高氧暴露对早产儿血单个核细胞血红素加氧酶-1蛋白表达水平及活性的影响

目的观察高氧暴露早产儿血单个核细胞血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白表达水平及活性变化。方法选择2008年2月至2009年8月本科住院吸入高浓度氧的40例早产儿（高氧组）和吸入常压空气的40例早产儿（对照组）,用Western Blot法检测血中单个核细胞HO-1蛋白表达水平、血清胆红素水平和血浆一氧化碳血红蛋白（COHb）百分比,并进行比较分析。结果与对照组相比,高氧组HO-1蛋白表达明显增加[（1.78±0.25）比（1.12±0.31）,P〈0.01],胆红素生成量（nmol.mg-1.h-1）及血浆COHb含量（μmol/L）均显著增加[（76.25±11.33）比（53.47±8.73）,（6.73±0.42）比（2.47±0.34）,P均〈0.01]。结论高氧暴露可上调早产儿血单个核细胞HO-1的表达及活性。     

高体积分数氧暴露早产儿外周血单个核细胞血红素加氧酶-1表达水平及其活性的变化

目的 观察高体积分数氧(高氧)暴露早产儿血单个核细胞(PBMC)血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白及 mRNA的表达水平和活性变化.方法 分别用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、Western blot方法 对60例吸入高氧的早产儿(高氧组)血中PBMC中HO-1 mRNA及蛋白表达水平进行检测,并测定血清胆红素水平代表HO-1活性及血浆一氧化碳血红蛋白(COHb)百分比,并与吸入常压空气的早产儿60例对照进行比较.结果 与空气组相比,高氧组早产儿PBMC中HO-1 mRNA及蛋白表达明显增加[(0.64±0.05) vs (0.13±0.03),(1.78±0.25) vs (1.12±0.31),Pa<0.01)],血清胆红素生成量及血浆COHb水平也显著升高[(76.25±11.33) nmol·L-1·h-1 vs (53.47±8.73) nmol·L-1·h-1,(6.73±0.42) μmol·L-1 vs (2.47±0.34) μmol·L-1,Pa<0.01].结论 高氧暴露可上调早产儿血PBMC中HO-1 mRNA及蛋白质表达水平,推测HO-1可能参与早产儿高氧肺损伤.     

高体积分数氧暴露早产大鼠肺组织血红素加氧酶-1的表达及活性变化

目的 观察血红素加氧酶-1(HO-1)在高体积分数氧(高氧)暴露早产大鼠肺组织中的表达及活性变化,探讨HO-1在早产大鼠高氧肺损伤中的作用.方法 将3日龄早产SD大鼠28只随机分为高氧组、空气组(每组14只),于实验第3、7天分别用半定量反转录-聚合酶链反应法和免疫组织化学法检测各组早产大鼠肺组织HO-1 mRNA表达水平和HO-1蛋白在肺组织的分布和表达水平,并测定HO-1的活性.采用SPSS 12.0软件进行统计学分析.结果 实验第3天,空气组早产大鼠肺组织HO-1 mRNA(0.17±0.08)、HO-1蛋白(7.23±4.63)均有微弱表达,HO-1活性为(4.32±1.57)nmol/(mg·h);高氧组早产大鼠肺组织HO-1mRNA(0.72±0.33)表达明显高于空气组(Pa<0.01),HO-1蛋白(18.54±6.55)仅在臣噬细胞表达弱阳性,HO-1活性明显增加(6.14±1.62)nmol/(mg·h),二者均明显高于空气组(Pa<0.05).实验第7天,各组早产大鼠肺组织HO-1 mRNA均未见表达,高氧组早产大鼠肺组织HO-1蛋白表达及活性均显著高于空气组[(51.24±18.32)vs(4.11±1.82),(32.38±5.46)nmol/(mg·h)vs(5.75±1.87)nmol/(mg·h) Pa<0.01].结论 HO-1可能参与了早产大鼠高氧肺损伤的过程.     

