人巨细胞病毒感染致造血祖细胞增殖抑制与更昔洛韦的影响术

背景：临床研究显示，骨髓移植后人巨细胞病毒感染可阻碍血小板植入、出现表型异常的外周血白细胞，导致骨髓移植失败，这可能是由于人巨细胞病毒感染直接影响了造血祖细胞所致。目的：观察更昔洛韦对人巨细胞病毒感染所致脐血粒一巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞体外增殖抑制的影响及更昔洛韦对此的保护作用。设计：对比观察性实验。单位：泸州医学院附属医院分子生物学实验室。对象：正常足月顺产新生儿脐血标本20例，每份10mL。由泸州医学院附属医院妇产科提供，产妇对本实验知情同意。实验经医院伦理委员会批准。方法：实验于2004-06／2006-12在泸州医学院附属医院分子生物学实验室完成。采用脐血标本造血祖细胞培养技术，观察、计数100TCID50人巨细胞病毒-AD169感染粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞后各祖细胞集落数，记录集落维持时间。用PCR和荧光定量PCR技术检测集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA。将7．5mg/L更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的造血祖细胞，再分别计集落数、集落维持时间及集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA。设正常培养的造血祖细胞为空白对照组，设与含灭活性人巨细胞病毒的正常造血祖细胞培养系统为灭活对照组。主要观察指标：①祖细胞集落数、祖细胞集落维持时间。②祖细胞集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA。结果：①集落数和集落维持时间：人巨细胞病毒感染的祖细胞集落数较对照组明显减少（P〈0．01），集落维持时间较对照组明显缩短（P〈0．01）。在人巨细胞病毒感染的集落细胞内检测到人巨细胞病毒-DNA的存在：更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后，与人巨细胞病毒感染的祖细胞比?     

更昔洛韦治疗婴儿巨细胞病毒感染致高胆红素血症疗效观察

目的探讨更昔洛韦治疗婴儿巨细胞病毒感染致高胆红素血症的疗效及副作用。方法通过检测血CMVIgM、IgG、肝功能而确定42例婴儿巨细胞病毒感染致高胆红素血症,随机分为更昔洛韦组和治疗组,均常规给予补液、退黄、白蛋白处理,更昔洛韦组加用更昔洛韦。结果更昔洛韦组在黄疸消退方面与治疗组比较有显著性差异(P<0.05),未发现明显副作用。结论更昔洛韦治疗巨细胞病毒感染致高胆红素血症疗效好,为较理想药物。     

更昔落韦治疗婴儿巨细胞病毒肝炎疗效评价

目的：观察更昔洛韦对婴儿巨细胞病毒（CMV）肝炎的治疗效果。方法：总结分析60例婴儿巨细胞病毒肝炎更昔洛韦治疗前后血清TBIL、ALT、AKP、γ-GT的变化，同时观察药物不良反应，结果：用更昔洛韦治疗后血清TBIL、ALT水平下降，肝脾回缩，所有指标的差异均有显着性（P〈0.01）、未发现更昔洛韦的明显副作用，结论：正规应用更昔洛韦诱导、维持治疗，安全、有效、副作用小。     

更昔洛韦防治异基因骨髓移植巨细胞病毒感染

目的探讨更昔洛韦防治异基因骨髓移植(alloBMT)术后巨细胞病毒(CMV)感染的临床效果。方法对6例alloBMT病人使用更昔洛韦防治CMV感染,预防用药,更昔洛韦5mg/(kg·次),q12h,于术前-9～-1d使用;治疗用药,更昔洛韦5mg/(kg·次),q12h,14～21d,而后每周用药5d维持2～3周。结果6例alloBMT患者术后有3例出现CMV感染,均治愈,随访3～9个月未再出现CMV感染。结论更昔洛韦防治异基因造血干细胞移植术后CMV感染效果良好,早期诊断和治疗更为重要。     

