PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生长的影响

目的 通过增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与PTEN融合蛋白真核表达载体的构建和表达,观察PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生长的影响。方法 （1）以RT—PCR方法扩增人的PTEN基因,经T—A亚克隆筛选后连入真核表达载体pEGFP—N1,构建融合蛋白表达载体。采用阳离子聚合物转染试剂,将重组质粒DNA瞬时转染至SHG-44细胞,检测融合蛋白的表达。（2）G418筛选出稳定转染的细胞（SHG-44-Z）,并扩增培养,通过细胞形态学、生长曲线观察PTEN基因对细胞形态和增殖的影响,免疫组织化学法检测对胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。结果 （1）重组质粒阳性克隆的测序结果与GenBank报告序列一致。瞬时转染的SHG-44细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光,流式细胞仪可检测到荧光表达量为17．8％,免疫细胞化学法检测到外源PTEN蛋白表达。证实pEGFP—PTEN融合蛋白表达载体构建成功,并在胶质瘤细胞得以正确表达。（2）转染组SHG-44-Z细胞株的生长增殖受到明显抑制,第7天细胞计数为未转染组细胞数的27．8％,且GFAP表达上调。结论携带绿色荧光蛋白的PTEN基因真核表达载体的构建,为进一步研究PTEN的作用机理及抑癌效应奠定了基础。     

INPP4B和PTEN在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的:检测磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型（inositol polyphosphate 4-phosphatase type Ⅱ,INPP4B)和磷酸酯酶与张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)在人脑胶质瘤中的表达情况及二者的相关性,希望对胶质瘤的诊断分级、预后判断及治疗等方面提供理论依据。方法:采用免疫组织化学法（IHC）和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法分别测定25例正常脑组织和60例不同级别胶质瘤中INPP4B和PTEN蛋白及mRNA的表达情况。结果:在IHC、qRT-PCR中显示:INPP4B、PTEN在正常脑组织组和低级别胶质瘤组、高级别胶质瘤组三组间表达差异均有统计学意义（P＜0.05）;低级别胶质瘤组中 INPP4B、PTEN表达均高于高级别胶质瘤组（P＜0.05）,正常脑组织组中 INPP4B、PTEN表达均高于低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组（P＜0.05）。INPP4B与PTEN mRNA在正常脑组织、低级别胶质瘤、高级别胶质瘤三组中表达呈正相关（P=0.000）。结论:INPP4B与PTEN的表达水平均与胶质瘤的恶性级别呈负相关,随着胶质瘤恶性程度的增高二者的表达水平下降。INPP4B与PTEN在胶质瘤中的表达水平具有正相关性,推测其可能在抑制胶质瘤的发生、发展、侵袭增殖等方面具有协同作用。     

PTEN在正常脑组织及脑胶质瘤中的表达与细胞凋亡的关系

0引言胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤,在国内胶质瘤的发病率居颅内肿瘤之首,虽然脑肿瘤的手术技巧以及放疗和化疗等综合治疗己经取得了很大的进展,但恶性胶质瘤患者的预后仍然很差。随着分子生物学和分子遗传学的发展,人类对胶质瘤的产     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2蛋白表达下调

目的　探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl 2表达的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机理。方法　PTEN基因体外转染SHG 44细胞 ,筛选阳性细胞克隆 ,以原位杂交、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况以免疫荧光法检测bcl 2基因的表达。结果　PTEN基因转染的SHG 44细胞有PTEN基因和蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现 ;流式细胞仪示细胞周期从G1 期到S期发生抑制 ,并且在G1 期峰前出现一明显的凋亡峰 (1 2 .9% ) ;细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ;bcl 2的表达也显著下调。转染空载体和未转染的SHG 44细胞无明显的凋亡表现。结论　PTEN基因可诱导SHG 44细胞凋亡 ,并下调bcl 2蛋白的表达 ,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一     

