不同抗凝剂对肝移植受者FK506血药浓度测定的影响及临床意义

目的探讨不同抗凝剂对肝移植受者他克莫司(FK506)血药浓度测定的影响及临床意义。方法采集肝移植受者静脉全血34份,使用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)、枸橼酸钠和肝素锂抗凝剂分别抗凝同一份血样本,在IMx型免疫分析仪上用微粒子酶免疫分析法(MEIA)测定FK506血药浓度。结果肝素锂组与EDTA组差异无统计学意义(P=0.660),呈正相关(r=0.982 8)。枸橼酸钠组与EDTA组差异有统计学意义(P=0.000),呈正相关(r=0.961 3)。枸橼酸钠组与肝素锂组差异有统计学意义(P=0.000),呈正相关(r=0.939 8)。结论肝素锂组与EDTA组几乎无偏差,但是枸橼酸钠组分别与EDTA组和肝素锂组存在一定程度的负偏差。枸橼酸钠对MEIA测定FK506血药浓度有一定的影响,应优先考虑EDTA或肝素锂抗凝剂采集全血样本。     

纠正EDTA-K2抗凝剂致假性血小板减少方法的探讨

目的探讨纠正EDTA-K2抗凝剂致假性血小板减少的方法。方法用Sysmex XE-2100型全自动血液分析仪检测20例健康体检者不同时间3种抗凝血血小板数值及11例EDTA依赖性假性血小板减少症（EDTA-PTCP）患者不同抗凝血在15min血小板数值,同时作手工血小板计数。结果 15~30min内健康体检者EDTA-K2抗凝血血小板数值与手工血小板计数值相比差异无统计学意义（P〉0.05）,不同时间的枸橼酸钠和肝素锂抗凝血血小板数值与手工血小板计数值相比差异有统计学意义（P〈0.05）。EDTA-PTCP患者枸橼酸钠和肝素锂抗凝血在15min内测定的血小板数值与手工血小板计数值相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论枸橼酸钠和肝素锂抗凝剂不可替代EDTA-K2抗凝剂用于全自动血液分析仪血小板的检测,手工血小板计数是目前最为理想的纠正EDTA-K2抗凝剂致假性血小板减少的方法。     

酶增强免疫分析法与微粒子酶联免疫吸附法检测他克莫司药物浓度的结果对比研究

目的对酶增强免疫分析法（EMIT）与微粒子酶联免疫吸附法（MEIA）进行比对实验,评估SYVAViva-E临床化学分析仪（简称SYVA Viva-E）和Abbott IMX分析仪（简称Abbott IMX）2种检测系统测定他克莫司（FK506）药物浓度的一致性。方法将Tac/Csa CONTROL质控品分别用SYVA Viva-E（EMIT）和Abbott IMX（MEIA）进行批内、批间精密度测定。FK506的靶值（检测范围）：A1水平为4.3（2.1～6.5）ng/mL、A2水平为8.9（5.3～12.5）ng/mL、A3水平为18.0（14.0～22.0）ng/mL。将158份临床患者样本分为极低浓度（0.1～〈2.0 ng/mL）、低浓度（2.0～〈8.0 ng/mL）、中浓度（8.0～〈14.0 ng/mL）、高浓度（14.0～〈20.0 ng/mL）和极高浓度（20.0～24.0 ng/mL）5个组,用SYVA Viva-E和Abbott IMX平行测定FK506浓度,观察2种检测系统测定临床样本的相关性。结果当FK506浓度处于A1水平时,SYVA Viva-E的批内、批间精密度及检测结果均值均高于Abbott IMX（P〈0.05）;处于A2、A3水平时,2种检测系统批内、批间精密度及检测结果均值相近,差异无统计学意义（P〉0.05）。Abbott IMX的检测精密度优于SYVA Viva-E。当临床样本浓度〈8.0 ng/mL时,SYVAViva-E检测结果的均值比Abbott IMX约高1.0 ng/mL,二者比较差异有统计学意义（P〈0.01）,与测定质控品的结果一致;当样本浓度≥8.0 ng/mL时,SYVA Viva-E检测结果的均值与Abbott IMX相近,二者比较差异无统计学意义（P〉0.05）。2种检测系统测定临床样本的总体相关性较好（r=0.977）,但SYVA Viva-E检测结果均略高于Abbott IMX。结论应用EMIT检测FK506时,其检测结果略高于MEIA,尤其在低浓度范围更加明显。2种检测系统在检测FK506浓度时可能存在系统偏差。     

