同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞增殖周期的影响

目的研究表明,动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的独立危险因子,同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）,能通过促进血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）增殖而影响AS的发生,但Hcy与VSMCs增殖之间的关系,目前并不清楚。本研究采用不同浓度的Hcy刺激原代培养的脐静脉VSMCs,分析Hcy对VSMCs增殖周期的影响。方法常规培养人脐带VSMCs,将培养的VSMCs分为,0、50、100、200、500及1000μmol／LHcy组,其中Opmol／LHcy组为对照组。当VSMCs细胞长满80％瓶底时,各组加入不同浓度的Hcy,继续培养细胞24h和48h,采用倒置显微镜观察细胞的生长状态,采用MTT法检测VSMCs的增殖活力,采用流式细胞技术分析VSMCs的增殖周期。结果当Hey刺激VSMCs24h和48h后,VSMCs的数目增多,细胞的活力增加（P〈0．05）;同时VSMCsS期细胞减少,G2／M期细胞增多,G0／G1细胞基本不变。结论1．Hcy可直接诱导VSMCs的增殖;2．Hcy促进VSMCs从S期向G2／M期转变。     

糜酶对人血管平滑肌细胞增殖血管紧张素Ⅱ生成及细胞增殖的影响

目的 探讨阻断糜酶途径对人血管平滑肌细胞血管紧张素（Ang）Ⅱ生成及细胞增殖的影响。方法通过植块培养法获得人脐动脉血管平滑肌细胞,设立5组培养液并分组：对照组,AngⅠ组,卡托普利组,糜酶抑素组,缬沙坦组。对照组中仅为空白DMEM培养液,其他各组均加入AngⅠ（浓度均为10^-8mol／L）,此外卡托普利组、糜酶抑素组、缬沙坦组分别加入相应的干预药物（浓度均为10^-4mol／L）。作相应时间培养后测定各组细胞计数、细胞增殖指数及培养液中AngⅡ含量。结果本实验成功培养出人血管平滑肌细胞,免疫组化染色示阳性细胞达95％以上。卡托普利组、糜酶抑素组及缬沙坦组细胞计数[（624±024）、（5．39±0．51）、（5．26±0．67）个]及刺激指数（1273±0．121、1175±0.098、1．128±0.038）均显著低于AngⅠ组[（7.43±0．33）个、1．424±0．168]（均P〈0．01）,而且糜酶抑素组较卡托普利组更低（P〈0．01）,与缬沙坦组相当;糜酶抑素组AngⅡ含量[（59．0±75）pg／ml]较AngⅠ组、卡托普利组及缬沙坦组[（150．0±302）、（169．0±205）、（2200±29．0）pg／ml]更低（均P〈0.01）,而缬沙坦组则显著高于其他所有组（P〈0.01）。结论糜酶在血管平滑肌细胞AngⅡ生成及细胞增殖过程中起着重要作用。     

钙调神经磷酸酶对血管平滑肌细胞增殖中蛋白激酶G表达的影响

目的:探讨钙调神经磷酸酶(CaN)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中蛋白激酶G(PKG Iα)表达的影响.方法:对大鼠VSMCs培养并行细胞鉴定,分为对照组、低浓度环孢菌素A(CsA,0.5 mg/L)干预组、高浓度CsA(5 mg/L)干预组以及苯肾上腺素(PE)刺激组(5 mg/L CsA 10 μmol/L PE).其中CsA为CaN特异性抑制剂,PE为已知的CaN激活剂,能够刺激细胞增殖.应用RT-PCR、免疫细胞化学及Western blot法定性及定量测定VSMCs增殖中PKG Iα mRNA以及蛋白的表达水平.结果:0.5 mg/L CsA组PKG Iα mRNA以及蛋白的表达水平与对照组相比差异无统计学意义,而5 mg/L CsA组PKG Iα mRNA及蛋白的表达明显高于对照组,5 mg/L CsA 10 μmol/L PE组中PKG Iα mRNA的表达比5 mg/L CsA组减少了32.2%,蛋白的表达减少了36.7%,但仍明显高于对照组.结论:CaN能够调节培养VSMCs中PKG Iα的表达,增殖细胞用CaN特异性抑制剂CsA灭活CaN后,PKG Iα的表达明显增加,给予PE再次激活CaN后,PKG Iα的表达明显减少.     

