来氟米特对HaCaT细胞分泌α-肿瘤坏死因子、白介素-6和8的影响

目的：研究来氟米特活性代谢产物A77l 1726对角质形成细胞分泌α-肿瘤坏死因子（TNF-α），白介素(IL）-6及IL-8的影响。方法：以体外培养的角质形成细胞株HaCaT为对象，以不同浓度A77 l726处理正常及TNF-α刺激后细胞，用生物活性法及ELISA方法测定培养上清中TNF-α、IL-6及IL-8的分泌变化情况。结果：正常情况下，HaCaT细胞可自发分泌TNF-α、IL-6和IL-8；药物作用后分泌水平下降；TNF-α诱导下，HaCaT细胞IL-6及IL-8表达量均增加，加入来氟米特后则表达量均受到抑制。结论：来氟米特可抑制角质形成细胞分泌TNF-α、IL-6及IL-8。     

消银解毒饮调控银屑病血热证肿瘤坏死因子-α的相关研究

目的 研究消银解毒饮对银屑病血热证外周血单一核细胞(PBMCs)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的调控作用.方法 入选银屑病血热证患者抽取静脉血,分离PBMCs,并与人永生化角质形成细胞(HaCat细胞)混合接种培养48h,加入五种不同组别的动物药理血清,即蒸馏水空白组、消银解毒饮组、凉血方组、解毒方组、甲氨蝶吟阳性对照组,并于不同体积分数培养混合细胞48h,用四唑盐比色实脸(MTT)测定药物对HaCat细胞的细胞增殖率,双抗体夹心法测定药物对混合培养细胞上清TNF-α的影响.结果 消银解毒饮能有效的抑制HaCat细胞增殖(P<0.001),且效果优于拆方中药组(P<0.05);消银解毒饮能降低混合培养细胞分泌TNF-α(P<0.05),且与拆方两组比较疗效更显著(P<0.05).结论 消银解毒饮能有效的抑制角质细胞活化增殖,对银屑病血热证TNF-α有免疫调节作用,凉血类中药与解毒类中药协同作用治疗血热型银屑病效果可能更佳.     

中药白疕合剂对体外培养HaCaT细胞肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6表达的影响

目的观察中药白疕合剂对体外培养人永生化表皮角质形成细胞(Ha Ca T细胞)分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6及TNF-αm RNA、IL-6 m RNA表达的影响,并探讨其作用机制。方法采用ELISA法检测白疕合剂对Ha Ca T细胞分泌TNF-α、IL-6的影响;采用RT-PCR方法检测白疕合剂对Ha Ca T细胞TNF-αm RNA、IL-6m RNA表达的影响。结果白疕合剂低、中、高剂量组干预Ha Ca T细胞后,对TNF-α、IL-6的分泌量及TNF-αm RNA、IL-6 m RNA的表达均有明显的抑制作用。白疕合剂高剂量组对IL-6分泌量的抑制作用及降低TNF-αm RNA、IL-6m RNA的表达与消银颗粒组和阿维A组比较差异无统计学意义;对TNF-α的抑制作用与消银颗粒组比较差异有统计学意义,与阿维A组比较差异无统计学意义。结论白疕合剂可能通过抑制TNF-α、IL-6的分泌和降低TNF-αm RNA、IL-6 m RNA的表达,发挥对银屑病的治疗作用。     

砷剂对角质形成细胞生长和IL-8、TNF-α分泌的影响

目的研究不同浓度砷剂对角质形成细胞生长和IL-8、TNF-α分泌的影响。方法以体外培养的角质形成细胞株为对象,不同浓度砷剂处理细胞后,用MTT比色分析法反映细胞增殖的变化。ELISA方法测定细胞上清中IL-8分泌,用L929细胞检测上清TNF-α的生物活性。结果0.5～5μmol/L三氧化二砷对角质形成细胞株HaCaT细胞有明显抑制作用,并呈剂量依赖关系。在0.001μmol/L至0.015μmol/L药物浓度范围内,同对照组相比细胞增殖加快;未药物处理的对照组HaCaT细胞可分泌一定水平的IL-8和TNF-α,低浓度砷剂(0.001～0.015μmol/L)可刺激其分泌增加。结论低浓度砷剂可促进角质形成细胞株HaCaT细胞的生长,但高浓度能抑制增殖和影响细胞活性。并在一定浓度范围刺激IL-8和TNF-α的合成分泌,可能在砷相关皮肤病的发病机制中具有重要意义。     