银杏叶制剂对高氧暴露早产鼠肺组织血红素加氧酶-1表达的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及银杏叶制剂(舒血宁)对HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达的影响,为舒血宁防治早产儿高氧肺损伤提供理论依据.方法 3日龄早产鼠随机分为高氧组、空气组和高氧 舒血宁组3组,于实验3 d及7 d时,分别用半定量反转录-聚合酶链反应法和免疫组织化学法检测各组早产鼠肺组织HO-1 mRNA的表达水平争HO-1蛋白质表达水平.结果 实验第3天,空气组HO-1 mRNA、HO-1蛋白均有微弱表达;与空气组相比,高氧组HO-1 mRNA表达明显高于空气组(P<0.01),HO-1蛋白仅在巨噬细胞表达弱阳性(P<0.05);与高氧组相比,舒血宁 高氧组HO-1 mRNA的表达明显下降(P<0.01),但仍然高于空气组(P<0.05),HO-1蛋白弱阳性表达(P>0.05).实验第7天,各组HO-1 mRNA均未见表达.空气组HO-1蛋白极微弱或无表达,高氧组HO-1蛋白在巨噬细胞呈强阳性表达,明显高于空气组(P<0.01);舒血宁 高氧组HO-1蛋白的表达较高氧组明显下降(P<0.01),但仍然高于空气组(P<0.01).结论 HO-1可能参与了早产鼠高氧肺损伤,舒血宁能够下调高氧暴露早产鼠肺组织中HO-1的表达水平.     

高氧对新生大鼠肺血管发育及肺组织血管生成素1表达的影响

目的 观察持续吸入85％氧气对新生大鼠肺血管发育和肺组织血管生成素1(Ang-1)表达的影响,探讨高氧肺损伤新生大鼠的肺血管发育情况及可能的发生机制.方法 将96只新生SD大鼠在生后6h内,随机分为高氧组和空气组,高氧组将大鼠置于自制密闭氧箱,FiO2=0.85.在实验3、7、14d每组各随机取16只处死,采集标本.采用HE染色进行肺组织形态学分析,放射状肺泡计数评价肺泡化程度,肺动脉钡剂造影及肺动脉密度检测评价肺血管的发育,免疫组织化学法检测肺组织Ang-1的表达,荧光定量PCR和Western blot技术检测肺组织Ang-1的mRNA和蛋白表达水平.结果 (1)新生大鼠高氧暴露14 d,肺组织的病理表现与早产儿支气管肺发育不良(BPD)的病理表现相似.(2)高氧组7 d RAC值显著低于空气组[(10.55±0.13):(11.74 ±0.19),P＜0.05],在14d时差异更显著[(12.47±0.05):( 15.03±0.16),P＜0.01].(3)肺动脉钡剂造影显示,高氧组14 d大鼠肺动脉主干变细,肺小动脉显影减少,肺动脉密度显著低于空气组[(3.55±0.09):(6.03±0.16),P＜0.05].(4)免疫组化染色显示,高氧组7d和14 d,肺组织Ang-1的表达均显著低于同时间点空气组[ (4.27±0.34):(3.10 ±0.29),P＜0.05,(5.65±0.49)∶(3.21±0.28),P＜0.01].(5)荧光定量PCR及Western blot结果显示,高氧组7d和14 d,Ang-1的mRNA水平显著低于空气组[(0.85±0.14)∶(0.44±0.21),P＜0.05,(0.87±0.24)∶(0.24±0.05),P＜0.01],Ang-1的蛋白水平也显著低于空气组[(0.88±0.31)∶(0.41 ±0.12),P＜0.05,(0.90 ±0.29):(0.21 ±0.06),P＜0.01].结论 持续吸入高浓度氧导致新生大鼠的肺血管发育障碍,Ang-1的表达下调可能参与了早产儿BPD血管发育受阻的发生机制.     

