缺氧诱导宫颈癌Hela细胞的生物学行为改变

[目的]研究缺氧引起的糖酵解改变对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响。[方法]CoCl2化学诱导宫颈癌Hela细胞缺氧,将实验对象分为常氧组和缺氧组。用MTT法、软琼脂克隆形成实验、流式细胞仪、跨膜侵袭实验等方法观察两组细胞的增殖、克隆、凋亡和侵袭能力;用酶比色法检测细胞培养液上清中HKⅡ和乳酸值。免疫细胞化学法和Western blot法分别检测两组HIF-1α、GLUT1的表达,RT-PCR检测两组HIF-1α、GLUT1及HKⅡ基因表达水平。[结果]缺氧组与常氧组相比,缺氧组细胞生长增殖活跃、凋亡率下降、跨膜细胞数增加,差异有显著性意义(P<0.05)。缺氧组中HKⅡ和乳酸值较常氧组明显升高(P<0.05)。缺氧诱导后,HIF-1α基因表达水平无明显变化(P>0.05),蛋白表达水平明显升高(P<0.05),GLUT1基因和蛋白在缺氧诱导后表达水平都明显升高(P<0.05)。[结论]氧微环境下宫颈癌Hela细胞增殖、抗凋亡、侵袭能力加强,可能与缺氧诱导后HIF-1α蛋白不宜降解,细胞糖酵解能力加强有关。     

阿霉素对人乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响

[目的]检测阿霉素(ADR)对体外人乳腺癌化疗敏感细胞(MCF-7/S)凋亡和增殖的影响,并探讨其可能的作用机理.[方法]应用MTT比色法检测ADR对体外培养的MCF-7/S细胞增殖抑制作用,应用流式细胞术检测ADR诱导乳腺癌细胞凋亡,采用免疫细胞化学法检测ADR作用前后去磷酸化Rb蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.[结果]ADR抑制MCF-7/S细胞增殖,呈剂量依赖性;ADR组MCF-7/S细胞的凋亡率、磷酸化Rb蛋白的表达量与对照组相比明显增高(P＜0.01);PCNA阳性表达率与对照组的相比明显降低(P＜0.01).在ADR组,MCF-7/S细胞的凋亡率(AR)与去磷酸化Rb蛋白的表达量呈正相关,与增殖细胞核抗原的阳性表达率呈负相关.[结论]ADR诱导MCF-7/S细胞凋亡并抑制MCF-7/S细胞增殖可能与其上调去磷酸化Rb蛋白和下调细胞内增殖细胞核抗原表达水平有关.     

PCNA的表达与人乳腺癌细胞凋亡的关系

目的：研究增殖细胞核抗原（PCNA）的表达与人乳腺癌细胞凋亡的关系。方法：以乳腺癌细胞株MCF-7／S（化疗敏感细胞株）为研究对象,应用MTT比色法检测阿霉素（ADR）对体外培养的MCF-7／S细胞增殖抑制作用,末端标记（TUNEL）法检测ADR诱导乳腺癌细胞凋亡,免疫细胞化学法检测ADR作用前后PCNA的表达。结果：ADR抑制MCF-7／S细胞增殖,旱剂量依赖性,IC50为0．128mg／L;ADR作用组MCF-7／S细胞的凋亡率（Apoptoticrate,AR）为0．261,与对照组细胞的凋亡率0．0449相比明显增高（P〈0．01）;PCNA阳性表达率为0．3371,与对照组PCNA阳性表达率0．5152相比明显降低（P〈0．01）。结论：乳腺癌肿瘤细胞的凋亡率（AR）和PCNA的阳性表达呈负相关;ADR能诱导MCF-7／S细胞凋亡,并能抑制其增殖。     

青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7/TAM细胞的抑制作用

[目的]探讨青蒿琥酯抑制耐三苯氧胺人乳腺癌细胞MCF-7/TAM的增殖及其机制。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色分析法、流式细胞术、免疫细胞化学法技术检测青蒿琥酯作用于MCF-7/TAM细胞后的抑制率、凋亡率、细胞周期及Bcl-2表达变化。[结果]青蒿琥酯对MCF-7/TAM细胞有明显的抑制作用,呈浓度和时间依赖性。作用48h后能诱导细胞凋亡,细胞周期被阻滞于G1、G2期（P〈0.05）。青蒿琥酯处理组Bcl-2表达减弱（P〈0.01）。[结论]青蒿琥酯可抑制MCF-7/TAM细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7生物学行为的影响