冬凌草甲素对角质形成细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的研究冬凌草甲素(oridonin)对人永生化角质形成细胞株(HaCaT cells)增殖、凋亡和迁移的影响,并分析其机制。方法分别用0、10、20和40μmol/L的冬凌草甲素处理HaCaT细胞,在不同时间用MTT法检测冬凌草甲素对HaCaT细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测冬凌草甲素对HaCaT细胞凋亡的影响;用Transwell实验检测冬凌草甲素对HaCaT细胞迁移能力的影响;用ELISA实验检测冬凌草甲素对HaCaT细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平的影响。结果冬凌草甲素对HaCaT细胞的增殖有明显的抑制作用,且抑制率与浓度和时间呈正相关;经冬凌草甲素干预后的HaCaT细胞凋亡率升高,迁移减慢;冬凌草甲素作用于HaCaT细胞后TNF-α、IL-6表达水平下降。结论冬凌草甲素能抑制角质形成细胞的增殖、迁移,促进凋亡,并且可以抑制角质形成细胞TNF-α、IL-6的分泌,可能成为治疗银屑病的潜在药物。     

CpG ODN刺激的寻常性银屑病中性粒细胞培养上清液对HaCaT细胞增殖的影响

目的 探讨中性粒细胞在银屑病发病中的作用.方法 采用脂多糖(LPS)或人工合成的CpG ODNs(CpG-A或CpG-B)刺激中性粒细胞,取其培养上清液处理人永生化角质形成细胞株(HaCaT),观察HaCaT细胞株增殖的变化,并通过抗IL-8、抗TNF-α单克隆抗体以及SOD/CAT预处理评价中性粒细胞分泌的炎性因子在银屑病发病中的作用.结果 与RPMI 1640培养液比较,无LPS、CpG-A和CpG-B刺激的正常人和静止期银屑病患者中性粒细胞培养上清液对HaCaT细胞株的增殖无明显促进作用(P＞0.05),而进行期患者中性粒细胞培养上清液明显促进HaCaT细胞株的增殖(t=2.41,P<0.05).与正常人比较,进行期银屑病患者中性粒细胞受LPS、CpG-A和CpG-B刺激后的培养上清液显著增强HacaT细胞的增殖(t值分别为3.11,2.89,2.29,P<0.05).经LPS、CpG-A刺激的中性粒细胞培养上清液与无刺激组比较,均明显促进HaCaT细胞的增殖.与未予阻断剂组比较,予抗IL-8、抗TNF-α单克隆抗体以及SOD/CAT预处理的进行期银屑病组中性粒细胞经LPS、CpG-A和CpG-B刺激后的上清液诱导的HaCaT细胞增殖均显著减少(P<0.05).结论 寻常性银屑病患者外周血中性粒细胞存在炎性因子IL-8、TNF-α和SOD/CAT分泌异常,且这些异常分泌的炎性因子可以促进HaCaT细胞的增殖.     

柳蘑多糖对角质形成细胞作用实验研究

目的观察柳蘑多糖对角质形成细胞株(Ha Cat细胞)生物学性状的影响,并探讨其相关作用机制。方法MTT法检测柳蘑多糖对Ha Cat细胞增殖活性的影响;Annexin V-PI染色法测定柳蘑多糖刺激Ha Cat细胞后的凋亡情况;PI法测定应用柳蘑多糖刺激后Ha Cat细胞周期的改变;重组人γ-干扰素(rh IFN-γ)诱导Ha Cat细胞活化,然后加入柳蘑多糖,用ELISA法检测IL-8和ICAM-1细胞因子分泌情况。结果 MTT法证实柳蘑多糖对Ha Ca T细胞的增殖有抑制作用,且最佳抑制浓度为0.1μg/m L,最佳作用时间为48 h;用Annexin V-PI染色法证实了柳蘑多糖可以促进Ha Ca T细胞凋亡,尤其是晚期凋亡;用PI法证实了柳蘑多糖可以影响Ha Ca T细胞的细胞周期,对细胞DNA合成期有影响;用ELISA法证明了rh IFN-γ活化后Ha Ca T细胞分泌的白介素-8(IL-8)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)明显增多,而柳蘑多糖可以使活化后Ha Ca T细胞分泌的IL-8及ICAM-1显著减少。结论柳蘑多糖可以抑制体外培养的角质形成细胞的增殖、促进角质形成细胞凋亡、改变角质形成细胞的细胞周期,减少细胞因子(IL-8,ICAM-1)分泌,提示柳蘑多糖有抑制角质形成细胞增殖、减轻炎症反应的潜力。     