布地奈德对哮喘大鼠模型肺组织血红素氧合酶-1的调控作用

目的：研究大鼠哮喘模型肺组织血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白及基因表达特点,以及布地奈德(budesonide,BUD)对HO-1蛋白及基因表达的影响。方法：用卵清蛋白(OVA)致敏、激发大鼠建立哮喘动物模型,并在致敏、激发过程中分别经地塞米松(DXM) 、血晶素(Hemin)及BUD处理。分别测定激发后各组动物全血COHb 的百分比含量;计算肺泡灌洗液（BALF）沉渣中细胞总数和分类百分比;进行支气管周围炎性细胞浸润评分;利用免疫组化和RT-PCR检测方式观察HO-1在哮喘大鼠肺组织的蛋白及基因表达。结果：肺组织的病理改变及BALF细胞学检测显示Hemin (H)组、DXM (D)组和BUD (B)组炎性细胞浸润较哮喘(A)组有显著减轻(P<0.01或P<0.05）。与对照(C)组相比,A、H、D和B组HO-1蛋白、基因表达以及碳氧血红蛋白(COHb)含量显著性升高(P<0.01);而与A组相比,H、D和B组HO-1蛋白及mRNA表达亦显著升高(P<0.01或P<0.05）;D组和H组COHb含量显著升高（P<0.05）。结论：哮喘大鼠的肺组织HO-1表达水平及活性显著增加,提示HO-1可能参与了哮喘的发病过程;HO-1对大鼠哮喘模型气道炎症有保护作用;BUD和DXM对大鼠哮喘模型气道炎症有保护作用,可能通过上调肺组织HO-1表达实现。     

内源性一氧化碳在哮喘中的变化与机制

目的　 探讨内源性一氧化碳 (CO)在哮喘中的变化及其调节机制。 方法 　 5 0只豚鼠随机分成 5组 ,建立哮喘豚鼠模型 ,其中 3组分别使用地米松、血红素氧合酶 1(HO- 1 )特异性激动剂血晶素和抑制剂锡原卟啉 ,余为哮喘组和正常对照组。用分光光度法检测血一氧化碳血红蛋白 (COHb)含量和肺组织HO- 1 活性 ,免疫组化染色观察肺组织HO- 1 蛋白表达等。 结果 　哮喘组全血COHb为 4 94± 2 15 % ;肺HO- 1 活性为 881± 36 1pmol/(mg .protein·h) ,分别较正常组有显著性差异 (t=4 5 8～ 10 19,P <0 0 1) ,肺HO- 1 蛋白增加。血晶素激动组较哮喘组略高 (P >0 0 5 )。锡原卟啉抑制和地塞米松预防组较哮喘组明显降低 (t =4 43～ 8 83,P <0 0 1)。血COHb与肺组织HO- 1 活性水平呈正相关 (r =0 90 ,P <0 0 0 1)。 结论 　哮喘时体内HO- 1 蛋白和活性增加 ,导致内源性CO水平升高     

高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织尿激酶型纤溶酶原激活因子和纤溶酶原激活物抑制因子1表达的动态改变及意义