目的:研究缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为,增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α(hypoxic-induciblefactor1α,HIF-1α)的表达,检验其在这一过程中的作用,并进一步探讨作用机制。方法:慢病毒感染细胞,干扰乳腺癌细胞系MCF-7中HIF-1α的表达,得到HIF-1α表达正常的乳腺癌细胞系MCF-7-NC和HIF-1α表达受干扰的细胞系MCF-7-HIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧,用MTT法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力,ANOVA检验检测其增殖能力的区别。Transwell实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力,计数通过Transwell小室的细胞,ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。结果:MTT实验结果:正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell实验检测细胞的侵袭能力,缺氧后正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后,正常表达HIF-1α的细胞系MCF-7-NC发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。共聚焦荧光染色显示:在诱导缺氧后,正常表达HIF-1α的MCF-7-NC细胞极性发生变化,呈长梭形改变,上皮标志物人广谱角蛋白(pan-cytokeratin,P-CK)表达下调,间质标志物人α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达上调;而HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△无明显EMT变化。结论:在体外条件下,缺氧可以引起乳腺癌细胞系MCF-7增殖能力减弱、侵袭能力增强,可以诱导乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,干扰缺氧诱导因子亚基HIF-1α的表达,则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。     

缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7生物学行为的影响

目的:研究缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为,增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α(hypoxic-induciblefactor1α,HIF-1α)的表达,检验其在这一过程中的作用,并进一步探讨作用机制。方法:慢病毒感染细胞,干扰乳腺癌细胞系MCF-7中HIF-1α的表达,得到HIF-1α表达正常的乳腺癌细胞系MCF-7-NC和HIF-1α表达受干扰的细胞系MCF-7-HIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧,用MTT法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力,ANOVA检验检测其增殖能力的区别。Transwell实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力,计数通过Transwell小室的细胞,ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。结果:MTT实验结果:正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell实验检测细胞的侵袭能力,缺氧后正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后,正常表达HIF-1α的细胞系MCF-7-NC发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。共聚焦荧光染色显示:在诱导缺氧后,正常表达HIF-1α的MCF-7-NC细胞极性发生变化,呈长梭形改变,上皮标志物人广谱角蛋白(pan-cytokeratin,P-CK)表达下调,间质标志物人α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达上调;而HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△无明显EMT变化。结论:在体外条件下,缺氧可以引起乳腺癌细胞系MCF-7增殖能力减弱、侵袭能力增强,可以诱导乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,干扰缺氧诱导因子亚基HIF-1α的表达,则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。     

缺氧及HIF-1α对结直肠癌上皮-间质转化及侵袭增殖的影响

目的 研究不同缺氧条件下缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、锌指转录因子Snail及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在结直肠癌SW480细胞中的表达水平,以及它们对细胞的增殖凋亡和侵袭迁移力的影响,探讨三者在结直肠癌的缺氧及上皮间质转化中的作用及可能机制.方法 利用氯化钴(CoCl2)化学诱导细胞缺氧模型,实验分组:常氧组、低氧组和无氧组.采用MTT法检测结直肠癌SW480细胞的生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell小室法)检测细胞的侵袭迁移力,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡及周期变化,RT-PCR及Western blot检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherin mRNA与蛋白的表达.结果 MTT结果显示随CoCl2浓度的增加结直肠癌SW480细胞的增殖活性逐渐增加(P＜0.05);Transwell结果显示随缺氧程度的增加穿过基质膜和聚碳酸酯膜的细胞数逐渐增多,侵袭迁移率增加(P＜0.05);FCM检测结果显示与常氧组比较,无氧组和低氧组G0/G1期SW480细胞明显减少,G2/S期细胞明显增多,细胞凋亡率降低(P＜0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示低氧组、无氧组与常氧组比较,SW480细胞内HIF-1α和Snail mRNA与蛋白的表达增加,E-cadherin mRNA和蛋白的表达降低(P＜0.05),且HIF 1 α和Snail的表达呈显著正相关.HIF-1α、Snail与E-cadherin的表达均呈显著负相关(P＜0.05).结论 缺氧及HIF-1α可促进结直肠癌SW480细胞株的体外生长增殖活性,抑制其凋亡,增强其体外侵袭迁移能力,其机制可能是缺氧诱导HIF-1α表达上调直接作用于SW480细胞产生,亦可能是缺氧或HIF-1α表达上调通过促进Snail表达,抑制E-cadherin表达,间接导致EMT的发生发展而产生.     

