抑癌基因p16INK4变异与肿瘤基因治疗

肿瘤抑制基因ｐ１６ＩＮＫ４在肿瘤中的变异及治疗越来越受到重视。本文主要对抑癌基因ｐ１６ＩＮＫ４在肿瘤细胞系与原发性肿瘤中的变异及其在肿瘤基因治疗方面的最新研究进展作一综述。     

新型抑癌基因p16

新型抑癌基因ｐ１６朱如玮刘振延作者单位：苏州医学院病理解剖教研室（苏州２１５００７）细胞的增殖失控是肿瘤组织最显著的特点，癌基因、抑癌基因对细胞增殖周期各环节直接或间接的调控作用发生异常，从而导致肿瘤的发生。近２０年来人们先后发现了十余种抑癌基因，其...     

抑癌基因p16与肿瘤

 近几年来 ,随着分子生物学技术的迅速发展 ,细胞增殖周期及其调控机制的研究有了长足的进展。越来越多的证据表明 ,细胞周期调节失控是肿瘤发生的重要机制 ,细胞增殖周期受细胞周期素依赖激酶(ＣＤＫｓ)调节 ,ＣＤＫｓ与细胞周期素 (ｃｙｃｌｉｎｓ)结合后被活化 ,促进细胞增殖 ,ＣＤＫｓ受到其抑制因子 (ＣＤＫＩｓ)的作用而失活 ,阻止细胞的分裂。细胞周期素Ｄ和ＣＤＫＩｓ表达异常均可导致肿瘤发生。在已知的ＣＤ ＫＩｓ中 ,ｐ16做为一种新型的抑癌基因 ,受到人们的广泛重视。它直接作用于细胞周期抑制细胞分裂 ,形成对“ＣＤＫ4 ｃｙｃｌｉｎＤ Ｒｂ Ｅ2Ｆ”环路的负反馈调控。一旦ｐ16基因发生变异 ,上述环路将无限止进行下去 ,最终导致肿瘤发生。本文就细胞周期及其分子调节机制以及抑癌基因 ｐ16与肿瘤发生的关系做一综述。1　ｐ16抑制肿瘤生长的分子生物学证据　　 1992年 ,Ｔｒａｖｉｓ等人在研究寻找皮肤黑色素瘤的易感基因时 ,发现染色体 9ｐ2 1区位存在一个等位基因丢失和另一个存留等位基因突变 ,常伴有相邻区域的杂合性丢失 ,推测此区域至少是一种多肿瘤抑制基因的所在地 ,此区的突变在很多种肿瘤中都存在。随后...     

抑癌基因p16与细胞周期调控

细胞周期是细胞生命活动的基本过程,细胞在周期时相的变迁中进入增殖、分化、衰老和死亡等生理状态。若细胞周期调控异常,细胞将进入病理状态,且与肿瘤的发生也密切相关。参与细胞周期调控的分子主要包括:细胞周期蛋白(cyclin),细胞周期蛋白依赖性激酶(cy-clin-dependentkinase,CDK),磷酸化酶以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(CDKinhibitorCKI),这些调节成分组成多条调节途径,通过使Rb磷酸化或去磷酸化构成以Rb为中心的一个复杂网络[1]。CKI通过竞争性结合cyclin或CDK/cyclin复合物,导致cyclin生物活性丧失,最终表现为负调控细胞…     

抑癌基因p16在卵巢肿瘤中的表达及其意义

采用ＳＰ免疫组化染色法对９７例卵巢癌,３５例卵巢良性肿瘤及１６例正常卵巢ｐ１６蛋白表达进行测定,结果ｐ１６蛋白表达阳性率分别为３８．１４％,８２．８３％和８７．５０％,卵巢癌组明显低于正常对照及良性肿瘤（Ｐ＜０．０１）;不同组织类型卵巢癌之间ｐ１６蛋白阳性率无显著性差异（Ｐ＞０．０５）;但随着分化程度的降低,ｐ１６蛋白阳性率明显降低,高分化组（５８．０６％）与低分化组（１３．０４％）有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）;Ⅰ、Ⅱ期癌和Ⅲ、Ⅳ期癌阳性率分别为５２．２７％和２６．４２％（Ｐ＜０．０５）;ｐ１６蛋白阳性的卵巢癌患者累计生存率明显高于ｐ１６阴性者（Ｐ＜０．０１）。说明ｐ１６基因表达缺失与卵巢癌的发生、分化程度、进展及预后密切相关。     

p16基因与肿瘤

Ｐ１６基因是一种抑癌基因，定位于人类染色体９Ｐ２１，编码的核磷酸蛋白Ｐ１６ｉｎｋ４调节细胞周期关键酶ｃｄｋ４，在大多数肿瘤中发现在Ｐ１６基因的突变和缺失，说明Ｐ１６基因功能的失活与肿瘤的起因和恶化有关。     