靛玉红对角质形成细胞中促炎细胞因子表达水平的影响

目的:探讨靛玉红对人类永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平的影响,初步阐明青黛膏治疗银屑病的机制.方法:以人类永生化角质形成细胞株HaCaT细胞作为研究对象,观察不同浓度靛玉红处理后HaCaT细胞中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平的变化,采用E...     

寻常型银屑病患者中性粒细胞分泌炎性因子的研究

目的观察寻常型银屑病患者外周血中性粒细胞是否存在分泌炎性因子的异常,探讨中性粒细胞参与银屑病的机制。方法作中性粒细胞培养,应用酶联免疫吸附法检测脂多糖(LPS)刺激前后中性粒细胞分泌白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,应用细胞色素C还原法检测LPS刺激前后中性粒细胞超氧阴离子(Superox-ide anion)的水平。结果在脂多糖刺激前、后,银屑病患者外周血中性粒细胞分泌的IL-8、TNF-α以及Superoxide anion水平均较正常人显著增高(P<0.05),且进行期患者上述炎性因子的分泌水平显著高于静止期患者(P<0.01)。银屑病患者病情严重程度(PASI评分)与中性粒细胞于脂多糖刺激前、后IL-8、TNF-α及Superoxideanion水平均呈正相关(P<0.05)。结论银屑病患者存在外周血中性粒细胞分泌炎性因子的异常,该种异常可能参与银屑病的发病与病情进展,其中可能有感染因素的介导。     

干扰素诱导蛋白16在银屑病患者皮损中的表达及其调控

目的研究干扰素诱导蛋白16(interferon inducible protein 16,IFI16)在银屑病中的表达及分布,探讨其在银屑病发病中的作用。方法采用RT-PCR、免疫组化的方法分别检测10例银屑病患者皮损和10例健康人皮肤组织真皮与表皮中IFI16的表达情况;采用RT-PCR、Western印记方法检测IFN-γ,TNF-α,IL-17刺激前后Ha Ca T细胞中IFI16的表达情况。结果银屑病患者皮损处IFI16的表达明显高于健康人皮肤,并且以表皮表达为主,免疫组化结果显示IFI16主要定位于银屑病患者的角质形成细胞中。银屑病相关细胞因子IFN-γ,TNF-α和IL-17可以上调角质形成细胞中IFI16的表达水平。结论IFI16在银屑病患者皮损处表达明显高于正常人皮肤,并且IFN-γ,TNF-α和IL-17可以诱导其表达上调,可能是银屑病角质形成细胞的活化机制之一。     

重楼总皂苷对HaCaT细胞增殖和分泌IL-8的影响

目的研究重楼总皂苷对人永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)增殖和分泌白介素8(IL-8)的影响。方法采用MTT法进行细胞增殖实验,采用ELISA法测定重楼总皂苷对HaCaT细胞分泌IL-8的情况。结果在所选浓度范围内(60μg/mL,90μg/mL,120μg/mL和150μg/mL),重楼总皂苷对HaCaT细胞的增殖有抑制作用;其中120μg/mL和150μg/mL浓度组重楼总皂苷可抑制HaCaT细胞自分泌IL-8,90μg/mL,120μg/mL和150μg/mL浓度组重楼总皂苷能抑制TNF-α(浓度为100U/mL),刺激HaCaT细胞分泌IL-8。结论重楼总皂苷能抑制HaCaT细胞增殖和IL-8的分泌。     

miR-142-3p/Sema3A轴调节角质形成细胞增殖凋亡及银屑病皮肤炎症反应

目的 旨在探讨miR-142-3p在M5刺激人表皮角质形成细胞HaCaT中的作用及潜在机制.方法 MTT法检测细胞增殖;ELISA凋亡检测试剂盒评估细胞凋亡.ELISA试剂盒测定炎症介质TNF-α、IL-22和IL-17A的分泌量.RT-PCR和Western blot分别测定目的基因mRNA和蛋白表达.荧光素酶报告实...     