别直参抑制人乳腺癌细胞MCF-7体外增殖

[目的]评价别直参对MCF-7细胞体外增殖的影响,并检测其对凋亡相关蛋白bax/bcl-2表达的影响.[方法]采用MTT比色法检测对MCF-7细胞增殖的作用;流式细胞术检测对MCF-7细胞凋亡的影响;免疫组化法检测bax/bcl-2的表达.[结果]别直参高剂量组作用MCF-7细胞24h后,MTT检测增殖率为89.83％,提示有抑制MCF-7细胞体外增殖的作用(P＜0.05);流式细胞术检测高剂量组细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);免疫组化法检测高剂量组能上调MCF-7细胞bax的表达,并下调bcl-2的表达.[结论]别直参高剂量组具有一定的诱导MCF-7细胞凋亡效应作用,其机制可能通过上调bax的表达和下调bcl-2的表达.     

miR-155对乳腺癌细胞增殖、凋亡及耐药蛋白表达的调控作用研究

目的 探讨microRNA-155（miR-155）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及乳腺癌耐药相关蛋白表达的调控作用。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测MCF-7细胞和人乳腺正常上皮细胞中miR-155的表达水平。将MCF-7细胞分为4组：对照组、空转染组、抑制（转染miR-155 inhibitor）组和过表达（转染miR-155 mimics）组,采用qRT-PCR检测转染24、48、72及96 h后各组的转染效果,噻唑蓝（MTT）法检测各组转染24、48、72及96 h的增殖能力,采用流式细胞仪PI／Annexin V双染色法检测各组转染24、48 h后的凋亡率,Western blotting法检测各组转染48 h后乳腺癌耐药蛋白（BCRP）、P-糖蛋白（P-gp）及多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达水平。结果 乳腺癌MCF-7细胞中的miR 155水平高于人乳腺正常上皮细胞（P＜0.05）,且转染miR-155 inhibitor或mimics可呈时间依赖的方式降低或升高MCF-7细胞的miR-155水平（P＜0.05）。与对照组相比,抑制组转染后的细胞增殖率及BCRP、P-gp和MRP1的表达水平均降低,凋亡率升高（P＜0.05）;而过表达组的细胞增殖率及BCRP、P gp和MRP1的表达水平均升高,凋亡率降低（P＜0.05）。结论 MCF-7细胞中miR-155呈高表达,下调miR-155表达可抑制其增殖及耐药相关蛋白的表达,同时诱导凋亡。     

HIF-1α对胶质瘤U251细胞增殖及侵袭的影响

目的：探讨氯化钴（CoCl2）模拟化学缺氧复氧中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白的表达及其对人胶质瘤U251细胞增殖及侵袭的影响。方法：在培养基中加入和去除CoCl2模拟化学缺氧和缺氧复氧,采用免疫印迹法（Western blot）检测CoCl2与HIF-1α蛋白表达关系;通过MTT、过河实验、黏附试验分别检测细胞侵袭、迁移运动能力和黏附能力。结果：人胶质瘤U251细胞中存在HIF-1α蛋白表达;在CoCl2模拟缺氧的时-效关系实验中,100μmol/L CoCl2刺激细胞6h、12h、24h时HIF-1α蛋白呈递增（分别为1.024±0.03、2.35±0.04、2.82±0.12）（P〈0.05）,24h达高峰,48h明显下降（1.82±0.05）。同时,在量-效关系实验中,CoCl250μmol/L、100μmol/L和150μmol/L刺激细胞24h时HIF-1α蛋白呈递增（分别为1.78±0.03、1.81±0.03、2.12±0.12）（P〈0.05）;MTT发现CoCl2诱导的缺氧对细胞增殖起抑制作用;过河实验发现缺氧24h复氧24h后细胞的迁移运动能力增加;细胞黏附实验发现缺氧24h复氧24h后细胞的黏附力增加。结论：CoCl2能诱导人胶质瘤U251细胞HIF-1α蛋白过度表达,而且存在一定的时-效关系;经CoCl2诱导的缺氧后复氧,肿瘤细胞增殖能力下降,细胞的迁移运动能力和黏附能力增加。     

