染色体原位杂交检测28例急性早幼粒细胞白血病残留病变

应用荧光染色体原位杂交（ＦＩＳＨ）方法检测急性早幼粒细胞白血病（ａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ,ＡＰＬ）患完全缓解（ｃｏｍｐｌｅｔｅｒｅｍｉｓｓｉｏｎ,ＣＲ）期微小残留病变（ｍｉｎｉｍａｌｒｅｓｉｄｕａｌｄｉｓｅａｓｅ,ＭＲＤ）,并探讨ＭＲＤ的动态变化与复发的关系。方法：对２８例具有ｔ）（１５：１７）的ＡＰＬ患在ＣＲ期应用中期分裂相ＦＩＳＨ方法,进行了监测。结果：１１例以     

联合应用染色体G显带和间期荧光原位杂交技术检测急性早幼粒细胞白血病

目的 联合染色体G显带和间期荧光原位杂交技术(interphase fluorescence in situ hybridization，I—FISH)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL．)患者进行早期诊断和治疗后微小残留病的监测，同时对两种方法的灵敏度进行比较。方法 应用染色体G显带技术和I—FISH对20例APL患者进行遗传学检测，包括13例初诊患者和8例治疗后获完全缓解的患者(其中有初诊中的1例)。结果 ①13例初诊病例中，9例染色体G显带检测t(15；17)阳性，2例阴性,2例因分裂相缺乏无法分析结果，阳性检出率为9／13(69.2％)；I—FISH检测PML／RARa融合基因13例为阳性，阳性检出率为13／13(100％)，细胞阳性率为76％～100％，平均91.3％。②8例治疗后血液学获完全缓解病例，染色体G显带后核型分析6例正常，2例无分裂相可供分析；I—FISH检测7例均为阴性，1例阳性。结论 联合运用染色体G显带和I—FISH技术能够有效提高APL患者的诊断和治疗后微小残留病的监测水平。     

急性早幼粒细胞白血病的治疗进展

急性早幼粒细胞白血病(APL)的治疗取得了新的进展。在提高疗效的基础上进一步降低治疗的不良反应是近年来主要的研究方向之一,包括诱导方案的改进和巩固治疗策略的优化。以全反式维甲酸联合化疗为基础的治疗方案用于APL患者的治疗取得了良好的预后,提高了APL的完全缓解率。根据危险度不同进行分层治疗可以提高巩固治疗的疗效,而将微小残留病监测技术与抢先治疗相结合大大减少了血液学复发风险,使APL的治疗成为个体化治疗的典范。     

急性早幼粒细胞白血病染色体易位联合R显带和间期荧光原位杂交技术分析

目的探讨荧光原位杂交(FISH)及常规细胞遗传学染色体核型分析技术对急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARa融合基因检测的灵敏度和特异度及其在临床中应用价值。方法选取51例APL患者,应用常规细胞遗传学染色体核型分析方法及FISH技术检测患者PML/RARa融合基因的表达情况。结果在进行常规染色体核型分析的51例患者中41例(80.4%)为t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常,其中38例(74.5%)为单纯t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常,3例(5.9%)为伴t(15;17)(q22;q21)易位的复杂核型异常;10例(19.6%)无t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常中1例(2.0%)为不伴t(15;17)(q22;q21)易位的复杂核型异常,1例(2.0%)为t(11;17)(q13;q21)易位的核型异常,3例(5.9%)为正常核型,5例(9.8%)未见分裂相。在进行FISH检测的51例患者标本中48例(94.1%)有PML/RARa融合基因异常,同时进行常规染色体核型分析和FISH检测的41例患者同时存在t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常和PML/RARa融合基因异常,两者符合率为100%;在15例正常骨髓标本的FISH检测中15例标本结果均未发现有PML/RARa融合基因,提示FISH检测技术具有较高的敏感度和特异性。结论对于初发的APL患者,常规染色体核型分析和间期荧光杂交技术结合分析APL患者细胞遗传学特征是诊断该病的有力工具,FISH技术操作更为简单,省时直观。     

PML/RARα融合基因及染色体检测在急性早幼粒细胞白血病诊断中的应用

目的:探讨PML/RARα融合基因检测及染色体分析对急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断的价值。方法:骨髓细胞24h培养后,采用FISH法检测PML/RARα融合基因,同时染色体R显带法分析是否存在t(15;17)。结果:41例确诊的APL患者中FISH检测发现所有病例均存在PML/RARα融合基因,检出率为100%,染色体核型分析发现典型t(15;17)38例,复杂核型1例,正常核型2例,检出率为92.7%。结论:PML/RARα融合基因检测和染色体分析是诊断APL的可靠方法,而PML/RARα融合基因检测灵敏度更高,可作为细胞遗传学的重要补充。     