β-溶血型链球菌诱发银屑病发病机理探讨

探讨β-溶血性链球菌诱发银屑病的机制。采用3H-TdR掺入法测定细胞增殖反应,AnnexinV法测定细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞表面抗原表达。结果显示β-溶血性链球菌(SP)刺激淋巴细胞活化增殖,经SP活化的淋巴细胞培养上清液作用于角质形成细胞48h,可促进角质形成细胞增殖,诱导角质形成细胞表达HLA-DR和Fas抗原;再次加入上清液继续作用48h,则诱导角质形成细胞凋亡。SP作为超抗原首先活化T细胞,使之释放细胞因子,后者使角质形成细胞活化增殖,表达和抗原,继而诱导细胞凋亡,此过程可能是银屑病的主要发病机制之一。     

蜕皮甾酮抑制肿瘤坏死因子α诱导的HaCaT细胞的炎症因子的产生

目的蜕皮甾酮(Ecdysterone,EDS)是来源于中药牛膝的一类甾酮类化合物。笔者检测了蜕皮甾酮对肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激后HaCaT角质形成细胞的炎症因子产生的影响及相关可能机制。方法采用CCK-8细胞活力测定法检测了蜕皮甾酮对细胞增殖的影响,研究蜕采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了蜕皮甾酮对TNF-α刺激后HaCaT炎症因子产生的影响;采用Western印迹法对NF-κB通路和MAPK通路的相关蛋白进行了检测;采用免疫荧光法检测了TNF-α刺激后HaCaT细胞核因子(NF)-κB蛋白核转位。结果在所选浓度内,蜕皮甾酮对HaCaT细胞增殖无明显影响;蜕皮甾酮抑制了TNF-α诱导的HaCaT细胞胸腺和活化调节趋化因子(TARC),人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22),调节激活正常T-细胞表达分泌因子(RANTES/CCL5),白细胞介素(IL)-8的表达。蜕皮甾酮能剂量依赖性降低TNF-α诱导的HaCaT细胞胞核内P65的水平,抑制P65和核转位,提高胞浆内IκB的水平;蜕皮甾酮能剂量依赖性抑制TNF-α诱导的HaCaT细胞MAPK通路中P38,ERK,JNK蛋白的磷酸化。结论蜕皮甾酮可能通过调节NF-κB通路和MAPK通路的活化抑制了TNF-α刺激后HaCaT炎症因子产生。这为蜕皮甾酮应用于炎症性皮肤疾病提供了一定的依据。     

NFKBIZ基因表达在银屑病发病中的作用机制分析

目的 旨在分析B细胞K轻肽基因增强子核因子抑制因子（NFKBIZ）基因表达在银屑病发病中的作用机制。方法 采用白细胞介素-17A/F(IL-17A/F)异源二聚体或肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激培养的人角质细胞进行实验,并转染含有睫状肌核转录因子κB抑制物ζ基因表达的小干扰RNA(IκBζsiRNA)的细胞沉默IκBζ。收集细胞或上清液,进行定量聚合酶链反应（qPCR）、酶联免疫吸附测定（ELISA）以及蛋白质印迹（WB）检测特定的银屑病相关基因和蛋白质（NFKBIZ/IκBζ,CCL20,DEFB4/hBD2,S100A7,IL-8和CHI3L1）,并通过将人角质细胞与p38有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制剂（SB202190）,ERK1/2抑制剂（PD98059）,JNK1/2抑制剂（SP600125）或核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂（SC-514）预孵育,以此评估所涉及的信号通路。结果 单独的IL-17A/F或联合TNF-α都能显著诱导刺激1.5 h、3 h、6 h和24 h的人角质细胞NFKBIZ mRNA表达,当IL-17A/F异源二聚体的浓度分别为10、10...     

