不同方法移植骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死效果比较

目的:比较经心外膜、静脉移植骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗大鼠急性心肌梗死(AMI)的效果,为临床选择移植方法提供依据。方法:体外获取、培养大鼠骨髓MSCs。建立AMI模型,分别经心外膜、静脉移植5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记的MSCs。移植3周后超声测算左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS);右颈总动脉插管检测血流动力学指标;免疫组化分析心肌内MSCs。结果:静脉移植组、心外膜移植组LVEF、FS较对照组均升高(P<0.05),心外膜移植组比静脉移植组升高更明显(P<0.05)。静脉移植组、心外膜移植组左心室收缩压、压力变化上升及下降速率最大值升高,左心室舒张末期压降低,心外膜移植组的变化比静脉移植组更明显(P<0.05)。心外膜移植组梗死心肌内BrdU阳性的MSCs数多于静脉移植组。结论:经心外膜移植MSCs治疗AMI的效果优于静脉移植途径。     

同种异体骨髓间充质干细胞心内膜移植治疗小型猪急性心肌梗死

目的:探讨同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)心内膜移植治疗小型猪急性心肌梗死的疗效。方法:分离、纯化、扩增培养小型猪MSCs;开胸结扎第1与第2对角支间前降支中段形成急性前壁心肌梗死的动物模型,心肌梗死后2~3周经心内膜注射移植DAPI标记的同种异体MSCs,心肌梗死前、后及移植后3个月行超声心动图及生化检查,并取梗死周围心肌组织冰冻切片及苏木精-伊红染色,免疫荧光法鉴定结蛋白(desmin)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达。结果:每40ml骨髓液经2~3周传3代平均获得(3.81±0.09)×107个细胞,移植后3个月左室射血分数较心肌梗死后及对照组改善明显,分别为(56.7±0.8)%,(40.1±1.2)%,(34.9±0.9)%(均P<0.05),肝肾功能、血糖及血气分析正常,3个月冰冻切片可见坏死心肌周围细胞核蓝染的移植细胞,免疫组化提示desmin及cTnI表达阳性。结论:同种异体MSCs经心内膜移植安全有效,心功能明显改善。     

骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的研究进展

心肌梗死是近年来导致人类死亡的主要疾病之一,骨髓间充质干细胞移植在一定程度上能改善心功能,且具有取材方便、不涉及伦理道德问题等优点,成为研究的热点。近年来有关骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化、心功能的改善、细胞移植方法等方面的研究取得很大的进展,但同时也发现了不少问题。     

骨髓间充质干细胞在心肌梗死中的应用

<正>急性心肌梗死(AMI)是指由冠状动脉血供急剧减少或中断引起的急性心肌缺血性坏死。AMI是世界上致死率较高的疾病之一。虽然目前药物抗栓溶栓、PCI及经冠状动脉旁路移植术等治疗,已使AMI的病死率明显下降,但这些方法均不能使梗死后的心肌细胞再生~([1])。近些年,随着干细胞治疗研究的深入,心肌再生修复成为一种可能。骨髓间充质干细胞(MSC)因具有强大的增殖能力和多向分化潜能以及免疫原性弱等特性,成为AMI后再生治疗的热点种子细     

同种异体移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠心肌梗死

目的　探讨同种异体骨髓间充质干细胞 (MSCs)在梗死大鼠心脏局部存活、迁移、分化及对心功能的影响 ;明确同种异体细胞移植治疗心肌梗死 (MI)的可行性及效果。方法　雌性Wistar大鼠 3 5只 ,随机分为正常对照组、急性心肌梗死 (AMI)组及MI MSCs治疗组。分离纯化雄性Wistar大鼠骨髓MSCs ,于左冠状动脉前降支结扎后 1～ 3h植入到雌性大鼠心脏组织 ,移植后 10周检测心功能并取心脏检测各种相关指标。结果　异体大鼠MSCs经纯化后可在梗死心脏组织定居、生存 ,并与宿主心肌纤维排列方向一致 ,免疫组化检测胞质心肌特异蛋白染色阳性 ,与MI组比较 ,异体细胞移植组左室收缩压升高 (P <0 0 5) ,舒张末压明显降低 (P <0 0 1)、左心室内压最大上升和下降速率显著增快 (P <0 0 5) ,梗死边缘区心肌面毛细血管数目明显增加 (P <0 0 5) ,多功能真彩色病理图像分析系统显示MI面积缩小 (P <0 0 5)。结论　同种异体MSCs移植治疗MI可行、有效     