经人巨细胞病毒感染人脐血造血干细胞向粒-巨噬系和红系祖细胞增殖过程中HOXB6-mRNA及其基因表达

背景:造血祖细胞被人巨细胞病毒(HCMV)感染后增殖和分化能力受到抑制是否与受染细胞增殖的基因异常表达有关联?目的:观察经人类巨细胞病毒感染的人类造血干祖细胞向粒-巨噬系、红系祖细胞增殖过程中HOXB6mRNA表达.设计:观察对比实验.单位:泸州医学院附属医院分子生物学实验室.材料:所有脐血标本由泸州医学院附属医院产科提供,取自正常足月顺产新生儿断脐后的胎盘段脐血.所有新生儿母亲HBSAg阴性,常规ELISA检测抗HCMV-IgM及PCR检测HCMV-DNA均为阴性,且对本实验知情同意,实验经过医院伦理委员会批准.HCMV-AD169株由中国预防医学科学院病毒研究所提供.全反式维甲酸(ATRA)为重庆华邦制药股份有限公司产品,批号为20010126.方法:实验于2006-04/2007-04在泸州医学院附属医院分子生物学实验室完成.分离脐血单个核细胞,进行造血祖细胞培养.根据实验干预方式不同将细胞分为4组:[1]对照组:与HCMV组等量的IMDM培养液进行细胞培养.[2]HCMV组:HCMV-AD169滴度为105pfu,以0.1mL感染培养体系.[3]ATRA组:在培养体系分组中加入12μL ATRA,终浓度为60μmol/L.[4]HCMV ATRA组:在HCMV感染组中加入ATRA,终浓度同ATRA组.主要观察指标:分别于培养后3,7,12天收获各组细胞,采用实时荧光定量PCR技术分别检测脐血粒-巨噬系祖细胞和脐血红系祖细胞HOXB6 mRNA表达水平.结果:[1]对照组红系祖细胞和粒-巨噬系祖细胞均表达HOXB6-mRNA,随着时间推移,表达水平增加,其中,脐血红系祖细胞表达HOXB6-mRNA于第12天达高峰,脐血粒-巨噬系祖细胞HOXB6-mRNA于第7天达高峰.[2]HCMV组脐血粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞感染人巨细胞病毒后各时间点HOXB6基因表达均低于对照组,差异有显著性意义(P<0.05).[3]ATRA组各时间点脐血粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞HOXB6-mRNA表达均高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05).[4]HCMV ATRA组各时间点红系祖细胞及粒-巨噬系祖细胞的HOXB6-mRNA表达均高于人巨细胞病毒组,差异有显著性意义(P<0.05~0.01).结论:[1]人类造血干祖细胞向粒单系和红系祖细胞增殖分化过程中,HOXB6-mRNA呈现持续稳定的表达.[2]人巨细胞病毒能使HOXB6基因表达下调.[3]ATRA能上调HOXB6基因的表达.     

肾移植术后肺巨细胞病毒感染的影像学表现和治疗

目的探讨肾移植术后肺巨细胞病毒感染的胸部X线特点和治疗，以提高早期诊治效果。方法根据临床表现及实验室检测证实的4例肾移植术后巨细胞病毒感染的患者，动态观察其胸部X线表现。结果肺部巨细胞病毒感染，发生在术后10～12周，肺部X线变化快，主要表现为早期肺纹理增粗、增多、边缘模糊。随病变发展，肺内可见多发的渗出性病灶，单侧或双侧病变，重症可呈斑片状或大片状融合性模糊影。临床表现凶险，多出现呼吸窘迫。本组4例，经及时以更昔洛韦为主的抗病毒治疗后痊愈。结论胸部X线摄片是诊断肾移植术后巨细胞病毒感染的重要依据，对肾移植术后肺部CMV感染应及时应用以更昔洛韦为主的综合治疗。     