PTEN与VEGF在人脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的 探讨抑癌基因PTEN和VEGF在人脑胶质瘤组织中的表达意义及两者与胶质瘤侵袭性的关系.方法 采用S-P免疫组织化学法检测56例人脑胶质瘤组织中PTEN、VEGF蛋白的表达,并分析两者与胶质瘤病理级别和侵袭性的关系.结果 PTEN在胶质瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级中阳性率分别为91.7%、75.0%、53.3%、15.4%,且随病理分级升高而降低(P<0.01);而VEGF表达阳性率分别为33.3%、50.0%、73.3%、76.9%,且与PTEN表达水平呈负相关(r=0.5232,P<0.01).结论 PTEN和VEGF的表达一定程度反映胶质瘤恶性度和侵袭性的强弱;PTEN缺失可引起VEGF表达增加,在胶质瘤发生、发展过程中发挥重要作用.     

^32P,147Pm对人脑胶质瘤细胞作用

颅内肿瘤在我国居民发病率为1.34/10万,脑胶质瘤约占颅内肿瘤的43％。恶性胶质瘤自然病程从出现症状至死亡平均存活期不到一年。恶性胶质瘤患者术后放疗生存期高于单纯手术治疗。对脑干、丘脑、第三脑室等手术难以达到部位的肿瘤,放疗更具有独特的效果。近年来有人报导采用~(32)P、~(198)Au颅内注射治疗脑胶质瘤。内照射治疗的效果主要取决于选择的核素种类和剂量。为此我们采     

MGMT在人脑胶质瘤中的表达及其意义

目的：探讨MGMT的表达水平与脑胶质瘤的关系。方法：53例脑胶质瘤标本分为4组，经免疫组化染色后，观察MGMT的表达部位和程度。结果：MGMT在脑胶质瘤中的表达呈棕黄色或棕褐色粗大颗粒，定位于胞浆内，阳性细胞散在或局灶性，染色强度及分布不均、缺乏明显规律。不同病理分级脑胶质瘤的MGMT阳性表达率无显著性差异（P=0．335）；MGMT表达阳性与MGMT表达阴性的脑胶质瘤患者的平均年龄组间无显著性差异（P=0．457）；男性与女性脑胶质瘤患者的MGMT阳性表达率之问无显著性差异（P=0．519）。结论：MGMT的表达水平与脑胶质瘤的恶性度、患者的年龄及性别无明显相关性，仅根据肿瘤恶性度而使用烷化剂进行化疗是不科学的，测定MGMT在脑胶质瘤中的表达水平有助于评估人脑胶质瘤细胞对烷化剂的耐药程度。     

腺病毒介导PTEN基因对胶质瘤增殖与侵袭力的影响

脑胶质瘤为神经外科的常见病、多发病 ,约占颅内肿瘤的 45 % ,其主要治疗手段包括手术切除、化学治疗与放射治疗 ,其生存时间短、预后差 ,平均生存时间不足 1年 ,这与其具有高增殖性及高侵袭性有关。本实验应用腺病毒作为载体介导抑癌基因PTEN体外转染人脑胶质瘤细胞U87,检测其细胞增殖力与体外侵袭力的改变 ,进而探讨PTEN作为胶质瘤基因治疗靶点的可能性。分别用的Ad PTEN(实验病毒 )、Ad LacZ(对照病毒 )感染人胶质瘤细胞U87(病毒滴度为 5× 1 0 8pfu/ml,MOI为 5 0 ) ,同时用无病毒感染的U87作空白对照 ,首先用RT PCR检测PTE…     

