四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用机理。用⁶⁰Coγ射线全身照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34⁺细胞在骨髓有核细胞中的比例;细胞固定后PI染色测定细胞周期;Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡。结果:四物汤对小鼠骨髓造血干祖细胞、外周血细胞的恢复有明显促进作用;有保护骨髓和促进骨髓细胞由G₁期进入S期的效应;四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡;促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一     

四物汤对血虚证小鼠骨髓细胞CD 34抗原表达的影响

目的：探讨四物汤对^60Coγ射线或环磷酰胺诱导的血虚证小鼠骨髓细胞CD34抗原分子表达的影响。方法：用^60Coγ射线全身照射小鼠升腹腔注射环磷酰胺造成小鼠血虚证模型，实验分正常组、模型组、小剂量组、中剂量组、大剂量组，荧光标记小鼠骨髓细胞并用流式细胞仪 测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例，同时做小鼠骨髓细胞 落培养。结果与结论：四物汤可促进血虚小鼠骨髓中干祖细胞增生，增加CD34抗原分子的表达，为四物汤治疗血虚证提供了依据。     

四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤治疗环磷酰胺所致小鼠血虚证的作用机理。腹腔注射环磷酰胺制成小鼠血虚证模型;测定小鼠外周血象;骨髓细胞集落形成;CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例;小鼠胸腺指数。结果表明四物汤具有明显促进骨髓造血和增强免疫的作用,并可升高血虚证小鼠的外周血象。四物汤增强免疫、促进造血可能是四物汤治疗小鼠血虚证的机理之一。     

四物汤及其各单药对辐射小鼠骨髓造血的调节作用

目的：研究四物汤及其各单药对射线诱发小鼠血虚证骨髓造血的调节作用,方法：采用3．5或5．5Gy^60Goγ射线全身一次性照射,制成血虚证模型小鼠,在不同时间点观察四物汤及单药对NFS－60细胞,外周血象,造血祖细胞集落培养及骨髓细胞凋亡的影响。结果：四物汤,地黄,当归能升高辐射小鼠外周血中的白细胞,增加造血祖细胞集落数,刺激NFS－60细胞增殖;白芍则降低外周血象,抑制NFS－60细胞增殖;川芎能增加造血细胞集落数,抑制骨髓细胞凋亡,结论：四物汤及各单药作用的靶点和强度不同,。其变化规律符合中医的君臣佐使理论。     

四物汤及其提取物对辐射致血虚证小鼠造血作用的研究

【目的】探讨四物汤及其提取物治疗辐射致血虚证小鼠的作用机制和有效物质基础。【方法】γ射线全身照射小鼠制成血虚证模型,观察四物汤对其外周血和造血祖细胞集落的影响,基因芯片检测有效单体芍药苷的分子作用机制。【结果】四物汤、正丁醇提取物、水溶提取物对血虚证小鼠外周的白细胞的恢复有明显促进作用;四物汤和芍药苷增强血虚证小鼠骨髓造血干祖细胞的集落形成能力;芍药苷可促进骨髓基质细胞分泌造血因子(G—CSF,GM—CSF,PDGF—α)等,抑制造血抑制因子(M—CIP)的分泌。【结论】四物汤补血的物质基础可能是芍药苷,促进骨髓基质细胞分泌G—CSF,GM—CSF,PDGF-α等造血因子可能是四物汤补血的作用机制之一。     

圣愈汤及其拆方对血虚小鼠骨髓细胞凋亡及增殖周期的影响

目的:研究圣愈汤及其拆方对γ射线照射致血虚小鼠造血系统的影响,探讨圣愈汤补血作用及配伍机制。方法:采用3.5Gy60Coγ射线照射制作放射损伤性血虚小鼠模型,取股骨测定骨髓有核细胞数量,流式细胞仪测定骨髓细胞周期,骨髓组织切片观察骨髓损伤修复情况。结果:圣愈汤及其各拆方药组能明显提高血虚小鼠骨髓有核细胞数量,抑制骨髓细胞凋亡,促进骨髓造血细胞由相对静止时相(G0/G1期)进入细胞增殖活跃时相(S期+G2/M期),明显提高细胞增殖指数(PI),促进骨髓造血组织的修复,以全方效果最佳。结论:抑制骨髓细胞凋亡,诱导骨髓细胞由相对静止期进入增殖活跃期,促进骨髓造血干/祖细胞的增殖、分化,刺激血细胞的生成和释放,可能是圣愈汤补血作用的主要机制之一。     