ＰＰＡＲ-γ激动剂对瘦素刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)激动剂对瘦素刺激的血管平滑肌细胞(VSMCa)增殖效应的影响.方法:采用原代细胞培养方法建立大鼠VSMCs细胞模型;以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察不同浓度的瘦素及PPAR-γ激动剂吡格列酮对VSMCs增殖的影响.结果:瘦素能显著促进VSMCs增殖.促增殖效应在72 h末达峰值且瘦素浓度在0-100ng/ml之间呈剂量依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05);而PPAR-γ激动剂吡格列酮能抑制瘦素诱导的VSMCs的增殖效应,最佳浓度在100 umol/L时(P<0.01).结论:瘦素能刺激VSMCs增殖,而PPAR-γ激动剂能够抑制瘦素的促增殖作用,有望用于干预动脉粥样硬化的发生发展,上述实验结果可能与纠正瘦素抵抗的机制有关.     

乙酰水杨酸姜黄素酯对血管紧张素II诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响及相关机制

目的 探讨乙酰水杨酸姜黄素酯(curcumin acetylsalicylate,CA)对血管紧张素II(Angiotensin II,AngII)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)增殖的抑制作用及其相关机制.方法 建立AngII诱导的VSMC增殖模型.采用MTT法、流式细胞术观察CA干预对细胞活力和周期的影响.Western blot检测其对第10号染色体同源缺失性磷酸酶张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化AKT(p-AKT)、AKT蛋白表达的影响.结果 1、3、10μmol/L CA可以显著抑制AngII诱导的细胞活力,其中3μmol/L为最佳浓度(P<0.05).在CA的干预下,与AngII组比较,流式细胞术显示VSMC G0/G1期细胞数量明显增加,S期明显减少;Western blot显示其可以促进PTEN蛋白表达,从而抑制AKT激活(P<0.05).结论 CA可以抑制AngII诱导的VSMC增殖,其机制与阻滞VSMC G0/G1期向S期转化,以及调节PTEN/AKT信号通路有关.     

通脉宁胶囊对LPC诱导血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察通脉宁胶囊不同剂量药物血清对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管平滑肌细胞增殖活性及细胞周期的影响.方法组织贴块法进行血管平滑肌细胞(VSMC)培养,应用血清药理学的方法,LPC10-8 mol/L作为刺激因子,将通脉宁胶囊分为大、中、小3个剂量组.MTT法测定细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期.结果通脉宁大、中、小剂量组可明显降低细胞的OD值呈剂量依赖性地抑制LPC诱导的VSMC增殖. 明显降低细胞的S期数目百分比,增加G0/G1期数目百分比,使VSMC阻滞在G0/G1期,抑制细胞进入S期.结论从细胞分子水平说明通脉宁胶囊主要是通过影响细胞内DNA合成,减少有丝分裂,增加G0/G1期数目百分比,减少S期数目百分比而发挥抑制VSMC增殖作用.     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖及人Ⅰ型胶原α2（Ⅰ）基因启动子活性的影响

目的：通过研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及对人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性的调控，了解AngⅡ在动脉粥样硬化形成和发展过程中的作用。方法：①SD大鼠胸主动脉VSMC体外培养，分别在24、48和72h采用MTF法检测不同浓度的AngⅡ(10^-8mol／L、10^-7mol／L、10^-6mol／L)对VSMCs增殖的影响。②构建含人α2(Ⅰ)前胶原基因5侧翼序列-2．4kb和-1．6kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体，用FuGENE转染试剂瞬时转染平滑肌细胞，CAT—ELISA测定AngⅡ10^-7mol／L对重组体的作用。结果：①AngⅡ剂量依赖性促进VSMC增殖。②AngⅡ组的相对CAT表达量明显增高，有统计学意义。结论：AngⅡ可促进VSMC增殖，并可以在转录水平上调人α2(Ⅰ)前胶原基因表达，从而促进动脉粥样硬化的形成和发展。     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响及叶酸的拮抗作用

目的探讨不同浓度同型半胱氨酸(Hcy)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和细胞周期分布的影响及叶酸对Hcy的拮抗作用。方法正常人脐动脉VSMCs体外培养,随机分为6组:空白对照组、不同浓度Hcy干预组(50、100、2005、00μmol.L-1)和叶酸治疗组(Hcy100μmol.L-1+叶酸30μmol.L-1)。应用MTT法及流式细胞仪检测各组VSMCs增殖率及细胞周期。结果随着Hcy浓度的增加VSMCs的增殖率增加;Hcy作用后VSMCs G0/G1期细胞数降低;S期和G2/M期细胞数增加,处于DNA合成期的细胞数明显增加,而叶酸治疗组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),叶酸治疗组与Hcy 100μmol.L-1组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Hcy可通过对细胞周期的影响促进VSMCs的增殖,并在一定时间和浓度范围内呈明显的剂量依赖关系;叶酸对Hcy有拮抗作用。     