PI3K、AKT、PTEN在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

背景与目的：PI3K/AKT信号通路可能在人脑恶性胶质瘤的发生发展过程中起重要作用。本研究探讨人脑胶质瘤中PI3K/AKT通路相关蛋白PI3K、AKT、PTEN在脑胶质瘤中的表达及其与胶质瘤病理分级之间的关系。方法：采用免疫组化Envision二步法检测PI3K、AKT、PTEN蛋白在42例不同级别脑胶质瘤、10例正常脑组织中的表达,计算阳性细胞百分率,用统计学方法分析人脑胶质瘤中PI3K、AKT、PTEN蛋白表达之间的相关性及其三者与胶质瘤不同分级之间的关系。结果：PI3K在人脑胶质瘤组织的阳性表达率是80.95%,而正常脑组织中表达率为20.00%,两者间差异有统计学意义（P〈0.05）;PI3K蛋白在低级别胶质瘤和高级别胶质瘤中的阳性率分别是66.67%、95.24%,两者之间差异有统计学意义（P〈0.05）。胶质瘤组织与正常脑组织中AKT蛋白阳性率分别是85.71%与30.00%,两者差异有统计学意义（P〈0.05）;AKT蛋白在低级别胶质瘤和高级别胶质瘤中的阳性率分别是76.19%与95.24%,两者之间差异有统计学意义（P〈0.05）;胶质瘤组织与正常脑组织中PTEN蛋白阳性率分别是45.24%、100%,两者差异有统计学意义（P〈0.01）;PTEN蛋白在低级别胶质瘤中的阳性率52.38%,而高级别胶质瘤表达率为38.10%,两者之间差异有显著性（P〈0.05）;PTEN与PI3K、AKT蛋白在脑胶质瘤中的表达分别呈负相关（P〈0.01）;PI3K与AKT蛋白的阳性表达呈正相关（P〈0.01）。结论：（1）在人脑胶质瘤组织中PI3K、AKT蛋白表达明显增高,且PI3K、AKT蛋白阳性表达与胶质瘤恶性程度正相关,说明了PI3K/AKT信号通路在胶质瘤的恶性转化中发挥着重要作用。（2）胶质瘤组织中PTEN蛋白的阳性表达率明显低于其在正常脑组织中的表达,与胶质瘤的恶性程度负相关,提示了PTEN蛋白的表达下降或缺失导致其抑癌功能减弱甚至丧失,其与胶质瘤的发生发展密切相关。（3）在人脑胶质瘤组织中,PTEN与PI3K、AKT蛋白表达呈负相关,揭示了在胶质瘤的发生发展中PTEN与PI3K、AKT的作用可能互相拮抗,PTEN蛋白的表达下降或缺失与PI3K、AKT的过度表达可能共同促进了胶质瘤的恶性进展。     

胶质瘤瘤周水肿与PTEN表达的相关性研究

背景与目的：胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤,胶质瘤瘤周水肿是胶质瘤患者影像学上的常见表现。本研究探讨胶质瘤瘤周水肿与PTEN表达的关系．为评估胶质瘤患者的预后提供依据。方法：对18例手术后经病理证实为胶质瘤的患者进行回顾性分析研究．利用患者术前的磁共振资料,对瘤周水肿程度进行分析,并测定MRI上瘤周水肿范围。采用免疫组化学SP法对18例胶质瘤组织标本进行标记分析。应用Spearman等级相关统计学方法分析二者的关系。结果：PTEN的表达与瘤周水肿呈负相关．相关系数为-0．5。结论：胶质瘤瘤周水肿与PTEN的表达密切相关。     

褪黑素联合顺铂通过诱导细胞凋亡抑制人胶质瘤细胞U251和SHG-44增殖

目的：研究褪黑素（melatonin,MT）和顺铂（cisplatin,DDP）单独或联合应用对人胶质瘤细胞U251和SHG-44增殖及凋亡的影响。方法：采用不同质量浓度MT和DDP单独或联合处理U251和SHG-44细胞,并设对照组（不加任何药物）及乙醇组（加入乙醇）;以CCK-8法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡和细胞周期,采用两药相互作用指数（coefficient of drug interaction,CDI）评估MT是否影响U251和SHG-44细胞对DDP的敏感性。结果：CCK-8结果显示,单用MT或DDP可浓度依赖性抑制U251和SHG-44细胞的增殖,MT还可协同增强DDP对U251和SHG-44细胞的增殖抑制作用（CDI<1）。流式细胞术检测结果显示,MT可促进U251和SHG-44细胞的凋亡,MT可增强DDP对U251和SHG-44细胞的凋亡诱导作用,0.5 mmol/L MT联合20 μg/ml DDP组U251和SHG-44的细胞凋亡率显著高于20 μg/ml DDP组\[（66.3±1.0）% vs （45.9±1.7）%,（35.5±0.8）% vs （15.5±0.8%）;均P<0.01\];而且0.5 mmol/L MT联合20 μg/ml DDP 组U251和SHG-44细胞的G1期比例显著高于20 μg/ml DDP组\[（52.4±2.1）% vs （27.9±1.5）%,（39.7±1.5）% vs （27.7±1.3）%;均P<001\]。结论：MT能显著增强DDP对人胶质瘤细胞U251和SHG-44的凋亡诱导作用,从而协同增强DDP对细胞增殖的抑制作用,有望成为人胶质瘤化疗的辅助药物。     