环磷酰胺所致血虚证小鼠骨髓CD34~ 细胞的变化

目的 :研究环磷酰胺 (CTX)诱发的血虚证小鼠骨髓中干祖细胞的数量和骨髓细胞周期的动态变化。方法 :采用CTX大小两个剂量分别对两组小鼠进行腹腔注射制作小鼠血虚证模型。在不同时相点 ,双荧光标记测定CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例 ,骨髓细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果 :①注射CTX后CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例下降后迅速上升 ,然后又下降。②注射CTX后骨髓细胞增殖受抑 ,然后动员骨髓细胞增殖 ,但药后 10d细胞增殖又受抑。与CD34 细胞在骨髓有核细胞中比例的变化规律有一致性。结论 :CTX可以动员骨髓造血干祖细胞进入细胞周期而增殖 ,增加了骨髓中造血干祖细胞的数量 ,但此过程加速了干祖细胞池的耗竭 ,从而对骨髓造成更大损伤 ,这可能是CTX诱发小鼠血虚证的机理之一。     

环磷酰胺所致血虚证小鼠骨髓CD34^＋细胞的变化

目的：研究环磷酰胺（CTX）诱发的血虚证小鼠骨髓中干祖细胞的数量和骨髓细胞周期的动态变化。方法：采用CTX大小两个剂量分别对两组小鼠进行腹腔注射制作小鼠血虚证模型,在不同时相点,双荧光标记测定CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例,骨髓细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果：（1）注射CTX后CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例下降后迅速上升,然后又下降。（2）注射CTX后骨髓细胞增殖受抑,然后动员骨髓细胞增殖,但药后10d细胞增殖又受抑。与CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中比例的变化规律有一致性。结论：CTX可以动员骨髓造血干祖细胞进入细胞周期而增殖,增加了骨髓中造血干祖细胞的数量,但此过程加速了干祖细胞池的耗竭,从而对骨髓造成更大损伤,这厅能是CTX诱发小鼠血虚证的机理之一。     

四物汤及其单药对血虚证小鼠造血的改善作用及其机制初探

目的 :研究四物汤及各单药对γ射线照射致血虚小鼠造血系统的影响 ,探讨四物汤补血作用的机理及配伍机制。方法 :采用 3 5Gy60 Coγ射线全身一次照射制作小鼠血虚证模型 ,进行外周血象检测及造血祖细胞集落培养 ;MTT法检测四物汤及各单药诱生Peyer’sPatch细胞、NIH3T3细胞上清的活性。结果 :①血虚小鼠骨髓中的CFU GM、BFU E、CFU E、CFU mix较正常组明显减少 ,四物汤及各单药对模型组造血祖细胞集落增殖的作用强度不同 ,四物汤最为明显。②四物汤及各单药能够诱导Peyer’sPatch产生细胞因子刺激骨髓细胞的增殖。③四物汤、当归、白芍诱生NIH3T3细胞上清能显著促进NFS 6 0细胞的增殖。结论 :四物汤及各单药对血虚小鼠造血系统的作用机制 ,可能通过刺激Peyer’sPatch细胞、成纤维细胞或产生造血生长因子 ,或与造血因子协同作用 ,促进骨髓干祖细胞增殖分化来实现的 ;四物汤及各单药作用的靶点和强度不同 ,符合中药复方组方的规律。     

四物汤对环磷酰胺致血虚证小鼠骨髓蛋白质组的影响

目的：研究四物汤对环磷酰胺（CTX）损伤致血虚证小鼠骨髓蛋白质组的影响,旨在分子水平上探讨四物汤促进骨髓造血的作用机制。方法：采用CTX 250 mg·kg^-1腹腔注射制成化学损伤型血虚证小鼠模型,利用蛋白质组学技术研究四物汤治疗后的差异蛋白质组。结果：研究发现CTX使小鼠骨髓中12个蛋白表达上调、3个蛋白表达下调,四物汤可使CTX造模后这些表达改变的蛋白有不同程度恢复。结论：四物汤可能通过影响与细胞凋亡、造血干祖细胞增殖分化有关的蛋白质而促进骨髓造血。     

四物汤对再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞增殖的影响研究

目的：研究四物汤对再生障碍性贫血（AA）小鼠骨髓细胞体外增殖的影响，探讨其治疗AA的机制。方法：采用流式细胞仪、骨髓造血祖细胞培养等技术，检测四物汤对从小鼠骨髓细胞的增殖变化。结果：四物汤能促进骨髓有核细胞进入G2／S期、增加CFU—GM、CFU—E、BFU—E集落数，且与自然恢复组有明显增强的差异（P〈0．01）。结论：四物汤在体外有促进从小鼠骨髓细胞增殖的作用，为补血药治疗从提供了实验与理论依据。     