目的 慢性肺疾病(Chronic lung disease,CLD)的特征性病理改变是肺发育受阻和肺问质纤维化,因此胶原等细胞外基质(extracellular matrix,ECM)重塑在肺纤维化形成中的作用已成为当今的研究热点.纤溶系统也是调节ECM降解和基质金属蛋白酶(MMPs)活性的重要因素.这里我们制备了吸入高浓度氧(高氧)致新生大鼠CLD的模型,探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子(urokinase-plasminogen activator,u-PA)和纤溶酶原激活物抑制因子(plasminogen activator inhibitor-1.PAI-1)在新生大鼠CLD中的动态变化和意义.方法 足月新牛大鼠生后12h内,分别于0.90～0.95氧和卒气中持续暴露,于1、3、7,14、21 d光镜下观察不同时间点的病理改变,应用Western Blotting和RT-PCR的方法分别检测肺组织u-PA、PAI-1蛋白及mRNA表达的动态改变.结果 (1)病理改变:3d时高氧组可见炎件反应;7d时肺发育障碍,间隔增宽,胶原纤维沉积.(2)u-PA表达:高氧暴露3d时,蛋白表达较对照组明显升高(115.52±7.10 vs 96.51±6.33),P<0.01;高氧组在7～21 d(97.66±7.98,99.91±7.60,103.23±6.24)与对照组比较(112.43±6.01,123.25±8.35,103.23±6.24)降低,P值分别为<0.05,<0.01,<0.01.mRNA表达在高氧暴露3d时较对照组明显升高(1.18±0.07 vs 0.99±0.05),P<0.01,7 d至21 d(1.01±0.06,1.10±0.12,1.27±0.06)与对照组比较(1.15±0.08,1.51±0.32,1.60±0.24)降低,P均<0.01.(3)PAI-1表达:高氧暴露后7～21 d,蛋白表达(147.83±12.27,149.07±11.17,161.42±13.08)明显高于同期对照组(116.18±10.67,113.73±15.58,126.60±8.59),P值分别<0.01,<0.05,<0.O1;mRNA表达在7～21 d(1.49±0.28,1.46±0.31,1.51±0.33)也高于同期对照组(0.94±0.01,0.94±0.03,0.98±0.03),P<0.05,<0.01和<0.05.结论 新生大鼠高氧暴露早期,肺组织u-PA/PAI-lmRNA及蛋白表达增强,纤溶和降解活性增强;高氧暴露中晚期,u-PA/PAI-lmRNA及蛋白表达降低,纤溶和降解活性降低,与肺纤维沉积平行,提示u-PA/PAI-1失衡参与了高氧致CLD的纤维化形成过程.     

地塞米松对哮喘大鼠肺组织血红素氧合酶-1的调控

目的(1)研究哮喘大鼠肺组织中血红素氧合酶-1(HO-1)的表达情况;(2)观察哮喘大鼠肺组织中HO-1表达与支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)占细胞总数的百分比(EOS%)、肺组织中EOS、全血一氧化碳血红蛋白(COHb)的百分比含量之间的相关性;(3)研究地塞米松对HO-1的调控作用。方法清洁级雄性SD大鼠30只,随机分为3组,每组10只:正常对照组(N组);哮喘组(A组);地塞米松治疗组(D组)。测定全血COHb的百分比含量;计数BALF沉渣中细胞总数和分类;计数肺组织中浸润的炎性细胞数;免疫组织化学染色法观察HO-1在哮喘大鼠肺组织的表达。结果HO-1主要表达在气道上皮细胞,三组HO-1阳性表达的平均吸光度分别为(0.07±0.01)、(0.22±0.03)、(0.12±0.02)。A组HO-1表达水平显著高于N组(P<0.001),D组HO-1蛋白的表达显著低于A组(P<0.01)。HO-1表达水平与全血COHb的百分比含量、BALF中EOS占细胞总数的百分比及肺组织中EOS总数均呈显著正相关(分别为r=0.916,P<0.01;r=0.874,P<0.01;r=0.895,P<0.01)。结论哮喘大鼠的肺组织HO-1表达水平显著增加,提示HO-1可能参与了哮喘的发病过程。地塞米松明显改善哮喘的气道炎症浸润,其作用机制部分是通过抑制HO-1起作用。     

转录因子T-bet、GATA-3在过敏性紫癜患儿发病机制中的作用

目的 探讨转录因子T-bet和GATA-3在过敏性紫癜(HSP)患儿发病机制中的作用.方法 本院儿科2009年2月-2010年2月收治急性期HSP患儿46例(HSP组)以及健康对照儿童30例(健康对照组).采用SYBR Green I实时荧光定量PCR方法检测其外周血单个核细胞T-bet mRNA、GATA-3 mRNA的表达.应用Luminex-100液相芯片技术检测其血浆细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ水平.结果 HSP组患儿外周血单个核细胞T-bet mRNA相对表达水平(53.98±35.79)低于健康对照组(181.56±96.90)(P＜0.001).GATA-3 mRNA相对表达水平(964.30±655.18)高于健康对照组(78.09±57.20)(P ＜0.001).HSP组血浆细胞因子IL-2[( 16.54±7.38) ng?L-1],IFN-γ[(11.31±8.02) ng?L-1]的表达显著低于健康对照组[(35.73±22.66) ng?L-1,(30.67±21.29) ng?L-1](P＜0.001,0.05),IL-4[(74.66±26.15) ng.L-1]的表达高于健康对照组[(51.81±27.76) ng?L-1].IFN-γ水平与T-bet mRNA表达呈正相关(r=0.882,P＜0.01);IL4水平与GATA-3 mRNA的表达呈正相关(r=0.886,P＜0.01).结论 HSP患儿急性期存在Th1/Th2失衡,主要表现为Th2优势活化,该失衡与其特异性转录因子T-bet mRNA表达降低、GATA-3 mRNA 表达增高有关,本研究为阐明Th1/Th2失衡的分子机制之一提供了实验依据.     