粟米草三萜皂苷对血管平滑肌细胞增殖及cyclin E表达的影响

目的 探讨粟米草三萜皂苷（MPTS）对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（RASMCs）增殖的影响.方法 采用细胞计数和流式细胞术观察粟米草三帖皂甙对RASMCs细胞增殖及RASMCs细胞周期的变化,采用western-blot方法检测粟米草三帖皂甙作用前后血管平滑肌细胞cyclin E表达变化.结果 ①与正常对照组相比,粟米草三萜皂苷呈浓度依赖性,显著降低RASMCs细胞计数值.②流式细胞术实验结果显示,不同浓度粟米草三帖皂甙处理后,G0/G1期细胞升高,S期细胞比例降低.③western-blot结果显示粟米草三萜皂苷作用48 h后cyclinE表达下降.结论 粟米草三萜皂苷对RASMCs增殖有明显的抑制作用,其机制可能与cyclin E表达下降有关.     

温脉通对VSMC增殖和迁移相关因子MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的 观察温脉通对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移及其相关因子基质金属蛋白酶_2(MMP-2)和其抑制因子(TIMP-1)的影响.方法 体外培养兔胸主动脉VSMC,以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作为诱导因素,复制VSMC增殖、迁移模型,用温脉通药物血清进行干预.应用四唑盐(MTT)比色法测定VSMC增殖活性,用免疫细胞化学检测方法 观察MMP-2、TIMP-1的表达.结果 细胞经AngⅡ作用后其增殖活性和迁移距离明显增加,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01);而加入药物血清后,细胞增殖活性降低、迁移距离变短,与AngⅡ组比较有显著性差异(P<0.01),其中以高剂量组最为明显.正常对照组MMP-2呈弱表达、TIMP-1呈中度表达;AngⅡ组MMP-2表达明显增强、TIMP-1表达减弱;温脉通组MMP-2表达明显受到抑制而TIMP-1表达增强.结论 温脉通可抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖和迁移,抑制MMP-2蛋白表达、诱导TIMP-1蛋白表达,提示该方抑制VSMC迁移可能与影响细胞因子表达从而调节细胞外基质(ECM)代谢有关.     

普伐他汀对激活的VSMC增殖和细胞因子合成的干预作用

目的研究不同浓度普伐他汀对体外培养的经脂多糖 (LPS)激活的狗血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖和细胞因子合成的影响。方法 10、10 0、5 0 0 μmol/L普伐他汀 ,于作用后 2 4h和 4 8h采用MTT比色法观察VSMC增殖情况 ,ELISA法观察细胞因子IL 6和TNF α的表达。结果作用 2 4h后 ,10 0、5 0 0 μmol/L的普伐他汀可抑制VSMC的增殖 ,而各浓度均可抑制IL 6的合成 (P <0 .0 5 ) ;作用 4 8h后 ,各浓度普伐他汀均可抑制VSMC增殖和IL 6合成 ,10 0、5 0 0 μmol/L组作用大于 10 μmol/L组 (P<0 .0 5 ) ;普伐他汀对TNF α合成无显著影响 (P >0 .0 5 )。结论一定浓度的普伐他汀可抑制VSMC增殖和细胞因子IL 6的合成 ,该作用可能与时间和剂量有关。     

阿托伐他汀对血管平滑肌细胞增殖和血红素氧化酶1表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对血管平滑肌细胞增殖的影响及对血红素氧化酶1（HO-1）表达的作用。方法采用酶消化法分离大鼠血管平滑肌细胞。取4－6代细胞用于实验,胰岛素样生长因子1（IGF-1）刺激血管平滑肌细胞增殖,以不同浓度（0、0.01、0.1、1和10μmol/L）阿托伐他汀、10μmol/L阿托伐他汀＋锌原卟啉Ⅸ（ZNPPⅨ）进行干预。采用四唑盐（MTT）比色法观察细胞的增殖。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）半定量分析细胞HO-1 mRNA的表达。结果IGF-1可促进血管平滑肌细胞增殖,与空白组比较,IGF-1组细胞计数明显增加（P〈0.01）,随着阿托伐他汀浓度的提高,血管平滑肌细胞计数逐渐减少（P〈0.01）,加入ZNPPⅨ后血管平滑肌细胞增殖恢复。空白组和IGF-1组血管平滑肌细胞HO-1有少量表达,随着阿托伐他汀浓度的增加,HO-1的表达增强,呈剂量依赖性。与空白组和IGF-1组比较,0.01μmol/L组HO-1增加不明显,0.1μmol/L组HO-1开始有较明显增加,10μmol/L组HO-1表达达高峰（P〈0.01）。结论阿托伐他汀可抑制血管平滑肌细胞的增殖和诱导HO-1的表达。诱导HO-1表达是阿托伐他汀抑制血管平滑肌细胞增殖的机制之一。     