抑癌基因p16与乙肝病毒相关性肝癌研究进展

p16蛋白是细胞周期素依赖性蛋白激酶CDK4特异性的抑制子，通过抑制CDK4的活性，使细胞分裂停滞于G1-S期而阻止细胞的异常增殖，因而p16基因为重要的抑癌基因。乙型肝炎病毒(HBV)感染后，其DNA可整合入宿主肝细胞基因组中，并引起抑癌基因的改变，HBV与p16的改变有相关性。p16基因的改变在HBV相关性肝癌的发病机制中占重要地位。     

抑癌基因p16与乙肝病毒相关性肝癌研究进展

p16蛋白是细胞周期素依赖性蛋白激酶CDK4特异性的抑制子，通过抑制CDK4的活性，使细胞分裂停滞于G1－S期而阻止细胞的异常增殖，因而p16基因为重要的抑癌基因。乙型肝炎病毒（HBV）感染后，其DNA可整合入宿主肝细胞基因组中，并引起抑癌基因的改变，HBV与p16的改变有相关性。p16基因的改变在HBV相关性肝癌的发病机制中占重要地位。     

INK4a／ARF抑癌基因

细胞增殖失控和细胞凋亡障碍是癌变的根本原因,而大多数肿瘤细胞都是通过干扰 Rb（ retinoblastoma,Rb）蛋白和 p53的功能,导致细胞周期调节紊乱和凋亡反应阻抑的。 INK4a/ARF（ inhibitor of CDK4/ alternative reading frame）基因可同时调控这两条控制细胞增殖和凋亡的通路,它编码两种蛋白： p16INK4a,一种细胞周期素依赖蛋白激酶抑制蛋白 (CKI),可以上调 Rb蛋白的活性; p19ARF,可以阻抑 mdm2抑制 p53的活性（ mdm2：小鼠双微 -2, murine double minute-2）。这种同一基因—两个产物—两条途径的方式,在哺乳动物中相当罕见,为探索肿瘤的发生提供了一种新的思路。 1 p16INK4a的发现与结构 细胞周期是由细胞周期素（ cyclin）、细胞周期素依赖蛋白激酶 (CDK) 和细胞周期素依赖蛋白激酶抑制蛋白 (CKI)来进行调控的。 CKI分为两类： INK4（ inhibitor of CDK4）和 KIP家族,其中 INK4a和 INK4b位于染色体 9p21。 1992年, Cannon-Albright[1]在研究黑色素瘤的易感基因时,发现 9p21有一个抑癌基因所在位点; 1993年, Xiong Y[2]在用 DNA肿瘤病毒 SV40转化的二倍体成纤维细胞中 ,发现了一个与 CDK4紧密结合的 16 kDa的多肽 (p16);同年, Serrano[3]用酵母双杂合蛋白相关性筛选法,把两个融合蛋白 CAL4ad和 GALR4db与 p16基因表达蛋白进行筛选,发现 p16的 cDNA编码的蛋白与 CAL4ad 相同,命名为 p16INK4a蛋白; 1994年, Kamb[4]利用染色体步移法（ chromosal walk）的物理图和序列标记位点图 (sequence tagged sites,STSs),研究肺癌、乳腺癌、膀胱癌等多种细胞系,发现 9p21存在一个与 p16 cDNA序列相同的多肿瘤抑制基因,命名为 MTS1(multiple tumor suppressor 1),以后由 HUGO正式命名为 CDKN2(cyclin dependent kinase inhibitor 2)。     