Effect of the adaptation of the food of the hospitalized child on the cover of the nutritional needs]

AIMS: Denutrition remains a major concern in hospitalized children. Daily experience suggests that the meals proposed by hospital dietetic service, although well-balanced and in accordance with the recommendations, may be poorly accepted and consumed by children. The aims of this study were to assess the effect of modification of foods offer on energy intakes as well as nutriments and minerals and trace elements in hospitalized children. PATIENTS AND METHODS: During a 1-month period, 25 consecutive children (range 4-17 years; 13 girls), hospitalized in our pediatric department were included in the study (reasons for hospitalisation comprised: medical reasons [n=7], orthopedic problem [n=16] or surgery [n=2]). They had no restricted diet and received the usual pediatric hospital feeding according to the French recommended dietary allowances (RDA) (D1). They were compared to 21 children--matched for age, sex, nutritional status and pathology, hospitalized during the following 1-month period--who received a modified diet (D2), elaborated by dieticians according to the child's preference and excluded or limited food usually nonconsumed by the children. Food consumption was prospectively measured for 24h by analysis of the nonconsumed foods, as well as browsing and extra food brought by the family. Analysis of energy, carbohydrate, lipid, protein, iron and calcium intake was made using Bilnut 3 software (Nutrisoft, France). RESULTS: D2 covered 119+/-37% of the median energy needs versus 89+/-37% for D1 (p<0.05). The median energy needs were more often reached with D2 as compared to D1 (62% versus 32%, p<0.05). Protein intake was high in both groups, more importantly with D2 (266+/-111% of RDA versus 193+/-77% with D1, p<0.05). We observed no difference between the 2 diets in regards of fat/carbohydrate balance and iron intake. Calcium intake was increased with the adapted diet: 68+/-26% of RDA with D2 versus 49+/-26% with D1 (p<0.01). CONCLUSION: Adapting food offers to preference influences food and caloric intakes in hospitalized children. This could be an efficient strategy to prevent acute undernutrition in hospital.     

关节内侧间隙测量对髋关节脱位术后稳定性的预测

目的探讨关节内侧间隙测量对髋关节脱位术后稳定性的预测意义。方法分析2004～2007年本院10例髋关节再脱位患儿以及随机抽取的50例术后未发生再脱位患儿的影像学资料,对其术后1d、1周、1．5个月、3个月、4个月、5个月、6个月骨盆平片进行患侧髋关节内侧间隙值OA以及泪滴至髋臼外缘的距离OA的测量,并采用D值（D=OA／OA）进行标准化处理。结果无再脱位组D值基本小于0．8。其中30例采用髋关节外展支具,未出现再脱位,D值位于0．66～0．8之间;脱位组在石膏同定期间,D值基本小于0．7,此时股骨头位于髋臼内,未出现脱位;术后6周至3个月拆除石膏后,D值为0．66．0．8,未采取措施,相继出现脱位,此时D值基本大于0．8。结论测量关节内侧间隙对于评价髋关节脱位术后关节的稳定性以及预测早期再脱位有重要意义。D值小于0．66,关节稳定,不会出现再脱位;D值为0．66～0．8,关节稳定性受到影响,可能出现再脱位,需尽早采取干预措施;D值大于0．8,出现再脱位,简单保守治疗措旆失去作用．需再次手术蚕新复位。