.Western blot检测肿瘤组织中Survivin表达变化.免疫组织化学测定Survivin、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3表达变化.结果 Ad-sur组、Ad-494组、Ad-sur+ Ad-494组裸鼠前列腺癌移植瘤的生长明显被抑制.第35天时即表现差异.其中Ad-sur+ Ad-494组瘤体积最小,为(40.69±0.69) mm3,Ad-sur、Ad-494组瘤体体积分别为(102.11±5.32) mm3、(99.03±3.50) mm3,3组肿瘤体积均明显小于PBS组(572.72±10.46) mm3、Ad-GFP组(544.85 ±10.28) mm3(P＜0.05).但Ad-sur组与Ad-494组间瘤体大小差异无统计学意义(P＞0.05).55 d后,Ad-sur、Ad-494、Ad-sur+ Ad-494组对移植瘤抑制率分别64.62％、65.98％、86.67％,Ad-sur+ Ad-494组具有抑瘤增效的相加作用(Q=0.99).同对照组比较,实验各组的Survivin基因均表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05).其中,Ad-494组与Ad-sur组间差异无统计学意义(P＞0.05),Ad-sur+ Ad-494组较Ad-494、Ad-sur组更为显著;实验各组中的bax、Caspase-3表达上调,bcl-2表达下调,且Ad-sur+ Ad-494组效果优于Ad-sur、Ad-494组.结论 过表达microRNA-494与RNA干扰方法均可抑制前列腺癌裸鼠移植瘤Survivin基因表达,从而抑制移植瘤的生长,且两者联合效果更加显著.     

表皮生长因子联合氟尿嘧啶对结直肠癌裸鼠皮下移植瘤的作用

目的观察联合应用表皮生长因子（EGF）和氟尿嘧啶（5-FU）治疗结直肠癌裸鼠皮下移植瘤的疗效,并分析可能的机制。方法建立结直肠癌（Caco-2细胞系）裸鼠移植瘤模型,观察应用EGF和5-Fu治疗后的肿瘤生长曲线并计算抑瘤率．同时观察肿瘤细胞生长情况及EGF对其他器官正常细胞的影响。结果单用5-Fu组裸鼠的抑瘤率为40．97％：EGF和5-Fu联合治疗组（联合治疗组）明显高于前者达57．05％。苏木精-伊红染色见联合治疗组肿瘤细胞形态模糊,细胞数明显减少．其他脏器组织切片未见异常。EGF组和联合治疗组PCNA指数分别达到（51．60±10．97）％和（48．00±11．66）％,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）：联合治疗组处于增殖周期的肿瘤细胞增多。结论联合应用EGF可以提高结直肠癌对5-Fu的敏感性,同时对其他器官无不良反应。其机制可能与EGF诱导静止期细胞增殖有关。     

胃癌组织中E26转录因子-1表达与血管生成的相关性研究

目的研究胃癌组织中E26转录因子-1(Ets-1)表达与血管生成的关系。方法应用免疫组织化学方法(SP法)检测86例胃癌标本中Ets-1的表达及微血管密度(MVD);建立裸鼠胃癌皮下种植瘤模型,分别应用Ets-1反义,正义寡核苷酸与PBS行瘤内注射,应用逆转录聚合酶链式反应检测瘤组织Ets-1mRNA的变化,并检测瘤组织Ets-1蛋白及微血管密度的差异。结果胃癌组织中Ets-1标记指数(LI)和MVD呈正相关(γ=0.495,P<0.05);经Ets-1反义寡核苷酸治疗后,裸鼠瘤组织Ets-1mRNA及Ets-1蛋白表达降低,反义组MVD显著低于正义组与PBS组(10.4±3.1VS24.5±8.4,20.6±7.5,P<0.01)。结论胃癌组织中Ets-1在促进血管生成中起重要作用。     