HPLC-MS/MS法在骨髓移植患者他克莫司血药浓度测定中的应用

目的建立测定骨髓移植患者全血他克莫司(FK506)血药浓度的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法,探索HPLC-MS/MS法与羧基金属免疫分析(CMIA)法和化学发光微粒免疫(Elecsys)法在FK506血药浓度检测中的关系,为临床合理选用FK506血药浓度监测方法提供可靠依据。方法采用子囊霉素作内标,全血样品经合内标甲醇沉淀蛋白处理。色谱柱为Ultimate XB-C_(18),柱温65℃,流动相为含0.1 g/dl甲酸和2 mmol/IL乙酸铵的水和含0.1ml/dl甲酸的甲醇,梯度洗脱。质谱检测方式为电喷雾离子阱正离子模式,MRM扫描,监测FK506 m/z 821.5~768.5,子囊霉素m/z809.4~756.4。选取部分骨髓移植患者全血FK506样本,分别用HPLC-MS/MS法,CMIA法和Elecsys法进行检测,对各种检测方法所检测的FK506浓度值进行比较。结果建立的HPLC-MS/MS法检测FK506血药浓度在0.5~50 ng/ml范围内线性关系良好,Y=0.228X-0.003 08(r=0.999 0)。HPLC-MS/MS法与CMIA法和Elecsys法检测FK506血药浓度结果相关性较好,差异无统计学意义。结论建立了检测FK506血药浓度的HPLC-MS/MS法,该法可用于临床骨髓移植患者全血FK506浓度的监测。     

6项临床化学指标适用血浆样本类型的研究

目的 研究不饱和铁结合力（UIBC）、β-羟丁酸（β-HB）、肌红蛋白（MYO）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、铁（Fe）和磷（P）试剂盒可接受的血浆样本类型.方法 使用血清、肝素血浆和EDTA血浆采血管,收集研究对象静脉血样本.样本离心处理后,在BS-800全自动生化分析仪上,分别检测血清和血浆样本中UIBC,β HB,MYO,ALT,Fe和P的水平,并对血清和血浆样本结果进行统计学分析.结果 血清样本组UIBC,β HB,MYO测定结果（34.4±9.8 μmol/L,0.41±0.92mmol/L和48.0±21.6 ng/ml）与肝素血浆样本组（34.6±10.2 μmol/L,0.41±0.92 mmol/L和46.7±20.1 ng/ml）比较差异无统计学意义（t=0.77, 0.88和1.33,P均＞0.05）,血清样本组MYO测定结果（113.2±118.0 ng/ml）和EDTA血浆样本组（113.0±116.3 ng/ml）比较差异无统计学意义（t=0.25,P＞0.05）.血清样本组ALT,Fe和P测定结果（76.9±155.7 U/L,17.7±16.3 μmol/L和1.14±0.15 mmol/L）与肝素血浆样本组（76.3±155.8 U/L,17.9±16.3 μmol/L和1.11±0.15 mmol/L）比较差异有统计学意义（t=2.99,-2.25和5.61,P均＜0.05）,血清样本组P测定结果（1.14±0.15mmol/L）和EDTA血浆样本组（1.09±0.14 mmol/L）比较差异有统计学意义（t=13.46,P＜0.05）.但血清和肝素血浆ALT,Fe和P测定结果,及血清和EDTA血浆P测定结果均呈正相关（相关系数分别为0.999 9,0.999 0,0.987 5和0.9936,P均＜0.01）,在医学决定水平处的偏差（4.2％-3.2％）均小于允许误差的50％.结论 肝素血浆样本类型适用于UIBC,β HB,MYO,ALT,Fe和P试剂盒的测定,EDTA血浆样本类型适用于MYO和P的测定.     