抑癌基因p16与胃癌

P16是kamb和kolnik 于1994年初首先报道的一种新型抑癌基因.已证实p16基因位于人9号染色体的p21区域,其由3个外显子和2个内含子组成.这个部位的缺失、突变易发生恶性肿瘤.p16基因的重要性不亚于p53和RB肿瘤抑制基因、甚至更为重要.为了探讨p16的表达及在胃癌中的意义,我们对80例人胃癌石蜡切片用原位分子杂交方法进行了检测.现报告如下;l 材料与方法l.1 标本 将第四军医大学西京医院1994～1995年间经手术证实的80例胃癌标本、40例慢性萎缩性胃炎标本作为研究对象.标本经10%福尔马林固     

抑癌基因p53在胃癌组织的表达及临床意义

目的：探讨ｐ５３基因在胃癌的表达与临床、病理因素及预后的关系,探索ｐ５３基因异常表达在胃癌发生过程中的作用。方法：使用抗ｐ５３蛋白单克隆抗体ＤＯ－７,对９９例人胃癌组织ｐ５３的表达进行免疫组化研究。结果：４８例胃癌组织ｐ５３基因表达阳性（４９％）。ｐ５３基因表达与胃癌的大体类型、分化工、淋巴结转移等指标均无明显关系。在１０例不典型增生的癌旁组织中,２例呈阳性反应;在４例有肠上皮化生的癌旁组织中及其     

抑癌基因p16INK4真核表达载体的构建及其表达 *

目的：探讨融合自杀基因ｐＣＥＡｅｄ－ｔＫ在导入到肺癌细胞后,其体外旁观者效应的细胞差异性。方法：融合基因ｐＣＥＡｅｄ－ｔｋ提取后,脂质体介导的方法转染到６训肺癌细胞株（ＳＰＣＡ－１,ＧＬＣ－８２,Ａ５４９,ＳＣ,ＨＬＡＭＰ,Ｌ－７８）,用ＭＴＴ法测定染前后对前体药物５－氟胞嘧啶（５－ＦＣ）和丙氧岛苷（ＣＣＶ）的敏感性和在体外的旁观者效应。结果：（１）脂质体介导找历历志染效应低低。（２）在和种已转染     

宫颈癌组织中癌基因c-myc与抑癌基因p16的对比分析

背景与目的：原癌基因的激活和抑癌基因的失活是许多肿瘤发生的机制;c-mvc与p16的异常表达是否共同参与宫颈癌的发生、发展,以及两种基因的表达与宫颈癌细胞对化疗药物反应的相关性均未明确。本研究旨在探讨c-myc与p16在宫颈癌发生、发展中的作用及其与化疗的关系。方法：采用原位分子杂交技术,用地高辛标记探针检测37例宫颈鳞癌组织(其中11例为化疗后组织)、21例癌前病变组织及5例正常宫颈组织中c-myc mRNA与p16mRNA的表达情况,并用图像分析仪对阳性信号的灰度值作定量分析。结果：正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变(cerlvical intraepithelial neoplasia,CIN)组织、宫颈鳞癌组织中p16的表达率分别为100．0％、71．4％及21．6％(P=0．0001),c-myc的表达率分别为0％、42．9％、75．7％(P=0．0011),p16及c-myc的表达在三组问差异均有统计学意义,c-myc表达强度随恶性程度的增高而增强,且CINⅢ级比CINⅡ级和CINⅠ级表达强,化疗前c-mvc表达率比化疗后高,c-myc与p16的表达呈负相关(rs=-0．907)。对化疗敏感者与不敏感者的c-myc和p16表达均无显著性差异。结论：癌基因c-mvc的过表达与抑癌基因p16的失表达在宫颈癌的发生、发展过程中可能起着重要的作用;c-myc在不同级别CIN增生细胞中的表达变化趋势提示细胞癌变是一个渐进的过程。     