干细胞移植后的巨细胞病毒感染

学术背景:巨细胞病毒感染是异基因造血干细胞移植后的常见并发症,病死率极高。目的:综述移植后巨细胞病毒感染的诊断和防治等研究进展。检索策略:应用计算机检索PubMed1999-01/2006-12期间的相关文章,检索词为"infection post transplant,CMV,interstitial pneumonia,valacyclovir,ganciclovir"。同时机检索万方数据库2001-01/2006-12期间的相关文章,检索词为"移植后感染,巨细胞病毒,间质性肺炎,万乃洛韦,更昔洛韦"。对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与移植后巨细胞病毒感染的诊断和防治等研究进展中的应用相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。共收集到66篇相关文献,35篇文献符合纳入标准,排除的31篇为内容陈旧或重复文献。文献评价:符合纳入标准的35篇文献中,15篇涉及移植后巨细胞病毒感染的临床表现与诊断,16篇涉及移植后巨细胞病毒感染的防治,4篇涉及存在的问题与展望。资料综合:巨细胞病毒性间质性肺炎是移植后巨细胞病毒疾病的主要类型。没有特异性的临床和X射线表现可以将巨细胞病毒肺炎和其他条件病原体肺炎区别开来,只有从下呼吸道支气管灌注液、支气管镜活检或肺组织活检标本中检出巨细胞病毒,结合相应的临床表现才可以诊断巨细胞病毒肺炎。抗病毒药物可能会减少原发性巨细胞病毒感染的发生。阿昔洛韦可以明显减少巨细胞病毒感染的发生率,延缓术后巨细胞病毒感染的起病时间,大剂量万乃洛韦可将巨细胞病毒感染的风险降低。结论:联合使用抗病毒药物可以降低巨细胞病毒感染的发生率,提高移植后患者的生存率。     

更昔洛韦联合大剂量丙种球蛋白治疗婴儿巨细胞病毒性肝炎82例疗效观察

目的观察更昔洛韦(GCV)联合大剂量丙种球蛋白对婴儿巨细胞病毒(CMV)肝炎的疗效。方法比较以更昔洛韦联合大剂量丙种球蛋白治疗82例婴儿CMV性肝炎前后肝功能、肝脾大小变化以及CMV检测指标等的转阴率,并观察不良反应。结果肝功各项指标治疗前后差异显著(P<0.05),肝脾较治疗前明显回缩(P<0.05),血CMV-IgM、聚合酶链式反应法测定巨细胞病毒脱氧核糖核酸(PCR-CMV-DNA)转阴率分别为87.8%和75.8%。6例出现白细胞减少,停药后均迅速恢复。结论更昔洛韦联合大剂量丙种球蛋白联合治疗婴儿巨细胞病毒性肝炎有较好疗效,未见明显不良反应,临床上值得推广。     

10%葡萄糖与更昔洛韦存在配伍禁忌

更昔洛韦通用名注射用更昔洛韦,为白色疏松块状物或粉末,适用于可能发生于有巨细胞病毒感染风险的器官移植受者的巨细胞病毒,治疗免疫功能缺陷患者发生的巨细胞病毒视网     

婴儿巨细胞病毒性肝炎28例分析

目的 :观察婴儿巨细胞病毒 (CMV)肝炎的临床和肝脏组织病理学特点及更昔洛韦的治疗效果。方法 :对 2 0 0 0年 1月— 2 0 0 1年 6月诊断为CMV肝炎的 2 8例婴儿进行分析 ,结合肝穿刺病理资料总结其特点 ;应用更昔洛韦对其中 18例进行了治疗并观察其疗效及不良反应。结果 :婴儿CMV肝炎的临床及肝组织病理表现轻重不一 ,临床主要表现为黄疸、肝脾肿大及肝功能异常 ,同时可累及其他系统病变 ,重者可发展至肝硬化、腹水 ;应用更昔洛韦治疗后 92 % (11/ 12 )和 71% (10 / 14 )的病例黄疸及血清丙氨酸转氨酶 (ALT)下降 ,且无不良反应 ,随访肝功能及脾、肝肿大逐渐恢复。结论 :CMV肝炎大部分预后良好 ,但重者可导致肝硬化。应用更昔洛韦抗感染治疗具有良好的疗效。     

人巨细胞病毒抑制人巨核系祖细胞增殖的体外研究

目的 探讨人巨细胞病毒（HCMV）对人巨核系祖细胞增殖的影响。方法 收集20份脐血标本,采用巨核系祖细胞体外半固体培养技术,观察HCMV AD169株对巨核细胞集落形成单位（CFU－MK）生长的影响,分别用原位聚合酶链反应（IS－PCR）和RT－PCR检测集落细胞中的HCMV DNA与抑刻早期抗原（IEA）mRNA。结果 HCMV AD169株在体外能明显抑制CFU－MK生长,抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系,经IS－PCR检测发现病毒感染组CFU－MK细胞中有HCMV DNA存在;RT－PCR检测发现病毒感染组CFU－MK细胞中有IEAmRNA的表达。结论 HCMV AD169株可直接感染巨核系祖细胞,并抑制其增殖与分化;HCMV对巨核系祖细胞的直接抑制作用可能是该病毒感染后引起血小板减少的原因之一。     