CYP3A5基因型与肾移植患者他克莫司血药浓度关系的系统评价

目的 系统评价CYP3A5基因型与肾移植术后他克莫司（FK506）血药浓度的关系。方法 计算机检索PubMed（1966.1～2013.7）、Sciverse（1823.1～2013.7）、The Cochrane Library（2013年第7期）、CNKI（1994.1～2013.7）、VIP（1989.1-2013.7）、CBM（1978.1～2013.7）及WanFang Data（1995.1～2013.7）,查找关于CYP3A5基因型与肾移植术后他克莫司（FK506）血药浓度/剂量关系的文献。根据纳入与排除标准筛选文献、提取资料和评价质量后,采用RevMan 5.2软件进行Meta分析。结果 共纳入12篇文献,包含956例对象。Meta分析结果显示：在肾移植术后7天［MD=54.61,95%CI（–67.67,–41.54）,P〈0.000 01］、1个月［MD= –74.84,95%CI（–83.39,–66.29）,P〈0.000 01］、3个月［MD= –96.09,95%CI（–107.55,–84.64）,P〈0.000 01］、6个月［MD= –107.30,95%CI（–125.65,–88.95）,P〈0.000 01］和1年［MD= –78.32,95%CI（–123.02,–33.61）,P=0.000 6］,携带CYP3A5 ＊3/＊3基因型患者的FK506 血药浓度/剂量值明显较携带其他基因型患者高;而携带＊1/＊1患者的FK506 血药浓度/剂量值较低。结论 肾移植术后FK506血药浓度/剂量值与CYP3A5基因型相关。因此在肾移植术后应用FK506作为免疫抑制治疗时,有必要对患者进行CYP3A5基因型检测,以指导临床治疗。     

他可莫司血药浓度的动态监测及其临床意义

目的 :为临床胰 -肾移植患者他可莫司 (FK5 0 6 )的合理使用提供参考。方法 :采用单抗微珠酶联免疫吸附试验 (MEIA)法对胰 -肾联合移植的患者术后全血FK5 0 6浓度进行动态监测 ,并对其结果进行分析。结果 :药量与血药浓度二者呈正相关 ,但相关关系不密切 (Y^ =2 .35 +1.0x^ ,r =0 .4 2 75 ,P <0 .0 5 )。结论 :胰 肾移植术后应常规性的监测FK5 0 6血药浓度 ,随时调整其合理用量。     

应用尿微量蛋白检测评价钙调磷酸酶抑制剂类抗排异药物对肝移植受者的肾毒性损伤

目的用尿微量蛋白检测评价肝移植受者使用钙调磷酸酶抑制剂(CNI)类抗排异药物他克莫司(FK506)及环孢素A(CsA)治疗后对肾脏毒性损伤程度的差异。方法用免疫散射比浊法检测138例使用FK506、CsA的肝移植受者和30例健康对照者尿β2-微球蛋白(β2-MG)、α1-微球蛋白(α1-MG)、微量白蛋白(mAlb)、转铁蛋白(TF)和IgG浓度;用酶放大免疫分析法(EMIT)检测所有肝移植受者FK506、CsA的血药浓度,分析FK506组和CsA组尿微量蛋白的结果,比较2组间肾毒性损伤的特点。结果除CsA治疗组β2-MG与健康对照组比较无差异外,其他项目2组结果均显著高于健康对照组(P<0.05)。FK506治疗组5项结果均显著高于CsA治疗组(P<0.05)。2组的肾脏损害都以单纯肾小管损害和混合性损害为主(P<0.025)。术后0~1年和1~3年受者FK506组5项尿微量蛋白结果均显著高于CsA组(P<0.05)。肾小球蛋白尿、肾小管蛋白尿和混合蛋白尿在不同用药组之间无差异(P>0.05)。但总异常率FK506组显著高于CsA组(P<0.05)。结论CNI对肝移植受者有明显的肾毒性损伤,其药物毒性损害以肾小管损害和混合性损害为主;FK506对肝移植受者的肾毒性作用明显强于CsA;尿微量蛋白是评价CNI肾毒性损伤的敏感指标,可为临床观察提供早期客观依据。     

非遗传因素(年龄、性别)对肾移植患者他克莫司药物浓度影响的研究

目的 探讨肾移植患者接受他克莫司（FK506）治疗后药物浓度与年龄、性别的关系.方法 应用全自动化学发光免疫分析仪器测定不同年龄、性别的86例（804例次）患者在肾移植术后口服FK506后的血药浓度.结果 年龄＜45岁和≥45岁的女性患者术后第2个月时FK506的血药浓度分别为（9.68±1.21）和（10.55±0.77） μg·L-1;术后＞3个月时FK506的血药浓度分别为（5.13±1.54）和（5.19±1.57）μg· L-1.年龄＜45和≥45年龄男性患者术后第2个月时FK506的药物浓度分别为（10.03±2.13）和（11.17±3.92）μg· L-1;术后＞3个月时FK506的药物浓度分别为（4.94±1.75）和（5.03±1.83） μg· L-1.随着年龄增大,FK506的血药浓度也有所增高,但差异无统计学意义（均P＞0.05）;不同性别的患者对FK506的血药浓度均不产生影响.结论 肾移植术后男性及女性不同年龄各时间段的FK506全血浓度分析发现,随着年龄的增大,血药浓度亦有所增高;不同性别对FK506的血药浓度均不产生影响.     