大鼠骨髓间充质干细胞移植在心肌梗死区长期存活的观察

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)异体移植在心肌梗死区后长期存活数量的动态变化及其分布情况.方法 分离、纯化、培养雄性SD大鼠BMSC.开胸结扎雌性SD大鼠左冠状动脉前降支,于心肌梗死1 b后,将雄性大鼠BMSC 1.2×106个注入移植在雌性大鼠梗死心肌中心区心外膜下.将细胞移植受体大鼠随机分为3组,分别于移植后1、3和6周采集心肌梗死组织标本(n=18).实验动物移植细胞用Hoechst33342(n=5)和Brdu预先标记(n=5).实时定量PCR(realtime quantitative PCR)检测大鼠Y染色体雄性鉴别基因sry片段的表达(n=8).结果 分离纯化的雄性大鼠BMSC经流式细胞术鉴定为CID44+/CD34-.Hoechst33342荧光及Brdu免疫组织化学定性定位了移植细胞的存活,并在3周和6周组观察到部分标记细胞有序聚集排列,形成血管样结构.RT-PCR检测移植后细胞存活率在1、3和6周组分别为7.88%、7.82%和8.73%.结论 BMSC可以在心肌梗死区长期存活并参与受损心肌的修复.存活数量于移植1周后不再进行性减少,至6周均为8%左右.

Abstract：

Objective To investigate the quantification and distribution of survival transplanted bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) in infarcted myocardium of rats. Methods BMSCs of male SD rats were isolated, purified and proliferated. Female SD rats were subjected to occlusion of left anterior descending artery, 1.2 × 106 BMSCs were injected into the centre zone of the infarct region 1 h after left anterior descending artery occlusion. Myocardial tissue was harvested randomly at 1,3 and 6 ( n = 18) weeks after transplantation. Transplanted cells were labeled with Hoechst33342 ( n = 5 ) and Brdu ( n = 5 ). Sry suquence of Y chromatosome in male rat was analyzed by real-time PCR in the tissue ( n = 8). Results FACS analysis showed that BMSCs expressed homogenous with CD44 +/ CD34 -. Hoechst33342 or Brdu labeled positive cells were found in localized accumulation and some of them migrated to the margin of the infarct region, and vessel-like structure could be observed in the host hearts. The real-time PCR demonstrated that the survival rates of engrafted BMSCs were 7. 88%, 7. 82% and 8. 73% respectively at 1,3 and 6 weeks after transplantation. Conclusion BMSCs could survive in the host infarcted myocardium for more than one month and the survival rate was around 8% from the first week to the sixth week after transplantation.     

骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的新技术

骨髓间充质干细胞移植是治疗心肌梗死的新途径之一,其技术和方法不断发展。诸如建立更好的大型活体实验动物模型；改进对植入细胞的标记追踪技术；进一步研究细胞植入的适宜方式和时间等。骨髓间充质干细胞移植和基因疗法相结合可能得到叠加的治疗效果。     

骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的新技术

骨髓间充质干细胞移植是治疗心肌梗死的新途径之一,其技术和方法不断发展.诸如建立更好的大型活体实验动物模型;改进对植入细胞的标记追踪技术;进一步研究细胞植入的适宜方式和时间等.骨髓间充质干细胞移植和基因疗法相结合可能得到叠加的治疗效果.     

骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的研究进展

骨髓间充质干细胞是一种多能干细胞,在体外培养时,可以通过诱导使其分化为心肌细胞等。目前进行的动物实验和临床Ⅰ期实验表明骨髓间充质干细胞具有促进血管增生以及改善心肌梗死后心脏功能的作用,为心肌梗死的治疗提供了广阔前景。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的进展

心肌梗死可引起心肌细胞的丢失,进而引起心脏功能的下降,是心力衰竭最主要的病因。骨髓间充质干细胞（BM—MSCs）是一类具有横向分化为各系统器官和组织能力的干细胞,能补充丢失的心肌细胞并通过旁分泌等机制增强心功能,为心肌梗死提供一种全新的治疗方法,极具发展潜力。本文对BM—MSCs的分离培养、诱导因素、移植以及临床研究等方面进行了综述。     