巨细胞病毒对人骨髓粒-巨噬系祖细胞生长的影响

目的探讨人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对人骨髓粒巨噬系祖细胞集落（ＣＦＵＧＭ）是否有直接抑制作用。方法采用造血祖细胞体外培养技术,研究病毒株ＨＣＭＶＡＤ１６９对ＣＦＵＧＭ生长的影响,用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）技术检测ＣＦＵＧＭ的细胞内ＨＣＭＶＡＤ１６９ＤＮＡ。结果高浓度ＨＣＭＶＡＤ１６９（２×１０６ｐｆｕ／ｍｌ和２×１０５ｐｆｕ／ｍｌ）在体外能明显抑制ＣＦＵＧＭ的生长（Ｐ＜０．０１）,而低浓度（２×１０４ｐｆｕ／ｍｌ）ＨＣＭＶＡＤ１６９则无此作用,ＨＣＭＶＡＤ１６９对骨髓ＣＦＵＧＭ的抑制作用因其浓度的不同而有差异;经ＩＳＰＣＲ检测发现在ＣＦＵＧＭ的细胞核中存在ＨＣＭＶＡＤ１６９ＤＮＡ。结论ＣＦＵＧＭ是ＨＣＭＶＡＤ１６９的宿主细胞之一,ＨＣＭＶＡＤ１６９对骨髓ＣＦＵＧＭ生长的抑制作用与其对ＣＦＵＧＭ的直接感染有关。     

脐血和骨髓来源的CD34^＋细胞体外扩增巨核祖细胞差异的研究

本研究探讨脐血（CB）和骨髓（BM）来源的CD34^＋细胞体外扩增巨核祖细胞的差异。采用Ficoll—Hypaque分离法分离人CB及BM单个核细胞，免疫磁珠法制备CD34^＋细胞，在含血小板生成素（TPO）、TPO＋白介素11（IL—11）或TPO＋IL11＋肝素的无血清液体培养体系中培养14天。流式细胞术检测扩增产物（CD34^＋、CD41a^＋及CD34^＋CD41a^＋细胞）免疫表型、巨核细胞凋亡率及DNA含量，并以集落形成单位测定法进行粒巨-噬细胞集落形成单位（CFU—GM）、红系爆式集落形成单位（BFU—E）及巨核细胞集落形成单位（CFU—Mk）计数。结果表明：14天培养中，CB来源细胞在总细胞数、CD41a^＋及CD34^＋CD41a^＋细胞扩增倍数上均高于BM（P均〈0．05）。0天CB及BM来源CD34^＋细胞在CFU—GM、BFU—E及总的CFU—Mk的形成能力上无显著性差异（P均〉0．05），但CB来源CD34^＋细胞形成的CFU—Mk以大集落为主，其数量高于BM（P〈0．05）；在培养7、10和14天，CB及BM来源细胞CFU—GM扩增倍数无显著性差异（P均〉0．05），但CB来源细胞的BFU—E及总的CFU—Mk扩增倍数均高于BM（P均〈0．05）。14天培养中CB和BM来源巨核细胞的凋亡率无显著性差异（P均〉0．05）。DNA含量检测发现，14天培养中CB来源巨核细胞始终以2N细胞为主（比例〉90％），而BM来源巨核细胞随着培养时间延长，4N、8N及以上倍体巨核细胞比例逐渐增加。结论：CB来源CD34^＋细胞体外扩增巨核祖细胞能力高于BM，它可能是巨核祖细胞体外扩增较好的来源。     