荧光原位杂交技术检测急性早幼粒细胞白血病的PML/RARα融合基因重排

目的：探讨双色双融合荧光原位杂交技术（dual-color and dual-fusion fluorescence in-situ hybridization,D-FISH）在急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia,APL）诊断中的应用价值。方法：同时应用常规细胞遗传学R显带（RHG）核型分析和双色双融合荧光原位杂交2种方法,对21例APL患者进行检测。结果：21例APL患者中,常规细胞遗传学检出t（15;17）染色体易位18例,D-FISH检测均为PML/RARα融合基因（＋）;2例阴性和1例因无分裂相而无法分析结果者经D-FISH检测均为（＋）。D-FISH检测总阳性率100%（21/21）,高于常规细胞遗传学检查阳性率85.71%（18/21）。结论：与常规细胞遗传学方法相比,D-FISH检测APL的PML/RARα融合基因具有简便、快速、灵敏、特异性强等优点,可以作为APL临床诊断的一种重要检测方法。     

荧光原位杂交在急性早幼粒细胞白血病治疗前后的研究

目的 探讨荧光原位杂交技术在急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断及其微小残留病(MRD)检测中的价值。方法 应用PML/RARα易位探针对8例初诊和6例完全缓解的急性早幼粒细胞白血病和1例正常对照进行t(15；17)融合基因检测，并与经典细胞遗传学结果进行比较分析。结果 G显带分析8例初诊患者均为t(15；17)，6例缓解患者中3例为t(15；17)，3例为正常核型。FISH检测显示，8例初诊和5例缓解患者均存在PML／RARα融合基因红，绿荧光信号，只有1例缓解患者和正常对照为正常15红色信号和17绿色信号。研究发现2例M3V患者PML/RARα融合基因阳性率达80％以上，一般M3阳性率在60％左右，缓解中的患者阳性率普遍下降在20％以下，另外发现2例15三体患者和2例伴RML／RARα融合基因的同时增加1条17号染色体的绿色信号。结论 FISH技术是一种高灵敏度、高分辨率的分子遗传学新技术，对M3的诊断及缓解后残余的畸变肿瘤细胞检测具有重要意义。     

PML/RARa 融合基因监测急性早幼粒细胞白血病微小残留病的临床意义

观察PML/RARa融合基因在监测急性早幼为细胞白血病（APL）微小残留病（MRD）中的临床意义。方法：诱导缓解及巩固维持治疗期间，采用筑巢式逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测患者骨髓细胞中PML-RARa融合基因的动态变化，PML-RARa融合基因。结果：长期随访的18例完全缓解（CR）患者，2例出现分子学复发。其中1例发生于CR1后后4个月，诱导缓解治疗后获得CR2，CR2后2个月再次出现分子学与血液学的复发，诱导治疗1个疗程获得CR3；1例发生于CR1后74个月，诱导缓解治疗后获得CR2，随访结束时生存期已达106个月。结论：在CR期定期监测PML-RARa融合基因，可早期发现分子学复发，及时干预治疗可避免血液学复发。     

荧光原位杂交检测急性髓性白血病21号染色体复杂核型异常

目的对急性髓性白血病（AML）患者可能出现的21号染色体复杂核型异常进行研究。方法AML患者共50例,其中成人37例,儿童13例,采用荧光原位杂交技术（FISH）,运用多种位点特异性DNA探针（染色体全染、特殊位点、双色易位融合探针）进行杂交。结果50例AML中,7例患者出现21号染色体异常（14％）,包括21号染色体数量和结构上的异常。其中4例儿童AML出现21号染色体三倍体,1例合并复杂的核型变化：47～49,XX,der（1）t（1;17）（p36．1;q23）,＋4,＋10,der（11）t（11;17）（q23;q23）,-17,-18,＋20,＋21。3例成人AML出现21号染色体结构的变化,即t（8;21）（q22;q22）。其中1例患者出现复杂的核型变化,即der（21）,t（8;21）（q22;q22）,dup（15q）。结论AML常合并有21号染色体畸变。儿童及成人AML出现21号染色体畸变的方式不同：前者多见21号染色体数量上的变化,而后者多见21号染色体结构上的变化。     