血红素氧化酶-1基因修饰的自体骨髓间充质干细胞移植治疗猪急性心肌梗死

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSC)经血红素氧化酶-1(HO-1)基因修饰后移植对急性心肌梗死的治疗作用.方法细胞分为3组,未转染质粒组(MSC组)、转染空载质粒组(LaeZ-MSC组)、转染pcDNA3.1-hHO-1组(HO-1-MSC组),体外实验予缺氧诱导观察HO-1基因转染后MSC的抗凋亡情况,同时收集上清液检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达.体内实验建立猪的急性心肌梗死模型,梗死1 h再灌注1 h后分为3组,即生理盐水组、单纯干细胞治疗组(MSC组)及HO-1基因转染干细胞治疗组(HO-1-MSC组).治疗组分别予MSC及HO-1-MSC移植治疗,对照组则注入等量生理盐水.细胞移植后1周及3个月行磁共振检测.3个月后处死动物,取心脏标本行相关检查.结果(1)体外缺氧诱导实验中HO-1-MSC组凋亡率(30.30±7.64)%低于MSC组(56.93±4.68)%(P＜0.001)和LacZ-MSC组(55.88±4.38)%(P＜0.001).同时上清液中VEGF的分泌HO-1-MSC组(768.44±78.38)pg/ml高于MSC组(555.27±67.67)pg/ml(P＜0.001)和LacZ-MSC 组(522.97±71.45)pg/ml(P＜0.001).(2)细胞移植3个月后HO-1-MSC组LVEF(53.50±2.09)%明显高于MSC组(49.54±2.74)%(P=0.017).梗死周边区毛细血管密度(血管数/HPF)HO-1-MSC组14.59±2.39亦大于MSC组11.78±2.48(P=0.033).结论 HO-1基因转染MSC较单纯MSC移植治疗急性心肌梗死疗效明显.     

骨髓间充质干细胞的培养及低氧条件对其影响

目的 骨髓间充质干细胞(BMMSC)的体外培养和低氧对于BMMSC增殖作用的影响.方法 成年雄性SD大鼠断颈处死后于75％酒精中浸泡5 min.用全骨髓贴壁法培养细胞,选取生长状态良好的第3代细胞进行鉴定.以单克隆抗体CD45、CD90行流式细胞术鉴定大鼠BMMSC.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定第3代BMMSC以及低氧处理的第3代BMMSC的增殖情况.结果 用全骨髓贴壁法分离并培养SD大鼠BMMSC;流式细胞仪检测显示:第3代BMMSC表面特异性标志CD90表达率为96.0％,而非BMMSC表面标志CD45仅为2.5％.MTT结果显示低氧条件下的BMMSC比常氧条件下增殖速率高,并且光镜下观察到细胞状态均一,折光性更好.结论 用全骨髓贴壁法可以在体外分离、培养出纯度较高的SD大鼠来源BMMSC,低氧环境可以刺激BMMSC的增殖.     

左卡尼汀提高大鼠心肌梗死后移植骨髓间充质干细胞的存活和作用

目的探讨左卡尼汀（LC）是否能提高心肌梗死后移植骨髓间充质干细胞（MSCs）的存活率,从而提高其疗效。方法60只大鼠随机分为5组：假手术组、模型组、LC组、MSCs组和左卡尼汀联合骨髓间充质干细胞（LC＋MSCs）组。4周后检测心功能、MSCs存活情况和梗死区心肌纤维化水平。结果4周后,与MSCs组比较,LC＋MSCs组MSCs的存活、左室心功能、心肌纤维化均改善（P〈0．05）。结论LC联合MSCs使用可提高MSCs的存活率,更好地改善心肌梗死后的心功能和心肌纤维化。     

急性心肌梗死患者骨髓间充质干细胞生物学特性改变的研究

目的:研究急性心肌梗死(AMI)患者骨髓间充质干细胞(MSC)生物学特性的改变。方法:取AMI患者和对照组骨髓的贴壁细胞,测定其生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测其免疫表型,进行纤维母细胞集落形成单位(CFUF)计数,体外诱导成脂肪和成骨,以油红O及VonKossa染色证实。结果:这些细胞呈梭形贴壁生长,CD105、CD44、CD29、Flk1均阳性,AMI组细胞倍增时间长于对照组[(61.2±4.6)∶(55.1±5.2)h],CFUF低于对照组[(10.2±1.9)∶(13.3±2.9),P<0.05],2组MSC细胞均可成脂肪、成骨。结论:AMI组MSC增殖能力较对照组弱,MSC的异常可能是AMI患者易患动脉粥样硬化原因之一。     

关于骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导剂研究概况

骨髓间充质干细胞（BMSCs）具有多向分化潜能,且在体外容易扩增培养,是一种治疗心梗理想的种子细胞,通过诱导剂将骨髓间充质干细胞诱导为心肌样细胞是心血管领域研究的热门话题.本文就目前常用的诱导剂作一概况.     