四物汤及两味中药组方对γ射线照射所致血虚证小鼠作用机制的研究

[目的]探讨四物汤及其两味药组方治疗血虚证小鼠的补血作用机制。[方法]采用60^Coγ射线全身照射制成实验性小鼠血虚证模型，测定外周血象、CD34^ 细胞、细胞周期、NFS60细胞增殖以及造血干祖细胞的增殖情况。[结果]1)四物汤在各指标上都优于其两味药组方；(2)两味药组方中，当归相关组对CFU—E，CFU—Mix，CFU—GM的促进作用较好，且有升高白细胞的作用；而地黄相关组对CFU—E有增殖作用；白芍相关组能明显促进NFS60细胞的增殖；川芎相关组增加CD34抗原表达，并促进细胞由G0/1期向S期转化，其作用和所含的川芎嗪有关。[结论]四物汤全方优于两味药组方，各组方的作用靶点和作用强度各有异同。     

阿胶补血活性组分对环磷酰胺所致贫血小鼠骨髓造血微环境的影响

目的研究阿胶活性组分A、B对环磷酰胺所致贫血小鼠骨髓造血微环境的保护作用。方法细胞计数法检测小鼠单核细胞数,集落形成检测小鼠骨髓中造血干/祖细胞相对数量,流式细胞仪测定小鼠骨髓细胞CD34含量和细胞周期分布,切片观察小鼠骨髓组织形态。结果阿胶活性组分能够明显的增加环磷酰胺所致贫血小鼠骨髓单核细胞数、增加骨髓细胞中CFU-GM、BFU-E,CFU-E和CD34含量,增加骨髓细胞中S期细胞比率。结论阿胶活性组分能够有效地保护骨髓造血微环境,减轻环磷酰胺对骨髓组织的损伤,保护造血组织。     

肉苁蓉多糖对骨髓抑制性贫血小鼠造血调控的实验研究

目的：观察肉苁蓉多糖对骨髓抑制贫血小鼠造血功能的影响,探讨其造血调控作用机制。方法：采用Co^60照射和注射环磷酰胺复合制备贫血小鼠模型。应用流式细胞术（FCM）检测肉苁蓉多糖对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞周期的影响,采用造血祖细胞培养术观察三系造血祖细胞集落数。结果：低剂量和高剂量肉苁蓉多糖能明显促进骨髓G0/G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2/M期细胞的转化,G2/M期细胞比例明显升高,增殖指数（PI）也明显升高。给药组CFU-E,BFU-E,CFU-MeG与贫血对照组集落数有显著差异。结论：肉苁蓉多糖可能通过促使骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞细胞周期的转化,促进骨髓造血功能的恢复,并促进红系巨核系造血。     

四物汤的方证结合研究

方证结合研究是中医理法与方药之间的桥梁,以经典补血方剂四物汤与血虚证的方证关系研究为例探讨方证结合研究的新模式。运用射线照射、环磷酰胺腹腔注射和综合放血法复制动物模型,研究发现血虚证的发生发展与外周血各血液成份改变、骨髓造血干/祖细胞的动态变化、骨髓细胞凋亡、CD34+细胞的改变、细胞周期、造血相关基因和蛋白的改变等密切相关。进而从全方、有效部分、有效成分3个化学层次和整体、器官、细胞及分子4个药理水平,从方证到理法的逆向辨证探求方剂与证候间的内在联系,基本阐明了补血名方四物汤的药效物质基础,并重构了基于有效成分的新组方,首次发现了果糖和芍药苷的补血活性,研究体现了中医药方证结合研究的特色和优势,为方剂和证候学的结合研究提供了参考模式。     

四物汤的方证结合研究

方证结合研究是中医理法与方药之间的桥梁,以经典补血方剂四物汤与血虚证的方证关系研究为例探讨方证结合研究的新模式.运用射线照射、环磷酰胺腹腔注射和综合放血法复制动物模型,研究发现血虚证的发生发展与外周血各血液成份改变、骨髓造血干/祖细胞的动态变化、骨髓细胞凋亡、CD34+细胞的改变、细胞周期、造血相关基因和蛋白的改变等密切相关.进而从全方、有效部分、有效成分3个化学层次和整体、器官、细胞及分子4个药理水平,从方证到理法的逆向辨证探求方剂与证候间的内在联系,基本阐明了补血名方四物汤的药效物质基础,并重构了基于有效成分的新组方,首次发现了果糖和芍药苷的补血活性,研究体现了中医药方证结合研究的特色和优势,为方剂和证候学的结合研究提供了参考模式.     