荧光原位杂交技术在急性早幼粒细胞白血病诊断及治疗中的应用价值

目的探讨FISH法检测PML-RARa融合基因在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的临床应用价值。方法对21例疑诊APL患者应用FISH技术检测PML-RARa融合基因。结果 21例疑诊患者中最后确诊为APL 15例,排除APL 6例。15例APL患者中PML-RARa融合基因阳性14例,PML-RARa融合基因阴性者1例,该患者经最后确诊为APL变异型,经诱导治疗后效果不佳。6例疑诊患者PML-RARa融合基因均为阴性,确诊为急性髓细胞白血病-M2。结论 FISH法检测PML-RARa融合基因敏感、可靠,对APL的确诊及指导治疗有重要价值。     

间期荧光原位杂交检测核心结合因子相关急性白血病的初步研究

目的应用间期荧光原位杂交技术(I-FISH)检测初诊急性白血病患者中核心结合因子(CBF)受累的染色体异常情况并对治疗后患者的微小残留病(MRD)进行监测,同时对I-FISH与常规染色体G显带的灵敏度进行比较。方法在骨髓形态学初筛的基础上,应用常规染色体G显带技术对15例急性髓系白血病(AML)进行核型分析,应用I-FISH对患者可能受累的CBF相关靶基因进行检测,其中7例患者治疗后进行了MRD监测。结果(1)正常对照组中,CYTOCELL公司提供的3种探针(AML1/ETO易位探针、MYH11基因断裂点双色探针和ETV6/AML1易位探针)的正常分界值分别为4.13%、1.95%和2.12%。(2)常规染色体G显带分析,15例患者中有6例伴有潜在累及CBF基因的染色体异常,其中8例AML-M2中5例伴t(8;21),2例AML-M4EO中1例伴inv(16),5例儿童B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)未检出相应的异常。I-FISH检测15例患者发现有12例累及CBF基因,其中8例AML-M2患者均为AML1/ETO融合基因(+),2例AML-M4EO病人CBFβ/MYH11融合基因均为(+),5例儿童B-ALL中2例ETV6/AML融合基因(+)。(3)3例AML-M2患者中2例MRD阳性;2例M4E0患者治疗后MRD监测结果均阴性;2例B-ALL患者1例阴性,1例阳性。结论I-FISH较常规染色体G显带技术能够更灵敏地检测出累及CBF的急性白血病,在初诊时联合应用这两种     

Chromosomal changes detected by fluorescence in situ hybridization in patients with acute lymphoblastic leukemia

Objectives To investigate patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL) for TEL/AML1 fusion,BCR/ABL fusion, MLL gene rearrangements, and numerical changes of chromosomes 4, 10, 17 and 21 by fluorescence in situ hybridization (FISH) and to determine the relationship and the significance of those findings.Methods Fifty-one American patients (34 men and 17 women) were included in this study. Of them there were 41 patients with pro-B cell type ALL, 9 with B cell type ALL and 1 with T cell type ALL.Chromosome metaphases of each sample were prepared according to standard protocols.Fluorescence in situ hybridization was performed using commercially available DNA probes, including whole chromosome painting probes, locus specific probes, specific chromosome centromere probes and dual color/multiple color translocation fusion probes. The digital image analysis was carried out using Cytovision and Quips FISH programs.Results An overall incidence of chromosomal anomalies, including t (9; 22 ), MLL gene rearrangements, t (12;21), and numerical chromosomal anomalies of chromosomes 4, 10, 17 and 21 was found in 33 patients (65%). Thirty-one of them were pediatric patients and two adults. The t(12;21) was the commonest chromosomal anomaly detected in this population; 14 out of the 45pediatric patients (31%) were positive for TEL/AML1 fusion, among which three had an additionalderivative 21[t (12;21) ], four had a deletion of 12p and two had an extra copy of chromosome 21.All 14 patients with positive TEL/AML1 fusion had ALL pre-B cell or B-cell lineage according to standard immunotyping. The percentage of cells with fusion signals ranged from 20% to 80%. All fourteen patients positive for TEL/AML1 gene fusion were mosaic. Three out of the 14 patients positive for the TEL/AML1 gene fusion were originally reported to be culture failures and none of the remaining eleven samples had been found to have chromosome 12 abnormalities by conventional cytogenetic techniques. All pediatric patients with pre-T or T cell lineage and the six adults were negative for TEL/AML1 fusion. One patient had double Philadelphia chromosomes, three had a rearranaement or a deletion of the MLL aene. one had t (4;11)and two had a deletion of the MLL One of the patients with an MLL deletion also had a large ring of chromosome 21, and r (21) was caused by AML1 gene tandemly duplicated at least five times. The second case with the MLL deletion was also unique, the patient had a t (12;21) as well. A total of 20 patients had numerical changes( gain or loss) of chromosomes 4, 10, 17 and 21. Eight patients were found to have trisomies of three or four different chromosomes. Interestingly, seven of these patients did not have TEL/AML1, BCR/ABL or the MLL aene rearranaement, one did have the TEL/AML1 aene fusion. Eleven patients with pro-B cell or B cell type ALL (9 children with ALL, 2 adults with ALL) had numerical changes of chromosome 21 (gain 1 or 2 chromosome 21 ), among them, 10 patients had no structural alteration of chromosome 21, and one was combined by t (12;21 ). Four patients had a monosomy of chromosome 17 and three out of these patients with monosomy 17 also had a fusion signal of TEL/AML1.     