超声微泡介导骨髓间充质干细胞移植治疗兔心肌梗死的效果

目的：观察超声＋破裂微泡介导的骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植入兔梗死心肌后对移植效率和心脏功能的影响。方法：取日本大耳白兔52只随机均分为4组,超声组（US组）采用超声经兔胸壁辐照,微泡组（MB组）经静脉输注微泡造影剂,超声微泡联合组（US＋MB组）经静脉输注微泡造影剂后采用超声辐照,急性心肌梗死（AMI）模型组不予超声及微泡处理。各组取骨髓体外培养BMSCs。结扎兔左冠状动脉前降支建立AMI模型,分别于再灌注1h后对各组动物采取超声或微泡处理（AMI模型组不予处理）,经梗死相关动脉注射BrdU标记的BMSCs悬液。移植后24h和4周,测量各组兔左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（LVFS）,移植后4周测定各组BrdU阳性细胞数。结果：移植后4周,与AMI模型组、US组、MB组比较,US＋MB组LVEF[（52.45±5.45）%、（52.82±5.19）%、（51.10±3.54）%比（59.45±3.53）%]、LVFS[（24.36±3.47）%、（24.36±2.98）%、（23.50±2.01）%比（28.55±2.38）%]均显著提高,BrdU阳性细胞数[（39.28±11.38）个、（41.54±9.87）个、（42.66±16.93）个比（69.15±12.27）个]明显增加,P均〈0.01。结论：超声＋微泡介导的骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死可提高移植效率并在不同程度上提高心脏功能。     

自体骨骼肌成肌细胞和骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死兔心室重构和心功能的影响

目的：观察经冠状动脉途径移植自体骨骼肌成肌细胞（SMs）和骨髓间充质干细胞（BM—MSCs）到兔急性心肌梗死（AMI）区后对心室重构和心脏功能的影响。方法：取日本大耳白兔60只,随机分为经冠状动脉注射SMs移植组、BM—MSCs移植组、对照组和假手术组,各15只。结扎兔左冠状动脉前降支,建立AMI模型：再灌注后,SMs移植组经冠状动脉注射自体SMs悬液1ml（5×10^6个细胞）;BM—MSCs移植组经冠脉注射自体BM—MSCs悬液1ml（5×10^6个细胞）;对照组注入等量的无血清培养液;假手术组除不结扎左前降支外,其余操作均同对照组。术后4周,以超声心动图仪测量各组左心室舒张末期内径（LVEDd）和左心室射血分数（LVEF）。测定各组兔左心室质量及左心室质量指数并以免疫组织化学法检测各组兔新生血管数目。结果：术后4周,与对照组比较,SMs和BM—MSCs移植组的I。VEF明显提高[（53．21±2．32）％比（61．93±4．11）％比（62．41±2．58）％,P〈0．01],LVEDd明显减小[（12．48±0．84）mm比（11．23±0．44）mm比（11．34±0．36）mm,P〈0．01],左心室质量、左心室质量指数明显减低（P〈0．01）,新生血管数目明显增多[（4．08±1．8）个／HP比（13．6±1．6）个／HP比（12．5±1．7）个／HP,P〈0．05]。两移植组间各指标比较均无显著性（P〉0．05）。结论：经冠状动脉途径自体骨骼肌成肌细胞和骨髓间充质干细胞移植可促进血管新生,改善心肌梗死后心室重构,从而增强心脏收缩功能。     

体外诱导成人骨髓间充质干细胞转化为神经元细胞的实验研究

目的探讨成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在体外特定的诱导条件下,转化为神经元细胞的规律、效率及长期存活的条件.方法采用β-巯基乙醇为诱导剂,在体外诱导6 h后,改用诱导维持液使诱导后的细胞在诱导维持液中存活6 d.用细胞化学及免疫组织化学、Western blot方法检测神经元细胞、星形胶质细胞标记蛋白的表达.结果诱导6 h,诱导后的细胞尼氏染色胞浆中可见深蓝色的尼氏体形成;细胞表达NSE、NF-M,而不表达GFAP;NSE、NF-M阳性细胞数超过80%以上.Western blot结果显示:诱导6 h,诱导后的细胞表达Nestin,而无MAP-2的表达,随着时间的延长,Nestin的表达逐渐减少,而出现了MAP-2的表达.结论β-巯基乙醇在体外可定向诱导hMSCs经神经干细胞转化为神经元细胞,而且诱导后的神经元细胞逐渐趋于成熟.