非小细胞肺癌中P14ARF与P16INK4a和p53蛋白表达及其相互关系的研究

目的:检测p14ARF、p16INK4a和p53蛋白在非小细胞肺癌中表达情况,对它们在非小细胞肺癌发生过程中的作用及其相互关系进行初步探讨方法:应用免疫组化方法检测了40例非小细胞肺癌组织标本的p14AHF、p16INK4a和p53基因的表达水平.结果:非小细胞肺癌组织中p14ARF、p16INK4a和p53蛋白总阳性率分别是72.5%,50.0%和52 5%,与癌旁正常组织(分别是95.0%,92.5%,2.5%)有显著性差异(P＜0.01);非小细胞肺癌中p14ARF和p53蛋白表达异常与肿瘤分期、组织类型、分化程度、淋巴结转移情况无显著相关性;p16INK4a蛋白表达水平与组织分化程度相关(P＜0.05),但与肿瘤分期、组织类型、淋巴结转移情况无关;p14ARF和p53蛋白在组织中表达呈负相关,r2=-0.475(P＜0.0),而p14ARF和p16INK4a蛋白表达无关;p14ARF蛋白在Ⅰ期病例中强阳性( )占阳性比例为41.7%,在Ⅲ期中强阳性( )比例为10.0%.结论:p14ARF、p16INK4a和p53三个基因在NSCLC发生过程中起重要作用,特别在肿瘤早期可能起到更为重要的作用;p14ARF和p53基因在同一调节通路上;p14ARF、p16INK4a和p53蛋白可以作为非小细胞肺癌早期生物学检测指标.     

p16抑癌基因的发现及研究

ｐ１６基因是新近发现的抑癌基因，其突变广泛而高频率地存在于各种人肿瘤细胞。ｐ１６蛋白为ＣＤＫ４的抑制物，参与对正常细胞周期演进的调控，并与ｐＲｂ，ｐ５３等抑癌基因及ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１癌基因有着密切的关系，对ｐ１６抑癌基因的研究目前已成为肿瘤研究中一个具有吸引力的课题。     

抑癌基因p16在胃癌及胃癌前病变组织中的表达

目的探讨p16基因表达与胃癌发生及胃癌生物学行为的关系。方法应用抗p16蛋白单克隆抗体,采用免疫组化ABE方法对10例正常胃粘膜、16例胃粘膜轻度异型增生、12例中度异型增生、14例重度异型增生、16例早期胃癌及52例进展期胃癌进行了标记分析。结果正常胃粘膜全部表达p16蛋白,随着胃粘膜病变的进展,p16蛋白的阳性率逐渐下降。轻、中、重度异型增生阳性率分别为87.5％、75％、50％,早期胃癌及进展期胃癌的阳性率分别为43.8％和38.5％。p16蛋白在轻度异型增生中的阳性率分别与重度异型增生、早期胃癌及进展期胃癌相比,差异均有显著性(P<0.05);中度异型增生的阳性率显著高于进展期胃癌(P<0.05);而淋巴结转移组的阳性率明显低于淋巴结未转移组(22.2％vs 51.2％,P<0.05)。结论胃粘膜的癌变过程与抑癌基因p16表达缺失密切相关,p16蛋白可作为判断胃癌生物学行为的一个有用指标。     

抑癌基因MTS1／p16的缺失与胃癌生物学特性的关系

目的：研究MTS1/p16基因在胃癌中失活的发生率及其临床意义。方法：采用PCR方法对35例胃癌标本MTS/p16基因第2外显子进行扩增研究。结果：胃癌中MTS1/p16基因的缺失率为40.0%,明显高于正常胃粘膜组织MTS1/p16 基因的缺失与胃癌的组织学类型和分化程度无关,但与淋巴结转移以及临床病理分期有密切关系。随着癌转移的发生或疾病向晚期发展,MTS1/p16基因的缺失率明显提高。结论：MTS1/p16基因的缺失是胃癌细胞发生发展中和重要的分子事件。可以作为胃癌恶性进展的一个标志因素。对MTS1/p16基因的检测,将可能有助于临床提高胃癌的基因诊断水平,并且为胃癌恶性程度的判断以及患预后的评估提供有力的参考指标。     

携带p16基因重组腺病毒的构建

目的 构建携带p16基因的重组腺病毒并对目的基因的表达进行研究。方法 lipofectamine介导质粒共转染293细胞构建重组腺病毒，病毒DNA提取及电泳，免疫组化检测p16蛋白表达。结果 构建的携带目的基因的重组体腺病毒，经扩增，纯化后，病毒滴度均达到了10^10 pfu/ml 以上。用Ad-LacZ为代表进行重组体腺病毒转导效率的检测，发现当MOI为625以上的感染强度时，就可使100％的体外培养的肿瘤细胞被转导。重组体腺病毒能介导p16外源基因在脑胶质瘤细胞系TJ899和TJ905细胞中表达。结论 腺病毒载体能携带p16基因在转导细胞中表达，并有很高的转导效率。