抗凝剂对化学发光法测定心肌肌钙蛋白Ⅰ的影响

目的探讨抗凝剂对化学发光法测定心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)的影响.方法分别取EDTA、肝素抗凝血浆及血清标本在1MMULITEⅠ型化学发光分析仪上测定46例患者cTnI水平.结果与血清标本测定值比较,肝素抗凝血浆样本平均偏低4.6%,EDTA抗凝血浆样本平均偏低13.9%,但两种抗凝血样本与血清样本测定结果相关性良好,分别为r=0.99和r=0.96.结论抗凝剂对化学发光法测定cTnI有不同程度的影响,应选择适当的抗凝物,以保证测定值真实可靠.     

Osteocalcin concentrations in plasma prepared with different anticoagulants

We investigated the effects on plasma osteocalcin concentrations of different anticoagulants used to collect the blood samples. Plasma osteocalcin concentrations measured by enzyme immunoassay and radioimmunoassay are influenced by the nature of the anticoagulants used. The most significant difference between concentrations found in plasma and serum was seen with oxalate/fluoride anticoagulant, which reduced osteocalcin concentrations to 37.3% of serum values. This is probably related to increased hemolysis with this anticoagulant compared with osteocalcin concentrations in plasma prepared with other anticoagulants. Samples prepared with sodium citrate (0.105 mol/L) or lithium heparin gave values 92.4% and 83.6% of those obtained with matched serum samples. Osteocalcin concentrations were relatively stable in plasma and serum at -20 degrees C for two freeze/thaw cycles. In blood from 100 patients there was a good correlation between osteocalcin concentrations in serum and plasma (lithium heparin) (r2 = 0.831); the slope and intercept (+/- SE) were 0.924 +/- 0.04 and 4.92 +/- 1.25 micrograms/L, respectively. However, in 10 patients, serum osteocalcin concentrations were two- to threefold higher than those in matched plasma samples.     

Influence of anticoagulants on the measurement of S100B protein in blood

OBJECTIVE: Evaluate anticoagulants influence on blood S100B levels. DESIGN AND METHODS: Blood from 18 healthy adult subjects were collected using: no anticoagulants; EDTA; heparin; and citrate. S100B levels were determined using LIA-mat assay. RESULTS: Heparin and citrate increased S100B levels (p<0.001), whereas EDTA had no effect (p=0.24). Heparin samples were highly (r2=0.97, p<0.001), citrate samples were moderately (r2=0.49, p<0.001), and EDTA samples were not (r2=0.22, p=0.059) correlated with serum samples. CONCLUSION: When anticoagulant is required, heparin should be the primary choice.     

Serum cystatin C in renal transplant patients

BACKGROUND: Waiting temperature before centrifugation and anticoagulants used, markedly effect total homocysteine concentrations. The aim of this study was to investigate the effect of different anticoagulants and temperature on plasma homocysteine levels. METHODS: We studied total homocysteine concentrations in 23 healthy subjects. Blood was drawn in K(3)EDTA, sodium citrate- or sodium fluoride-containing tubes, and kept at 0 degrees C or 22 degrees C for 3 h. Total homocysteine measurements were performed with fluorescence polarization immunoassay (FPIA) method. We compared all results with baseline EDTA values (samples put on crushed ice and centrifuged immediately) recommended in literature for reference handling. RESULTS: At 22 degrees C, the tubes containing sodium citrate and sodium fluoride showed significantly higher total homocysteine concentrations than their respective baseline values (p=0.000). However, sodium fluoride tubes were not significantly different than baseline EDTA levels. Waiting 3 h at 0 degrees C did not effect sodium citrate and EDTA plasma total homocysteine concentrations when compared to baseline EDTA, but sodium fluoride-containing plasma levels were significantly decreased (p=0.000). CONCLUSIONS: According to our results, the most available and practical temperature and anticoagulant for total homocysteine determination is sodium fluoride at room temperature up to 3 h.     