人类巨细胞病毒感染对淋巴系祖细胞增殖过程中Hoxc4及Hoxc6基因表达的影响

本研究探讨人类脐血造血干细胞（HSC）向淋巴系祖细胞（CFU—TL）分化过程中hoxc4、hoxc6基因表达的情况,并且用人类巨细胞病毒（HCMV）和／或全反式维甲酸（ATRA）进行干扰,在基因水平探讨HCMV感染导致脐血CFU—TL损伤的机制。采用体外定向培养CFU—TL,经MTT法检测后,应用荧光定量RT-PCR技术检测经人HCMV和／或ATRA处理的人脐血CFU—TL中hoxc4、hoxc6基因的mRNA表达水平。HCMV—AD169滴度为10^6蚀斑形成单位（PFU）／ml,按0．1ml 10^5 PFU／ml接种培养体系。结果表明：正常对照组、病毒处理组、维甲酸处理组hox04、hoxc6基因均在增殖分化的第3天少量表达,第7天表达最强烈（P〈0．05）,第12天表达明显下降。各组中hoxc4基因表达量高于hoxc6组（P〈0．05）。与正常对照组比较,维甲酸组（6×10^-8 mol/L）的hoxc4、hoxc6基因表达上调（P〈0．05）,而病毒处理组hoxc4、hoxc6基因表达下调（P〈0．05）。结论：hoxc4与hoxc6基因在脐血CFU—TL中各组呈现规律的表达,提示hoxc4、hoxc6均与淋巴系造血有密切的相关性。HCMV能使hoxc4、hoxc6基因表达下调．提示HCMV致造血细胞损害可能与hoxc4、hoxc6基因表达异常有关。ATRA能显著上调hoxc4、hoxc6基因的表达。     

CFU-Mk content of immunoselected CD34+ peripheral blood progenitor cells, evaluated with an adapted serum-free methylcellulose assay, is predictive of platelet lineage reconstitution in children with solid tumors

Immunoselected CD34+ peripheral blood progenitor cell (PBPC) transplantation is now frequently used to support autologous hematopoiesis after myeloablative therapy, its feasability having been proved by several groups. However, we and others observed delayed platelet recovery. We hypothesized that immunoselection processing might induce selective loss of megakaryocyte progenitors, or a decrease in their proliferation. We used a colony-forming units megakaryocyte (CFU-Mk) assay to evaluate these consequences and predict platelet recovery in patients. In CD34+ PBPCs from 10 children with solid tumors, we observed no selective loss in CFU-Mk numbers during immunoselection processing and no impairment of clonogenicity. The CFU-Mk yield (59.2 +/- 11.3%) was at least similar to the CD34+ yield (44.2 +/- 3.8%). We assessed the predictive value of CFU-Mk numbers infused for recovery of platelet lineage. We found an inverse correlation between the time taken to reach a platelet count greater than 50 x 10(9)/L and only the CFU-Mk dose (r = -0.71; p = 0.022) among the different type of progenitors, including colony-forming units granulocyte-macrophage (CFU-GM), burst-forming units erythrocyte (BFU-E) and colony-forming units-mixed (CFU-Mix). These findings suggest that CFU-Mk number could be used as sole predictive functional parameter for platelet reconstitution in children after immunoselection of CD34+ cells, in particular for low CD34+ cell dose, and thus as an indicator for initial quality of hematopoietic cells before in vitro expansion.     

化疗对造血微环境的影响及化疗后回输自体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用

目的观察化疗对造血祖细胞、造血微环境的影响,化疗后回输体外扩增的自体骨髓基质细胞(ABMSC)对造血功能恢复的作用.方法对化疗患者进行骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E及基质细胞集落(CFU-F)培养、长期骨髓培养,观察基质层融合情况,计算基质层覆盖率及完全融合时间.长期化疗的10例患者进行自身前后对照,在同一化疗方案下,单纯化疗与化疗后回输体外扩增的ABMSC[(1.1～8.7)×103/次]作对比,观察两者造血恢复情况.结果①长期化疗组的CFU-GM、BFU-E、CFU-E、CFU-F显著低于正常对照组及短期化疗组,后两组差异无显著性;②三组基质层覆盖率及完全融合时间差异无显著性;③长期化疗组ABMSC输注后的CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-F显著高于未输注组;④输注ABMSC后白细胞计数及血小板计数降至最低点的值显著高于未输注组,前者白细胞计数及血小板计数恢复正常时间较后者明显缩短;⑤基质细胞回输过程及输后临床观察无不良反应.结论长期化疗明显损伤造血祖细胞、基质祖细胞,但对骨髓基质细胞融合功能无明显影响,化疗后给予ABMSC可加速造血功能的恢复.     