沉默HIF-2α表达对低氧下乳腺癌干细胞微球体富集的影响

  目的   探讨沉默低氧诱导因子-2α(hypoxia-inducible factor-2α, HIF-2α)表达对低氧下乳腺癌干细胞(breast cancerstem cells, BCSCs)微球体富集的影响。   方法   构建HIF-2αRNA干扰慢病毒载体, 并转染至MCF-7细胞, RT-PCR和Western blot检测HIF-2αmRNA及蛋白表达; MTT检测MCF-7细胞在不同氧浓度下增殖活性; 显微镜下观察低氧下BCSCs微球体形成情况; 有限稀释法检测微球体细胞单克隆形成能力; RT-PCR检测微球体细胞干细胞相关标志物ABCG2、CD44及OCT-4 mRNA表达。   结果   成功构建了HIF-2α基因siRNA慢病毒表达载体, RT-PCR和Western blot结果显示干扰组细胞HIF-2αmRNA及蛋白表达均明显降低(P < 0.05)。与未转染组及空载体组比较, 低氧下RNA干扰组细胞增殖活性及BCSCs单克隆形成能力明显降低(P < 0.05);RT-PCR结果亦显示RNA干扰组BCSCs相关标志物ABCG2、CD44及OCT-4 mRNA表达显著降低(P < 0.05)。   结论   低氧能够诱导和强化MCF-7细胞乳腺癌癌干细胞样特性, 而沉默HIF-2α表达可抑制低氧下BCSCs富集, 提示HIF-2α有望成为乳腺癌治疗新的靶点。      

软骨多糖对乳腺癌细胞CyclinD1及p21周期蛋白表达影响的研究

[目的]研究软骨多糖对乳腺癌细胞CyclinD1及p21周期蛋白表达的影响。[方法]选用MCF-7人乳腺癌细胞系进行体外培养，采用MTT法检测细胞增殖作用。流式细胞仪检测细胞周期的变化，免疫荧光染色方法检测细胞周期蛋白CyclinD1及p21蛋白的表达率。[结果]软骨多糖对MCF-7乳腺癌细胞体外生长有明显的抑制作用，且呈时间和剂量依赖性；软骨多糖使MCF-7乳腺癌细胞出现S期阻滞；软骨多糖促进CyclinD1蛋白失表达及p21蛋白过表达。     

CDK4/6抑制剂联合内分泌治疗对乳腺癌细胞miRNA表达水平的影响

目的:分析CDK4/6抑制剂联合内分泌药物对人乳腺癌细胞中相关miRNA表达水平的影响。方法:培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3、MCF-7株,使用CDK4/6抑制剂帕布昔利布和内分泌药物阿那曲唑作用于人乳腺癌细胞,MTT法检测细胞增殖情况,BD流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期情况,采用RT-PCR检测相关miRNA表达情况,Western blot 检测TNF-α、Survivin蛋白表达。结果:在药物作用12 h、24 h、48 h和72 h后的MDA-MB-231研究组、SK-BR-3研究组、MCF-7研究组细胞中miRNA-1321、miRNA-574-5p、miRNA-24-3p的表达水平均较对照组有所下降,而miRNA-1246、miRNA-494-3p、miRNA-29b-3p的表达水平有所升高;MDA-MB-231研究组、SK-BR-3研究组、MCF-7研究组细胞G0/G1期、S期的比例均较对照组细胞均有所升高,而G2/M期比例与对照组相比较均有所下降;MDA-MB-231研究组、SK-BR-3研究组、MCF-7研究组细胞中TNF-α及Survivin的表达水平均较对照组有所上升。结论:CDK4/6抑制剂联合内分泌药物可以调节人乳腺癌细胞中相关miRNA表达水平,从而抑制人乳腺癌细胞增殖。     