人类皮肤中5-羟色胺的免疫学作用机制

人类皮肤中5-羟色胺(5-HT)作为一种免疫调节介质具有极其复杂的机制,它可以调节人类皮肤中先天性和获得性免疫5-HT诱导T和B细胞增殖,T细胞和单核细胞又可以释放5-HT,在树突状细胞和角质形成细胞上均有5-HT或其受体表达,5-HT对淋巴细胞、自然杀伤细胞、单核—巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α)等均有显著作用,这些机制涉及到免疫性皮肤病和皮肤肿瘤的发病机制,因此,5-HT免疫学作用机制及其受体相关药物的研发对治疗一些皮肤病可能具有重要意义。     

白芍总苷对经肿瘤坏死因子-α诱导的HaCaT细胞细胞因子分泌的影响

目的观察白芍总苷（TGP）对体外培养的Hacalr细胞白细胞介素（IL）-6、IL-8、IL-10、干扰素（IFN）-γ分泌的影响，以及肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导的HaCaT细胞IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ分泌在白芍总苷的作用下是否发生变化，从而进一步探讨银屑病的发病机制及白芍总苷治疗银屑病的可能作用机制。方法本实验运用TNF—α诱导HaCaT细胞，并用不同浓度的TGP进行处理，通过ELISA法检测TGP作用前后细胞因子分泌的变化。结果TGP对经TNF-α诱导的HaCaT细胞IL-6、IL-8、IFN-γ分泌有抑制作用，而对IL-10分泌有促进作用。且这两种作用均与药物作用浓度相关。结论TGP可能通过抑制HaCaT细胞IL-6、IL-8及IFN-γ的分泌，提高IL-10的分泌，进而发挥一定的免疫调节作用，从而达到治疗银屑病的作用。     

银屑Ⅰ号含药血清对银屑病样细胞模型的增殖、凋亡相关蛋白及基因的影响

目的 探讨银屑Ⅰ号治疗银屑病的药理机制.方法 将人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)分为对照组(control组),TNF-α造模组(TNF-oα组),中药高剂量组(TNF-α+ HD组),中药中剂量组(TNF-α+MD组),中药低剂量组(TNF-α+LD组).对照组不予造模,其余组别均予TNF-α造模,并予相应血清...     

IL-23在寻常型银屑病皮损角质形成细胞中的表达

目的：探讨IL-23在寻常型银屑病患者角质形成细胞中的表达。方法：分离培养正常人表皮组、银屑病皮损组和银屑病非皮损组中角质形成细胞,给予混合刺激物处理。用RT-PCR方法比较培养的上述各组角质形成细胞在刺激后IL-23p19亚单位的mRNA水平,并用ELISA方法检测刺激前后培养液上清中的IL-23 p19浓度。结果：刺激前,银屑病皮损组角质形成细胞中IL-23水平均高于正常人表皮组和银屑病非皮损组;刺激后,银屑病皮损组角质形成细胞中IL-23 p19 mRNA和IL-23水平均明显高于正常人表皮组和银屑病非皮损组。结论：IL-23在银屑病皮损角质形成细胞中刺激前后的表达均增加,IL-23可能在银屑病的发生中发挥重要作用。     

肿瘤坏死因子α对角质形成细胞产生白介素8和增殖活性的影响

目的 了解肿瘤坏死因子α(TNF-α)、肿瘤坏死因子受体Ⅰ(TNFRⅠ)和抗TNFRⅠ抗体对银屑病患者角质形成细胞(KC)产生白介素8(IL-8)和增殖活性的影响.方法 分离表皮细胞接种96孔板,分别为:①自然增殖孔;②TNF-α刺激孔;③sTNFRⅠ/TNFα培养孔;④sTNFRⅠ/抗TNFRⅠ/TNF-α培养孔;⑤抗TNFRⅠ/TNF-α培养孔.ELISA法测上清液IL-8的含量;MTT法测增殖活性;收集细胞提取RNA进行反转录和扩增,产物电泳后转膜,进行DNA印迹以比较IL-8的表达在转录水平上的差异.结果 银屑病患者组所测3个指标均较正常对照组高(P<0.05);两组TNF-α刺激孔KC3个指标均显着高于自然增殖孔和sTNFRⅠ/抗TNFRⅠ/TNF-α培养孔;自然增殖孔和sTNFRⅠ/抗TNFRⅠ/TNF-α培养孔之间比较差异无显着性.结论 ①银屑病患者KC处于活化状态,分泌高水平细胞因子且增殖活跃;②TNF-α可诱导体外培养KC表达IL-8mRNA和蛋白,促进KC增殖,其作用可能主要是通过和细胞表面TNFRⅠ结合来实现;③sTNFRⅠ可以部分阻断TNF-α的生物学作用.