Inhibitory effect and mechanism of chuanxiongzine on multiplication of VSMC

Objective: To study the inhibitory effect of chuanxiongzine on vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation and explore its molecular biology basis. Methods: we selected the VSMC cultured 4～8 generation from rat aorta thoracalis as research object.The objects were divided into four groups( Ⅰ )control group, ( Ⅱ )chuanxiongzine(50 μg/ml)group, ( Ⅲ )chuanxiongzine (100 μg/ml) group and( Ⅳ ) chuanxiongzine (200 μg/ml) group. The inhib itory effect of chuanxiongzine on VSMC proliferation was investigated by cell counting, MTT and 3H-TdR incorporation assay. In order to illuminate the molecular biology mechanism of chuanxiongzine inhibiting VSMCs proliferation, the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and C-myc were detected.Results: Chuanxiongzine could inhibit the proliferation of VSMC significantly in a dose- and time-dependent manner, compared with control group (P ＜ 0.05). The expression of PCNA and c-myc were inhibited obviously and correlated with the concentration of chuanxiongzine (P ＜ 0.05). Conclusion: Chuanxiongzine may play a considerable role in VSMC proliferation process. The inhibitory effect of chuanxiongzine in a dose- and time-dependent manner can be realized via down regulating the expression of PCNA and c-myc. In this study, The great theoretical fundament about Chinese medicine, which is used to treat atherosclerosis (AS), has been obtained.     

温脉通对实验性肢体动脉硬化家兔的防治作用及其机制的研究

目的观察温脉通对实验性家兔肢体动脉硬化性闭塞症(ASO)的疗效,并初步探讨其作用机理。方法将24只雄性日本纯种大耳白兔随机分为正常组、模型组和治疗组,每组8只。用实验性体内血栓形成测定仪对家兔右下肢股动脉定位电流刺激,同时给予高脂、高胆固醇饲料喂养制作ASO模型。治疗组术后第2天开始灌服中药复方温脉通,6周后取出定位血管,运用HE染色、Mas-son染色,光镜观察血管变化。用免疫组织化学方法检测血管平滑肌细胞(VSMC)增殖指标细胞增殖核抗原(PCNA),用TUNEL法检测细胞凋亡情况。用免疫组织化学方法检测血管壁基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和其抑制因子(TIMP-1)。结果模型组血管内膜增厚,中膜VSMC明显增殖、迁移;温脉通防治组接近正常。模型组PCNA阳性数明显高于正常组(P<0.01),治疗组PCNA阳性数低于模型组(P<0.01)。模型组凋亡数稍高于正常组,治疗组凋亡数明显高于正常组和模型组(P<0.01)。凋亡与PCNA之比,治疗组明显高于模型组。模型组MMP-2表达明显高于正常组,尤其新生内膜表达增高明显,治疗组MMP-2表达明显低于模型组。正常组TIMP-1有明显表达,模型组新生内膜TIMP-1表达稍高于正常组、中膜表达稍低于正常组;治疗组表达增强,中膜稍高于模型组接近正常组。结论温脉通具有防治实验性家兔ASO作用,并可抑制病变血管VSMC增殖、诱导细胞凋亡。该方可能是通过调整细胞增殖速率与凋亡速率之间的动态平衡,减少内膜过度增生,减轻动脉粥样硬化程度,从而发挥防治ASO作用。该方能使ASO模型组家兔血管MMP-2表达下降,TIMP-1表达相对增加,调节MMPs/TIMPs使之平衡,从而抑制VSMC过度增殖、迁移,达到防治ASO的目的。     

Kawasaki Disease on PDGF Expression and VSMC Proliferation

The effect of serum of patients with Kawasaki disease (KD) on expression of platelet-derived growth factor (PDGF) B chain protein in vascular endothelial cells (VEC) was studied by immunocytochemical method. Meanwhile,the effects of the endothelial cell conditioned media (ECM) on expression of PDGF receptor mRNA in vascular smooth muscle cells (VSMC) and on cell cycle of VSMC were investigated by the methods of nucleic acid hybridization and flow cytometry (FCM). The results showed that the serum of patients with KD induced the expression of PDGF-B chain protein significantly. ECM significantly promoted the expression of PDGF receptor mRNA and induced the proliferation of VSMC. These data suggest that the activation of PDGF-PDGF receptor may play a role in the pathogenesis of coronary complication of KD.     