电穿击化疗治疗异位移植裸小鼠人结直肠肿瘤肝转移

目的 :用电穿击化疗对异位移植裸小鼠人结直肠肿瘤肝转移模型进行治疗 ,探讨其疗效和机制。方法 :将 4 0只皮下人结肠癌LoVo细胞系肿瘤的裸鼠随机分成 1 0区组 ,每区组 4只 ,随后将每区组的小鼠分至电穿击化疗组、化疗组、电击组、阴性对照组 ,并给予相应的治疗。 1w后处死小鼠 ,观察瘤重及病理改变情况。结果 :电穿击化疗组小鼠的肿瘤显著减小 ,其中有一只小鼠的肿瘤完全消失 ,平均瘤重为 1 8.3mg ,与其余各组平均瘤重 (化疗组 36 .9mg、电击组 37.9mg、阴性对照组 4 2 .7mg)相比在统计学上差异有显著性 ,P<0 .0 1。光镜下可见电穿击化疗组的肿瘤组织有大量片状坏死、炎性细胞浸润、血管的扭曲及内皮的脱落和坏死 ,而化疗组和电击组则仅见少量炎性细胞的浸润和单个细胞的坏死。结论 :电穿击化疗可以显著增强肿瘤对化疗的敏感性 ,为人结直肠肿瘤肝转移的治疗提供了一种新的途径     

人肝癌裸鼠NKG2D受体的表达及对NK细胞毒活性的影响

目的 通过研究原发性肝癌中NK细胞的细胞毒活性变化及其活化性受体NKG2D的表达,观察肝脏和脾脏组织病理变化,探讨NK细胞免疫抑制机制,为原发性肝癌的免疫治疗提供理论依据。方法 ①建立人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型：先用人肝癌细胞株Hep3B接种于裸鼠皮下,形成皮下移植瘤,然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内,建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型）;②检测裸鼠原发性肝癌对NK细胞免疫活性的影响：分离裸鼠外周血、肝脏及脾脏组织NK细胞,LDH方法检测NK细胞的细胞毒活性,流式细胞技术检测不同组织NK细胞NKG2D表达百分率,H-E染色观察肝脏移植瘤对肝脏和脾脏淋巴细胞的影响。结果 ①外周血、肝脏及脾脏的NK细胞毒活性及NKG2D受体表达随着肿瘤生长逐渐下降,其中肝脏NK细胞毒活性及NKG2D表达下降明显;②荷瘤裸鼠肝脏癌组织与皮下瘤相同,癌组织异型性与时间呈正相关,脾脏淋巴小结在第4周增生明显,第8周小梁结构增多。结论 原发性肝癌通过下调NKG2D的表达,对NK细胞有免疫抑制作用,这种作用主要发生在肝脏,但对外周血和脾脏也有影响。     

谷氨酰胺酶反义基因对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用

目的研究反义核酸技术封闭谷氨酰胺酶(GA)基因对裸鼠体内胃癌生长的抑制作用。方法将携带GA反义基因的质粒转染胃癌细胞SGC-7901,并将转染的胃癌细胞接种于裸鼠皮下,观察其在裸鼠体内的生长情况,通过病理学检查和免疫组化方法评价细胞增殖活性的改变;RT-PCR技术检测移植瘤内GA mRNA的含量。结果GA反义基因质粒载体成功转染胃癌细胞后,癌细胞成瘤能力下降,肿瘤生长速度减慢,肿瘤血管生成减少,肿瘤组织GA mRNA的含量减少。结论GA反义基因有效抑制GA基因的表达并抑制胃癌细胞在裸鼠体内的生长。     

StealthTMRNAi沉默人肝癌细胞Bcl-2表达抑制体外移植瘤生长的研究

目的探讨StealthTMRNAi抑制Bcl-2基因表达对体内移植瘤生长的影响。方法通过合成的人肝癌Bcl-2基因干扰序列转染入肝癌细胞内并从皮下移植到裸鼠，免疫组化检测瘤组织中Bcl-2蛋白的表达。结果荧光显微镜下显清晰的绿色荧光为转染成功细胞；RT．PCR检测转染组Bcl-2基因mRNA的表达水平下调（P〈0．01）。转染StealthTMRNA裸鼠皮下移植肿瘤生长缓慢，与对照组瘤体积比较差异有显著性（P〈0．01）；采用免疫组化法检测注射StealthTMRNA组，Bcl-2蛋白的表达下调（P〈0．01）。结论StealthTMRNAi可抑制Bcl-2基因表达，对移植瘤的生长有抑制作用。