Effects of pl6INK4 gene on chemosensitivity of human glioma U251 cell line to teniposide

Objective: To determine the effects on the cell growth, tumorigenicity and chemosensitivity of pl6/CDK4I in human glioma. Methods: pl6 gene was transfected into U251 cells by lipofectin. Expression of exogenous pl6 gene was confirmed by immunohistochemistry and Northern blot. The effects of exogenous pl6 gene on the growth and chemosensitivity to teniposide were examined. Results: Expression of exogenous pl6 gene inhibited the growth dramaticallyin vitro. Gl arrest of tumor cells was observed. However, wt pl6-positive U251 was less sensitive than control cell lines and the number of apoptotic cells after chemotherapy was reduced. Conclusion: The expression of exogenous pl6 gene could inhibit the growth of glioma. On the other hand, the chemosensitivity to teniposide of pl6-positive U251 was decreased. This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 39700143).     

人PTEN基因表达载体的构建及其在U251细胞中的表达

背景与目的:克隆人野生型和突变型PTEN的cDNA并构建其表达载体,探讨该表达质粒在人星形胶质瘤细胞U251中的表达情况.材料与方法:分别从新鲜胎盘组织和结肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增人野生型和突变型PTEN基因全长cDNA,分别克隆入pMD 18-T载体上,经PCR、酶切鉴定均为阳性的克隆,进行核苷酸序列分析.再分别将两段基因定向克隆入pcDNA3.1( )载体中构建表达载体,转染入U251细胞.结果:成功克隆了人野生型及突变型PTEN cDNA并成功构建其表达载体,发现突变型PTEN蛋白对细胞生长无明显抑制作用,而野生型PTEN蛋白对细胞生长有明显抑制作用.结论:PTEN可能能抑制肿瘤细胞生长,为后进一步开展PTEN对肿瘤相关功能的研究奠定基础.     

腺病毒介导PTEN过表达抑制人脑胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤的生长

目的:研究含第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homologue deleted on chromo-some 10,PTEN)基因的重组腺病毒(Ad-PTEN-GFP)对人胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:于裸鼠背部注射人脑胶质瘤U251细胞,建立胶质瘤裸鼠移植瘤模型。荷瘤裸鼠随机分为3组进行治疗:Ad-PTEN-GFP组,Ad-GFP组(空载体组)及PBS组(空白组),观察3组裸鼠移植瘤的生长,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,并观察荷瘤裸鼠的生存时间。采用TUNEL法检测移植瘤组织中细胞凋亡的情况,采用免疫组化法检测移植瘤组织中PTEN及P65蛋白的表达。结果:与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP组移植瘤的生长受到抑制,肿瘤体积抑制率显著升高[(82.5±12.7)%vs(7.2±1.3)%,P<0.05],荷瘤裸鼠生存时间延长[(103±10)vs(58±8)d,P<0.01];TUNEL结果表明,Ad-PTEN-GFP组与Ad-GFP组相比,移植瘤细胞凋亡率明显增加[(46.4±8.3)%vs(4.6±1.0)%,P<0.01];免疫组化结果显示,Ad-PTEN-GFP组与Ad-GFP组相比,移植瘤组织中PTEN蛋白的阳性表达率增高(83.3%vs 0,P<0.01),P65蛋白阳性表达率下降(16.7%vs 66.7%,P<0.01)。结论:感染Ad-PTEN-GFP后人脑胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制,其机制可能与P65蛋白表达的下调有关。     