新的人趋化素样因子对骨髓造血干/祖细胞的体外刺激作用

目的　探讨新克隆的人趋化素样因子 (chemokine likefactor 1,CKLF1)对人造血干 /祖细胞的体外刺激作用。方法　分离正常人骨髓单个核细胞 ,进行液体和半固体集落培养 ,研究CKLF1对CFU GM和CFU Mix的作用。结果　加入转染CKLF1质粒上清组的CFU GM集落数明显增多 ,平均值为每 10 5细胞 2 34.81± 98.71,为对照组的 2 .4 2倍 (P <0 .0 5 ) ;CFU Mix平均集落数在正常对照、CKLF1、PHA和GM CSF组分别为每 10 5细胞 82 .0 0± 2 0 .2 5 ,10 5 .76± 36 .70 ,14 6 .6 3± 2 7.0 9和 14 3.33± 6 0 2 3,CKLF1的集落数多且较大 ,但统计学上差异无显著性 ;流式细胞术检测CD3 4 + 细胞百分率 ,正常对照、CKLF1、PHA、GM CSF组分别为 (0 .75± 0 .6 2 ) % ,(1.32± 0 .87) % ,(0 .15± 0 .0 2 ) % ,(0 .2 9± 0 .2 3) % ,与对照组相比 ,各组间差异无显著性。结论　新发现的具有CC家族结构的人趋化素样因子CKLF1对骨髓CFU GM集落的形成具有促增殖作用 ,提示CKLF1对人骨髓造血祖细胞的增殖和集落形成具有促进作用     

Phorbol diesters stimulate the development of an early murine progenitor cell. The burst-forming unit-megakaryocyte.

When murine (C57BL/6) bone marrow cells are cultivated with WEHI-3 conditioned media, a source of megakaryocyte-colony-stimulating activity (Mk-CSA), and phorbol myristate acetate (PMA), a previously undetected population of megakaryocyte (Mk) progenitor cells is observed. These new Mk colonies are reminiscent of erythroid bursts, in that they contain large numbers (40-500) of Mk and multiple foci (2-7) of development. These burst-forming units, Mk (BFU-Mk), are defined as having greater than or equal to 42 cells/colony and, at least, three foci of Mk development (colonies grown in soft agar cultures, all studies done at limiting dilutions; colonies detected by acetylcholinesterase [ACh-E] staining). CFU-Mk and BFU-Mk require two activities for optimal growth: Mk-CSA and PMA. However, the BFU-Mk require a tenfold greater concentration of PMA for optimal development (10(-6) vs. 10(-7) M). BFU-Mk detection is linear (over a range of 25-100 X 10(3) cells/ml), with the regression line passing through the origin. Bone marrow frequencies of these two progenitor cells are CFU-Mk, 36.7 +/- 2.5, and BFU-Mk, 7.3 +/- 0.7 per 10(5) total nucleated cells (mean +/- SEM; n = 28). The BFU-Mk have a restricted velocity sedimentation range (3.3-4.5 mmh-1 vs. 3.3-6.8 mmh-1 for CFU-Mk). Modal buoyant densities are 1.068 +/- 0.0002 and 1.070 +/- 0.002 for BFU-Mk and CFU-Mk, respectively. Thus, these cells are found among the smallest and less dense of the Mk progenitors, and are not clumps or clusters of CFU-Mk. Kinetic analysis indicates that CFU-Mk require 5-7 d for optimal growth, whereas BFU-Mk require 10-12 d. Examination of the proliferative potential (cells per colony) shows 19.3 +/- 1.5 cells per colony (n = 246 colonies) for day 10 CFU-Mk, vs. 118 +/- 6.0 for day 10 BFU-Mk (n = 163). Analysis of the cellularity/subcolony within each burst indicates 37.0 +/- 2.1 (n = 146) Mk/colony and 3.9 +/- 0.1 subcolonies/burst (n = 100). Finally, greater than 90% of the BFU-Mk contain only ACh-E positive cells, indicating that these are not mixed colonies. These results indicate that the BFU-Mk, compared with the CFU-Mk, require an increased amount of stimulation in order to differentiate, show delayed in vitro development, and have a higher proliferative potential. These data are consistent with the hypothesis that these cells are early progenitor cells in the Mk lineage that antedate the CFU-Mk.