肝移植后他克莫司血药浓度对外周血单个核细胞内HBV DNA的影响

背景：肝移植后他克莫司等免疫抑制剂的长期应用导致机体细胞免疫功能降低,并有可能影响机体对乙肝病毒的清除。目的：分析乙肝相关肝移植患者后不同浓度他克莫司对外周血单个核细胞中的HBVDNA含量的影响。方法：纳入乙肝相关终末期肝病肝移植受者23例,根据移植后12周清晨空腹他克莫司血药浓度,分为高浓度组（≥10μg/L）9例和低浓度组（〈10μg/L）14例,同时用荧光标记单克隆抗体结合流式细胞技术检测外周血T细胞亚群的百分比,用实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞内的HBVDNA。结果与结论：用多元线性回归分析外周血单个核细胞内的HBVDNA含量与CD8＋CD152＋呈正相关,与CD8＋CD28＋呈负相关。高血药浓度他克莫司的患者外周血单个核细胞内的HBVDNA高于低浓度组,其改变与反映细胞免疫功能的指标CD8＋CD152＋和CD8＋CD28＋的变化有关。     

脑血栓形成患者炎症指标（CRP、WBC、Nper、N）与血栓分子标记物（DD、ATⅢ、VWF）相关性研究

目的：探讨首次入院脑血栓形成患者于血栓发生前的炎症指标与血栓分子标记物之间的相关性。方法：选取2011年1月到2011年12月佛山市第二人民医院神经内科88名首次入院且入院后3天内发生脑血栓形成患者作为研究对象,血栓发生前抽血检测炎症指标C反应蛋白（CRP）、白细胞总数（WBC）、嗜中性粒细胞分类百分比（Nper）、嗜中性粒细胞计数（N）和血栓分子标记物D二聚体（DD）、抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）、VWF 因子（VWF）。同一时间同一患者用EDTA抗凝管和柠檬酸钠管按要求采取静脉血各2ml并立即测定各项指标,CRP用微量全血法测定,WBC、Nper和N用全自动血细胞分析仪法测定,DD、ATⅢ、VWF用贝克曼ACL TOP全自动凝血分析仪器检测。结果：（1）DD与CRP（r=0.237,p=0.027）有相关性,与WBC, Nper,N无相关性。（2）ATⅢ与CRP, WBC, Nper, N无相关性（3）VWF与CRP（r=0.487,p=0.008）, WBC（r=0.251,p=0.017）, Nper（r=0.239,p=0.025）, N（r=0.260,p=0.012）有相关性。结论：脑血栓形成患者炎症指标与血栓分子标记物之间存在一定的相关性,表明脑血栓形成患者于血栓发生前可能存在炎症与血栓形成间的因果联系。     

两种免疫法联合肾功能指标测定他克莫司血药浓度的比较

背景：不同免疫法测定的他克莫司血药浓度,对免疫抑制作用及毒性反应的预测能力是否有差异,在肾功能异常时是否能够更加敏感的反映患者血药浓度,是值得研究的问题。目的：联合肾功能指标,分析酶联免疫吸附技术和酶增强免疫技术测定他克莫司血药浓度的相关性。方法：收集133例应用他克莫司治疗的肾移植患者血样,分别用酶联免疫吸附技术、酶增强免疫技术测定血药浓度。分析两种方法测定的相同浓度范围内肾功能异常的发生率;分析不同浓度范围内,两种方法测定结果的相关性。结果与结论：在肾功能异常时,比较两种方法测定的浓度,酶联免疫吸附法测定结果均值较高,且波动较大。酶联免疫吸附法测定他克莫司血药浓度5-20μg/L范围内,肾功能异常发生率较酶增强免疫法少,分析显示两种方法测定结果总体差异无显著性意义（r=0.9045,P＞0.05）。以酶联免疫吸附法为标准,在他克莫司血药浓度＜2.0μg/L时,酶增强免疫法测定结果明显较高（P＜0.01）。在血药浓度为≥2.0μg/L时,两种方法测定结果差异无显著性意义（P＞0.05）。说明酶增强免疫法与酶联免疫吸附法相关性较好,均适合于临床常规测定他克莫司的血药浓度,建议结合肾功能指标,细化区分两种测定方法的参考范围。同时,在患者血药浓度极低（＜2.0μg/L）时,不建议采用酶增强免疫法。