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞系BIU87增殖及侵袭活性的影响

背景与目的:PTEN(phosphataseandtensinhomologuedeletedfromchromosome10)是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种原发性恶性肿瘤和肿瘤细胞株中均存在有较高频率的缺失或突变,其失活与肿瘤的进程和预后相关。本实验研究外源性PTEN转染后,人膀胱癌细胞系BIU87增殖和侵袭活性的改变。方法:将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pBp-PTEN体外转染BIU87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和细胞侵袭实验分别检测PTEN基因转染前、后BIU87细胞增殖和侵袭活性的变化。结果:pBp-PTEN的酶切鉴定证实含有目的基因PTEN;pBp-PTEN-BIU87细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT发现,pBp-PTEN-BIU87细胞在第2、3和4天的吸光度(A值)明显低于两对照组(P<0.05),以正常BIU87细胞为对照,PTEN基因在第1、2、3、4天的细胞生长抑制率分别为4.27%、18.92%、19.54%、17.69%。细胞侵袭试验显示,各组细胞浸润穿透ECM膜的数目:pBp-PTEN-BIU8为39.3±7.7,BIU87和pBp-BIU87分别为48.1±13.2和48.9±11.0,pBp-PTEN-BIU87细胞明显少于两对照组(P<0.05)。结论:抑癌基因PTEN转染能降低膀胱癌细胞的增殖和侵袭活性。     

PTEN基因转染对卵巢癌A2780细胞周期和增殖能力影响的研究

目的:研究外源性PTEN基因稳定转染对人卵巢癌A2780细胞周期和增殖能力的影响。方法:构建PTEN基因的野生型真核表达质粒pEGFP-C1-WT-PTEN和突变型表达质粒pEG-FP-C1-C124A-PTEN,以脂质体介导法转染体外培养的人卵巢癌细胞株A2780,同时转染空载体pEGFP-C1质粒,以未转染细胞为对照(转染成功后分别命名为WT-PTEN/A2780组、C124A-PTEN/A2780组、pEGFP-C1/A2-780组和A2780组。应用RT-PCR、Western blot方法分析目的基因及其蛋白表达,并采用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期。结果:与对照细胞相比,WT-PTEN/A2780组和C124A-PTEN/A2780组PTEN mRNA及PTEN蛋白出现明显的高表达,与对照组细胞相比差异有统计学意义(t=5.300,P=0.034;t=11.963,P=0.007;t=7.869,P=0.016;t=22.421,P=0.002);WT-PTEN/A2780组细胞生长速度明显慢于未转染A2780细胞,然而C124A-PTEN/A2780组和pEGFP-C1/A2780组细胞生长速度无明显变化。流式细胞术显示WT-PTEN/A2780细胞G1期细胞数增加到(71.18±4.34)%,S期细胞数变为(17.48±1.96)%,与对照组相比差异有统计学意义(t=19.508,P=0.003;t=25.354,P=0.002),提示从G1期到S期发生抑制。结论:野生型PTEN可依赖其磷酸酶活性使A2780细胞在G1/S期发生细胞周期阻滞,并抑制A2780细胞增殖。     

p16基因的不同转染方法对脑胶质瘤细胞的不同作用

目的：探讨Ｐ１６基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用。方法：分别采用脂质体、磷酸钙＋ＤＭＳＯ休克转染的方法,观察外源野生型Ｐ１６基因短暂转染与长期稳定转染对人胶质瘤细胞系Ｕ２５１、ＳＷＯ的作用,并筛选阳性克隆。同时以空载体质粒ＰＣＤＮＡ３为对象。免疫组化、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测Ｐ１６基因表达,对转染后细胞生长、细胞周期及细胞凋亡的变化进行分析。结果：Ｐ１６基因短暂转染有明显的凋亡诱导作用;而Ｐ１６