CIK细胞对急性髓细胞白血病微小残留病作用的研究

目的:制备和观察CIK细胞对自体、异体原代急性髓细胞白血病(AML)细胞的杀伤作用和对G0期CD3+4白血病细胞的细胞毒作用,以及对正常骨髓造血干细胞的影响。方法:取AML化疗后及正常人外周血单个核细胞加入一系列细胞因子诱导培养CIK细胞,流式细胞仪检测CIK细胞表型,G带法分析CIK细胞核型。冻存、复苏后作为靶细胞,MTT法测定CIK细胞对自体、异体原代白血病细胞杀伤作用。AO染色法测定复苏后G0期AMLCD3+4细胞比例。流式细胞仪检测CIK细胞杀伤前后G0期CD3+4细胞比例变化。半固体培养法检测CIK细胞对正常骨髓CFU-GM、BFU-E集落形成的影响。结果:CIK细胞可从白血病患者外周血中获得,来源于正常淋巴细胞,对自体原代白血病细胞有明显杀伤作用,对G0期白血病细胞有明显抑制作用,对正常造血干细胞无杀伤作用。结论:CIK细胞可作为清除残留急性髓细胞白血病细胞的有效工具     

儿童急性T淋巴细胞白血病微小残留病检测的临床价值分析

目的分析儿童急性T淋巴细胞白血病微小残留病检测的临床价值。方法选取2010年11月～2012年1月在我院接受治疗的急性T淋巴细胞白血病患儿72例作为研究对象,在患儿治疗的不同时间点,对其实施多参数流式细胞术跟踪监测,对不同微小残留病水平患儿的临床特征和预后进行观察、分析。结果在对72例患儿进行随访1个月～7年,其中存活51例(70.83%)、发生事件20例(27.78%)、死亡1例(1.38%),死亡患儿是由于在诱导治疗期间骨髓抑制感染性休克所导致;疾病复发15例(20.83%);随着对患儿的治疗,在最终存活的51例患儿中,通过对其监测,发现其微小残留病水平一直低于检测下限,且无事件发生。随着疾病治疗的持续,患儿微小残留病阳性率逐渐升高;患儿微小残留病水平中位数呈先降低后升高的现象;其中强化治疗前微小残留病阳性例数明显高于诱导治疗33 d、巩固治疗前和再诱导治疗前,微小残留病水平中位数明显高于诱导治疗33 d、巩固治疗前,而微小残留病中位数明显低于诱导治疗33 d、巩固治疗前,差异有统计学意义(P0.05)。在完全缓解的62例患儿中,有6例患儿的水平≥10~(-2),5例复发、1例死于感染;有12例患儿的水平在(1～10)10~(-3)之间,5例复发、且1例患儿由于并发症而出现死亡;微小残留病水平在(1～10)10~(-4)之间的患儿23例,有1例患儿出现病情复发现象。部分缓解患儿共5例,但有2例出现病情复发;在5例未缓解的患儿中,均诱导失败。微小残留病水平10~(-4)组和微小残留病水平10~(-4)～10~(-3)组完全缓解例数明显高于微小残留病水平≥10~(-2)组和微小残留病水平10~(-3)～10~(-2)组,差异有统计学意义(P0.05)。结论对急性T淋巴细胞白血病患儿进行微小残留病水平检测,可以评估患儿的早期治疗情况,对调整治疗策略、病情预后评估具有重要作用。     