低氧对紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞A2780凋亡的影响及其机制

背景与目的低氧作为实体瘤的特征和重要的生存微环境,可能与化疗耐药相关.我们认为低氧与卵巢癌化疗耐药可能相关.本研究建立低氧模型,探讨低氧、低氧诱导因子1 α(HIF-1α)对紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞A2780凋亡的影响.方法体外培养的A2780细胞中加入化学性低氧诱导剂氯化钴(CoCl2),诱导并制作低氧模型.将细胞分为4组A组(对照)、B组(常氧培养加紫杉醇)、C组(低氧培养加紫杉醇)、D组(低氧培养加Decoy加紫杉醇).用诱骗法(Decoy)阻断HIF-1α功能,Western blot、RT-PCR、TUNEL和流式细胞术分别检测各组细胞HIF-1α蛋白、mRNA的表达水平及细胞凋亡情况.结果CoCl2能明显增加A2780细胞HIF-1α蛋白的表达,而对其mRNA的表达无明显影响,Decoy法阻断HIF-1α的功能,对其蛋白和mRNA的表达无明显影响.TUNEL检测发现,B组凋亡指数[AI(41.12±25.65)%]显著高于C组[AI(24.12±15.19)%](P＜0.05);低氧阻断了HIF-1α功能后,D组凋亡指数[AI(35.19±21.73)%]较C组明显增加(P＜0.05).流式细胞仪检测细胞凋亡率结果与TUNEL检测结果类似.结论低氧能保护A2780细胞抵抗化学治疗,HIF-1α可能在紫杉醇诱导的细胞凋亡中发挥重要的抗凋亡作用.     

氯化钴诱导化学性低氧对经HIF-1α基因转染后的大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的:探讨氯化钴（CoCl2）诱导的化学性低氧对经低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α） 基因转染后的大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）生物学特性的影响。方法:第3代BMSCs以及转染有HIF-1α全长基因的第 3 代BMSCs,根据低氧诱导方式不同分为4组。BMSCs组、BMSCs-HIF-1α组:BMSCs或经HIF-1α基因转染后的BMSCs在H-35低氧工作站诱导的物理性低氧环境下培养;BMSCs-CoCl2组、BMSCs-HIF-1α-CoCl2组:BMSCs或经HIF-1α基因转染后的BMSCs在CoCl2诱导的化学性低氧环境下培养。低氧培养8天后,Western blot 测定各组内HIF-1α蛋白表达;流式细胞仪检测细胞周期内G1/G2/S期细胞比例,统计增殖指数（PI）和凋亡率。MTT法绘制细胞生长曲线,比较细胞数目。结果:与BMSCs-HIF-1α组和BMSCs-CoCl2组比较,BMSCs-HIF-1α-CoCl2组内HIF-1α蛋白表达上调（P<0.05）,细胞周期内处于G2期和S期的细胞数目增多（P<0.05）,PI升高（P<0.05）,细胞凋亡率下降（P<0.05）。BMSCs-HIF-1α-CoCl2组细胞在培养的3~8天内,细胞数目均多于其他三组细胞（P<0.05）。结论:CoCl2诱导的化学性低氧上调了经基因转染后BMSCs内HIF-1α的蛋白表达,提高了细胞增殖能力,降低了细胞凋亡率。     