用血清药理学研究益气通络丹对大鼠血管平滑肌细胞的影响

目的观察益气通络丹 (YQTLD)含药血清对培养SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞 (VSMC)的影响 ,探讨该药抗冠心病、脑梗塞等心脑血管疾病的作用机制。方法血清药理学方法制备含药血清 ;MTT法测定含药血清对VSMC增殖活性的影响 ;NO试剂盒测定含药血清对VSMC作用与NO的关系。结果YQTLD含药血清能显著降低培养的SD大鼠VSMCMTT法的D(()值 ,与空白血清组有显著性差异 (P <0 0 1) ;YQTLD含药血清组培养基中NO含量明显增多 ,与空白血清组有显著性差异 (P <0 0 1)。结论YQTLD有抗VSMC增殖的作用 ,此作用可能与NO有关 ,YQTLD可能通过抗VSMC增殖 ,促进NO释放来延缓AS的发生、发展 ,从而在冠心病、脑梗死等心脑血管疾病中发挥作用。     

瑞舒伐他汀对实验性动脉粥样硬化兔动脉平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响

目的探讨瑞舒伐他汀对动脉粥样硬化(AS)模型兔主动脉骨桥蛋白(OPN)的表达变化。方法复制AS兔模型,检测血清脂质成分;HE染色观察动脉的结构;用免疫组化和Western blot检测主动脉中OPN的表达。结果成功建立了AS兔模型;实验用兔在高脂喂养12周后血清中脂质相关指标有明显的增加(P<0.05);HE染色则显示了模型主动脉内膜增厚,有泡沫细胞生成并可见明显的AS斑块;免疫组化和Western blot结果表明主动脉平滑肌细胞的OPN表达显著上升(P<0.05),治疗后OPN表达降低,AS斑块减少。结论瑞舒伐他汀可能通过降低OPN的表达从而抑制AS的形成。     

原癌基因c－fos和c－jun在血管平滑肌细胞增殖调控中的作用

体外培养大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ），通过３Ｈ－ＴｄＲ参入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察内皮素－１对ＶＳＭＣＤＮＡ合成、原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ表达及ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ增殖的影响。结果表明，内皮素－１作用于ＶＳＭＣ１２小时，３Ｈ－ＴｄＲ参入开始增加，２４小时达到峰值。在内皮素－１作用下，原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ的表达活性在３０分钟达到高峰，３／小时后恢复到原来水平。将可合成ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ的表达载体导入ＶＳＭＣ，外源性ｃ－ｊｕｎ基因在ＶＳＭＣ中大量表达并显著抑制细胞增殖。本文提示，原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ在ＶＳＭＣ增殖调控中起着重要作用。     

OX-LDL对血管平滑肌细胞增殖及人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)基因启动子活性的影响

目的:了解氧化修饰低密度脂蛋白(OX—LDL)在动脉粥样硬化形成和发展过程中的作用。方法:(1)SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)体外培养,分别在24、48和72 h采用MTT法检测不同质量浓度(50、100、150、200 μg/ml)的OX—LDL对VSMC增殖的影响。(2)构建含人a2(I)前胶原基因5’侧翼序列-2.4 kb和-1.6 kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体,用FuGENE转染试剂瞬时转染平滑肌细胞,CAT-ELISA测定150/μg/ml OX-LDL对重组体的作用。结果:(1)OX—LDL促进VSMC增殖,且随着浓度的增加和作用时间的延长,促增殖作用越强;(2)与对照组相比,VSMC经重组体pCOLH2 1.6、pCOLH2 2.4转染再经OX—LDL作用后,相对CAT分别为1.78±0.01及1.67±0.10,其表达量明显增高(P<0.01)。结论:OX—LDL可促进VSMC增殖,并从转录水平增加I型胶原蛋白的生成,从而促进动脉粥样硬化的形成和发展。