微小残留病变检测在急性高危白血病异基因造血干细胞移植中的意义

目的 分析急性白血病(AL)高危患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)前后微小残留病变(MRD)水平与移植后预后的关系.方法 采用以CD45/SS设门的4色或5色荧光标记多参数流式细胞术(MFC)动态检测90例高危AL患者allo-HSCT前第30天、移植后第30、60、100天和6、9、12个月的MRD水平,以0.1％为界,将患者分为MRD高水平组(≥0.1％)和低水平组(＜0.1％),其中高水平组根据移植后是否干预治疗分为两组,回顾性分析MRD水平与预后的关系.结果 移植前MRD水平与移植后预后无明显关系,移植后第60、100天MRD高水平组患者移植后复发率明显高于低水平组.移植后第100天,MRD高水平干预组、MRD高水平未干预组、MRD低水平组1年无复发生存率(RFS)分别为100％、60.87％和91.30％,3年RFS分别为85.71％、44.72％和68.48％,组间差异均有统计学意义(均P＜0.05).复发患者首次检出MRD高水平的时间比临床诊断复发提前了2.5(1.0 ～26.0)个月.移植后第100天,30例MRD高水平组患者中,7例患者及时接受干预治疗后均未复发,而另外23例未接受干预治疗的患者中11例出现复发(P＜0.05).结论 多参数流式细胞术动态监测高危AL患者移植后MRD可以有效评估其临床预后,并可根据移植后第100天MRD进行危险分层,MRD≥0.1％的患者预后较差,及时进行有效的干预可以明显降低其复发率,增加长期生存率.     

FISH检测乳腺癌组织HER-2原癌基因50例分析

目的:探讨荧光免疫原位杂交法(FISH)检查乳腺癌HER-2基因扩增在临床中的应用价值。方法:选取50例乳腺癌手术患者,免疫组化染色方法检查乳腺癌组织中HER-2蛋白表达,FISH检查HER-2基因扩增情况,比较二者之间差异。结果:50例乳腺癌中免疫组化方法检测HER-2蛋白表达,者7例,者21例,+者17例;FISH检查50例中有8例出现HER-2基因扩增,42例无扩增。两种检测方法检测阳性结果有显著性差异(P<0.01)。结论:免疫组化检测可做为HER-2表达状态的初筛,对于初筛阳性患者有必要进行FISH检测,有助于指导临床应用赫赛汀(Herceptin)的治疗及对患者预后的判断。     

用荧光原位杂交技术研究慢性粒细胞性白血病变异Ph染色体易位的形成

目的：研究慢性粒细胞性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ,ＣＭＬ）变异Ｐｈ 染色体的形成。方法：应用荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）技术,以９ 号、１５ 号、２２ 号整条染色体ＤＮＡ探针和Ｍｂｃｒ／ａｂｌ 易位探针检测７ 例具有变异Ｐｈ 染色体的ＣＭＬ病人骨髓中期分裂相及间期细胞。结果：所有变异Ｐｈ 染色体易位至少涉及３ 条染色体,并由标准Ｐｈ 染色体易位ｔ（９ ;２２）（ｑ３４ ;ｑ１１） 衍生而来。结论：ＦＩＳＨ 技术比传统细胞遗传学方法更敏感,能准确分析变异Ｐｈ 染色体及其形成过程。     

双色双融合荧光原位杂交检测成人急性白血病PML/RARα、MLL、AML1/ETO基因重排

目的探讨双色双融合荧光原位杂交技术（DC-DF-FISH）在成人急性白血病（Acute Leukemia,AL）中的应用价值。方法应用DC-DF-FISH检测我院26例AL患者相应的AML1/ETO、MLL、PML/RARa融合基因,并与常规R-显带技术进行比较。结果 26例AL患者中,R-显带发现4例存在标记染色体,检出率15.4%（4/26）,17例为正常核型和其他异常核型,未检出包含11q23染色体异常,DC-DF-FISH检测发现8例特异目的基因为阳性,包括R-显带检测出的4例,检出阳性率30.8%（8/26）。结论双色双融合荧光原位杂交技术是检测成人急性白血病PML/RARα、MLL、AML1/ETO基因重排的可靠方法,适用于AL的诊断、疗效判定及微小残留病灶的检测。