左归丸对骨髓抑制小鼠造血调控的影响

目的 观察左归丸对骨髓抑制小鼠外周血、造血干细胞增殖能力、骨髓细胞周期和凋亡的影响,并探讨其可能的造血调控机制.方法 将48只大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型组、阳性对照组和左归丸低、中、高剂量组,各8只,除正常对照组外,其余各组采用60Coγ射线和环磷酰胺联合制作骨髓抑制大鼠模型,于造模结束后第2 d开始给药,模型组、正常对照组予0.9%氯化钠注射液,左归丸低、中、高剂量组予相应浓度左归丸,阳性对照组予重组人粒细胞集落刺激因子注射液.各组均给药7 d.用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法、造血祖细胞培养和流式细胞术分别检测左归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数、体外培养各系造血祖细胞的集落数以及骨髓细胞周期和调亡的影响.结果 左归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞、血红蛋白、骨髓有核细胞(P＜0.05,P＜0.01),左归丸中剂量对血小板和左归丸高剂量对白细胞有明显升高作用(P＜0.05).左归丸中剂量组和阳性对照组能提高体外培养各系造血祖细胞的集落数(P＜0.05,P＜0.01),左归丸高剂量组粒单系细胞集落生成单位、红系细胞集落生成单位和爆增型红细胞集落生成单位数提高显著(P＜0.05,P＜0.01).左归丸各剂量组均能促进骨髓G0/G1 期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2/M期细胞的转化,从而导致G2/M期细胞比例和增殖指数(PI)明显升高(P＜0.05,P＜0.01).左归丸各剂量组的骨髓细胞凋亡比例与模型组比较均显著下降(P＜0.01),与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 左归丸可能通过促进G0期造血干细胞进入细胞周期,进行增殖;加速骨髓细胞修复受损的DNA,通过G1/S和S期监测点;抑制造血细胞的凋亡等机制,从而促进损伤骨髓造血功能恢复.     

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察四物汤对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo,G-CSF基因表达的影响,为阐明四物汤补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy⁶⁰Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;检测外周血象;骨髓集落培养观察并计数CFU-GM,BFU-E,CFU-E,CFUmix;RTPCR检测骨髓Epo和G-CSF基因表达。结果:四物汤显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFUGM,BFUE,CFUE,CFUmix数量,上调骨髓Epo和GCSF基因表达。结论:四物汤促进骨髓细胞Epo和G-CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。     

四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响

目的:观察四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响,为比较四物汤对不同血虚证模型补血作用提供实验依据。方法:每日按75g·kg^-1体重限食,隔日游泳20min及放血0.4mL共15d,建立小鼠血虚证模型。提前7d,四物汤小,中,大剂量组分别按每天5,10,20g·kg^-1给予四物汤至造模结束,通过血细胞计数仪及流式细胞仪等分析手段,检测外周血象、骨髓细胞周期、骨髓细胞凋亡和CD34⁺细胞数。结果:四物汤小,中,大剂量组可以使血虚证小鼠红细胞由第7天最低值4.6×10¹²·L^-1,分别显著升高到6.5,7.1,7.0×10¹²·L^-1;在第15天,使血虚证小鼠S期骨髓细胞数由11.53%,分别显著增加到14.34%,14.03%,13.58%。结论:四物汤可以在一定程度上逆转综合放血致小鼠的造血损伤。     

八珍汤对骨髓抑制小鼠血发生的影响

本研究从外周血细胞、骨髓有核细胞、造血祖细胞及细胞周期等方面探讨八珍汤对骨髓抑制小鼠造血系统的作用及其机制。结果显示：①八珍汤能明显促进骨髓抑制小鼠外周血白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）、血红蛋白（HB）以及骨髓有核细胞（BMC）的增加;②体内用药能明显促进红系（BFU—E,CFU—E）、粒系（CFU-GM）和巨核系（CFU—Meg）三系造血祖细胞集落形成;③能明显促进骨髓抑制小鼠骨髓细胞进入细胞周期,使G0／G1期细胞比例减少,S期和G2／M期细胞比例增加。