乳腺癌中COX-2表达及其抑制剂塞来昔布对乳腺癌细胞系增生和凋亡的影响

目的为进一步观察COX-2对乳腺癌的作用,我们检测了乳腺癌组织、乳腺癌细胞株MCF-7和B37中COX-2的表达,并观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对乳腺癌细胞株生长和凋亡的影响。方法应用免疫组织化学染色的方法检测132例乳腺癌组织标本中COX-2蛋白的表达;应用免疫细胞化学染色、原位杂交、逆转录多聚酶联反应（RT-PCR）的方法,分别检测COX-2蛋白和mRNA在乳腺癌细胞株MCF-7、B37中的表达;采用MTT法、AO/EB双荧光染色法和流式细胞术,研究塞来昔布对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。结果52.3%(69/132)的乳腺癌组织标本表达COX-2蛋白;在乳腺癌细胞株MCF-7和B37中均有COX-2的表达,25μmol/L塞来昔布作用72h后,COX-2表达明显减少;25、50、100μmol/L的塞来昔布与MCF-7细胞作用72h,生长抑制率分别为36.3%、57.7%、74.5%。100μmol/L塞来昔布作用72h后,MCF-7细胞凋亡率为38.5％。结论乳腺癌组织和乳腺癌细胞株MCF-7、B37中存在COX-2的表达;塞来昔布可抑制乳腺癌细胞增殖,并促进细胞凋亡,塞来昔布可能作为新的药物治疗乳腺癌。     

低氧对顺铂诱导的人喉鳞癌Hep2细胞凋亡及细胞周期分布的影响及其机制

目的:建立体外低氧模型,探讨低氧对人喉鳞癌细胞Hep2细胞周期以及顺铂对其诱导的凋亡的影响。方法:将体外培养的人喉鳞癌细胞分为4组:A组(对照组)、B组(低氧培养组)、C组(常氧培养加顺铂组)、D组(低氧培养加顺铂组)。流式细胞仪检测HIF-1α蛋白表达、细胞凋亡及细胞周期变化;MTT法检测C、D两组在不同浓度顺铂作用24h后的细胞抑制率;RT-PCR检测各组细胞HIF-1αmRNA的表达水平。结果:低氧能明显增加Hep2细胞HIF-1α蛋白表达,而对HIF-1αmRNA的表达无明显影响。B、D组的Hep2细胞发生G₀/G₁期细胞周期阻滞,顺铂5μg/ml作用24h后C组细胞凋亡及抑制率(%)显著高于D组(P＜0.05)。结论:低氧使Hep2细胞产生化疗抵抗,其中HIF-1α蛋白表达水平升高以及低氧造成的G₀/G₁期细胞周期阻滞可能在顺铂诱导的人喉鳞癌细胞凋亡中发挥重要的抗凋亡作用。     

Upregulation of CYP1B1 by hypoxia is mediated by ERα activation in breast cancer cells

Endocrine therapy for breast cancer often leads to drug resistance and tumor recurrence; tumor hypoxia is also associated with mortality and tumor relapse. Cytochrome P450 1B1 (CYP1B1) regulates estrogen metabolism in breast cells and is known to be overexpressed in breast cancer tissue. Although the individual association of hypoxia-induced hypoxia-inducible factor-1-alpha (HIF-1α) and CYP1B1 with tumorigenesis is well known, the association between HIF-1α and CYP1B1 leading to tumorigenesis has not been investigated. Here, we investigated the correlation between hypoxia and CYP1B1 expression in breast cancer cells for tumorigenesis-related mechanisms. Hypoxia was induced in the human breast cancer cell lines MCF-7 (Er-positive) and MDA-MB-231 (triple-negative) and the normal breast epithelial cell line MCF10A; these cell lines were then subjected to immunoblotting, transient transfection, luciferase assays, gene silencing using small interfering RNA, polymerase chain reaction analysis, chromatin immunoprecipitation, co-immunoprecipitation, and mammalian two-hybrid assays. Furthermore, immunofluorescence analysis of the tumor microarrays was performed, and the pub2015 and the Cancer Genome Atlas patient datasets were analyzed. HIF-1α expression in response to hypoxia occurred in both normal and breast cancer cells, whereas CYP1B1 was induced only in estrogen receptor α (ERα)-positive breast cancer cells under hypoxia. HIF-1α activated ERα through direct binding and in a ligand-independent manner to promote CYP1B1 expression. Therefore, we suggested the mechanism by which hypoxia and ER-positivity orchestrate breast cancer relapse.